PCR诊断结核性脑膜炎的临床应用

<正> 结核性脑膜炎(结脑)在我国是常见病,危害极大,由于本病临床表现多种形式及抗生素的广泛应用,使得具有诊断意义的生化改变不够典型,培养涂片检出率越来越低,目前仍为临床诊断的难题之一。近二年来,多聚酶链反应(PCR)技术广泛应用于临床研究,一些学者已建立了敏感特异的从脑脊液(CSF)中检测结核杆菌DNA方法。本文根据Eisenach介绍的结核分枝杆菌染色体DNA链结构中一段123bp核苷酸为靶系列,合成引物进行CSF中DNA体外扩增,并与CSF中结核分枝杆菌蛋白     

聚合酶链反应在结核性脑膜炎中的诊断价值

目的 :探讨聚合酶链反应 (PCR)技术在结核性脑膜炎 (结脑 )中的早期诊断价值。方法 :对 12 3例结脑及 15例非结脑病人脑脊液 (CSF)进行PCR检测 ,同时予以常规化验、涂片及培养对照。结果 :CSF常规化验敏感性 (6 8% )与PCR敏感性 (6 7% )相似 ,特异性 (87% )比PCR(5 3% )高。而涂片、培养虽然特异性为10 0 % ,但敏感性分别为 1 6 % ,4 1% ,明显低于PCR。非结脑组 15例 ,有 7例CSF也呈阳性反应 ,阳性率为43%。结论 :CSF常规化验、涂片、培养 ,辅以PCR技术及头颅CT检查 ,对结脑的早期诊断更有帮助。PCR目前尚不能作为结脑诊断的黄金指标。     

实时荧光定量聚合酶链反应技术对结核性脑膜炎的诊断价值

目的探讨实时荧光定量聚合酶链反应技术(RT-PCR)对结核性脑膜炎的诊断价值。方法分别采用涂片法、RT-PCR法对结核性脑膜炎、疑似结核性脑膜炎以及非结核性脑膜炎患者的脑脊液标本进行检测,并对检测结果进行比较分析。结果涂片法共检出10例阳性,其中结核性脑膜炎7例(70.00%),疑似结核性脑膜炎3例(30.00%);RT-PCR法共检出46例阳性,其中结核性脑膜炎31例(67.39%),疑似结核性脑膜炎15例(32.61%)。对结核性脑膜炎患者检测,涂片法阳性率(12.28%)低于RT-PCR法阳性率(54.39%),差异有统计学意义(P0.05);对疑似结核性脑膜炎患者检测,涂片法阳性率(2.91%)低于RT-PCR法阳性率(14.56%),差异有统计学意义(P0.05);脑脊液涂片法检测结核性脑膜炎的灵敏度为12.28%,漏诊率为87.72%,RT-PCR法检测的灵敏度为54.39%,漏诊率为45.61%,差异有统计学意义(P0.05)。结论 RT-PCR法诊断结核性脑膜炎具有灵敏度好,准确度高等特点,临床有重要的指导意义。     

免疫学检查在结核性脑膜炎诊断中的应用

结核性脑膜炎(Tuberculous meningitis,TBM)的早期诊断至关重要,以往的实验室检查主要靠脑脊液(CSF)涂片和结核菌培养,阳性率均较低,且培养费时,延误诊断。TBM生化检查已有概述,免疫学检查对其诊断可以提供快速、敏感、特异的实验室指标。本文就CSF免疫学检查在TBM诊断中的应用概述如下。     

实时荧光定量PCR法在儿童巨细胞病毒感染诊断中的应用分析

目的 分析实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）法在人巨细胞病毒（Human cytomegalovirus,HCMV）感染诊断中的应用价值。方法 选取2021年1月至2023年3月我院收治的88例疑似HCMV感染患儿，于清晨采集患儿空腹静脉血5ml及新鲜晨尿的中段尿5ml，采用ELISA法测定HCMV-IgM，采用FQ-PCR法测定HCMV-DNA。统计病毒培养法诊断结果；以病毒培养法诊断结果作为金标准，计算HCMV-IgM、HCMV-DNA诊断HCMV感染结果，并计算诊断HCMV感染结果与病毒培养法诊断结果的一致性。结果 88例疑似HCMV感染患儿中经病毒培养法诊断HCMV感染60例；以病毒培养法诊断结果作为金标准，HCMV-IgM诊断阳性34例，阴性54例，其中漏诊28例，误诊2例，HCMV-IgM诊断结果与病毒培养法诊断结果一致性差（Kappa=0.370,P=0.000）;HCMV-DNA诊断阳性52例，阴性36例，其中漏诊9例，误诊1例，HCMV-DNA诊断结果与病毒培养法诊断结果一致性极好（Kappa=0.757,P=0.000）;HCMV-DNA诊断灵敏度、准确度均高...     

聚合酶链反应在结核性胸膜炎诊断中的应用

结核病是严重危害人类健康的常见传染病之一,我国近年来发病率有上升趋势.在各种原因所致的胸腔积液中,结核菌感染仍占首位.然而,由于传统的病原体检测方法有局限性,故目前结核性胸膜炎的早期诊断与鉴别诊断仍有一定困难.作为基因诊断技术之一的聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)是在分子生物学和基因工程取得进展的基础上发展起来的完全不同于常规的九十年代病原学诊断技术,它可在短时间内使病原体的特异性DNA片段成百万倍的增长,从而大大提高对病原微生物的分析检测能力.本文采用PCR技术及传统方法检测一组结核性胸水并与非结核性胸水对照,同时针对其中部分病例的痰、血、纤支镜下留取的支气管分泌物标本进行PCR检测,试图探讨PCR技术在结核性渗出性胸膜炎早期诊断中的应用.     

脑脊液在结核性脑膜炎诊断中的临床意义

结核性脑膜炎(结脑)近年来有上升趋势,特别是在农村和边远地区发病率比较高,由于结核免疫的普及、结核菌的耐药性等因素,使得结脑临床表现不典型的居多,误诊率增加.我们对近几年收治的资料完整的50例结脑病人的诊断过程进行了分析,认为在科技高速发展的今天,脑脊液的常规检查对诊断结脑仍然是非常重要和实用的方法.     

实时荧光定量PCR检测肺炎支原体DNA在小儿肺炎诊断中的应用价值

目的探讨实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）检测肺炎支原体（MP）DNA在小儿肺炎诊断中的应用价值。方法采用FQ-PCR对该院742例儿科住院患儿的血清、痰液、胸腔积液、支气管灌洗液、肺泡灌洗液临床标本进行MPDNA的定量检测。结果742例患儿中MPDNA检测总阳性率为40．3％（299／742）;男、女性患儿MPDNA阳性率的差异无统计学意义（P〉0．05）;4～〈7岁、7～〈10岁、10～〈13岁、13～16岁组,MPDNA阳性率均高于0～〈4岁组（P〈O．05）;不同种类标本的阳性率不同,由高到低依次为支气管灌洗液（96．5％）、肺泡灌洗液（83．7％）、痰液（71．7％）、胸腔积液（38．9％）、血清（6．1％）。结论4岁及4岁以上儿童易感染肺炎支原体,且随着年龄增长感染率逐渐增高;支气管灌洗液标本的MPDNA阳性率较高;FQ-PCR法检测MP DNA用于肺炎支原体感染的诊断有一定价值。     

扩增效率评价在荧光PCR外标法定量中的应用初探

[目的]了解扩增效率评价对现行定量PCR的外标定量法结果的影响。[方法]将两份HBV阳性血清样本梯度稀释4个梯度后PCR,建立血清样本的标准曲线。同时比较两份血清样本标准曲线以及与试剂盒标准品的标准曲线的差异,并利用E=10^-1slope公式计算不同样本及标准品的扩增效率。比较扩增效率评价前后外标法定量结果之间的差异。[结果]发现同一样本的扩增效率不同批次PCR扩增效率变化很小,然而不同样本之间扩增效率存在明显的差异。对扩增效率评价前后同一样本的定量分析的结果差异巨大,达到了93％。[结论]采用荧光PCR外标定量法对未知样本进行定量分析时应对其扩增效率进行评价。     

噬菌体生物扩增法检测结核性胸膜炎患者胸水临床应用研究

目的 评价噬菌体生物扩增法检测胸水中结核分枝杆菌对诊断结核性胸膜炎的临床应用价值.方法 采用噬菌体生物扩增法技术对73例结核性胸膜炎患者,20例非结核性胸膜炎患者胸水中的结核分枝杆菌进行检测.同份标本同时进行涂片抗酸染色、罗氏培养.结果 73例结核性胸膜炎胸水.噬菌体生物扩增法阳性率为49.3%(36/73)、涂片抗酸染色阳性率为2.7%(2/731、罗氏培养阳性率为4.1%(3/73).20例非结核性胸膜炎,噬菌体生物扩增法、涂片抗酸染色、罗氏培养都未检出阳性.结论 噬菌体生物扩增法检测胸水中结核分枝杆菌只需2天时间,操作简便、灵敏度高、特异性强,不需要特殊仪器设备,可作为诊断结核性胸膜炎的一种好方法 .     

噬菌体生物扩增法检测结核性胸膜炎患者胸水临床应用研究

目的评价噬菌体生物扩增法检测胸水中结核分枝杆菌对诊断结核性胸膜炎的临床应用价值。方法采用噬菌体生物扩增法技术对73例结核性胸膜炎患者．20例非结核性胸膜炎患者胸水中的结核分枝杆菌进行检测．同份标本同时进行涂片抗酸染色、罗氏培养。结果73例结核性胸膜炎胸水,噬菌体生物扩增法阳性率为49．3％（36／73）、涂片抗酸染色阳性率为2.7％（2/73）、罗氏培养阳性率为4．1％（3／73）。20例非结核性胸膜炎。噬菌体生物扩增法、涂片抗酸染色、罗氏培养都未检出阳性。结论噬菌体生物扩增法检测胸水中结核分枝杆菌只需2天时间,操作简便、灵敏度高、特异性强,不需要特殊仪器设备,可作为诊断结核性胸膜炎的一种好方法．     

回顾性分析噬菌体生物扩增技术在肺结核诊断中的应用

目的评价噬菌体生物扩增技术（PhaB）在肺结核诊断中的应用。方法回顾性分析采用PhaB法、3D培养法、直接涂片法检测373份痰标本的抗酸杆菌结果。结果 PhaB法、3D培养法、直接涂片法检测抗酸杆菌的阳性率分别为53.6%、56.6%及20.1%。以3D培养法结果为标准,直接涂片法的敏感性、特异度、准确性分别为33.2%、95.7%及60.3%;PhaB法的敏感性、特异度、准确性分别为89.1%、93.6%及90.6%。直接涂片法与PhaB法检测结果比较,差异有统计学意义（χ2=94.7,P〈0.01）;PhaB法与3D培养法检测结果比较,差异无统计学意义（χ2=3.46,P〉0.05）。结论 PhaB法检测结核分枝杆菌具有较高的敏感性、特异度、准确性,值得在临床推广。     

应用实时荧光定量PCR方法检测血小板制品细菌污染

目的应用实时荧光定量PCR方法检测血小板制品中细菌的探讨。方法选取金黄色葡萄球菌及大肠埃希氏杆菌,用改良的Chelex-100法抽提细菌基因组DNA,进行荧光定量PCR检测。并应用过滤法去除反应体系中潜在的细菌及其基因组DNA污染。结果针对16srRNA基因保守序列进行扩增的荧光定量PCR方法具有较高的特异性和灵敏度,与人类淋巴细胞及病毒等的基因组无交叉反应。在金黄色葡萄球菌检测中,应用过滤法后最低含菌量组与阴性对照组Ct值有极显著差异(P<0.001)。该方法对金黄色葡萄球菌的最低检出量为0.3CFUs/PCR,与阴性对照Ct值有显著差异(P<0.01),在大肠埃希氏杆菌中该法可检测出0.1CFUs/PCR,与阴性对照Ct值有显著性差异(P<0.01)。结论改良Chelex-100法抽提细菌基因组及后续的荧光定量PCR分析用于检测血小板制品中的细菌污染,检测实验缩短到3-4h,操作简单,灵敏性高,特异性好,为在临床标本大规模检测中的应用提供理论基础和实验数据。     

噬菌体生物扩增法检测痰液结核分枝杆菌的临床应用

结核病的细菌学检查是发现传染源的主要途径和手段,是结核病诊断和化疗的重要依据,也是考核、评价治疗效果的可靠标准[1].然而,传统的结核分枝杆菌分离培养方法需时较长(2～8周),涂片敏感度和特异度不高,涂片中菌体数要达到104～103个/m]时,才可检出[2].随着耐药结核病尤其是MDR-TB迅速增加[3],现有的细菌学实验方法远不能满足临床要求.近年来分枝杆菌噬菌体法在结核病实验研究中取得巨大进展,其中最引人注目的是PhaB[4]检测结核分枝杆菌,但其检测的实际意义、影响因素,尤其在判断疗效的作用报道不多.本研究对前期的实验结果进行分析,评价检验结果的一致性,并与其他细菌学检测结果结合,评估动态检测在疗效评价中的作用.     

噬菌体生物扩增法快速检测结核分枝杆菌的临床应用

目的 探讨噬菌体生物扩增法（Phab）快速检测结核分枝杆菌的临床应用价值。方法 应用Phab、BACTEC-460检测仪及厚涂片法共同检测206例痰标本。结果 58例涂片阳性、BACTEC-460培养阳性的标本中．Phab检测阳性55例（94．8％）;47例涂片阴性、BACTEC-460、培养阳性的标本中,Phab检测阳性35例（74．4％）;101例涂片阴性、BACTEC-460培养阴性的标本中,Phab检测阳性25例（24．8％）。结论 Phab快速、简便、灵敏,有助于结核分枝杆茵的快速检测,可用于结核病的初步诊断,但测定条件的选择非常重要。     

噬菌体法检测利福平耐药在耐多药肺结核诊断中的应用价值

目的:评估噬菌体检测利福平耐药性在快速早期诊断耐多药肺结核的临床应用价值.方法:收集广州市胸科医院2009-2011年诊治菌阳肺结核患者的痰噬菌体检测利福平耐药结果和培养法的药物敏感结果进行对照.结果:(1)在药物敏感试验证实RFP耐药的患者中,82.7％为耐多药肺结核.(2)在菌阳肺结核中耐多药肺结核患病率24.6％.其中初治和复治涂阳肺结核患者中耐多药肺结核分别为4.1％和54.9％.(3)在耐多药肺结核患者中,噬菌体法检测RFP耐药阳性率为79.0％.(4)噬菌体法和培养法检测RFP耐药有较好的相关性(r=0.587).结论:噬菌体法检测RFP耐药性与耐多药结核病诊断符合率较高.噬菌体法测定RFP耐药可以作为耐多药的早期诊断依据.由于噬菌体法检测快速、方便和简易,它可以作为耐多药肺结核的早期诊断和筛查.     

实时荧光定量-聚合酶链反应检测食品中金黄色葡萄球菌方法的研究

目的利用实时荧光定量-聚合酶链反应（real-time PCR）技术,建立食品中金黄色葡萄球菌（金葡萄）污染的快速敏感特异的检测方法。方法以金葡菌的IFemB/I基因作为靶序列,设计一对引物和探针,以金葡菌菌株提取核酸DNA作为模板,优化引物和探针的浓度比和Mgsup2+/sup浓度,以金葡菌和10种相关细菌考核检测体系的灵敏性、稳定性和特异性。并初步应用于样品的检测。结果本研究建立的反应体系在引物和探针的浓度为0.8 mol/L、0.6 mol/L,Mgsup2+/sup浓度为3.5 mmol/L时,具有良好的特异性和敏感性。在10株相关菌株的检测中,除金葡菌出现很好的阳性外,其余菌株均为阴性。在纯菌条件下,最低检测限为44 cfu/ml。稳定性分析表明:同一样品重复检测3次IC/It值的变异系数均5％。检测样品结果显示real-time PCR方法较传统方法敏感、快捷、简便。结论该方法特异性强,稳定性高,操作简便快捷,适应食品微生物检验发展需要,具有较大的推广及应用价值。     

Development and validation of a quantitative real-time PCR assay for the early diagnosis of coccidioidomycosis

A new real-time polymerase chain reaction (RT-PCR) assay based on a Coccidioides genus–specific molecular beacon probe was developed for the detection of coccidioidomycosis and validated with tissues from animal models and clinical samples. The assay showed high analytic reproducibility (r² > 0.99) and specificity for cultured strains (100%); the lower limit of detection was 1 fg of genomic DNA/μL of reaction. Fungal burdens in the organs of mice infected with Coccidioides posadasii strain Silveira were more accurately quantified by RT-PCR compared to colony-forming unit for all tissues. The RT-PCR assay was positive for 97.7% of spleen and 100% of liver or lung. Progression of infection in all organs was similar by both methods (P > 0.05). The sensitivity of the assay also was 100% for paraffin-embedded samples and samples from patients with positive cultures. Our RT-PCR assay is effective for the diagnosis and monitoring of Coccidioides infection, and its use also avoids the biohazard and time delay of identifying cultures in the clinical setting.     

噬菌体生物扩增法检测涂阴肺结核患者痰标本的临床应用价值

目的 探讨噬菌体生物扩增法对涂阴肺结核临床诊断的应用价值.方法 对110例涂阴肺结核和20例非结核性其他肺部疾病患者的痰标本进行噬菌体生物扩增法检测,并同时进行分枝杆菌罗氏培养.结果 110例涂阴痰标本中46例噬菌体生物扩增法阳性(41.82%);27例罗氏培养阳性(24.55%).结论 噬蒲体生物扩增法检测涂阴痰标本中结核分枝杆菌只需2天时间,操作简便、灵敏度高、特异性强,可作为诊断涂阴肺结核的一种检测方法.