小鼠磨牙牙胚发育过程中硫酸软骨素硫酸化模式的时空变化

目的:检测硫酸软骨素在小鼠磨牙牙胚发育过程中的硫酸化模式的时空变化。方法:取胎龄分别为E11.5、E13.5、E15.0、E16.5和E18.5d的ICR胎鼠头部,常规组织学处理,制备5μm厚矢状或冠状切片,用免疫组织化学方法检测4-硫酸软骨素、6-硫酸软骨素在下颌第一磨牙牙胚组织中的时空表达。结果:从小鼠牙胚开始发生到帽状期,4-硫酸软骨素只在牙源性上皮外层细胞与基底膜强表达,在牙源性间充质组织中不表达,钟状早期其开始在牙源性间充质组织中表达。6-硫酸软骨素只在牙源性间充质细胞中表达,且其与4-硫酸软骨素呈互补表达模式。结论:硫酸软骨素在牙胚发生过程中其硫酸化模式呈现时间-空间的特异性改变,这种特异性改变可能与小鼠磨牙牙胚的形态发生密切相关。     

小鼠牙胚fgf18的基因克隆和序列分析

目的 从小鼠牙胚克隆成纤维细胞生长因子18(fgfl8)的全部编码区，测定并分析其基因序列。方法 用巢氏逆转录-聚合酶链反应(RT—PCR)扩增出fgfl8全部编码蛋白的基因，并克隆到PGEM—T载体，通过PCR及KpnⅠ和Hind Ⅲ限制性内切酶双酶切鉴定重组质粒，测定fgfl8序列。结果 测序结果表明从小鼠牙胚中成功扩增出fgfl8序列，经BLAST分析与已公布的小鼠fgfl8基因编码区完全一致。结论 fgfl8可能参与小鼠牙齿的发育和矿化。     

小鼠帽状期和钟状早期磨牙牙胚差异表达基因的初探

目的筛选小鼠帽状期(E14.5)和钟状早期(E18.5)磨牙牙胚的差异表达基因。方法分离小鼠E14.5和E18.5磨牙牙胚,采用基因芯片技术检测相关的差异表达基因。结果共得到76条差异表达基因,上调基因71条,下调基因5条。结论 E18.5磨牙牙胚,调控细胞代谢、分化、极性形成酶类,调控免疫应答相关基因,转录、翻译相关基因,信号通路的信号分子、受体以及应激反应相关基因等功能的基因表达都显著上调,而细胞凋亡相关基因、氨基酸代谢激酶等的表达下调。     

小鼠牙胚发育无血清体外培养模型的建立

目的：建立小鼠牙胚发育无血清体外培养模型。方法：胎龄17d的Balb/c胎鼠上颌第一磨牙牙胚，BGJb无血清半固态培养基中恒温培养4、6、8－16d。终止培养后常规制备石蜡切片，HE及von Kossa染色。结果：初始培养时牙胚处于帽状晚期，成翻器分为三层，紧邻基底膜的牙乳头细胞列不规则，核多为圆形。体外培养4－6d后，牙胚在体外进一步生长。培养6d后，牙尖处成牙本质细胞分化为高柱状，并在局部分泌基质。体外培养8d，牙胚进入钟状晚期，有基质带形成。培养16d后，牙冠已基本形成，根方出现上皮隔。von Kossa染色结果显示：培养10d后，牙胚基质带出现阳性着色。结论：建立了小鼠磨牙发育无血清体外培养模型，该 模型在体外真实地再现了成牙本质细胞、成釉细胞的分化和基质分泌、矿化等生理过程，是一种良好的生物模型。     

小鼠牙胚裸鼠体内移植的形态学观察

目的:观察小鼠牙胚裸鼠体内移植后的形态学变化。方法:将出生后5天的小鼠的下颌第一磨牙牙胚异位移植到成年裸鼠背部肌层中,在移植后第7天和第14天分别取出植入的牙胚,常规制片,HE染色,显微镜下观察。另取出生后12天和19天的小鼠各1只,常规制片,HE染色,作移植后不同时间的对照。结果:肉眼观察发现,移植后牙胚生长于肌浅层,组织相容性好,表面有丰富的毛细血管;组织学观察表明:移植后的牙胚可继续发育,但比正常发育的牙胚速度减慢。牙本质层较薄,移植后形成大量牙本质小管、排列不规则的牙本质。虽然上皮根鞘位置变化不明显,但牙根可继续根向延伸。髓室底形成,髓腔缩小,根部钙化程度明显增强。移植后第7天,牙胚内外均有炎细胞浸润;但移植后第14天的牙胚,均未见明显的炎症现象。结论:小鼠牙胚裸鼠肌浅层移植后有一定的发育趋势,可以短期用于牙根发育的研究。     

小鼠牙胚的鸡胚培养模型的建立

目的　采用鸡胚建立一种新的小鼠牙胚体内培养模型。方法　取15 d龄的昆明胎鼠下颌第一磨牙牙胚, 将其用钨丝固定于孵化4~5 d(翼芽期)的鸡胚内,继续孵化10 d后,终止培养并取材,进行苏木精-伊红染色,常规组织学观察。结果　小鼠牙胚在鸡胚内可继续生长发育,从帽状期进入到钟状末期,镜下可见分化成熟的成牙本质细胞、成釉细胞和分泌的基质。结论　以翼芽期鸡胚作为小鼠牙胚体内培养的宿主,可以保持其发育,再现牙齿形成过程中的细胞分化、形态发生的生理过程。     

氯离子通道CLC-3在小鼠牙胚发育中的表达

目的:探讨CLC-3在BALB/c小鼠下颌第一磨牙牙胚不同发育时期的时空表达。方法:选取E13.5、E15.5、E18.5 d的BALB/c胎鼠和P1、P5 d的BALB/c小鼠,脱颈处死后取其头部,梯度乙醇脱水,石蜡包埋后连续切片,最后对石蜡切片行CLC-3免疫组化染色。结果:当胎鼠牙胚处于蕾状期时,CLC-3在牙胚的牙板上皮中可见表达;当牙胚发育为帽状期时,在牙乳头和牙囊细胞中表达;到钟状期时,CLC-3在牙乳头、牙囊、星网状层细胞和中间层细胞中广泛表达。出生后的小鼠CLC-3在牙乳头、牙囊、成釉细胞、成牙本质细胞、星网状层细胞、中间层细胞中均广泛表达。结论:CLC-3在小鼠牙胚发育的不同时期呈现不同的时空表达。     

小鼠牙胚体内、外发育的比较

牙胚培养是研究体外成牙本质细胞分化和基质分泌的理想模型。国外已成功地进行了多种动物牙胚的体外培养^[1,2]，而国内在这方面的研究刚刚起步^[3,4]。为了更好地了解牙胚体外发育状况，为牙胚体外发育模型的建立及后期研究奠定基础，我们对Balb／c小鼠上颌第一磨牙体内、外发育状况进行了比较研究。     

转化生长因子β2 mRNA在小鼠磨牙牙胚发育过程中表达的研究

目的：探讨转化生长因子β2（transforminggrowthfactor-β2，TGFβ2）mRNA在小鼠磨牙牙胚发育过程中的表达及其意义。方法：制备小鼠磨牙各发育阶段标本，用原位杂交分析TGFβ2mRNA在牙胚中的表达与分布。结果：TGFβ2mRNA在小鼠磨牙牙胚不同发育阶段呈时间一空间特异性模式表达。结论：TGFβ2mRNA在牙形态发生过程中可能通过自分泌和旁分泌机制协同调控上皮一间充质相互作用及成牙本质细胞和成釉细胞的分化。     

氟化物对大鼠牙胚中光蛋白聚糖影响的免疫组化观察

目的:观察氟化物对牙胚分泌期成釉细胞中光蛋白聚糖(lumican)表达情况的影响.方法:取妊娠10 d孕鼠,随机分为对照组、实验1组和实验2组,每组3只鼠,饮水中给氟浓度分别为0(去离子水)、50、150 mg/L,妊娠21 d时取材(部位为包含胎鼠下颌第一磨牙牙胚的下颌骨段),固定,包埋,每组随机选择10个蜡块做连续5 μm切片,分别做HE染色,以及lumican的免疫组化SABC法染色,镜下观察,图像分析,所得数据用SPSS 16.0软件进行统计分析.结果:氟化物作用下,妊娠21 d时,胎鼠牙胚成釉细胞中lumican的表达水平较对照组均有所减弱,试验组2(高氟浓度)尤为明显.结论:氟化物可使牙胚分泌期成釉细胞中lumican的表达降低,高浓度时作用较强.     

透明质酸在小鼠下颌第一磨牙牙胚不同发育时期的表达

目的:检测透明质酸在小鼠下颌第一磨牙牙胚不同发育时期的表达,探讨其在小鼠牙胚发育过程中的作用。方法:取不同胎龄的ICR胎鼠,制备小鼠下颌第一磨牙不同发育时期切片,用免疫组织化学实验方法检测透明质酸在下颌第一磨牙牙胚组织中的表达情况。结果:透明质酸在小鼠下颌第一磨牙牙胚的不同发育阶段表达各异。在小鼠磨牙开始发生时,透明质酸即在增厚的牙板上皮中表达,随后在蕾状期牙蕾中央的上皮细胞间可见透明质酸的表达,而在深层的牙源性间充质表达则不明显。自帽状期至钟状晚期,透明质酸在牙胚星网状层细胞间以及牙源性间充质细胞的表达逐渐增强,而在基底膜、内外釉上皮细胞、成釉细胞以及成牙本质细胞所在区域不表达。结论:透明质酸在牙胚发育过程中呈现时间-空间特异性表达。特别是其在星网状层细胞以及牙乳头间充质细胞中的表达随着牙胚的发育逐渐增强提示其可能与牙胚的形态发生密切相关。     

成釉蛋白在小鼠牙胚发育不同时期的免疫组化定位

目的：观察成釉蛋白（ameloblastin,AMBN)在小鼠牙胚发育不同时期的表达和分布情况。方法：采用免疫组化的方法观察AMBN在小鼠牙胚不同时期的表达和定位。结果：蕾状期、帽状期和钟状早期牙胚中未见AMBN的表达；出生后1d钟状期，在成釉细胞和釉基质中呈强阳性表达，成牙本质细胞和牙本质基质中呈弱阳性表达；出生后3d，在成釉细胞胞浆中呈弱阳性表达，在成牙本质细胞中表达阳性，着色较成釉细胞深；出生后7d，AMBN在成釉细胞托姆氏突呈弱阳性表达，其余部位呈阴性表达。在牙胚发育的各个时期，AMBN在外釉细胞、星网层细胞、牙乳头细胞均呈阴性表达。结论：AMBN参与釉基质的形成，可能与牙胚发育中基质形成的信息传递有关。     

出生后小鼠第一磨牙牙胚不同发育阶段的Notch1的表达

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表皮生长因子受体在小鼠磨牙牙胚发育过程中的表达及其生物学意义

目的:探讨表皮生长因子受体在小鼠磨牙牙胚发育过程中的生物学作用。方法:用免疫组织化学检测表皮生长因子受体(EGFR)在小鼠下颌第一磨牙牙胚发育过程中的定位。结果:证实EGFR在鼠牙胚不同发育阶段呈时间-空间特异性分布模式。EGFR特别地在细胞增殖活跃的部位强染,在形态发生和分化晚期染色减弱。结论:EGF及其受体可能在调控蕾状期和帽状期形态发生的上皮-间充质相互作用中以旁分泌模式起作用。     

基质金属蛋白酶-8在人和大鼠牙胚发育钟状期的表达

目的　研究基质金属蛋白酶-8(MMP-8)在牙胚发育牙本质形成过程中的表达。方法　免疫组织化学方法检测MMP-8在人牙胚发育钟状期的表达;原位杂交方法检测MMP-8 mRNA在大鼠牙胚发育钟状期的表达。结果　 MMP-8在人牙胚钟状晚期硬组织形成期成牙本质细胞和牙本质基质阳性表达,近髓腔处,牙本质染色更深;MMP-8 mRNA在大鼠牙胚发育钟状早期个别分化的成牙本质细胞表达阳性,钟状晚期,即硬组织形成期,MMP-8mRNA在成牙本质细胞表达强阳性。结论　MMP-8可能参与了人和大鼠牙胚发育过程牙本质基质改建。     

半固态培养基法培养鼠磨牙牙胚的实验观察

目的：观察体外培养的鼠磨牙牙胚发育过程的组织学变化。方法：用１６ｄ胎龄的昆明小鼠下颌第一磨牙牙胚置于ＲＰＭＩ－１６４０半固态培养基上培养,常规组织学观察。结果：体外培养的牙胚可由帽状期进入钟状其,出现成牙本质细胞和成釉细胞的分化及前期牙本质的形成。结论：半固态培养基法培养牙胚可保持其发育过程。     

尼古丁对体外培养鼠磨牙牙胚发育的影响

目的:探讨尼古丁对体外鼠磨牙牙胚发育的影响.方法:采用RPMI-1640半固态培养基,在培养基中加入不同浓度的尼古丁,将15d胎龄的胎鼠的下颌第一磨牙牙胚分别置于各浓度组RPMI-1640半固态培养基表面培养4、8d,每48h更换培养基一次.结果:实验组与对照组相比较,主要表现在实验组发育中的牙胚体积缩小,成牙本质样细胞的分化程度不足、数量和速度均低于对照组,前期牙本质样基质形成减少或不能形成,并且呈时间、浓度依赖性.结论:尼古丁对体外培养胎鼠牙胚的形态、细胞的增殖和分化有抑制作用.     

Ddit3在小鼠下颌第一磨牙牙胚不同时期的表达研究

目的:检测Ddit3在小鼠下颌第一磨牙牙胚不同时期的表达分布及变化规律,初步揭示Ddit3在小鼠牙胚发育中的作用。方法:取不同胚胎时间点的ICR妊娠小鼠,制备牙胚发育标本,通过免疫荧光和免疫组化的方法显示Ddit3在小鼠下颌第一磨牙牙胚发育不同时间点的表达分布。结果:Ddit3在牙胚发育的早期主要表达于胞浆中,从钟状期开始,Ddit3不仅在胞浆中有阳性表达,同时也微弱地表达于细胞核中。分布如下:在小鼠下颌第一磨牙发育的板状期,Ddit3几乎没有表达。在蕾状期,Ddit3主要表达于釉上皮的细胞质中,在牙外胚间充质细胞中几乎无表达。在帽状期,Ddit3的表达模式基本和蕾状期相同。在钟状期早期,Ddit3在成釉细胞、前成牙本质细胞和牙乳头胞质中呈阳性表达,在部分细胞核中也检测到了Ddit3的表达。钟状期晚期,Ddit3在新形成的硬组织周围的高柱状成釉细胞、成牙本质细胞和牙乳头细胞的胞浆中有阳性表达,在大多数成釉细胞、成牙本质细胞和牙乳头细胞的细胞核中也有表达。结论:Ddit3可能会调节成釉细胞和成牙本质细胞的分化及其硬组织的生物矿化。     

C-Met在ICR小鼠下颌第一磨牙牙胚中的表达

目的探讨c-Met在小鼠下颌第一磨牙牙胚发育中的表达情况。方法采用孕12d、13d、14d、16d、18d ICR胎鼠及出生后2d ICR仔鼠的头部制作冰冻切片,以抗小鼠c-Met多克隆抗体对冰冻切片进行免疫荧光实验,激光共聚焦显微镜观察。结果 c-Met在牙胚蕾状期、帽状期的上皮、钟状期的内釉上皮、成釉细胞和成牙本质细胞中有表达;牙胚和口腔黏膜连接区域两侧的间充质中、牙乳头及蕾状早期颊侧下方下颌的间充质中c-Met也有表达。结论 C-Met对于牙齿的形态发生,成釉细胞和成牙本质细胞的分化,牙乳头细胞的发育可能具有重要作用。