褪黑素对体外培养的视网膜母细胞瘤HXO-RB44细胞增生活性的影响察

目的 探讨褪黑素（MLT）对视网膜母细胞瘤(RB)HXO-RB44细胞增生活性的影响及相关机制。方法 利用四氮唑化合物（MTT）比色法,观察不同浓度的MLT对RB HXO-RB44细胞增生活性的影响;利用10-10、10-9、10-8、10-7 mmol/L的MLT对RB HXO-RB44分别进行干预,采用Hoechst荧光染色观察细胞凋亡的形态学变化;利用流式细胞仪测定不同浓度的MLT干预24 h后,RB HXO-RB44细胞内活性氧（ROS）的表达、细胞周期与凋亡情况。结果 浓度为10-7 mmol/L以下的MLT对HXO-RB44细胞并无抑制作用（P值均＞0.05）。10-6 mmol/L以上的MLT能够显著抑制HXO-RB44细胞增生（P＜0.01）。浓度为10-6、10-5、10-4 mmol/L的MLT干预后,随药物浓度的升高,HXO-RB44细胞内ROS的表达逐渐升高。Hoechst染色显示：不同浓度的褪黑素分别作用于培养的HXO-RB44细胞4、8、12、24 h后,细胞核固缩、核碎裂增多,细胞凋亡的程度随着MLT浓度的增大而加重。流式细胞仪检测：药物干预后,G0/G1期细胞明显增多,S期细胞减少,G2/M期细胞相对增多,随着MLT浓度的升高,HXO-RB44细胞凋亡率明显升高。结论 浓度大于10-6 mmol/L的MLT能够有效地抑制HXO-RB44细胞增生,其抑制效率随药物浓度的升高和作用时间的延长而增强;MLT的抗细胞增殖作用可能与其诱导HXO-RB44细胞内的活性氧产生、阻滞细胞周期于G0/G1期并诱导细胞凋亡有关。     

人参皂甙Rg3诱导视网膜母细胞瘤HXO-RB44细胞凋亡

目的观察人参皂甙Rg3对体外视网膜母细胞瘤（Rb）HXO—RB44细胞凋亡的作用。方法不同质量浓度的Rg3处理HXO—RB44细胞后，应用MTT比色法分析其细胞生长抑制作用。HOECHST33258染色法观察细胞的形态学改变，流式细胞仪测定48h细胞凋亡率。结果人参皂甙Rg3在一定范围内抑制体外培养的HXO-RB44细胞生长，其抑制率具有时间、质量浓度依赖性（P〈0.01）。HOECHST染色可见实验组HXO-RB44细胞中致密强荧光。流式细胞仪检测凋亡率随药物质量浓度增加而增加。结论人参皂甙Rg3主要通过诱导HXO—RB44细胞凋亡达到抑制作用。     

人眼视网膜母细胞瘤细胞凋亡的研究

目的 观察人视网膜母细胞（ｒｅｔｉｎｏｂｌａｓｔｏｍａ,ＲＢ）标本中细胞凋亡,探讨细胞凋亡在ＲＢ发生发展及消退中的作用。方法 用ＴＵＮＥＬ方法光镜和电镜观察人ＲＢ摘除眼球标本中是否存在细胞凋亡。结果 １５例人ＲＢ分化型和未分化型标本中有９例发现少量凋亡细胞,自发退化型ＲＢ中未发现凋亡细胞。每例中均见成片出现的坏死细胞。结论 视网膜母细胞瘤细胞死亡通过坏死与凋亡２种途径。细胞凋亡是ＲＢ自发退化的机制     

热诱导视网膜母细胞瘤细胞凋亡及阿斯匹林对热凋亡的保护作用

目的 研究视网膜母细胞瘤的热凋亡现象及阿斯匹林对视网膜母细胞瘤热凋亡的影响。 方法 将视网膜母细胞瘤Y79细胞分为单纯加热组及加热+阿斯匹林组。加热条件：44℃水浴,加热时间分别为10,20,30,40分钟。阿斯匹林浓度为0.18,1.8,18μg/ml。分别测定细胞凋亡;热休克蛋白70的表达;bcl-2蛋白的表达。 结果 44℃加热可诱导视网膜母细胞瘤Y79细胞凋亡,并呈剂量依赖性。当加热超过一定范围(44℃,40分钟)细胞主要表现为坏死。阿斯匹林可抑制热诱导的Y79细胞的凋亡,也呈剂量依赖性。Y79细胞经44℃ 30分钟加热后,热休克蛋白70表达增强,阿斯匹林(1.8μg/ml以上)可进一步增加Y79细胞热休克蛋白70的表达。加热对Y79细胞bcl-2的表达无明显影响,阿斯匹林在加热状态下可增加Y79细胞bcl-2的表达。 结论 加热在一定范围内可诱导Y79细胞凋亡,阿斯匹林对热诱导的Y79细胞凋亡有保护作用,可能与其增加Y79细胞热休克蛋白70及bcl-2的表达有关。 (中华眼底病杂志, 1999, 15: 143-145)     

人视网膜母细胞瘤的细胞凋亡

目的 观察凋亡是否为视网膜母细胞瘤（ＲＢ）细胞死亡的主要方式。方法 应用光镜（１６例）、电镜（４例）及ＴＵＮＥＬ标记（１２例）对ＲＢ进行观察研究。结果 光镜下凋亡细胞大多位于退化区。电镜下可见不同凋亡阶段的ＲＢ细胞,占瘤细胞死亡的４２％。ＴＵＮＥＬ标记阳性细胞大多位于肿瘤退化区。凋亡指数（ＡＩ）在未分化型和放疗后的ＲＢ中明显增高（Ｐ〈０．０５）,与视神经受累与否及临床分期无关（Ｐ〉０．０５）。结论 凋亡可能是导致ＲＢ细胞死亡的主要形式,诱导调亡可作为促使ＲＢ退化的一种手段。     

细胞因子诱导人视网膜母细胞瘤细胞凋亡

该研究旨在探讨IFN-λ和TNF-α在人视网膜母细胞瘤(Rb)细胞中的抗增生特性。     

Rb基因诱导视网膜母细胞瘤移植瘤细胞凋亡的实验研究

目的观察外源性Ｒｂ基因对视网膜母细胞瘤（ＲＢ）细胞凋亡的影响。方法建立裸鼠眼玻璃体腔ＲＢ移植瘤模型及构建Ｒｂ基因的逆转录病毒表达载体Ｐｂａｂｅ－Ｒｂ，用脂质体Ｄｏｓｐｅｒ介导法将Ｒｂ基因导入裸鼠ＲＢ移植瘤，采用流式细胞术（ＦＣＭ），光镜、电镜及ＴＵＮＥＬ细胞凋亡原位末端标记法进行ＲＢ细胞凋亡的检测。结果Ｒｂ基因在ＲＢ移植瘤内表达至少持续７天。ＦＣＭ检测发现在Ｒｂ基因转染后第４天，各实验组治疗眼ＲＢ中均可检测到凋亡细胞峰，凋亡细胞百分率高于对照眼；第２０天，各实验组治疗眼细胞凋亡百分率与对照眼比无差异（Ｐ＞０．０５）。透射电镜下可见到典型的早期凋亡细胞及晚期凋亡小体形成。ＴＵＮＥＬ方法可在荧光显微镜下见到发黄绿色荧光的凋亡细胞，光镜下可见到紫红色的被标记的凋亡细胞。结论Ｒｂ基因可诱导ＲＢ移植瘤细胞凋亡，这可能是Ｒｂ基因体内抗癌的又一作用机制。     

化疗药物诱导视网膜母细胞瘤细胞凋亡模型的建立

目的 检测不同类型肿瘤化疗药物对视网膜母细胞瘤（ｒｅｔｉｎｏｂｌａｓｔｏｍａ ＲＢ）细胞系ＨＸＯ－ＲＢ４４的诱导凋亡作用,建立该细胞系的细胞凋亡模型,作为今后研究化疗药物诱导ＲＢ细胞凋亡机理的工作基础。方法 将长春新碱、阿糖胞苷、氨甲喋呤、环磷酰胺、噻替派、米托蒽醌、阿克拉霉素、吡喃阿霉素、顺铂、卡铂、丝裂霉素、足叶乙甙第十二种化疗药物分别以１０＾－９、１０＾－８、１０＾－７、１０＾－６、１０＾－     

Apoptin基因诱导视网膜母细胞瘤凋亡的研究

目的观察Apoptin基因对人视网膜母细胞瘤细胞株HXO-RB44的促凋亡作用,并探讨其可能的机制。方法用脂质体将Apoptin基因导入HXO-RB44细胞,通过RT-PCR法检测ApoptinmRNA的表达,同时用SABC免疫组织化学法分析Apoptin和p53的表达。采用细胞计数法检测细胞生长抑制率,流式细胞仪检测细胞周期的变化。结果转入Apoptin基因后,HXO-RB44细胞的生长明显受抑制（P〈0.05）。细胞周期分析可见凋亡峰,凋亡率为38.5%。细胞中可见Apoptin阳性表达（P〈0.05）,p53表达差异无统计学意义（P〉0.05）。凋亡细胞在荧光显微镜下形成凋亡小体。结论转入Apoptin基因可显著促进HXO-RB44细胞的凋亡,Apoptin诱导的凋亡不依赖功能性p53的生成。     

榄香烯乳联合足叶乙甙对视网膜母细胞瘤HXO-RB44细胞凋亡及survivin表达的影响

目的:观察榄香烯乳联合足叶乙甙对视网膜母细胞瘤HXO-RB44细胞凋亡及Survivin表达的影响及其作用机制.方法:采用榄香烯乳、足叶乙甙单药及两者联合处理视网膜母细胞瘤HXO-RB44细胞,观察HXO-RB44细胞生长情况并采用四甲基偶氮唑蓝(MT)结果:HXO-RB44细胞经榄香烯乳、足叶乙甙及两者联合处理后,细胞增殖受到不同程度的抑制(r=0.963,P＜0.05),Survivin蛋白表达下降(P＜0.01);其中以两者联合用药最为显著.结论:榄香烯乳联合足叶乙甙能协同抑制HXO-RB44细胞的增殖,并可能下调survivin的表达,促进细胞的凋亡,抑制RB细胞系增生.     

MiR-145对视网膜母细胞瘤Y79细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨MicroRNA145（miR．145）对视网膜母细胞瘤Y79细胞增殖和凋亡的影响。方法实验研究。将人视网膜母细胞瘤细胞株Y79分为四组：miR-145干预组、阴性miRNA对照组、空脂质体组、空白对照组。脂质体转染法将miR．145转入Y79细胞;荧光定量PCR检测转染后48h成熟miR．145的表达：CCK．8法检测转染48h后的细胞增殖抑制率;流式细胞术检测细胞周期;AnnexinV／PI免疫荧光双染色和流式细胞术检测细胞凋亡。各组数据的比较采用单因素方差分析。结果采用脂质体转染方法．成功将miR．145转染至Y79细胞;荧光定量PCR显示：miR．145干预组成熟miR．145表达（79．06±3．45）明显增加,与阴性miRNA对照组（1．06±0．03）、空脂质体组（O．93±O．02）和空白组（1．00±0．02）比较,差异有统计学意义（F=229．853,P〈0．05）;miR-145干预组的增殖抑制率（21．64％）明显高于阴性miRNA对照组（2．57％）、空脂质体组（3．97％）（F=34．130,P〈0．05）;miR．145抑制Y79细胞周期于G1期：AnnexinV／PI免疫荧光双染色和流式细胞术显示miR．145干预组AnnexinV阳性和AnnexinV／PI双阳性细胞明显增多,阳性率明显高于其他三组,差异有统计学意义（F=35．434,P〈0．05）。结论miR-145可以抑制视网膜母细胞瘤细胞Y79的增殖,诱导细胞凋亡。     

顺铂对视网膜母细胞瘤细胞B7-H1表达的影响

　　目的　观察顺铂对视网膜母细胞瘤（RB）细胞B7-H1表达的影响,并探讨其作用机制。方法　分别采用浓度为0.375、0.750、1.500、3.000、6.000 μg/ml顺铂处理人RB细胞HXO-Rb₄₄细胞,作为不同浓度实验组;以RPMI 1640细胞培养液处理HXO-Rb44细胞作为空白对照组。采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测HXO-Rb₄₄细胞B7-H1 mRNA的表达;免疫荧光染色和流式细胞术检测HXO-Rb₄₄细胞B7-H1蛋白表达。采用1.500 μg/ml顺铂处理HXO-Rb₄₄细胞0、15、30、60、120 min,蛋白免疫印迹（Western blot）检测细胞外信号调节激酶1/2（ERK1/2）的磷酸化水平。结果　0.375、0.750、1.500、3.000、6.000 μg/ml组HXO-Rb₄₄细胞B7-H1 mRNA表达均较空白对照组高,差异有统计学意义（F=395.478,P=0.000）。0.375、0.750、1.500、3.000、6.000 μg/ml组HXO-Rb₄₄细胞B7-H1蛋白表达均较空白对照组高,差异有统计学意义（F=112.03,P=0.000）。 Western blot 检测显示,1.500 μg/ml顺铂激活HXO-Rb₄₄细胞ERK1/2蛋白的磷酸化水平;随时间延长,其磷酸化水平逐渐增高,至30 min达高峰,以后又逐步下降。结论　顺铂能促进RB细胞B7-H1 mRNA和蛋白的表达;ERK1/2信号通路可能参与了这一过程。      

全反式维甲酸对视网膜母细胞瘤细胞增殖和分化影响的实验研究

目的 观察全反式维甲酸(ATRA)对视网膜母细胞瘤SO-Rb 50细胞生长及分化的作用.方法 为实验研究.将不同浓度的ATRA作用于SO-Rb 50细胞,绘制生长曲线;MTT法检测ATRA的IC50值;流式细胞仪测定用药前后的细胞周期;用药前及用药后20 d观察活体细胞和HE染色后的细胞形态;免疫组织化学法检测神经元特异性烯醇化酶(NSE)、波形蛋白(Vimentin)、神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达情况.结果 0、1×10-7、1×10-6、1×10-5mol/L的ATRA作用于SO-Rb 50细胞后细胞生长曲线随药物浓度增加而逐渐变得低平;ATRA作用于细胞的IC50值约为14.05 μmol/L;用1×10=3mol/L的ATRA作用细胞后,G0/G1期细胞从用药前的56.5%升至用药后的66.6%～81.O%,S期细胞则从33.1%降至22.3%～15.9%.细胞在包被0.25%多聚赖氨酸溶液的载玻片上可贴壁牛长,用药后细胞生长集落明显减小,20 d后部分细胞呈椭圆形或梭形,胞核与胞质比值减小,并伸出细长或较短的突起;用药前NSE、Vimentin、GFAP染色分别旱中等阳性、强阳性和弱阳性;用药20 d后三者染色分别呈强阳性、强阳性和中等阳性.结论 ATRA对SO-Rb 50细胞的生长有明显抑制作用,使细胞停滞于细胞周期的G0/G1期.ATRA可诱导SO-Rb 50细胞向神经元和胶质细胞方向分化.(中华眼科杂志,2008,44:549-553)     

视网膜母细胞瘤的综合治疗策略

视网膜母细胞瘤（RB）是婴幼儿眼内常见的恶性肿瘤。随着现代科学技术的进步以及新的诊疗手段的问世，使得临床医生对于RB的治疗有了更多选择，也使得我们对于RB患儿选择采用不同的个体化综合治疗方案的治疗策略得以实施。传统的治疗理念在不断发生更新和转变，我们应根据我国RB发病的实际情况，学习借鉴国外对RB先进的治疗经验，努力探索并逐步建立符合我国国情的规范化RB综合治疗新模式，这对提高RB患儿生存率，改善生存质量都具有十分重要的意义。     

白藜芦醇对视网膜母细胞瘤细胞多药耐药性相关因子表达的影响

目的 观察白藜芦醇对视网膜母细胞瘤(RB)细胞多药耐药性(MDR)因子表达的影响.方法 体外培养RB细胞,取对数生长期细胞进行实验.实验分为实验组及对照组进行.采用浓度为6.25、12.50、25.00、50.00、100.00 μmol/L的白藜芦醇处理RB细胞,作用24、48 h后,噻唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度组RB细胞的吸光度[A,旧称光密度(OD)]值,以此表示RB细胞活性.采用浓度为50.00 μmol/L的白藜芦醇处理RB细胞48 h,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质免疫印迹法(Western blot)分别检测MDR-1、环氧化酶(COX)-2、多药耐药相关蛋白(MRP)-1、谷胱苷肽转移酶(GST)-π的m RNA和蛋白表达.3种检测均以加入等体积0.5％二甲基亚砜细胞培养液为对照组.结果 MTT比色法检测结果显示,与对照组比较,6.25、12.50、25.00、50.00 μmol/L实验组A值呈剂量依赖性降低,差异有统计学意义(F=4.782,P＜0.05).50.00、100.00 μmol/L实验组A值间差异无统计学意义(F=6.351,P＞0.05).RT-PCR检测结果显示,实验组MDR-1、MRP1、COX-2、GST-π mRNA表达较对照组显著降低,差异均有统计学意义(t=9.170、5.758、4.152、4.638,P＜0.05).Western blot检测结果显示,实验组MDR-1、MRP1、COX-2、GST-π蛋白表达较对照组显著降低,差异均有统计学意义(t=3.848、5.955、4.541、3.514,P＜0.05).结论 白藜芦醇可降低RB细胞MDR因子的表达.     

眼科手术或联合系统化学疗法治疗视网膜母细胞瘤的短期观察

观察视网膜母细胞瘤（RB）患者全身化学药物治疗联合局部治疗的临床效果。方法回顾分析2006年8月至2007年9月本院收治的68例84只眼行全身化疗联合局部治疗并随访3个月以上的RB患儿的临床资料。所有患儿均进行眼部超声（B型超声或彩色多普勒超声）、影像学（CT/MRI）以及眼底照相检查（RetCam婴幼儿眼底照相机）,确诊为RB的患儿共66例82只眼,双眼16例,单眼50例;男性36例,女性30例。按照国际眼内视网膜母细胞瘤分期（IIRC）系统分期,A期选择局部治疗（包括激光光凝和冷冻疗法）,B、C、D、E期在系统化疗（CCTV方案,环孢霉素、卡铂、替尼泊苷、长春新碱）的基础上,联合手术（包括局部治疗、眼球摘除和眶内容剜出）治疗。随访时间6~13个月,平均8.6个月。结果 按IIRC分期,A期5只眼,B期6只眼,C期5只眼,D期15只眼,E期51只眼（包括球外转移的）;治疗结束后22只眼得以保存,其中,A~E期分别为5、6、5、4、2只眼,分别占同期治疗眼的100%、100%、100%、26.7%、3.9%;死亡5例,均为E期患者,占总人数的7.6%。结论 眼科手术或联合系统化学治疗RB是有效的,其疗效与患者肿瘤的临床分期有关,A、B、C期患者治疗效果较好,D、E期次之。     

视网膜母细胞瘤组织中热休克蛋白与Survivin表达关系及其对肿瘤细胞增生活性的影响

目的 探讨视网膜母细胞瘤（RB）组织中热休克蛋白（HSP）70、90的表达及其与凋亡调控因子Survivin表达关系,以及两者共同表达对RB细胞增生活性的影响。方法 采用链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶免疫组织化学法检测43例RB及6例正常视网膜石蜡组织切片HSP70、HSP90、Survivin和Ki-67蛋白表达水平,以Ki-67蛋白标记指数作为肿瘤细胞增生活性标志,结合病理学特征分析HSPs-Survivin协同表达与肿瘤细胞增生活性关系。结果 43例RB组织中HSP70阳性表达28例,占65.12%,HSP90阳性表达37例,占86.05%,Survivin阳性表达27例,占62.79%;6例正常视网膜组织中均无HSP70、HSP90及Survivin表达;HSP90阳性表达组中Survivin阳性表达率明显高于阴性表达组（P＜0.05）;HSP90阳性表达组及Survivin阳性表达组Ki-67蛋白标记指数均较表达阴性组明显增高（P＜0.05）,HSP90-Survivin共同阳性表达组Ki-67蛋白标记指数较HSP90-Survivin共同表达阴性或表达不一致组明显增高（P＜0.05）。但HSP70表达与Survivin相关性无统计学意义（P＞0.05）,且对Ki-67蛋白标记指数无明显影响（P＞0.05）;HSPs、Survivin表达及Ki-67蛋白标记指数与RB组织学分型无关（P均＞0.05）。结论 RB组织中HSP90与Survivin表达存在明显相关性,HSP90-Survivin共同阳性表达可能在RB细胞增生机制中具有重要意义。