肽类生长因子及苏拉明对体外培养人脐静脉内皮细胞生长的影响

目的：观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和苏拉明(suramin)对体外培养人脐静脉内皮细胞生长(HUVEC)的影响，旨在探讨他们在肿瘤血管生成和抗肿瘤血管生成中的作用。方法：体外培养人脐静脉内皮细胞EV—304，一组用不同浓度的bFCF(0．01、0．1、1．0、10、100ng／mL)进行培养，另一组在用不同浓度的苏拉明(0．01、0．1、1．0、10、100μmol/L)培养6h后抑入浓度为10ng／mL的bFGF再进行培养。结果：bFCF可明显刺激内皮细胞的生长，而Suramin可阻止bFGF对内皮细胞的生长刺激。结论：苏拉明对体外培养内皮细胞的生长抑制作用可能是通过中和肽类生长因子如bFGF及引起内皮细胞凋亡来实现的。     

Arresten抑制HUVEC细胞增殖和管腔形成的实验研究

目的:探讨血管生成抑制因子arresten对人脐静脉内皮细胞HUVEC增殖和体外血管腔形成的影响,了解其抑制血管生成的途径。方法:采用MTT比色法,观察不同浓度的arresten对HUVEC细胞增殖的影响;Matrigel胶体外管腔形成试验检测arresten对HUVEC细胞形成血管的影响。结果:MTT比色法显示,arresten对HUVEC细胞增殖具有抑制作用,随着浓度的增加,arresten对HUVEC细胞增殖抑制作用也增强,但当其浓度增加到800 ng/mL后其增殖抑制率不再提高; arresten浓度为0、400及800 ng/mL时,HUVEC细胞形成的血管腔数分别为17±2、9±1及5±1。结论:Arresten能够抑制HUVEC细胞的增殖,并抑制HUVEC细胞形成血管腔。     

血管内皮生长因子在肝癌血管内皮细胞体外管腔形成中量效和时效局限性的实验研究

目的：利用体外管腔形成模型,研究血管内皮生长因子（VEGF）对肿瘤血管内皮细胞（TECs）调控的精准性,探讨以 VEGF 为靶点的抗肿瘤药物在临床应用中出现缺陷的潜在机制。方法采用 CD31免疫磁珠分选人肝癌标本中的 TECs,在含 Matrigel 基质胶的96孔板中,分别与不同浓度 VEGF 共培养,观察不同时间的 TECs 体外管腔形成能力,以正常人脐静脉血管内皮细胞（ HUVECs）为对照。结果1）体外分离培养的 TECs 拟血管内皮细胞梭状形态,其96％的细胞表达内皮细胞特异性标记 CD31;2）TECs 在微小量（基础培养条件,2 ng·mL -1）VEGF165时,体外管腔形成较少或不成腔,而对照组 HUVECs 却能形成明显的管腔并分支成网;当附加10 ng·mL -1 VEGF165时,在4 h 观察到 TECs 如同 HUVECs 形成了管腔,在6 h 出现明显的分支网;然而,当附加20 ng·mL -1 VEGF165时,在6 h 观察到 TECs 形成的管腔明显减少;统计分析显示,10 ng·mL -1 VEGF165组 TECs 成管能力比2 ng·mL -1 VEGF165组高出6倍（ P ﹤0.001）,而20 ng·mL -1 VEGF165组 TECs 成管能力显著下降至10 ng·mL -1 VEGF165组的4.5倍（P ﹤0.001）;3）10 ng·mL -1 VEGF165组在培养4、6、8 h 均可见 TECs 管腔形成,但以6 h 为显著;在20 h 时,TECs 的管腔消失,而对照组 HUVECs 却还有明显的管腔分支网。结论肝癌 TECs 体外管腔形成对 VEGF165既有依赖性但又有量-效局限性,过高 VEGF 浓度能抑制性影响 TECs（而不是 HUVECs）管腔形成能力。在 VEGF 的刺激下,TECs 体外管腔形成的时效性短于 HUVECs。我们的实验结果提示,临床应用抗 VEGF 的抗肿瘤药物疗效不一可能与 VEGF 在 TECs 体外管腔形成的量效和时效的局限性有关。     

蜂毒素对人脐静脉内皮细胞ECV304生长的影响及其机制探讨

目的：研究蜂毒素对人脐静脉内皮细胞ECV304生长的抑制作用及其机制。方法：将人脐静脉内皮细胞ECV304进行体外培养。四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测蜂毒素对ECV304细胞的增殖抑制作用;流式细胞术测定细胞周期;膜联蛋白Ⅴ（AnnexinV）-异硫氰酸荧光素（FITC）＋碘化丙啶（PI）双参数检测细胞凋亡;免疫细胞化学法检测经不同浓度蜂毒素作用后ECV304细胞VEGF和bFGF的表达。结果：蜂毒素可显著抑制人脐静脉内皮细胞的增殖生长,并且呈浓度依赖性,其24h、48h和72h的IC50分别为5.11μg/ml、4.68μg/ml和4.40μg/ml。经蜂毒素作用后,S期细胞比例明显增加,G0/G1期细胞比例减小,细胞周期阻滞于S期,并可诱导细胞凋亡。蜂毒素可明显下调人脐静脉内皮细胞VEGF和bFGF的表达（P〈0.05和P〈0.01）。结论：蜂毒素在体外能够抑制人脐静脉内皮细胞增殖和合成VEGF及bFGF的功能,其机制可能与阻滞细胞周期、诱导细胞凋亡有关。     

人参皂苷Rg3抑制B16黑色素瘤新生血管生成及其机制的探讨

目的:观察20(S)-人参皂苷Rg3(SPG-Rg3)对B16黑色素瘤血管生成的影响,并探讨其可能的作用机制.方法:体内采用肿瘤诱导血管生成实验,观察SPG-Rg3对B16黑色素瘤血管生成的影响;免疫细胞化学法观察SPG-Rg3对B16黑色素瘤细胞血管内皮细胞生长因子(VEGF)表达的影响;取不同浓度SPG-Rg3作用后的B16黑色素瘤细胞条件培养基(BMCM)作用于人脐静脉内皮细胞,用MTT法、PCNA免疫荧光染色以及迁移实验观察SPG-Rg3对内皮细胞增殖和迁移的作用.结果:在肿瘤诱导血管生成实验中,SPG-Rg3组肿瘤周围的血管数明显少于对照组,P＜0.01;SPG-Rg3作用组BMCM的促内皮细胞增殖和迁移作用均明显弱于无SPG-Rg3作用组,且SPG-Rg3(5 μg/mL)降低了B16黑色素瘤细胞VEGF的表达,P＜0.01.结论:SPG-Rg3可明显抑制B16黑色素瘤的血管生成,且可能通过降低肿瘤细胞分泌VEGF来抑制肿瘤细胞对血管内皮细胞增殖和迁移的促进作用,从而达到抑制肿瘤新生血管形成的作用.     

蜂毒素对人脐静脉内皮细胞ECV304生长的影响及其机制探讨

目的:研究蜂毒素对人脐静脉内皮细胞 ECV304 生长的抑制作用及其机制.方法:将人脐静脉内皮细胞 ECV304 进行体外培养.四甲基偶氮唑盐 (MTT) 法检测蜂毒素对 ECV304 细胞的增殖抑制作用;流式细胞术测定细胞周期;膜联蛋白Ⅴ (AnnexinV)-异硫氰酸荧光素 (FITC) 碘化丙啶 (PI) 双参数检测细胞凋亡;免疫细胞化学法检测经不同浓度蜂毒素作用后ECV304细胞VEGF和bFGF的表达.结果: 蜂毒素可显著抑制人脐静脉内皮细胞的增殖生长,并且呈浓度依赖性,其24h 、48h和72h 的 IC50分别为 5.11 μg/ml、4.68 μg/ml 和 4.40 μg/ml.经蜂毒素作用后,S 期细胞比例明显增加,G0/G1 期细胞比例减小,细胞周期阻滞于 S 期,并可诱导细胞凋亡.蜂毒素可明显下调人脐静脉内皮细胞 VEGF 和 bFGF 的表达 (P<0.05和P<0.01).结论: 蜂毒素在体外能够抑制人脐静脉内皮细胞增殖和合成 VEGF及bFGF 的功能,其机制可能与阻滞细胞周期、诱导细胞凋亡有关.     

雷公藤甲素对血管内皮细胞尿激酶型纤溶酶原激活物表达的影响

背景与目的已有研究发现雷公藤具有抗肿瘤的作用,本研究旨在观察雷公藤甲素(triptolide,T10)对血管内皮细胞增殖和尿激酶型纤溶酶原激活物(urokinase-typeplasminogenactivator,u-PA)表达的影响,探讨T10抑制血管生成的机制。方法体外培养人脐静脉内皮细胞,传至第三代,加入不同浓度的T10(0、5、10、20、30μg/L)、地塞米松(300mg/L)后培养不同时间,计数细胞以了解细胞的增殖情况;培养48h,采用[3H]-TDR掺入法检测DNA的合成情况;利用鸡胚尿囊膜在体观察T10对血管生成的影响;免疫组织化学染色检测内皮细胞u-PA的蛋白表达;荧光定量RT-PCR检测u-PAmRNA的表达。结果T10可抑制内皮细胞的增殖,并且呈明显的剂量依赖性,5μg/LT10的抑制率达28.93%;可明显抑制鸡胚尿囊膜的血管生成(P<0.05);减少内皮细胞u-PA的蛋白表达,并呈剂量依赖趋势,5μg/LT10使内皮细胞u-PA表达降低41.05%;荧光定量RT-PCR结果显示,T10可下调u-PAmRNA的表达。结论雷公藤甲素可有效抑制血管内皮细胞的增殖,减少内皮细胞u-PA的表达,这可能是其抑制血管生成的主要机制之一。     

慢病毒介导的Canstatin基因转移对脐静脉血管内皮细胞增殖与凋亡的影响

目的:构建携带Canstatin基因的慢病毒载体,体外转染脐静脉血管内皮细胞ECV304,观察其体外培养的脐静脉血管内皮细胞增殖及凋亡的影响。方法:应用基因重组技术构建慢病毒载体表达质粒pGC-FU-Canstatin,通过酶切、测序验证Canstatin基因后,将pGC-FU-Canstatin质粒和包装质粒pHelper 1.0,pHelper 2.0共同转染人胚胎肾上皮细胞系293T细胞,获得携带Canstatin基因重组慢病毒GC-FU-Cansta-tin,并测定病毒滴度。将重组慢病毒转染靶细胞人脐静脉血管内皮细胞ECV304,通过Western blotting检测靶细胞中Canstatin的表达。采用MTT法观察Canstatin基因对人脐静脉血管内皮细胞ECV304的体外细胞增殖的影响。TUNEL染色、流式细胞仪AnnexinV/碘化丙啶双染法,检测慢病毒介导的Canstatin基因诱导脐静脉血管内皮细胞的凋亡。结果:pGC-FU-Canstatin中携有正确的Canstatin基因序列;pGC-FU-Cansta-tin和包装质粒pHelper 1.0,pHelper 2.0共转染包装细胞293T产生重组病毒GC-FU-Canstatin;检测病毒滴度为1×109TU/ml;Western blotting检测到Canstatin蛋白在靶细胞中持续表达。Canstatin(感染复数分别为25和50)作用72h后,ECV304细胞增殖数目显著少于PBS组和空载体组(P<0.01);TUNEL染色,以MOI为25的重组慢病毒GC-FU-Canstatin作用于人脐静脉血管内皮细胞ECV304细胞72h后,出现典型的凋亡形态学改变。以感染复数为25的GC-FU-Canstatin处理ECV304细胞72h后,细胞凋亡率为(21.63±1.32)%,PBS组为(2.87±0.76)%,空载体组为(2.66±0.69)%,转基因组与空载体组、PBS组相比差异均有显著统计学意义(P<0.01)。结论:慢病毒介导的Canstatin基因可显著抑制人脐静脉血管内皮细胞ECV304的体外增殖,同时对人脐静脉血管内皮细胞的凋亡具有促诱导作用。     

TNP-470对肺癌细胞诱导的血管内皮细胞增殖的抑制作用

应用体外培养的人脐带静脉内皮细胞 (HUVEC)和人肺腺癌细胞株AZGY82A ,探讨了TNP 4 70对肿瘤细胞诱导的血管内皮细胞增殖的抑制作用及其机制。人脐静脉内皮细胞的培养采用本实验室改进的Jaffe氏培养法 ,并且将人肺癌细胞株进行传代培养。制备肺癌细胞条件培养液和肺癌细胞粉碎液。待血管内皮细胞生长至亚融合状态后 ,与肺癌细胞条件培养液或细胞粉碎液同时加入TNP 4 70作用液 (TNP 4 70浓度分别为 :10 - 12 ,10 - 10 ,10 - 8,10 - 6 g/ml)。用免疫细胞化学方法检测内皮细胞PCNA ,Flk 1,FGFR的表达。肿瘤细胞可合成和释放多种活…     

胃癌组织中H.pylori感染与bFGF蛋白表达关系及其临床意义

目的 :探讨幽门螺旋杆菌感染(Helicobacterpylori,H .pylori)与碱性成纤维细胞生长因子 (basicfibroblastgrowthfac tor ,bFGF)蛋白表达的关系及其与胃癌发生和发展的关系。方法 :应用免疫组化方法检测了 63例胃癌存档标本和 10例正常胃组织中bFGF的蛋白表达。结果 :63例胃癌存档蜡块中有 45例阳性 ,Hp阳性胃癌组和转移性胃癌组显著高于Hp阴性胃癌组和非转移性胃癌组 ,P <0 0 1。阳性着色定位于肿瘤细胞、血管内皮细胞及肿瘤基质。结论 :H .pylori感染增强了bFGF的表达 ,bFGF可能通过自分泌和旁分泌机制诱导胃癌血管生成 ,或通过胞内分泌作用刺激某些酶的产生 ,从而促进肿瘤的浸润。     

Decorin对肝癌细胞株凋亡作用的研究

目的 :探讨decorin对肝癌细胞株增殖及细胞凋亡的作用。方法 :用不同浓度的decorin和正常肝细胞株 (L 0 2细胞 )、肝癌细胞株 (SMMC 772 1、MM4 5 )共同孵育一定时间后 ,观察细胞的存活情况、形态学改变 ,用流式细胞仪分析DNA的分布。结果 :Decorin在体外能抑制肝癌细胞的增殖 ,诱导肝癌细胞出现典型的凋亡细胞特征 :细胞核浓缩、细胞膜皱摺、凋亡小体形成 ,而且其诱导凋亡作用呈剂量效应。结论 :Decorin作为一种生物制剂可诱导肝癌细胞凋亡。     

氧化苦参碱抑制肝癌细胞诱导血管内皮细胞增殖作用的研究

目的探讨氧化苦参碱(OM)对肝癌细胞诱导血管内皮细胞(VEC)增殖的抑制作用.方法用 MTT 法检测不同浓度 OM 对 VEC、人肝癌 SMMC-7721 细胞增殖及 SMMC-7721 细胞诱导 VEC 增殖的影响.结果 OM 浓度为 2.5～10 mg/mL 时,对 VEC 增殖的抑制率为 4.6%～36.4%;OM 浓度为 0.313～10 mg/mL 时,对肝癌细胞增殖的抑制率为 2.53%～88.61% ;经浓度为 1.25～10 mg/mL OM 作用后的肝癌细胞培养液对 VEC 增殖的抑制率为 7.69%～38.46% ;OM 浓度为 0.625～10 mg/mL 时,对肝癌细胞培养液诱导的 VEC 增殖的抑制率为 3.57%～57.54%.结论 OM 对肝癌细胞诱导的 VEC 增殖具有抑制作用.     

缓激肽对大鼠脑微血管内皮细胞和星形胶质细胞及胶质瘤细胞影响的体外研究

目的:体外探讨缓激肽(bradykinin,BK)的作用靶点细胞及BK选择性开放血脑屏障的可能机制。方法:通过免疫荧光测定脑血管内皮细胞、胶质细胞及C6细胞在不同剂量BK作用前后的细胞内钙离子变化,并且通过WesternBlot测定三组细胞的BKB2受体表达水平。结果:小剂量BK可以引起肿瘤细胞内的钙离子水平升高,而只有大剂量BK才能触发星形胶质细胞内的钙离子水平变化,脑血管内皮细胞对大、小剂量BK均无任何反应;三组细胞BKB2受体的WesternBlot整合密度值(integrateddensityvalue,IDV)分别为5000.12±1110.21(n=2)、18480.88±4119.86(n=3)和63032.13±2802.71(n=4),组间比较差异有统计学意义。结论:BK的直接作用靶点是星形胶质细胞及肿瘤细胞,两种细胞B2受体表达水平差异是小剂量BK选择性开放血肿瘤屏障的物质基础;BK可能通过某些细胞间信使起到调节脑血管内皮细胞通透性的作用。     

硒酸酯多糖诱导人骨肉瘤细胞凋亡作用的体外实验

目的 :探索有机硒在体外对人骨肉瘤细胞的诱导凋亡作用。方法 :以硒酸酯多糖为实验药物 ,通过MTT法检测细胞活力 ,荧光显微镜、扫描电镜观察凋亡细胞形态 ,流式细胞仪分析凋亡峰及细胞周期等 ,研究其对骨肉瘤细胞的诱导凋亡作用。结果 :硒酸酯多糖作用骨肉瘤细胞 1、2、4、6d及浓度为 0、3 0、60、12 0μg/mL后细胞生长曲线呈明显下降趋势 ,差异有统计学意义 ,P <0 0 5。形态学观察可见早期和晚期凋亡细胞 ,细胞周期主要受阻于S期。结论 :硒酸酯多糖可在体外诱导人骨肉瘤细胞凋亡。     

姜黄素联合木黄酮对人胰腺癌细胞株BXPC-3的作用

目的　体外观察姜黄素及木黄酮对人胰腺癌细胞株 ( BXPC- 3)增殖的抑制作用及两者联合应用时的抑制率及相互作用。方法　采用 MTT法测定两者对人胰腺癌细胞株 ( BXPC- 3)的增殖抑制率 ,利用中效原理判定两药合用的效果。结果　两种药单独应用时随着药物剂量增加 ,其效应也增加 ,它们的相关系数分别为 0 .95 3和0 .998,姜黄素的中效浓度为 2 89.16 μm ol/L,木黄酮的中效浓度为 10 7.5 5 μmol/L;两药合用时它们的相关系数为0 .987,中效浓度为 2 2 5 .2 0 ( 171.6 0 + 5 3.6 0 ) μm ol/L。大剂量 (大于中效剂量 )合用时是协同作用 ( CI<1) ,小剂量(小于中效剂量 )合用时是拮抗作用 ( CI>1)。结论　姜黄素联合木黄酮对人胰腺癌细胞株 BXPC- 3的生长有抑制作用 ,它们合用时大剂量是协同 ,而小剂量则拮抗     

银杏叶提取物对AFB1致HepG2细胞毒性保护作用的观察

目的:研究银杏叶提取物(EGb761)对AFB1致HepG2细胞毒性的保护作用。方法:以MTT实验检测AFB1对HepG2细胞的生长抑制率,再以MTT、FCM等实验,观察EGb761预处理后对AFB1诱导HepG2细胞存活率的影响,然后通过硫代巴比妥酸(TBA)法及二氛荧光素双乙酸(DCFH-DA)法检测细胞内脂质过氧化产物丙二醛(MDA)及氧化代谢产物活性氧簇(ROS)水平,以观察EGb761对AFB1毒性引起的HepG2细胞活性保护作用及对脂质过氧化的抑制作用。结果:AFB1显著降低HepG2细胞活力,IC50为15μg/mL。EGb761能显著增加AFB1处理后的细胞活力,以219μg/mLEGb761预处理在24、48和72h均提高了AFB1(15μg/mL)处理的细胞存活率,分别提高了28%、47%及47%,P值均<0.01;在3个时间点都明显抑制了AFB1诱导的MDA的形成及ROS的水平,P值均<0.01。结论:EGb761对AFB1致HepG2细胞损伤具有保护作用,其机制可能与清除氧自由基、对抗脂质过氧化有关。     

三氧化二砷联合氟尿嘧啶抗人结肠癌Lovo细胞作用及其机制的研究

目的: 探讨三氧化二砷(As2O3)与氟尿嘧啶(5 FU)联合应用对人结肠腺癌细胞株Lovo的影响及其作用机制。方法:经不同浓度的As2O3 和(或)5- FU处理Lovo细胞后,采用MTT法测定细胞的增殖抑制效应;AO/EB荧光染色、DNA电泳、电镜和流式细胞术观察细胞凋亡和形态学及细胞周期变化;免疫组织化学法观察凋亡相关基因表达的变化。结果:与As2O3 或5 -FU单药作用相比,As2O3 与5- FU联合应用可显著增强人结肠癌细胞增殖抑制作用和诱导结肠癌细胞凋亡作用,联合用药后细胞周期分布发生改变,S期和G2/M期细胞比例下降,G0/G1 期细胞比例上升,癌细胞bcl- 2基因表达明显下降, bax和Fas基因表达显著增强。结论:As2O3与5 -FU联合应用具有显著协同抗大肠癌作用,其机制可能与增强诱导大肠癌细胞凋亡、细胞周期特异性药物与细胞周期调控剂联合增效以及调控凋亡相关基因的表达有关。     

麦胚提取物对抗肿瘤化疗的辅助调节

目的 :研究麦胚提取物 (WEE)对减轻肿瘤化疗的毒性 ,增强疗效的效果。方法 :采用动物实验方法 ,对试验组化疗 荷瘤动物施于化疗的同时加喂WEE ,观察肿瘤抑制率 (STR)和白细胞总数的变化。结果 :化疗同时给予WEE ,能显著的提高STR(P <0 .0 5 ) ;能迅速回升化疗造成的外周血白细胞减少 (P <0 .0 1)。结论 :WEE在肿瘤化疗中 ,可协同抑制肿瘤 ,提高外周血中白细胞的总数 ,进而调节生理功能 ,修复受损的组织或细胞 ,与其富含多不饱合脂肪酸 (PUFA)有关     

单用TAM及联合应用5-FU对结肠癌细胞株生长抑制作用及增殖凋亡的影响

目的探讨他莫昔芬(tamoxifen,TAM)单独或联合5-FU化疗对结肠癌细胞株生长抑制作用及凋亡的影响.方法应用MTT法,比较单纯应用TAM和TAM与5-FU联合对SW480、HT29细胞株生长抑制作用,通过药物量-效关系曲线,观察TAM有无化疗增敏作用,同时检测PCNA和AI,探讨TAM联合5-FU对增殖、凋亡的影响.结果单独应用TAM对SW480、HT29细胞株无生长抑制作用;TAM联合5-FU在一定浓度时可抑制SW480和HT29细胞的生长,提高对5-FU的敏感性,起到化疗增敏作用.通过对PCNA和AI 2个指标的检测,随着浓度的增加和时间的延长,TAM联合5-FU抑制细胞的增殖和促进细胞的凋亡均呈上升趋势.结论一定浓度的TAM能增加人结肠癌细胞株SW480、HT29对化疗药物5-FU的敏感性,抑制细胞增殖,促进细胞凋亡.