甲型流感病毒对肺泡上皮细胞作用的研究进展

流感是流感病毒引起的一种急性呼吸道病毒感染性疾病,能够引起较高的发病率和病死率,给人类健康带来重大威胁.肺泡上皮细胞是机体抵御甲型流感病毒的肺部关键组成部分,同时也是季节性和流行性甲型流感病毒最主要的靶向细胞和感染细胞之一,本文对甲型流感病毒对肺泡上皮细胞作用的研究进展进行简要阐述.     

肺泡上皮细胞在肺纤维化中的作用及机制研究进展

肺泡上皮细胞(alveolar epithelial cell,AEC)是肺组织的结构细胞,在肺纤维化(pulmonary fibrosis,PF)发生和发展的过程中起着重要的作用。AEC损伤和凋亡是促进和引起肺纤维增生的原因之一,但并不是PF的必需因素,完整的AEC转染TGF-β1基因后也能诱导PF的发生。体外研究发现,AEC在TGF-β1的诱导下可以向间质细胞转化,但其在PF中所起的作用及分子机制还有待进一步阐明。因此,AEC在PF中的作用与上述因素及其它细胞尤其是成纤维细胞之间的相互作用有关。     

p38 MAPK和JNK信号通道在TGF-β1诱导的肺泡上皮细胞上皮-间质转化中的意义

目的 探讨p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK）和c-Jun氨基端激酶（JNK）信号通道在转化生长因子β1 （TGF-β1）诱导的人肺泡上皮细胞上皮-间质转化（epithelial to mesenchymal transition,EMT）中的意义,从而进一步揭示肺纤维化的发病机制.方法 使用TGF-β1诱导A549细胞EMT,分别在蛋白水平（使用p38 MAPK抑制剂SB203580和JNK抑制剂SP600125）和RNA水平（RNA干扰）抑制p38 MAPK和JNK信号通道,检测抑制后A549细胞的p38 MAPK和JNK的蛋白和mRNA,以及间质细胞表型蛋白包括结蛋白、波形蛋白、α-平滑肌肌动蛋白和上皮细胞表型蛋白包括E-钙黏素、紧密连接蛋白-1、水通道蛋白-5的表达.结果 TGF-β1可以诱导A549细胞EMT,表现为间质细胞表型蛋白表达的增加和上皮细胞表型蛋白表达的减少,这一过程p38 MAPK和JNK通道表达也增加,无论蛋白水平抑制或基因沉默p38 MAPK和JNK均可减轻A549细胞的EMT.结论 p38 MAPK和JNK信号通道在TGF-β1诱导的A549细胞EMT过程中起重要作用.     

EGFR在TGFβ1诱导Ⅱ型肺泡上皮细胞转分化中的作用

目的探讨表皮生长因子受体(EGFR)在转分化因子β1(TGFβ1)体外诱导Ⅱ型肺泡上皮细胞转分化中的作用。方法体外培养Ⅱ型肺泡上皮细胞系细胞-A549细胞,以TGFβ1刺激,倒置相差显微镜观察细胞形态学的变化;收集不同时段的细胞,应用RT-PCR检测TGFβ1干预前后E-钙黏蛋白(E-cadherin)和α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA表达变化;Western blot观察E-cad、α-SMA和信号转导蛋白EGFR表达的变化。结果倒置相差显微镜观察到TGFβ1刺激后A549细胞由鹅卵石状变为梭形,形态如同肌成纤维细胞;TGFβ1刺激A549细胞能导致E-cadherin mRNA和蛋白表达下调;α-SMA mRNA和蛋白表达上调;磷酸化EGFR(p-EGFR)表达上调。结论 TGFβ1能在体外诱导肺泡上皮细胞向间质细胞转分化,其机制与EGFR信号通路的活化相关。抑制EGFR的活化可能为临床防治肺纤维化提供新的途径。     

内皮素-1诱导大鼠肾小管上皮细胞转分化的可能机制

目的:探讨内皮素-1(ET-1)是否可诱导大鼠肾小管上皮细胞转分化(TEMT)及可能的分子机制.方法:体外培养大鼠肾小管上皮细胞(NRK52E)并进行分组;倒置显微镜观察细胞的形态变化;Western印迹法检测细胞E钙黏蛋白(E-cadherin)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)及磷酸化-p38MAPK(p-p38MAPK)蛋白的表达;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测细胞E-cadherin及α-SMA mRNA的表达. 结果:ET-1可诱导细胞由鹅卵石样变为梭形,下调E-cadherin表达,上调α-SMA、p38 MAPK及p-p38MAPK表达,增强p38MAPK活性(P＜0.05),而内皮素A受体拮抗剂BQ123能明显抑制这些变化(P＜0.05).p38MAPK特异性抑制剂SB203580可抑制ET-1诱导的细胞梭形性变,ET-1诱导的E-cadherin、α-SMA及p-p38MAPK表达改变及p38MAPK活性改变(P＜0.05),但对p38MAPK表达无明显影响(P＞0.05). 结论:ET-1可能通过激活肾小管上皮细胞p38 MAPK通路,下调E-cadherin的表达,同时上调d-SMA的表达,从而诱导肾小管上皮细胞转分化.     

结缔组织生长因子在肝细胞上皮-间充质转分化及肝纤维化形成中的作用研究进展

纤维化是器官(肝、肾、肺等)慢性功能衰竭的一个共同机制,目前尚无有效防治方法.对上皮-间充质转分化(epithelial-to-mesenchymal transition,EMT)的研究使人们对器官纤维化的传统认识受到挑战,逆转分化已被认为是未来抗肝纤维化治疗的重要策略之一[l].肝细胞EMT被认为是肝纤维化时肝内肌成纤维细胞(myofibroblast)即活化肝星状细胞(HSC)的一种新的重要来源,对肝纤维化形成具有决定性影响[2-3].日益增加的证据表明,结缔组织生长因子(connective tissure growth factor,CTGF)可能介导了肝细胞EMT及肝纤维化形成[4-5].现就近年来CTGF在肝细胞EMT及肝纤维化形成中的作用研究进展作一综述.     

沙利度胺治疗重型β-地中海贫血2例报道

正南方医科大学深圳医院郝丹孙志强*卓伟彬陈雪茹,深圳518000     

维生素D对特发性肺纤维化Ⅱ型肺泡上皮作用的研究进展

特发性肺纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis, IPF)是一种不可逆转的肺纤维化疾病,男性较女性多发,常见于50 岁以上人群,平均预期生存时间3-5 年,目前认为Ⅱ型肺泡上皮细胞(type 2 alveolar epithelial cells,AT2)的反复损伤是IPF的起始事件.AT2...     

马兜铃酸I诱导人肾小管上皮细胞转分化的作用及机制

目的：探讨马兜铃酸Ｉ（Ａｒｉｓｔｏｌｏｃｈｉｓ ａｃｉｄ Ｉ,ＡＡＩ）在人类肾小管上皮细胞（ＨＫＣ）转分化中的可能作用,了解ＡＡＩ引起肾小管间质损害的机制。方法：将体外培养ＨＫＣ细胞分为无血清对照组（Ｃ组）和ＡＡＩ实验组两组,波形蛋白和α－平滑肌肌动蛋白（α－ｓｍｏｏｔｈ ｍｕｓｃｌｅ ａｃｔｉｎ,α－ＳＭＡ）表达的变化;应用流式细胞技术检测表达α－ＳＭＡ阳性（＋）的ＨＫＣ细胞百分率;采用免疫酶标     

沙利度胺对类风湿关节炎T淋巴细胞的免疫调节作用

目的 探讨沙利度胺(Thd)对类风湿关节炎(RA)患者外周血T淋巴细胞的免疫调节作用.方法 在植物血凝素(PHA)刺激下,RA患者外周血T淋巴细胞与不同浓度的Thd(2.5、25、100、300、500μg/ml)共同培养.用四甲基噻唑蓝(MTT)比色法检测T淋巴细胞的增殖,用流式细胞术检测T淋巴细胞的凋亡和T淋巴细胞CD152、CD28的表达情况,用Real-time聚合酶链反应(PCR)检测T淋巴细胞的自细胞介素(IL)-6、IL-10、肿瘤坏死因子(TNF)-α mRNA表达水平.结果 在体外,与阴性对照组相比,500μg/ml,Thd组显著抑制T淋巴细胞的增殖,促进T淋巴细胞早期凋亡,抑制T淋巴细胞CD3+CD28+表达,促进CD8+CD152+表达,而≤300μg/ml,对T淋巴细胞未见明显影响.与对照组相比,(100～500)μg/ml剂量组可抑制T淋巴细胞IL-6、TNF-α mRNA表达,(2.5～500)μg/ml可促进IL-10 mRNA的表达.结论 Thd可能通过影响RA患者外周血T淋巴细胞增殖、早期凋亡、CD3*CD28+和CD8+CD152+表达,以及IL-6、IL-10、TNF-α mRNA表达,反转RA患者的免疫平衡失控.     

肺泡上皮细胞间质转化及其信号转导途径在肺纤维化中的作用

目的以TGF-β1诱导A549细胞出现上皮细胞-间质细胞转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）,探讨EMT过程及其信号转导途径在肺纤维化中的作用。方法体外培养A549细胞,以TGF-β1进行干预,收集不同时段的细胞,用荧光实时定量PCR检测上皮及间质细胞标志物的mRNA表达,Western blot检测上皮及间质细胞的标志物以及信号转导蛋白P-Smad2/3、Snail1、Snail2的表达,应用倒置相差显微镜观察TGF-β1干预前后细胞形态学的变化。结果 TGF-β1干预后,A549细胞上皮细胞标志物的mRNA和蛋白表达下调（P〈0.05）,间质细胞标志物的mRNA和蛋白表达上调（P〈0.05）;信号转导蛋白P-Smad2/3、Snail1上调（P〈0.05）,snail2弱表达（P〉0.05）;倒置相差显微镜观察到TGF-β1干预后A549细胞由鹅卵石状变为梭形,形态如同肌纤维母细胞。结论 TGF-β1可以在体外诱导肺泡上皮细胞向间质细胞转化,其机制与Smad 2/3、Snail1信号转导途径相关,提示肺泡上皮细胞向间质细胞的转化是肺纤维化发生的直接原因,而Smad 2/3、Snail1信号转导途径很可能是关键环节。通过诱导或促进肺泡上皮细胞向间质细胞转化,可以促使肺纤维化的发病,而通过阻断这一过程及其下游的信号转导通路有望治疗肺纤维化。     

去甲斑蝥素抑制单侧输尿管梗阻大鼠肾小管上皮-间充质转分化的实验研究

目的:利用单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠模型,观察去甲斑蝥素(norcantharidin,NCTD)对肾小管上皮细胞间质转分化的影响。方法:SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、模型组(UUO组)和UUO+NCTD治疗组(NCTD组),每组6只。采用单侧(左)输尿管结扎方法,建立梗阻性肾小管间质纤维化大鼠模型,Sham组只游离输尿管而不结扎。术后14d处死动物,取结扎侧肾脏,同时处死Sham组大鼠,取出肾组织。采用免疫组化、Western Blot及RT-PCR检测α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E钙黏蛋白(E-cadherin)与转化生长因子β1(TGF-β1)蛋白的mRNA表达的变化。结果:免疫组化、Western Blot及RT-PCR均显示,与Sham组比较,UUO组肾组织α-SMA和TGF-β1的mRNA表达升高、E-cadherin蛋白和mRNA表达降低(P<0.05);NCTD能抑制UUO大鼠肾组织α-SMA和TGF-β1表达的上调,上调E-cadherin的表达(P<0.05)。结论:NCTD具有抑制UUO大鼠肾小管上皮-间充质转化的作用,该作用可能与抑制TGF-β1的过表达有关。     

Epithelial-mesenchymal transition induced by transforming growth factor-β1 in mouse tracheal epithelial cells

Background and objective:   Epithelial-mesenchymal transition (EMT) is the process by which differentiated epithelial cells undergo a phenotypic transition to mesenchymal cells. This process may occur in certain fibrotic diseases that involve airway remodelling. However, few studies have directly proved the occurrence of EMT in primary cultures of airway epithelial cells. The aim of this study was to clarify whether airway epithelial cells can differentiate into mesenchymal cells through EMT.
Methods:   Mouse tracheal epithelial cells (mTEC) were cultured in an air–liquid interface (ALI) culture system, in the presence or absence of transforming growth factor-β1 (TGF-β1). The expression of mesenchymal and epithelial cell markers was examined by immunofluorescence staining and western blotting. Secretion of matrix metalloproteinase (MMP)-9 into the culture medium was measured by ELISA. The phenotype of epithelial cells involved in EMT was also examined by immunofluorescence staining.
Results:   Immunofluorescence staining and western blotting revealed that TGF-β1 treatment for 14 days induced the expression of the mesenchymal markers, α-smooth muscle actin (α-SMA) and vimentin, and reduced the expression of the epithelial markers, zonula occludens-1 (Zo-1) and occludin. In addition, α-SMA and Zo-1 were colocalized within individual cells treated with TGF-β1. Concentrations of MMP-9 in the culture medium were significantly higher in TGF-β1-treated mTEC than in untreated cells. The basal cell markers, cytokeratin-5 and cytokeratin-17, were colocalized within the cells expressing α-SMA.
Conclusions:   EMT was induced by TGF-β1 in primary cultures of mTEC, suggesting that airway epithelial cells, possibly the basal cells, may be involved in airway remodelling through EMT.     

Raf-1对裸鼠人乳腺癌细胞移植瘤EMT的影响及其机制探讨

目的 观察原癌基因蛋白Raf-1对裸鼠人乳腺癌细胞移植瘤上皮间质转化(EMT)的影响,并探讨其可能的机制.方法 将20只裸鼠随机分成A、B组,每组10只,分别侧腹部皮下注射对数生长期的MCF-7和MCF-7Raf-1细胞2×106个,建立裸鼠移植瘤模型.12周后处死裸鼠,原代培养裸鼠移植瘤细胞.采用Western blot法检测EMT的上皮细胞标志物E-cadherin、β-catenin和间质标志物vimentin,以及AURKA、总正丝裂原活化蛋白激酶(tMAPK)及磷酸化MAPK(p-MAPK).采用AURKA抑制剂处理MCF-7Raf-1移植瘤细胞48、72 h,采用Western blot法检测E-caherin、β-catenin、vimentin蛋白.结果 肿瘤细胞移植后4、8、12周,B组移植瘤体积均大于A组(P均＜0.05);与A组比较,B组移植瘤细胞E-caherin、β-catenin蛋白相对表达量降低,vimentin、p-MAPK、AURKA蛋白相对表达量增加,P均＜0.05;与AURKA抑制剂处理前比较,B组处理后48、72 h移植瘤细胞E-caherin、β-catenin蛋白相对表达量增加,vimentin蛋白相对表达量降低,P均＜0.05.结论 Raf-1过表达使乳腺癌细胞增殖能力显著增强,导致了AURKA高表达,发展了EMT表型;针对MAPK和AURKA信号通路的分子靶向治疗,有助于抑制乳腺癌细胞的增殖、侵袭和转移.     

上皮-间充质转化对消化系统肿瘤及纤维化作用的研究进展

上皮-间充质转化(EMT)是近年细胞生物学领域的重大发现;在生理学方面,EMT可引起胚胎形成、伤口愈合和组织再生.在病理学方面,能引起组织纤维化、肿瘤发生、发展、转移及耐药性的形成.目前对于EMT的相关研究正成为临床和基础研究领域十分活跃的课题,对于众多疾病的防治具有深远影响.近期一些研究阐明了EMT关于某些疾病的发病基础机制及其主要的调节因子.将EMT机制作为靶向治疗的药物治疗方案可被应用于预防组织纤维化及抑制肿瘤进展方面.在消化系统领域,有许多关于EMT在胃肠道肿瘤、肝脏肿瘤、胰腺肿瘤及肝纤维化方面起到关键性作用的证据.然而,EMT会在不同疾病中表现出不同的变化,而且在许多特殊疾病中EMT的调节因子尚待证实.本文将对目前关于EMT在消化系统领域肿瘤及纤维化方面作用的研究进展作一综述.