单核细胞趋化蛋白-1在增生型糖尿病视网膜病变患者玻璃体中的表达

研究表明,炎症反应与糖尿病视网膜病变(DR)的发病机制密切相关[1].趋化因子是炎症反应的重要因子,可以诱导炎性细胞发生迁移聚集,在炎症性疾病的发生发展中起重要作用.单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)是单核细胞及巨噬细胞的强激活剂,能使大约30％的单核细胞发生迁移[2,3].为了进一步探讨MCP-1与DR发生发展的关系,我们观察了一组增生型DR(PDR)患者玻璃体中MCP-1的表达.现将结果报道如下.     

脯氨酰羟化酶在糖尿病大鼠视网膜的表达及其意义

目的 观察探讨糖尿病(DM)大鼠视网膜组织中脯氨酰羟化酶(PHD-2)的表达及意义.方法 雄性Wistar大鼠108只,随机分为DM模型组和正常对照组,分别为60、48只.对DM模型组大鼠进行一次性腹腔注射1％链脲霉素枸橼酸(STZ)溶液建模,正常对照组腹腔注射等量的构橼酸缓冲液.造模后1、3、6个月,荧光显微镜下观察大鼠视网膜血管分布形态.造模后1～6个月,采用伊凡思蓝(EB)灌注视网膜铺片检测视网膜组织内EB浓度;免疫组织化学染色法观察大鼠视网膜PHD-2阳性染色的分布特点;蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测大鼠视网膜中PHD-2、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)及血管内皮生长因子(VEGF)的表达.结果 荧光显微镜观察结果显示,正常对照组大鼠视网膜血管走行规则,浅深层血管形态清晰;DM模型组大鼠视网膜血管渗漏持续存在.造模后1～6个月,DM模型组大鼠视网膜血管外组织内EB含量较正常对照组明显增加,差异有统计学意义(t=3.810,2.722,2.845,2.342,2.456,3.823;P＜0.05).免疫组织化学染色结果显示,DM模型组及正常对照组大鼠视网膜中均可见PHD-2阳性染色,主要分布于视网膜内核层、神经节细胞层及血管壁.Western blot检测结果显示,DM模型组大鼠视网膜中PHD-2表达在造模后1、2个月时较正常对照组下降(t=16.230,16.390;P＜0.05);HIF-1a表达在造模后1、2、3个月时较正常对照组明显升高(t=27.073,36.709,10.176; P＜0.05);VEGF表达在造模后1～6个月均较正常对照组升高(t=13.547,31.984,21.897,8.912,9.019,14.046;P＜0.05).结论 PHD-2在DM大鼠视网膜组织中有丰富表达.PHD-2可能在糖尿病视网膜病变发生发展中有一定的调控作用,其作用途径及机制与VEGF作用通路有关.     

Müller细胞生理功能及其在糖尿病视网膜病变中的变化

Müller细胞接触并包裹视网膜神经元细胞体和突触,对视网膜神经元的功能及代谢起到支持作用;对维护视网膜细胞外环境的稳定,如离子、水平衡和血视网膜屏障（BRB）等具有重要调控作用;可释放神经胶质递质和刺激性神经物质,通过对神经递质的再吸收循环,为视网膜神经元提供神经递质前体进而影响神经突触的活性。此外,Müller细胞对病理刺激能够产生反应。该反应一方面具有视网膜神经元保护作用,如分泌神经营养因子、吸收降解兴奋性毒素、分泌抗氧化剂等,另一方面也可引起视网膜神经元谷氨酸盐代谢紊乱和离子平衡紊乱,导致视网膜水肿和神经元变性损伤。Müller细胞对糖尿病视网膜病变（DR）的发生发展具有重要影响。DR可引起Müller细胞增生,除造成谷氨酸盐代谢紊乱外,还会引起Müller细胞大量分泌炎症介质和血管内皮生长因子等破坏BRB。深入研究Müller细胞,对探讨DR的发病及防治具有重要意义。针对Müller细胞靶向转染的腺病毒载体研制成功,利用两亲肽携带蛋白或抗体直接转染细胞达到抑制DR的效果,这些方法为早期防治DR提供了新的途径。     

细胞因子在糖尿病视网膜病变中作用的研究进展

糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)确切的发病机制尚不清楚.有研究认为,细胞因子可增加单核细胞和内皮细胞黏附的过程,进而引起视网膜毛细血管炎症反应,是DR发生发展的关键因素.本文就多种细胞因子,如血管内皮生长因子、肿瘤坏死因子、碱性成纤维细胞生长因子、色素上皮衍生因子等在DR中的作用进行综述.     

糖尿病视网膜病变患者外周血内皮祖细胞数量及功能的变化

目的 观察糖尿病视网膜病变(DR)患者外周血内皮祖细胞(EPC)数量及功能变化.方法 选取DR患者12例(DR组)、糖尿病(DM)患者18例(DM组)及无DM的老年性白内障患者15例(对照组)纳入研究.密度梯度离心法收集各组患者外周血单个核细胞,培养后第10天采用流式细胞仪计数EPC细胞阳性率.采用二苯基四氮唑嗅盐(MTT)比色法、黏附能力测定实验及Transwell实验检测EPC的增生、黏附和迁移能力.结果 流式细胞仪检测结果显示,对照组、DM组及DR组培养后第10天EPC细胞阳性率分别为(45.190±1.287)％、(30.130±3.245)％、(37.370±2.501)％;3组间差异有统计学意义(F=27.690,P=0.001).MTT比色法检测结果显示,对照组、DM组及DR组吸光度[A,旧称光密度(OD)]值分别为0.330±0.047、0.225±0.042、0.120±0.029;3组间差异有统计学意义(F=29.327,P=0.000).黏附能力测定实验结果显示,对照组、DM组及DR组EPC细胞数分别为76.400±7.503、51.167±6.646、26.500±7.853;3组间差异有统计学意义(F=56.612,P=0.000).Transwell实验结果显示,对照组、DM组及DR组EPC细胞数分别为23.600±6.504、20.833±4.491、12.000±2.944;3组间差异有统计学意义(F=6.477,P=0.012).结论 DR患者外周血EPC数量减少,且其增生、黏附和迁移能力受损.     

血管内皮生长抑制因子在糖尿病视网膜病变大鼠中的表达

目的 观察血管内皮生长抑制因子（VEGI）及其相关因子在糖尿病（DM）大鼠外周血、玻璃体液及视网膜组织中的表达,探讨VEGI在糖尿病视网膜病变（DR）发病机制中的作用。方法 70只6周龄雄性Wistar大鼠,随机分为空白对照组（10只）,DM 1、3、6个月组（各20只）。DM大鼠模型建立后,分别于1、3、6个月时取大鼠外周血、玻璃体液、全眼球。酶联免疫吸附测定法检测肿瘤坏死因子样配体1/血管内皮生长抑制因子251（TL1A/VEGI 251）、血管内皮生长因子（VEGF）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）在血清及玻璃体液浓度,石蜡切片免疫组织化学法检测各因子在视网膜组织中的表达,苏木素 伊红（HE）染色评价各组大鼠DR进程。比较空白对照组和DM实验组间大鼠血清、玻璃体液及视网膜组织中TL1A、VEGF、TNF-α、IL-1β的表达差异。结果 分析采用单因素方差分析、独立样本t检验和最小显著差法检验。结果 空白对照组、DM 1、3、6个月组大鼠血清TL1A浓度分别为（92.09±2.05）、（118.36±8.30）、（85.90±7.51）、（78.90±4.88） ng/L,组间血清TL1A浓度比较,差异有统计学意义（F=77.405,P＜0.05）。从空白对照组到DM 1、3、6个月组,大鼠血清TNF-α、IL-1β浓度均呈升高趋势,4组间血清TNF-α、IL-1β浓度比较,差异有统计学意义（F=3.508、15.416,P＜0.05）。VEGF浓度在DM 1个月时升高,DM 3个月时下降,DM 6个月时再次升高,但4组间VEGF浓度比较,差异无统计学意义（F=1.242,P＞0.05）。各组大鼠玻璃体液TL1A浓度分别为（91.50±8.18）、（67.03±6.74）、（47.44±4.92）、（46.01±4.62） ng/L,组间TL1A浓度比较,差异有统计学意义（F=114.777,P＜0.05）。从空白对照组到DM 1、3、6个月组,大鼠玻璃体液VEGF、TNF-α、IL-1β浓度均呈升高趋势,4组间VEGF、TNF-α、IL-1β比较,差异有统计学意义（F=8.816、4.392、3.635,P＜0.05）。免疫组织化学检测结果显示,DM 1、3个月组大鼠视网膜TL1A表达吸光度［A,旧称光密度（OD）］值均较空白对照组降低（t=6.851、6.066,P＜0.05）,但DM 6个月组与空白对照组的TL1A表达A值比较,差异无统计学意义（t=1.401,P＞0.05）;DM各组大鼠视网膜VEGF和TNF-α表达A值均较空白对照组显著升高（t_VEGF=-4.709、-16.406、-9.228,P＜0.05;t _TNF-α=-4.703、-6.583、-17.762,P＜0.05）;DM 1、6个月组大鼠视网膜IL-1β表达A值均较空白对照组显著升高（t=-4.108、-3.495,P＜0.05）,但DM 3个月组与空白对照组IL-1β表达A值比较,差异无统计学意义（t=-0.997,P＞0.05）。HE染色结果显示,空白对照组与DM 1个月组大鼠视网膜组织结构基本正常;DM 3个月组大鼠视网膜组织水肿,细胞排列紊乱;DM 6个月组大鼠视网膜组织明显水肿,神经节细胞核染色加深,内丛状层可见大量新生血管,内核层细胞排列紊乱、水肿,可见大量脂肪空泡,视网膜各层结构不清晰。结论 VEGI可能通过与VEGF、TNF-α、IL-1β等因子的相互作用参与DR的发生发展过程。     

表观遗传调控在糖尿病视网膜病变中的研究进展

遗传和环境因素均参与糖尿病及其并发症的病理过程,表观遗传调控在其中的作用也日渐明确。糖尿病及其并发症中的主要病理过程如高血糖、氧化应激、炎症等均会导致表观遗传调控的异常,从而影响染色质结构和基因表达,而这些染色质表观遗传修饰的持续存在和糖尿病相关的代谢记忆现象相联系。表现机制相关的药物和治疗手段的研发或将成为糖尿病及相关并发症靶向治疗的新方面。     

核转录因子与糖尿病视网膜病变

糖尿病视网膜病变作为糖尿病的一种严重并发症，可能导致严重的视力下降或丧失。核转录因子（nuclear factorkB，NF-κB）作为一个重要的多向性核转录因子，在细胞凋亡和新生血管过程中能调节众多细胞因子和分子的表达。探讨NF-κB在糖尿病视网膜病变的发生、发展过程中的作用，可以使我们更好地从分子生物学的角度理解糖尿病视网膜病变的发病机制，为其预防和治疗提供恩路。现就NF—κB在糖尿病视网膜病变各个环节中的作用进行综述。     

动态脉压差与糖尿病视网膜病变的关系

糖尿病视网膜病变(DR)是DM(DM)患者致盲的重要原因之一,其发生发展与诸多全身因素有关.流行病学调查研究显示,脉压差增高是心血管疾病的危险标志[1,2],而DM能导致脉压差增高[3].但有关脉压差变化与DR关系的研究报道尚不多见[4,5].我们对一组2型DM患者进行了观察研究,了解其动态脉压差与DR程度的关系.     

糖尿病大鼠视网膜毛细血管细胞凋亡及其凋亡相关基因的表达

目的 确定早期糖尿病大鼠视网膜毛细血管细胞凋亡并观测凋亡相关基因（Bax、bcl-2）在早期糖尿病大鼠视网膜的表达。方法 选择健康成年Wistar大鼠40只,随机分成正常对照组（contrast group,CON）和糖尿病（diabetes mellitus)1个月（DM1）、3个月（DM3）及6个月（DM6）组。腹腔内注射链脲佐菌素（streptozotocin,STZ)诱发大鼠糖尿病。制备大鼠视网膜血管辅片及切片,分别行TUNEL法和免疫组化ABC法染色,并对ABC法染色结果进行计算机图像分析。结果 TUNEL法标记的阳性周细胞核出现于DM3和DM6组,而内皮细胞见于DM6组,CON和DM1组未见阳性反应。TUNEL阳性反应细胞核染色质分布不均,表现为环形核、新月形核等典型凋亡细胞特征。ABC法染色：于CON及DM各组,Bax和bcl-2二基因的蛋白均在视网膜血管表达。随病程进展,其阳性反应强度逐渐增加。此外,bcl-2阳性反应在DM3组于色素上皮细胞出现。在DM6组进一步扩大到视杆内节和节细胞。而Bax在DM6组亦出现于细胞。结论 早期糖尿病大鼠视网膜毛细血管周细胞丧失的性质为凋亡,内皮细胞亦存在凋亡;Bax和bcl-2在早期糖尿病大鼠视网膜的表达增加。     

增生型糖尿病视网膜病变患者外周血内皮祖细胞的数量变化及意义

目的 观察增生型糖尿病视网膜病变(PDR)患者外周血内皮祖细胞(EPCs)数量的变化规律,探讨EPCs在糖尿病视网膜病变(DR)发病机制中的作用.方法 PDR患者40例(PDR组)、单纯2型糖尿病患者30例(糖尿病组)及健康体检者20名(对照组)纳入研究.抽取3组受检者晨起空腹静脉血2 ml,反复离心过滤.采用流式细胞仪分析2×105个细胞,以CD34和(或)CD133双阳性细胞群为EPCs,观察并比较3组受检者外周血EPCs数量变化;同时分析PDR患者外周血EPCs数量与DR病程、糖化血红蛋白及血脂的相关性.结果 PDR组、糖尿病组及对照组受检者外周血EPCs计数分别为(49±12)、(35±11)、(90±25)个/ml,3组间差异有统计学意义(F=56.260,P＜0.05).相关性分析发现,PDR患者外周血EPCs数量与DR病程呈正相关(r=0.564,P＜0.05),与糖化血红蛋白(r=-0.170,P>0.05)及血脂(r=0.261,P>0.05)均无相关性.结论 PDR患者外周血EPCs数量较正常者明显降低;EPCs在DR发病机制中可能具有一定作用.

Abstract：

Objective To investigate the amounts of endothelial progenitor cells(EPCs)in peripheral blood of patients with proliferative diabetic retinopathy(PDR).Methods Forty patients with PDR(PDR group),thirty patmnts with type 2 diabetes mellitus(DM)without DR(DM group),and twenty agematched normal subjects(control group)were enrolled in this study.Blood samples were treated bv repeated centrifugation and stained with monoclonal antibodies.At least 2 × 105 cells were analyzed bv flow cytometry.EPCs were identified by CD34 and CD133 antibody.The correlation between EPCs numbers and DR duration,glycosylated hemoglobin,serum lipids was analyzed.Results The number of EPCs in PDR,DM and control group were(49±12)、(35±11)、(90±25)cells/ml respectively,the difference was statistically significant(F=56.260,P=0.000).There was a positive correlation between EPCs numbers and DR duration(r=0.564,P＜0.05).However there was no correlation between EPCs numbers and glycosylated hemoglobin(r=-0.170,P>0.05)or triglyceride levels(r=0.261,P>0.05).Conclusions The number of EPCs in peripheral blood of PDR patients was decreased. EPCs might play an important role in the pathogenesis of PDR.     

糖尿病视网膜病变对大鼠循环外周血内皮祖细胞数量的影响

目的 观察糖尿病视网膜病变(DR)对循环外周血内皮祖细胞(EPCs)的影响.方法 雄性成年Wistar大鼠60只,随机分为正常对照组和糖尿病组.后者通过腹腔注射链脲佐菌素(STZ)建立DR模型.采用流式细胞仪分别计数建模后1周、1、3、6个月各组大鼠循环外周血EPCs数量,同时于各相应时间点摘除大鼠眼球行苏木精一伊红(...     

多因素协同拮抗、上下游因子级联的庞大网络：糖尿病视网膜病变机制研究的热点

糖尿病视网膜病变（DR）发病机制复杂,除了传统的4条致病分子通路外,统一机制、炎症反应、神经元退行性病变和血糖“代谢记忆”等多因素相互协同或拮抗以及上下游因子级联式的庞大网络是目前DR发病机制研究的热点。尽管如此,现有的这些研究或许也只是DR发生发展机制这座“冰山”的一角;DR机制研究仍然面临巨大的挑战。除考虑从多因素协同或上下游通路的关系角度加强对其新生血管生成等发病机制的研究外,多学科配合,探索DR与糖尿病其他全身疾病之间的联系,寻找新的关联靶点,或许会给DR基础研究带来新的收获。     

增生型糖尿病视网膜病变患者外周血内皮祖细胞的数量变化及意义

Objective To investigate the amounts of endothelial progenitor cells(EPCs)in peripheral blood of patients with proliferative diabetic retinopathy(PDR).Methods Forty patients with PDR(PDR group),thirty patmnts with type 2 diabetes mellitus(DM)without DR(DM group),and twenty agematched normal subjects(control group)were enrolled in this study.Blood samples were treated bv repeated centrifugation and stained with monoclonal antibodies.At least 2 × 105 cells were analyzed bv flow cytometry.EPCs were identified by CD34 and CD133 antibody.The correlation between EPCs numbers and DR duration,glycosylated hemoglobin,serum lipids was analyzed.Results The number of EPCs in PDR,DM and control group were(49±12)、(35±11)、(90±25)cells/ml respectively,the difference was statistically significant(F=56.260,P=0.000).There was a positive correlation between EPCs numbers and DR duration(r=0.564,P＜0.05).However there was no correlation between EPCs numbers and glycosylated hemoglobin(r=-0.170,P>0.05)or triglyceride levels(r=0.261,P>0.05).Conclusions The number of EPCs in peripheral blood of PDR patients was decreased. EPCs might play an important role in the pathogenesis of PDR.     

增生型糖尿病视网膜病变患者外周血内皮祖细胞的数量变化及意义

Objective To investigate the amounts of endothelial progenitor cells(EPCs)in peripheral blood of patients with proliferative diabetic retinopathy(PDR).Methods Forty patients with PDR(PDR group),thirty patmnts with type 2 diabetes mellitus(DM)without DR(DM group),and twenty agematched normal subjects(control group)were enrolled in this study.Blood samples were treated bv repeated centrifugation and stained with monoclonal antibodies.At least 2 × 105 cells were analyzed bv flow cytometry.EPCs were identified by CD34 and CD133 antibody.The correlation between EPCs numbers and DR duration,glycosylated hemoglobin,serum lipids was analyzed.Results The number of EPCs in PDR,DM and control group were(49±12)、(35±11)、(90±25)cells/ml respectively,the difference was statistically significant(F=56.260,P=0.000).There was a positive correlation between EPCs numbers and DR duration(r=0.564,P＜0.05).However there was no correlation between EPCs numbers and glycosylated hemoglobin(r=-0.170,P>0.05)or triglyceride levels(r=0.261,P>0.05).Conclusions The number of EPCs in peripheral blood of PDR patients was decreased. EPCs might play an important role in the pathogenesis of PDR.     

辛伐他汀对糖尿病视网膜病变大鼠外周血内皮祖细胞数量和视网膜病变的影响

目的 探讨辛伐他汀对糖尿病视网膜病变(DR)大鼠外周血内皮祖细胞(EPCs)数量及视网膜病变的影响.方法 雄性成年Wistar大鼠80只,以随机数字表法分为正常对照组、模型对照组、安慰剂组、辛伐他汀组,每组各20只大鼠.采用腹腔注射链脲佐菌素(STZ)建立DR大鼠模型.正常对照组、模型对照组不给予任何干预;辛伐他汀组予辛伐他汀20 mg/kg灌胃,1次/d;安慰剂组给予等量蒸馏水灌胃,1次/d.分别于1、4及12周时取静脉血,采用流式细胞仪分别计数各组大鼠外周血EPCs数量的变化.于12周时处死大鼠,摘除眼球行苏木精-伊红(HE)染色,采用伊文思蓝(EB)定量检测血视网膜屏障的破坏程度,免疫组织化学法分析CD31在大鼠视网膜中的表达.实时定量逆转录聚合酶链反应检测内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)及血管生成素-1(Ang-1)在视网膜的表达.对比分析EPCs的数量改变与视网膜病理变化的相互关系.结果 与正常对照组大鼠相比,注射STZ后1、4、12周时安慰剂组大鼠外周血EPCs数均降低;注射STZ后1、4、12周时辛伐他汀组大鼠外周血EPCs数明显高于模型对照组和安慰剂组,差异均有统计学意义(t=4.967,5.648,6.688,6.042,7.392,7.454;P＜0.05);模型对照组和安慰剂组大鼠外周血EPCs数相比,差异无统计学意义(t=0.525,-0.249,-0.619;P＞0.05);正常对照组和辛伐他汀组大鼠外周血EPCs数相比,差异均有统计学意义(t=6.733,2.794,-5.535;P＜0.05).组织病理学检查显示,正常对照组大鼠视网膜各层结构清晰、排列整齐、形态正常;模型对照组和安慰剂组大鼠视网膜细胞排列紊乱,细胞核肿胀、体积增大,视网膜组织水肿;辛伐他汀组大鼠视网膜各层组织水肿减轻,细胞排列渐规则.模型对照组和辛伐他汀组大鼠视网膜平均EB渗漏量较正常对照组显著增加,辛伐他汀组较模型对照组明显减少,差异均有统计学意义(F=65.808,P＜0.05).正常对照组、模型对照组和安慰剂组中表达CD31的阳性细胞数显著低于辛伐他汀组,组间CD31阳性细胞数比较,差异有统计学意义(F=24.799,P＜0.05);eNOS在模型对照组表达较正常对照组明显减弱,辛伐他汀组表达强度较模型对照组增强(t=-2.750,2.230;P＜0.05);iNOS和Ang-1在模型对照组表达较正常对照组明显增强,辛伐他汀组表达强度较模型对照组减弱,差异均有统计学意义(t=3.881,-1.144,4.244,-1.458;P＜0.05).安慰剂组视网膜EB渗漏量、eNOS、iNOS及Ang-1的相对表达量与模型对照组相比,差异均无统计学意义(t=0.480,-0.877,0.062,0.220;P＞0.05).结论 辛伐他汀可动员DR大鼠外周血EPCs,诱导视网膜内皮细胞迁徙分化,减缓DR进展.其可能机制为调节eNOS和iNOS等内皮形成相关因子.     

糖尿病视网膜病变对大鼠循环外周血内皮祖细胞数量的影响

Objective To observe the effect of diabetic retinopathy on endothelial progenitor cells (EPCs)from peripheral blood.Methods Sixty male Wistar rats were divided into control group and diabetes group.The rats in diabetes group were induced with streptozotocin(STZ)injection for diabetic retinopathy model.Flow cytometry was used to identify and count the number of EPCs from peripheral blood at 1 week.1,3 and 6 months after injection.All eyeballs were examined by hematoxylin and eosin (HE)staining,periodic acid-Schiffs(PAS)staining of trypsin-digested retinal vessels flat preparation and transmission electron microscope.EPCs count,and the relationship between DR morphological changes and EPCs count were compared and analyzed.Results The quantity of EPCs from peripheral blood at 1 week,1,3 and 6 months after STZ injection were 25±7,28±8,39±7,43±7 cells per 200 000 monocytes respectively,which decreased compared with the control group 45±4 cells per 200 000 monocytes(F=8.933,P＜0.0 1).The quantity of EPCs was gradually increased at 1 week,1,3 and 6 months after STZ injection,accompanied with responsive pathological changes of retinal structure and vessels.The thickness of retina at 1 week and 1 month after injection were reduced slightly.The number of retinal ganglion cells reduced,with the time passing by.Endothelial cells were edema,mitochondrial was swollen,capillary basement membrane was thicken,lumen was significant stenosis,lumen occlusion and retinal artery aneurysm were observed at 6 months after STZ injection.Conclusion The number of EPCs increases gradually throughout the development of DR.