lncRNA HOTAIR通过介导JAK2/STAT3通路调节肾上腺肿瘤细胞增殖和凋亡的机制

目的探究长的非编码RNA(lncRNA)HOX转录反义基因间RNA(HOTAIR)通过介导Janus激酶/信号转导子和转录激活子(JAK/STAT)通路调节肾上腺肿瘤细胞增殖和凋亡的机制。方法前瞻性分析2019年6月至2020年7月三二〇一医院收治的接受肾上腺肿瘤手术切除的60例患者,提取人原发性肿瘤和邻近的健康组织,并分别作为病理观察组和对照组。将大鼠肾上腺髓质嗜铬瘤分化细胞株PC12分为对照组(PC12细胞系)、过表达组(lncRNA HOTAIR过表达转染)和敲低组(shRNA lncRNA HOTAIR转染)。RT-PCR检测lncRNA HOTAIR的mRNA的表达;流式细胞仪检测细胞凋亡率;细胞计数试剂盒-8(CCK-8)测定细胞增殖能力;酶联免疫吸附实验(ELISA)检测促炎因子[肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-6(IL-6)]水平;蛋白印迹分析JAK2/STAT3、核因子κB(NF-κB)相关通路蛋白的表达。结果病理观察组较健康对照组lncRNA HOTAIR mRNA表达升高(P<0.05)。转染24 h和48 h后,3组细胞增殖率均显著高于转染12 h(P<0.05);对照组和过表达组细胞增殖能力均随转染时间显著增强(P<0.05);转染24 h和48 h后,过表达组细胞增殖数目较对照组显著升高(P<0.05),敲低组细胞增殖数目较HOTAIR过表达组显著降低(P<0.05)。与对照组相比,过表达组细胞凋亡率、TNF-α、IL-1β、IL-6水平,以及JAK2、STAT3、NF-κB(p65)蛋白相对表达量均显著升高(P<0.05),敲低组细胞凋亡率、TNF-α、IL-1β、IL-6水平,以及JAK2、STAT3、NF-κB(p65)蛋白相对表达量均显著降低(P<0.05),与过表达组相比,敲低组细胞凋亡率、TNF-α、IL-1β、IL-6水平,以及JAK2、STAT3、NF-κB(p65)蛋白相对表达量均显著降低(P<0.05)。结论lncRNA HOTAIR通过上调促炎细胞因子(IL-1β、IL-6和TNF-α)水平,激活了JAK2/STAT3通路,调节肾上腺肿瘤细胞的增殖和凋亡。     

miRNA-9过表达对Aβ损伤的PC12细胞的保护作用

目的:探讨micro RNA-9(mi R-9)过表达对β-淀粉样蛋白(Aβ)损伤的PC12细胞及B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关x蛋白(Bax)表达的影响。方法:PC12细胞分为mi R-9过表达组(E组)、空转染对照组(NC组)、不转染的损伤细胞模型组(NT组),采用CCK-8法检测细胞增殖;采用Annexin-V-PE检测细胞凋亡;采用RT-q PCR检测Bcl-2、Bax m RNA的表达,Western-Blot检测Bcl-2、Bax蛋白表达。结果:与NC组及NT组比较,E组的PC12细胞转染48 h后增殖增加,凋亡率降低,Bcl-2表达增加,Bax表达下降(P0.05)。结论:mi R-9过表达可保护Aβ损伤的PC12细胞。     

抗β2GPI/β2GPI复合物激活THP-1细胞表达炎性相关因子

目的探讨抗β2糖蛋白I(抗β2GPI)自身抗体与β2糖蛋白I(β2GPI)复合物刺激单核细胞株THP-1表达炎性因子IL-6、IL-8、TNF-α及可能机制。方法用荧光定量PCR法检测抗β2GPI/β2GPI复合物刺激THP-1细胞不同时间(0.5、1、1.5、2、6 h)后IL-6、IL-8、TNF-αmRNA表达,用免疫荧光染色法及western blot观察THP-1细胞表达IL-6、IL-8、TNF-α蛋白的情况。荧光定量PCR及western blot观察Toll样受体4(TLR4)途径抑制物(TAK-242)干预抗β2GPI/β2GPI复合物对THP-1细胞的刺激作用。结果抗β2GPI/β2GPI复合物(100μg/mL)刺激THP-1细胞不同时间,可使细胞表达IL-6、IL-8及TNF-αmRNA水平逐渐上升,于刺激2 h时IL-6、IL-8及TNF-α达到峰值(P<0.01),免疫荧光染色及western blot证实细胞表达IL-6、IL-8及TNF-α蛋白水平也明显增加。TAK-242(5μmol/L)可显著抑制抗β2GPI/β2GPI复合物诱导的细胞IL-6、IL-8及TNF-α表达。结论抗β2GPI/β2GPI复合物通过TLR4途径,激活THP-1细胞表达炎性细胞因子IL-6、IL-8及TNF-α,参与抗磷脂综合征的病理机制。     

淀粉样β蛋白25～35诱导的PC12细胞凋亡与奥氮平的保护作用

背景:在阿尔茨海默病中起着重要作用的淀粉样β蛋白能够诱导细胞凋亡。目的:探讨奥氮平对淀粉样β蛋白25～35诱导的PC12细胞凋亡的机制及其保护作用。单位:解放军总医院南楼神经科。设计:随机设计。材料:实验于2002-05/2003-03在加拿大萨斯卡彻温大学医学院神经精神研究所完成。方法:P12细胞在RPMI1640培养液中培养。在96孔板每孔中接种100μL细胞悬液,在胶原被覆的25cm2培养瓶中接种5mL细胞悬液,培养24h后,分别加50μmol/L、100μmol/L奥氮平培养24h,再加不同浓度的淀粉样β蛋白25～35(0.01μmol/L、2μmol/L、20μmol/L)培养24h。将收获好的96孔板以淀粉样β蛋白25～35诱导PC12细胞凋亡,采用MTT比色分析测定细胞存活率。收获25cm2培养瓶中的PC12细胞,应用Westernblot检测奥氮平对PC12细胞Bax、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达的影响。主要观察指标:细胞存活率的测定,PC12细胞中Bax、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3的表达水平。结果:①细胞存活率比较:淀粉样β蛋白25～35诱导的PC12细胞的细胞活性从75%降低到35%;50μmol/L、100μmol/L奥氮平预处理组PC12细胞的活性明显提高。②奥氮平对淀粉样β蛋白25～35诱导的PC12细胞凋亡中Bax表达的影响:0.01μmol/L,2μmol/L,20μmol/L淀粉样β蛋白25～35处理的PC12细胞Bax的表达增加,50μmol/L奥氮平预处理使淀粉样β蛋白25～35诱导的PC12细胞Bax的表达减低。③奥氮平对Aβ25～35诱导的PC12细胞凋亡中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达的影响:0.001μmol/L、0.01μmol/L淀粉样β蛋白处理的PC12无变化,50μmol/L奥氮平预处理对PC12细胞表达亦无影响;2μmol/L、20μmol/L淀粉样β蛋白25～35处理的PC12细胞表达增高,50μmol/L奥氮平预处理能抑制其表达升高。结论:①淀粉样β蛋白25～35能够诱发与细胞凋亡密切相关的Bax、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3在培养的PC12细胞中高表达。②奥氮平具有降低其表达,提高PC12细胞存活的保护作用。     

淀粉样β蛋白25～35诱导的PC12细胞凋亡与奥氮平的保护作用

背景：在阿尔茨海默病中起着重要作用的淀粉样β蛋白能够诱导细胞凋亡。目的：探讨奥氮平对淀粉样β蛋白25～35诱导的PC12细胞凋亡的机制及其保护作用。单位：解放军总医院南楼神经科。设计：随机设计。材料：实验于2002-05／2003-03在加拿大萨斯卡彻温大学医学院神经精神研究所完成。方法：P12细胞在RPMI1640培养液中培养。在96孔板每孔中接种100μL细胞悬液，在胶原被覆的25cm^2培养瓶中接种5mL细胞悬液，培养24h后，分别加50μmol／L、100μmol／L奥氮平培养24h，再加不同浓度的淀粉样β蛋白25～35（0．01μmol／L．2μmol／L、20μmol／L）培养24h。将收获好的96孔板以淀粉样β蛋白25～35诱导PC12细胞凋亡，采用MTT比色分析测定细胞存活率。收获25cm^2培养瓶中的PC12细胞，应用Western blot检测奥氮平对PC12细胞Bax、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达的影响。主要观察指标：细胞存活率的测定，PC12细胞中Bax、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3的表达水平。结果：①细胞存活率比较：淀粉样β蛋白25～35诱导的PC12细胞的细胞活性从75％降低到35％；50μmol／L、100μmol／L奥氮平预处理组PC12细胞的活性明显提高。②奥氮平对淀粉样β蛋白25～35诱导的PC12细胞凋亡中Bax表达的影响：0．01μmol／L，2μmol／L,20μmol／L淀粉样β蛋白25～35处理的PC12细胞Bax的表达增加，50μmol／L奥氮平预处理使淀粉样β蛋白25～35诱导的PC12细胞Bax的表达减低。③奥氮平对Aβ25～35诱导的PC12细胞凋亡中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达的影响：0．001μmol／L、0．01μmol／L淀粉样β蛋白处理的PC12无变化，50μmol／L奥氮平预处理对PC12细胞表达亦无影响；2μmol／L、20μmol／L淀粉样β蛋白25～35处理的PC12细胞表达增高，50μmol／L奥氮平预处理能抑制其表达升高。结论：①淀粉样β蛋白25～35能够诱发与细胞凋亡密切相关的Bax、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3在培养的PC12细胞中高表达。②奥氮平具有降低其表达，提高PC12细胞存活的保护作用。     

CD14对胃癌SGC-7901细胞TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-12表达的影响

目的 研究胃癌细胞中CD14的过表达对TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-12的影响,探讨CD14在胃癌发生发展中的作用.方法 在本实验室前期建立的胃癌SGC-7901 CD14稳定转染细胞系的基础上,利用CD14蛋白受体胞壁酰二肽（MDP）刺激细胞,RT-PCR检测各细胞因子mRNA的表达,Western blot检测各细胞因子蛋白的表达,以空质粒转染的胃癌SGC-7901细胞为对照,探讨CD14强制表达对TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-12表达的影响.结果 转染并稳定表达CD14的细胞中TNF-α、IL-13、IL-6、IL-12在mRNA及蛋白表达水平上都有不同程度的升高,与空质粒转染的细胞相比,差异均有统计学意义（P均＜0.05）.结论 CD14对TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-12的表达具有一定的促进作用.     

以RNAi慢病毒为载体下调CD59对急性T系白血病Jurkat细胞株的表达影响

目的:分析以RNAi慢病毒为载体下调CD59基因表达对急性T系白血病Jurkat细胞株的表达影响。方法:通过RNAi慢病毒作为载体,诱导急性T系白血病Jurkat细胞株中的CD59表达降低;采用激光共聚焦技术分析RNAi慢病毒转染情况和CD59分子的定位情况;应用实时荧光定量PCR法检测空白对照组、阴性对照组和RNAi慢病毒转染组中CD59 mRNA的相对表达量;用酶联免疫吸附试验法测定3组细胞培养上清中肿瘤坏死因子-β(TNF-β)和白介素-3(IL-3)的表达,用免疫印迹法(Western blot)测定3组细胞中凋亡相关分子半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、生存素(Survivin)、B淋巴细胞瘤-2(BCL-2)及BCL-2相关X蛋白(BAX)蛋白表达水平。结果:Jurkat细胞转染效率高于90%,CD59主要定位于细胞膜中。相比空白对照组和阴性对照组,RNAi慢病毒转染组中CD59 mRNA表达明显下调(P 0. 05)。RNAi慢病毒转染组中CD59蛋白表达水平较空白对照组和阴性对照组明显降低(P 0. 05)。相比空白对照组和阴性对照组,RNAi慢病毒转染组中TNF-β表达水平明显升高,IL-3表达水平明显降低(P 0. 05)。RNAi慢病毒转染组Survivin和BCL-2表达水平较空白对照组和阴性对照组明显降低,Caspase-3和BAX蛋白表达较空白对照组和阴性对照组明显升高(P 0. 05)。结论:通过转染RNAi慢病毒载体促使CD59基因表达下调可降低急性T系白血病Jurkat细胞株中促增殖分化相关分子IL-3的表达,提高肿瘤坏死相关因子TNF-β的表达,同时可提高细胞中促凋亡相关蛋白Caspase-3和BAX的表达,降低抗凋亡蛋白Survivin和BCL-2的表达。     

雌激素受体基因ERβ与小鼠成骨细胞的增殖和分化

背景：雌激素受体ERs表达于所有关系到骨形成和骨吸收的细胞成分中。目的：观察雌激素受体ERβ对成骨细胞增殖、分化能力的调控作用。方法：以小鼠成骨细胞株MC3T3-E1为对象,设立3组：实验组转染雌激素受体ERβ RNAi载体、阴性对照组转染ERL RNAi载体、空白对照组不进行转染,3组在相同条件下培养。采用MTT法绘制各组细胞的生长曲线;流式细胞仪分析各组细胞的细胞周期。结果与结论：实验组成骨细胞的增殖能力明显高于空白对照组和阴性对照组,G1期细胞百分率明显少于空白对照组和阴性对照组,而S期和G2期细胞百分率明显高于空白对照组和阴性对照组（P均〈0.05）。根据雌激素受体ERβ沉默后检测的结果可以反向推断,ERβ的表达对成骨细胞的增殖、分化具有抑制作用。     

淀粉样前体蛋白过度表达细胞模型的建立及对细胞增殖和凋亡的影响

目的：建立淀粉样前体蛋白过度表达的细胞模型，并观察其对PC12细胞形态及细胞增殖的影响和在氧化应激损伤时，对细胞生长及凋亡的影响。方法：实验于2003-09／2004-12在哈尔滨医科大学遗传与细胞生物学教研室完成。用脂质体转染对数生长期的PC12细胞，细胞分为3组：转染真核表达载体的正常对照组；淀粉样前体蛋白过度表达组；642位由缬氨酸突变为异亮氨酸的突变淀粉样前体蛋白过度表达组，建立稳定表达的细胞株。用Westerm印迹法验证转染效果。使用细胞形态学方法、四甲基氮唑兰法观察对细胞形态和生长的影响；使用四甲基氮唑兰法、Hoechst33342观察在无血清培养24h后，100μmol／L过氧化氢作用4h对PC12细胞(经神经生长因子处理分化为交感神经元样细胞而接近于神经元)的影响。结果：①Western印迹法结果：转染真核表达载体的正常对照组无人的淀粉样前体蛋白表达，而淀粉样前体蛋白过度表达组和642位由缬氨酸突变为异亮氨酸的突变：淀粉样前体蛋白过度表达组有人的淀粉样前体蛋白表达，说明转染成功。②野生型淀粉样前体蛋白和突变型642位由缬氨酸突变为异亮氨酸的突变：淀粉样前体蛋白过度表达组基因转染PC12细胞后，与转染真核表达载体的正常对照组相比细胞形态及细胞突起的数量和长度无明显改变。⑧四甲基氮唑兰法测定结果：淀粉样前体蛋白过度表达组和642位由缬氨酸突变为异亮氨酸的突变淀粉样前体蛋白过度表达组细胞生长速度略低于转染真核表达载体的正常对照组，但无明显差异。四甲基氮唑兰法证实无血清培养24h后氧化应激损伤，与转染真核表达载体的正常对照组的细胞抑制率(24．3%)比较，淀粉样前体蛋白过度表达组抑制率(47．5％)和642位由缬氨酸突变为异亮氨酸的突变淀粉样前体蛋白过度表达组细胞抑制率(46．3%)明显增加。④Hoechst33342染色结果：无血清培养24h后氧化应激损伤，3组细胞都发生凋亡；与转染真核表达载体的正常对照组凋亡率(19&;#177;1．5)％相比，淀粉样前体蛋白过度表达组的凋亡率[(33&;#177;3．5)％]和642位由缬氨酸突变为异亮氨酸的突变淀粉样前体蛋白过度表达组细胞凋亡率[(33．5&;#177;6)％]都明显增加(P&;lt;0．01)。结论：成功的建立淀粉样前体蛋白过度表达的细胞模型，过渡表达的淀粉样前体蛋白对PC12细胞形态及增值速度无明显影响；而在氧化应激损伤时，对其牛长及凋亡有显著影响。     

双链RNA依赖的蛋白激酶在放射性肺损伤中的作用及机制研究

目的:探讨双链RNA依赖的蛋白激酶(PKR)在放射性肺损伤中的作用和分子机制。方法:将20只雄性SD大鼠随机分成对照组和放射组,对照组不做任何处理,放射组大鼠左肺一次性给予20Gy照射,观察1个月。人肺泡上皮细胞(HPAEpiC)分别转染高、低表达的PKR后,给予15Gy照射。采用支气管肺泡灌洗液的分析、Masson染色、免疫组织化学、MTT法、Real-time PCR和Western blot等方法研究PKR在放射性肺损伤中的作用及机制。结果:与对照组比较,放射组大鼠体重明显较低,肺/体重比值明显较高(P0.05);通过ELISA检测发现,放射组大鼠肺组织中促炎因子IL-1β和TNF-α相对表达水平显著高于对照组,而抑炎因子IL-10相对表达水平则明显低于对照组(P0.05);Masson染色结果表明,放射组大鼠肺间隔纤维组织沉积显著高于对照组(P0.05);放射组肺组织TUNEL阳性细胞及促凋亡因子Bax、Caspase-3的mRNA和蛋白水平明显高于对照组,且抗凋亡因子Bcl-2mRNA和蛋白水平显著低于对照组(P0.05);放射组大鼠肺组织PKR蛋白表达水平明显低于对照组,而p-PKR蛋白表达水平明显高于对照组(P0.05);实验结果表明,PKR敲低细胞照射组细胞生存率、PKR蛋白和抗凋亡蛋白Bcl-2蛋白表达显著低于正常细胞照射组,而促凋亡蛋白Bax和Caspase-3表达显著高于正常细胞照射组(P0.05);PKR过表达细胞照射组细胞生存率、PKR蛋白和抗凋亡蛋白Bcl-2蛋白表达显著高于正常细胞照射组,而促凋亡蛋白Bax和Caspase-3表达显著低于正常细胞照射组(P0.05)。结论:放射可以导致严重的肺损伤,肺损伤发生机制可能与PKR通路有关。     

雌激素受体基因ERβ与小鼠成骨细胞的增殖和分化

背景:雌激素受体ERs表达于所有关系到骨形成和骨吸收的细胞成分中。目的:观察雌激素受体ERβ对成骨细胞增殖、分化能力的调控作用。方法:以小鼠成骨细胞株MC3T3-E1为对象,设立3组:实验组转染雌激素受体ERβ RNAi载体、阴性对照组转染ERL RNAi载体、空白对照组不进行转染,3组在相同条件下培养。采用MTT法绘制各组细胞的生长曲线;流式细胞仪分析各组细胞的细胞周期。结果与结论:实验组成骨细胞的增殖能力明显高于空白对照组和阴性对照组,G1期细胞百分率明显少于空白对照组和阴性对照组,而S期和G2期细胞百分率明显高于空白对照组和阴性对照组(P均<0.05)。根据雌激素受体ERβ沉默后检测的结果可以反向推断,ERβ的表达对成骨细胞的增殖、分化具有抑制作用。     

淀粉样前体蛋白过度表达细胞模型的建立及对细胞增殖和凋亡的影响

目的:建立淀粉样前体蛋白过度表达的细胞模型,并观察其对PC12细胞形态及细胞增殖的影响和在氧化应激损伤时,对细胞生长及凋亡的影响。方法:实验于2003-09/2004-12在哈尔滨医科大学遗传与细胞生物学教研室完成。用脂质体转染对数生长期的PC12细胞,细胞分为3组:转染真核表达载体的正常对照组;淀粉样前体蛋白过度表达组;642位由缬氨酸突变为异亮氨酸的突变淀粉样前体蛋白过度表达组,建立稳定表达的细胞株。用Western印迹法验证转染效果。使用细胞形态学方法、四甲基氮唑兰法观察对细胞形态和生长的影响;使用四甲基氮唑兰法、Hoechst33342观察在无血清培养24h后,100μmol/L过氧化氢作用4h对PC12细胞(经神经生长因子处理分化为交感神经元样细胞而接近于神经元)的影响。结果:①Western印迹法结果:转染真核表达载体的正常对照组无人的淀粉样前体蛋白表达,而淀粉样前体蛋白过度表达组和642位由缬氨酸突变为异亮氨酸的突变:淀粉样前体蛋白过度表达组有人的淀粉样前体蛋白表达,说明转染成功。②野生型淀粉样前体蛋白和突变型642位由缬氨酸突变为异亮氨酸的突变:淀粉样前体蛋白过度表达组基因转染PC12细胞后,与转染真核表达载体的正常对照组相比细胞形态及细胞突起的数量和长度无明显改变。③四甲基氮唑兰法测定结     

银杏叶提取物通过激活PI3K/AKT通路抑制IL-1β诱导血管内皮细胞的凋亡

目的研究银杏叶提取物对白细胞介素-1β(IL-1β)诱导的血管内皮细胞凋亡的抑制作用及其作用机制。方法对人脐静脉血管内皮细胞进行培养,用IL-1β诱导血管内皮细胞建立细胞凋亡模型:分为对照组、IL-1β组、不同剂量的银杏叶提取物处理组(20μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml),对照组为空白对照,IL-1β刺激组给予10 ng/ml IL-1β处理细胞,银杏叶提取物处理组给予相应剂量银杏叶提取物处理细胞。通过CCK-8法检测不同剂量的银杏叶提取物对IL-1β诱导的血管内皮的增殖影响,流式细胞术检测银杏叶提取物对细胞凋亡的影响,Western blot检测通路蛋白PI3K、AKT、p-AKT和凋亡蛋白caspase 3、Bax和Bcl-2的表达情况,RT-PCR检测凋亡相关基因caspase 3、Bax和Bcl-2的表达变化。结果不同剂量的银杏叶提取物能显著提高IL-1β诱导血管内皮细胞的增殖能力,尤其是200μg/ml的银杏叶提取物组对IL-1β诱导血管内皮细胞的增殖能力作用非常显著。与对照组比较,IL-1β组细胞凋亡率、凋亡相关蛋白caspase 3和Bax的表达明显上升,抗凋亡蛋白Bcl-2表达明显下降。与IL-1β组比较,银杏叶提取物预处理组细胞凋亡率、凋亡相关蛋白caspase 3和Bax的表达明显下降,抗凋亡蛋白Bcl-2表达明显上升(P 0. 05)。同时与对照组比较,IL-1β组细胞通路蛋白PI3K和p-AKT蛋白的表达明显下降,而给予银杏叶提取物预处理后,其PI3K和p-AKT蛋白的表达明显上升(P 0. 05)。结论银杏叶提取物对IL-1β诱导的血管内皮细胞的凋亡具有一定的抑制作用,且其具体的抑制机制与激活PI3K/AKT信号通路有关。     

缺氧环境中胸腺素β4基因转染骨髓间充质干细胞凋亡率及Bax和Bcl-2的表达

背景：研究表明体外培养细胞加入胸腺素β4能增加细胞的抗凋亡能力,若在缺氧环境中上调胸腺素β4基因在骨髓间充干细胞中的表达,其抗凋亡能力如何改变,目前鲜见报道。
　　目的：观察胸腺素β4基因修饰的骨髓间充质干细胞在缺氧环境中的凋亡率改变,并探讨其是否通过调控Bax、Bcl-2表达影响凋亡能力。
　　方法：将携带有胸腺素β4基因的慢病毒转染骨髓间充质干细胞,转染完毕后利用Western blot法检测胸腺素β4在骨髓间充质干细胞中的表达。将细胞分为胸腺素β4转染组、对照病毒组、未转染组,分别置于缺氧环境中。流式细胞仪检测3组细胞凋亡率;Western blot法检测3组细胞中Bax和Bcl-2蛋白表达情况。
　　结果与结论：Western blot检测结果示,胸腺素β4基因在骨髓间充质干细胞中成功表达。流式细胞仪结果示,胸腺素β4转染组细胞凋亡率较对照病毒组、未转染组低,而对照病毒组、未转染组凋亡率差异无显著性意义。Western blot结果显示,Bcl-2蛋白在胸腺素β4转染组中表达量较对照病毒组、未转染组高,Bax蛋白在胸腺素β4转染组表达量较对照病毒组、未转染组低,而对照病毒组、未转染组中Bax、Bcl-2表达差异无显著性意义。提示过表达胸腺素β4基因可增加骨髓间充质干细胞在缺氧环境中的抗凋亡能力,其可能的作用机制是调控Bax和Bcl-2蛋白表达水平。     

白细胞介素-1对β淀粉样蛋白胞毒及基因表达的调节作用

目的：研究B淀粉样蛋白(β-amyloid protein，Aβ)的神经元毒性作用及白细胞介素1(interleukin-1β，IL-1β)对神经细胞β淀粉样蛋白前体(β-amyloid precursor protein，APP)基因表达以及对Aβ细胞毒性的调节作用。方法：以PC12细胞作为体外神经细胞模型，应用四唑盐(MTY)法检测Aβ，IL-1β对细胞活性的影响，应用RT-PCR法半定量分析IL-1β对APP基因表达的影响。结果：Aβ具有直接的神经细胞毒作用，与浓度以及聚集状态相关，以20μmol／L孵育3h毒性最大(q=5．62，P&;lt;0．01)，而孵育7d者几乎没有毒性。IL-1β(浓度为20μg／L)与Aβ25-35(浓度为20μmol／L孵育3h)共同作用于细胞时，Aβ25—35的细胞毒作用被扩大，细胞活性从36.7％降到了13．2％(q=3．8，P&;lt;0．05)；当IL-1β(浓度为20μg／L)与Aβ25-35(20μmol／L孵育7d)共同作用时，细胞活性迅速下降，从93％降到了7．7％(q=4．83，P&;lt;0．01)。IL-1β可以刺激PC12细胞APP751、770mRNA表达增加，与对照组相比，20μg／L组APP mRNA表达增加约为2倍(q=4．76，P&;lt;0．01)，此后增加不明显；APP mRNA的表达在IL-1β(20μg／L)刺激6h达高峰，约为对照组的2倍(q=4．92，P&;lt;0.01)。结论：Aβ具有直接细胞毒作用，与浓度以及聚集状态相关。IL-1β可以扩大Aβ的细胞毒性作用。IL-1β可以刺激PC12细胞APP mRNA表达增加，具有剂量及时间依赖性。     

鸡内金提取物通过调节肺泡巨噬细胞自噬水平减轻尘肺大鼠肺间质纤维化的机制

目的探究鸡内金提取物通过调节肺泡巨噬细胞自噬水平减轻尘肺大鼠肺间质纤维化的机制。方法选择30只雄性SD大鼠根据随机数字表法分为3组,每组10只。对照组为没有粉尘接触的健康SD大鼠;模型组采用一次性除尘方法建立大鼠矽肺模型;治疗组采用一次性除尘方法建立大鼠矽肺模型,每天灌服鸡内金提取物0.2 g。定量逆转录PCR(RT-qPCR)分析自噬相关基因(Beclin、LC3-Ⅱ和LC3-Ⅰ)和凋亡相关基因(Bcl-2)的mRNA表达。培养后6、12、24 h,MTT检测巨噬细胞的活力。培养后12、24 h,通过划痕实验测定细胞的划痕间隙距离。酶联免疫吸附试验法检测促炎因子白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平。蛋白质印迹检测大鼠肺部纤连蛋白、Ⅰ型胶原蛋白、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶-12(MMP-12)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和重组人精氨酸酶1(Arg1)的蛋白表达。结果模型组大鼠Beclin、LC3-Ⅱ/LC3-ⅠmRNA表达、IL-1β和TNF-α水平以及纤连蛋白、Ⅰ型胶原蛋白、MMP-9、MMP-12蛋白和iNOS蛋白表达水平均较对照组显著升高,Bcl-2 mRNA和Arg1蛋白表达水平均较对照组显著降低(P<0.05),治疗组大鼠Beclin、LC3-Ⅱ/LC3-ⅠmRNA表达、IL-1β和TNF-α水平以及纤连蛋白、Ⅰ型胶原蛋白、MMP-9、MMP-12蛋白和iNOS蛋白表达水平均较模型组显著降低,Bcl-2 mRNA和Arg1蛋白表达水平均较模型组显著升高(P<0.05)。培养后6、12、24 h,模型组较对照组细胞活力降低(P<0.05),治疗组大鼠较模型组细胞活力升高(P<0.05)。培养后12、24 h,模型组大鼠细胞划痕间隙距离较对照组降低(P<0.05),治疗组大鼠细胞划痕间隙距离较模型组升高(P<0.05)。结论鸡内金提取物通过诱导肺泡巨噬细胞自噬而发挥抗炎和抗纤维化作用。自噬通过抑制纤连蛋白、Ⅰ型胶原蛋白、MMP-9和MMP-12的表达,来保护肺泡巨噬细胞免受二氧化硅诱导的细胞凋亡,从而进一步减少由二氧化硅颗粒引起的炎症因子的分泌和最终的纤维化。     

雌激素受体β通过调节AMPK/mTORC1轴的作用诱导结肠癌细胞自噬

目的:探讨雌激素受体(ER)β诱导结肠癌细胞自噬的作用机制。方法:将ERβ质粒转染人结肠癌细胞株HCT116(p53野生型)和SW480(p53突变型)后,通过荧光显微镜观察自噬现象;采用蛋白印迹法检测LC3-Ⅱ蛋白、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、AMPK和p70S6K蛋白及相应磷酸化蛋白的表达变化;应用实时定量PCR法检测DRAM1、Sestrin1和Sestrin2的mRNA表达变化。结果:ERβ过表达能促进HCT116和SW480细胞发生自噬;LC3-Ⅱ和p-AMPK蛋白在HCT116细胞中分别上调了2.81倍和1.80倍(P<0.05);在SW480细胞中分别上调了1.70倍和2.48倍(P     

奥氮平与喹硫平对阿尔茨海默病相关基因共转染N2a细胞分泌淀粉样β蛋白42的影响

背景许多研究表明淀粉样β蛋白在阿尔茨海默病的发病中起着主要的作用,淀粉样β蛋白的减少将延缓阿尔茨海默病的发展,因此减少淀粉样β蛋白的产生成为干预阿尔茨海默病的一项重要策略.许多阿尔茨海默病患者因精神行为异常而接受抗精神病药物治疗,非典型抗精神病药物奥氮平与喹硫平能够明显地改善阿尔茨海默病患者临床整体印象评分,早期开始的长期干预能够改善患者预后.目的观察奥氮平与喹硫平对双转染(瑞典淀粉样β蛋白前体蛋白基因和早老素1基因)鼠成神经瘤细胞分泌淀粉样β蛋白42的作用.设计以细胞为研究对象,完全随机分组设计,对照实验研究.材料所有研究工作均在加拿大萨斯卡彻温大学医学院神经精神研究所进行.鼠N2a成神经瘤细胞与双转染N2a细胞由康奈尔大学医学院神经病学及神经科学系提供.干预双转染N2a细胞分别予200 μmol/L奥氮平及50μmol/L喹硫平处理24 h后,应用酶联免疫吸附反应法测定细胞内外淀粉样β蛋白的水平.应用四甲基偶氮唑盐方法检测细胞活性、BCA法测定细胞的蛋白质含量、免疫印迹检测N2a与双转染N2a细胞淀粉样β蛋白前体蛋白的表达、酶联免疫吸附法测定双转染N2a细胞分泌到培养液及细胞内的淀粉样β蛋白42水平.主要观察指标测定双转染N2a细胞分泌到培养液及细胞内的淀粉样β蛋白42水平.结果双转染N2a细胞淀粉样β蛋白前体蛋白的表达明显高于N2a细胞.奥氮平处理组细胞外淀粉样β蛋白浓度[(4.78±0.54)nmol/L]明显低于对照组[(7.69±0.62)nmol/L](t=3.52,P＜0.05);喹硫平处理组细胞外淀粉样β蛋白浓度[(4.09±0.18)nmol/L]明显低于对照组[(7.50±0.50)nmol/L](t=5.61,P＜0.05).奥氮平处理组细胞内淀粉样β蛋白浓度与对照组比较,差异无显著性意义(P＞0.05);喹硫平处理组细胞内淀粉样β蛋白浓度与对照组比较,差异无显著性意义(P＞0 05).结论奥氮平与喹硫平能够减少双转染鼠N2a细胞外淀粉样β蛋白42的分泌,奥氮平与喹硫平的应用有可能通过减少神经细胞淀粉样β蛋白42的分泌延缓阿尔茨海默病的发展.     

Toll样受体4在抗β2GPⅠ-β2GPⅠ复合物诱导小鼠腹腔巨噬细胞表达炎症因子中的作用

目的观察抗β2GPⅠ-β2GPⅠ复合物刺激小鼠腹腔巨噬细胞表达TNF-α、IL-1β、IL-6的效果,探讨Toll样受体4(TLR4)在其中的作用。方法对C3H/He N(TLR4正常)小鼠、C3H/He J(TLR4缺陷)小鼠腹腔注射非特异性兔Ig G(R-Ig G)、抗β2GPⅠ抗体,72 h后用细胞免疫荧光法检测小鼠腹腔巨噬细胞TNF-α、IL-1β、IL-6的表达水平;抗β2GPⅠ-β2GPⅠ复合物对小鼠腹腔巨噬细胞进行体外刺激,荧光定量PCR法检测细胞表达上述因子的mRNA水平,western blot法检测其蛋白质分泌水平。结果抗β2GPⅠ抗体刺激的C3H/He N小鼠腹腔巨噬细胞产生TNF-α、IL-1β、IL-6的水平明显高于C3H/He J小鼠,并经细胞免疫荧光法验证;经体外刺激后,荧光定量PCR法结果显示抗β2GPⅠ-β2GPⅠ复合物诱导C3H/He N小鼠腹腔巨噬细胞TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA表达水平高于空白组或C3H/He J刺激组(P均0.01);western blot结果显示C3H/He N来源细胞TNF-α、IL-1β、IL-6分泌均显著高于C3H/He J来源细胞(P均0.01)。结论抗β2GPⅠ-β2GPⅠ复合物能够促进小鼠腹腔巨噬细胞炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6的表达,TLR4为介导此过程的受体之一。     

二烯丙基三硫对脂多糖诱导小鼠肺泡巨噬细胞株MH-S细胞因子生成的影响

目的 探讨二烯丙基三硫（DATS）对脂多糖（LPS）诱导小鼠肺泡巨噬细胞株MH-S细胞因子生成的影响。方法 体外培养MH-S细胞，用DATS和（或）LPS进行干预。酶联免疫吸附法测定细胞上清液中肿瘤坏死因子（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）浓度。反转录PCR检测细胞中TNF-α、IL-1β mRNA表迭。结果 LPS（1mg／L）孵育细胞1、2、3、6h，TNF-α、IL-1β的蛋白生成及其mRNA表达均较对照组明显增加（P〈0．01），呈时间依赖性。用DATS（0．1、0．5、2．5、5．0ms／L）预处理细胞30min后再给予LPS刺激3h，可使TNF-α、IL-1β含量及其mRNA表达明显降低，并呈剂量依赖性，其中TNF-α含量仍高于对照组（P〈0．05），但IL-1β含量在2．5、5mg／LDATS作用下可降至对照组水平。单独DATS对TNF-α及IL-1β的生成及其mRNA表达无明显影响（P〉0．05）。结论 DATS通过抑制LPS诱导的小鼠MH-S细胞TNF-α、IL-1β mR-NA表达而减少其蛋白生成，具有直接的抗炎效应，这是DATS预防ALI发生、减轻肺组织损伤的重要机制。