猕猴自体骨髓干细胞移植治疗急性肝损伤的实验研究

目的探讨自体骨髓干细胞肝门静脉移植对猕猴急性肝损伤的治疗作用和为人类肝损伤治疗提供依据和方法。方法猕猴10只,随机分为实验组和对照组,每日皮下注射40?L40.8ml/kg,连续注射4d,经肝功能生化指标检测及肝穿组织病理学观察确认肝损伤后,分离实验组猴的自体骨髓单个核细胞,按3×108细胞/kg将骨髓细胞植入肝门静脉,植入后60d进行肝功能相关指标检测及组织病理学观察。结果连续注射CCL44d后,血清谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、球蛋白(GLOB)(P<0.001),而总蛋白(TP)和白蛋白含量无变化(P>0.05),肝组织结构紊乱,大量肝细胞坏死,部分细胞变性,水肿,汇管区及周围有大量炎性细胞浸润。骨髓细胞肝门静脉移植后60d,血清AST、ALT活性和GLOB、BIL含量显著低于对照组(P<0.05),而TP、ALB、LDL含量高于对照组(P<0.05),病理组织学观察结构清楚,而对照组有纤维增生和肝细胞有脂肪变性。结论自体骨髓细胞肝门静脉移植能对猕猴急性肝损伤有明显治疗作用,可改善急性肝损伤猕猴的肝功能及组织结构,提示该方法可能对人类急性肝损伤有一定治疗意义。     

不同途径移植间充质干细胞对大鼠急性肝损伤的修复作用

目的:评价骨髓间充质干细胞(MSCs)移植对大鼠急性肝损伤的修复作用,探讨其可行性和有效性.方法:四氯化碳(CCl4)腹腔注射复制Wistar大鼠急性肝损伤模型,造模后随机分为实验组及对照组,实验组分别通过尾静脉、门静脉、肝内注射移植经Hochest33342标记的大鼠骨髓MSCs悬液0.5 mL(约1×10 6个细胞...     

猕猴自体骨髓CD133+细胞肝门静脉移植治疗肝损伤的实验研究

目的探讨自体CD133 细胞肝门静脉移植对猕猴肝损伤的治疗意义,为人类肝损伤治疗提供新技术。方法猕猴每日皮下注射40?L40.5ml/kg复制肝损伤模型后连续饲喂高脂饲料,经肝功能生化指标检测及肝穿组织病理学观察确认肝损伤后,免疫磁珠法分离自体骨髓CD133 细胞,按3×105细胞/kg将细胞植入肝门静脉,植入后60d进行肝功能相关指标检测及组织病理学观察。结果连续注射CCL44d后,血清谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、球蛋白(GLOB)均显著升高,而总蛋白(TP)和白蛋白含量无变化(P>0.05),肝组织结构紊乱,部分肝细胞水肿、变性和坏死,汇管区及周围有大量炎性细胞浸润。第二次肝门静脉细胞移植后30d,血清AST、ALT活性和GLOB、BIL含量显著低于对照组(P<0.05),而TP、ALB、LDL含量高于对照组(P<0.05),治疗组肝组织结构清楚,而对照组有部分纤维增生和肝细胞有脂肪变性。结论自体CD133 细胞肝门静脉移植能有效促进肝损伤修复和阻止猕猴肝损伤的发展,改善猕猴肝组织结构和功能。     

同种异体骨髓单个核细胞肝内移植治疗急性肝损伤的磁共振扩散成像实验观察

目的 探讨骨髓单个核细胞肝内移植治疗急性肝损伤的疗效及利用磁共振扩散成像评价骨髓单个核细胞移植后急性肝损伤模型肝组织修复情况的可行性.方法 10只健康同龄兔作正常对照,仅行正常肝脏平均ADC值的测定.42只肝损伤模型兔随机均分为两组:(1)移植组:肝内注射5 ml骨髓单个核细胞悬液;(2)对照组:肝内注射5 ml D-hanks液.移植术前均行肝功能测定,术后第7、14、28天,两组分别选7只行肝脏磁共振扩散成像及肝功能检查后处死,行肝脏病理切片.结果 术前,移植组、对照组肝功能差异无统计学意义(P＞0.05),术后各时点移植组肝功能好于对照组(P＜0.05).术后第7天,移植组、对照组平均ADC值低于正常对照组(P＜0.05),并随时间推移逐渐向正常肝脏平均ADC值接近;同时点,移植组平均ADC值高于对照组(P＜0.05);移植组内各时点平均ADC值两两比较差异有统计学意义(P＜0.05).对照组内部比较,术后第7天平均ADC值小于术后第14天及28天(P＜0.05);术后第14天与术后第28天差异无统计学意义(P=0.473).移植组、对照组平均ADC值与ALT、AST值呈负相关(P＜0.05),与ALB值呈正相关(P＜0.05).结论 骨髓单个核细胞移植可促进急性肝损伤模型的肝功能恢复;观察肝脏平均ADC值动态变化可了解骨髓单个核细胞移植治疗急性肝损伤的疗效.

Abstract：

Objective To investigate the therapeutic effect of mononuclear bone marrow cells (MBMCs) transplantation to rabbit liver with acute hepatic injury ( AHI ) and the feasibility that evaluated the functional recovery of acute hepatic injury model with MR-DWI. Methods 10 healthy rabbits were chosen to be normal control group which was only carried out MR-DWI scan of normal liver. 42 model rabbits of acute liver injury were randomly selected and divided into 2 groups: transplanted group( n = 21 ) and control group( n =21 ). Each rabbit of the transplanted group was infused 5 ml MBMCs suspension (about containing 2 × 107 MBMCs) into its liver at multiple sites. All manipulations to each rabbit in the control group were as same as those in the transplanted group except that 5 ml of D-Hanks solution was injected instead of MBMCs suspension. 7 model rabbits respectively chosen from the transplanted group and the control group were carried out MR-DWI scan and calculated the mean ADC value of the injury liver and then were killed on day 7, day 14 and day 28 of AHI establishment after transplantation. Other comparative assays were performed including: functional assay of liver, pathological examination of liver sections. Results Before MBMCs transplantation, the difference of liver function was not significant between the transplanted group and the control group. But after MBMCs transplantation , the liver functions of the transplanted group were significantly better than those of the control group at all time points tested ( P ＜ 0. 05 ). On day 7 of AHI establishment after MBMCs transplantation, the mean ADC values of the transplanted group and the control group were significant lower than those of the normal control group(P ＜0. 05 ). The mean ADC values of the transplanted group and the control group increased to the mean ADC values of the normal control group over time. At the same time point , the mean ADC values of the transplanted group were significantly higher than those of the control group. In the transplanted group, the difference of average ADC values between any two time points were significantly (P ＜ 0. 05). In the control group, the mean ADC values on day 7 were lower than those on day 14 and day 28 (P＜0. 05), the mean ADC values on day 14 were lower than those on day 28(P =0. 417). The correlation between the average ADC value and the ALT or AST was negative( P ＜0. 05 ), the correlation between the average ADC value and the ALB was positive( P ＜ 0. 05). Along with the increase of the average ADC value, the liver function of the AHI model rabbit gradually got better. Conclusion Transplantation of MBMCs promoted the recovery of liver function of AHI model rabbit The recovery of the injury liver could be detected with observing dynamic change of its mean ADC value.     

人脐血间充质干细胞在大鼠急性肝损伤修复中的作用

目的:探讨经外周静脉途径移植人脐血间充质干细胞(hUCBMSCs)对急性肝损伤大鼠肝脏功能及组织的修复作用。方法:使用密度梯度离心法结合贴壁培养法体外培养人脐血间充质干细胞。44只雌性SD大鼠随机地分为四组,每组11只:正常组(N组)、单纯移植组(NT组)、损伤组(I组)、移植治疗组(IT组)。I组和IT组在移植前24h腹腔注射50%CCl_4溶液(3ml/kg),N组、NT组腹腔注射等量的生理盐水。造模后24h,使用DAPI标记第3代hUCBMSCs,NT组、IT组大鼠经外周静脉途径移植入(5~6)×10~6个hUCBMSCs,N组、I组大鼠注入1ml生理盐水。在造模前、造模后24h,移植后第3天、第7天、第14天,收集血清检测ALT和AST;移植后第3天、第7天,各组分别处死3只大鼠,第14天处死剩余大鼠,取肝脏组织行病理染色及冰冻切片,观察大鼠肝脏组织的病理学变化以及hUCBMSCs在肝脏内的迁移定植情况。移植后第14天,取IT组和NT组的肝脏组织进行免疫组织化学染色,检测大鼠肝脏中人源性肝细胞特异性抗原(HSA)的表达。结果:造模后24h,I组和IT组血清ALT和AST水平明显升高,与N组相比差异有统计学意义(P均<0.05)。与损伤组(I)相比,移植治疗组(IT)的肝脏病理学损伤恢复速度明显加快,移植后第14天接近于正常。无论在移植后的第3天、第7天还是第14天,IT组蓝色荧光标记的细胞数均多于NT组(P均<0.05)。在移植后的第3天,hUCBMSCs主要位于汇管区的周围,第7天和第14天主要定植于肝实质中。移植后第14天,IT组、NT组大鼠的肝组织中均可见红色荧光标记的人源性肝细胞特异性抗原(HSA),IT组的阳性细胞数(35±7.3)个明显多于NT组(7±3.4)个(t=1.377,P<0.05)。结论:肝脏受损后形成的微环境能够促使hUCBMSCs向受损肝组织中迁移、定植,并诱导其横向分化为肝样细胞来修复肝脏功能及组织。     

自体单个核骨髓干细胞移植对急性心肌梗死后心功能的影响

目的 探讨自体单个核骨髓干细胞(BMSCs)移植对前壁急性心肌梗死(AMI)后心功能的影响.方法 选择2006年1月至2008年12月本院住院的前壁AMI患者32例,按患者意愿分为移植组和对照组,各16例,对照组按常规行心脏介入治疗,移植组术前采集1×108～3×108个自体单个核BMSCs,介入治疗后直接经导管向冠...     

同种异体骨髓单个核细胞肝内移植治疗急性肝损伤的MVD改变及VEGF的表达

目的：探讨骨髓单个核细胞移植后急性肝损伤模型的血管内皮生长因子（VEGF）表达及微血管密度（MVD）值的动态变化。方法：随机选择急性肝损伤模型兔42只,移植组及对照组各21只,在细胞移植组行骨髓单个核细胞移植后的第7,14,28天,移植组及对照组分别处死7只,处死前行肝功能检查而后行肝脏病理切片免疫组织化学检查,测定并比较VEGF表达阳性细胞数及MVD值。结果：细胞移植前,移植组与对照组肝功能无差别（P>0.05）,细胞移植后各观察时点移植组的肝功能指标均好于对照组（P<0.05）,VEGF表达阳性细胞数及MVD值均高于对照组（P<0.05）。移植组内部各时点相互比较,VEGF表达阳性细胞数逐渐降低,第7,14天较第28天高（P<0.05）,第7天较第14天高（P>0.05）; MVD值逐渐增高,第14天及第28天较第7天高（P<0.05）,第28天较第14天高（P>0.05）。对照组各时点比较,VEGF表达阳性细胞数逐渐降低,第7天较第14天及第28天高（P<0.05）,第14天较第28天高（P>0.05）;MVD值逐渐增高,各时点两两比较差异均有统计学意义（P<0.05）。结论：骨髓单个核细胞移植可以促进急性肝损伤模型的VEGF表达及MVD值增加,有利于肝脏功能的恢复。     

大鼠骨髓间充质干细胞移植后肝内定居的实验研究

目的探索大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)同种异体移植后在受体大鼠模型肝内定居分布情况。方法利用密度梯度离心法分离、纯化培养大鼠骨髓间充质干细胞。取第三代MSCs经CFSE标记后从门静脉植入同种异体正常组和肝损伤组大鼠体内,于移植后的第14d取出的肝脏,通过冰冻切片行荧光检测,研究MSCs在大鼠肝脏内定居分布情况。结果经门静脉移植的MSCs在正常组和肝损伤组的肝脏内均能定居,且定居的细胞数量上肝损伤组明显多于正常组。结论经门静脉移植的MSCs可以定居于肝脏内,且定于肝脏的干细胞数量与肝脏是否损伤密切相关。     

不同途径骨髓基质干细胞移植治疗小鼠糖尿病效果

目的研究不同途径骨髓基质干细胞(BMSCs)移植对小鼠糖尿病治疗效果。方法分离骨髓,贴壁培养并纯化和扩增BMSCs。腹腔注射链脲佐菌素建立小鼠糖尿病动物模型。取2×105个第3代BMSCs,对模型鼠分别进行胰腺内多点注射、尾静脉移植以及肾被膜移植。动态观察移植后小鼠的血糖、体质量及行为的变化。结果与糖尿病对照组相比,胰腺移植组、尾静脉移植组和肾被膜移植组小鼠的糖尿病症状有所改善,血糖明显降低(F=32.58~48.35,q=10.06~14.98,P<0.05),以胰腺移植组血糖下降更为显著。结论 3种途径BMSCs移植对小鼠糖尿病均有治疗作用。     

miR-122在骨髓间充质干细胞治疗大鼠急性肝损伤中的作用

目的:探讨miR-122在骨髓间充质干细胞(BMSCs)治疗大鼠急性肝损伤中的作用,阐明相关作用机制。方法:密度梯度离心法分离收集雄性大鼠的BMSCs,分为转染组和对照组,其中转染组BMSCs采用脂质体介导转染miR-122 mimics,对照组BMSCs未接受转染。将60只四氯化碳(CCl₄) 诱导的急性肝损伤大鼠随机分为肝损伤对照组(静脉注射生理盐水)、普通治疗组(静脉移植普通BMSCs)和实验治疗组(静脉移植转染miR-122的BMSCs)(n=20)。移植细胞后1、7和14 d检测大鼠肝功能,肝组织行HE染色观察其病理学改变。结果:转染miR-122 mimics后7 d,BMSCs中白蛋白(ALB)表达水平明显上调,而甲胎蛋白(AFP)的表达水平则明显下调。移植细胞后1d,与普通治疗组比较,实验治疗组血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)活性差异无统计学意义(P>0.05);移植细胞后7和14 d时,实验治疗组大鼠血清ALT和AST活性均低于普通治疗组(P<0.05);HE染色,实验治疗组大鼠肝脏充血、细胞质内空泡变性及肝细胞坏死情况明显好于普通治疗组。结论:上调BMSCs中miR-122表达水平能够促进其分化为肝样细胞,并可明显改善CCl₄所致大鼠肝脏损伤。     

肝素联合肝干细胞经脾移植治疗SD大鼠急性肝损伤

目的:探讨肝素联合肝干细胞(WB-F344细胞)经脾移植对大鼠急性肝损伤的治疗作用.方法:构建携带绿色荧光蛋白(GFP)基因的慢病毒载体,体外培养、扩增WB-F344细胞,携带GFP基因的慢病毒转染WB-F344细胞.通过腹腔注射四氯化碳(CCl4)建立大鼠急性肝损伤模型,造模后24 h分别将1 mL含2×107个肝干...     

同种异体骨髓基质干细胞移植修复急性化学性肝损伤

目的 探讨骨髓基质干细胞（BMSCs）同种异体移植治疗急性化学性肝损伤的疗效。方法 采用CCl4喂养制作SD大鼠急性化学性肝损伤模型，同种大鼠骨髓提取BMSCs。45只SD大鼠随机分为正常对照组、肝损伤对照组、肝损伤移植组（肝损伤大鼠，向肝实质内移植BMSCs），每组15只。分别在造模前、BMSCs移植术后6h及1，5周，每组各取3只大鼠检测血清中ALT，AST，A／G，SOD，MDA，Hyp水平和肝组织中SOD，MDA，Hyp水平，并进行统计学检验。结果 移植后6h，肝损伤移植组和肝损伤对照组血清ALT，AST，A／G，MDA，SOD，Hyp和组织SOD，MDA，Hyp水平仍均明显低于正常对照组，差异有统计学意义，肝损伤移植组和肝损伤对照组比较，差异无统计学意义；移植后1，5周，肝损伤移植组血清ALT，AST，A／G，MDA，SOD，肝组织SOD，MDA水平明显高于肝损伤对照组．并且较移植后6h明显升高，差异有统计学意义。结论 BMSCs移植可全面修复急性化学性肝损伤所致的肝功能损害。     

骨髓间充质干细胞移植对严重烧伤大鼠肝损伤的修复作用及其机制

目的：探讨骨髓间充质干细胞（BMSCs）移植对严重烧伤大鼠肝损伤的修复作用，初步阐明其作用机制。方法：体外分离、培养、扩增、鉴定并标记大鼠BMSCs。将30只Wistar大鼠随机分成正常对照组、模型组和细胞治疗组,每组10只。制备大鼠烧伤模型，将氯甲基苯甲酰胺（CM-Dil）标记的BMSCs经球后静脉移植到细胞治疗组大鼠体内，模型组大鼠注射生理盐水。观察各组大鼠的一般状况。细胞移植后2周取大鼠肝组织，进行病理组织学观察和评分；TUNEL法检测肝细胞凋亡率；激光共聚焦显微镜观察BMSCs在大鼠肝组织中的定植情况。结果：细胞移植后2周，模型组大鼠精神明显萎靡、少动；细胞治疗组大鼠精神状态较好，大鼠体质量显著高于模型组（P<0.05）。病理组织学观察，模型组大鼠肝小叶结构消失，肝索排列紊乱，部分肝窦扩张充血，散在淋巴细胞浸润，偶见小灶性聚集，肝细胞浊肿，有些细胞胞浆疏松，脂肪变性；细胞治疗组大鼠肝组织的病理学改变较轻，明显好于模型组；细胞治疗组大鼠病理组织学评分明显低于模型组(P<0.05)。TUNEL法检测，模型组大鼠肝组织出现较多凋亡肝细胞，细胞治疗组大鼠肝细胞凋亡率明显低于模型组（P<0.05）。激光共聚焦显微镜观察，细胞治疗组大鼠肝组织中有CM-Dil标记的BMSCs。结论：BMSCs移植后能够向受损肝组织定植，对烧伤引起的肝损伤有明显的修复作用，其机制可能与抑制细胞凋亡有关。     

同种异体移植骨髓基质干细胞修复大鼠急性化学性肝损伤的组织学观察

目的 探讨同种异体移植骨髓基质干细胞修复大鼠急性化学性肝损伤的可行性。方法 采用CCl4喂养制作SD大鼠急性化学性肝损伤模型，通过肝实质局部注射同种BMSCs（肝损伤移植组），或不行细胞移植（肝损伤对照组）。分别在造模前、BMSCs移植术后6h、1周、5周取肝组织石蜡包埋、切片、HE染色，光镜下观察。结果 肝损伤大鼠造模后肝内出现弥漫性分布的点片块坏死，肝血窦充血明显，弥散性炎性细胞浸润。BMSCs移植组大鼠移植术后6h肝内坏死、充血、炎性细胞等改变与肝损伤对照组组织学改变基本类似，移植术后1周、5周上述组织学改变逐渐好转，但BMSCs移植组较肝损伤对照组好转更明显。结论 同种异体移植BMSCs有助于修复大鼠急性化学性损伤的肝组织。     

间充质干细胞和单个核细胞异种移植治疗小鼠肝损伤的研究

目的：研究大鼠骨髓间充质干细胞（MSCs）和单个核细胞（MNCs）在四氯化碳（CCl4）诱导性小鼠肝损伤治疗中的作用。方法：无菌条件下取雄性Wistar大鼠骨髓分离MNCs,培养纯化及流式细胞仪筛选获得MSCs;采用CCl4制作雌性Balb/c小鼠肝损伤模型,随机分为MSCs移植组、MNCs移植组和肝损伤对照组。2个细胞移植组分别在CCl4损伤后立即经尾静脉注入大鼠MSCs或MNCs,各组分别于移植细胞输入前即刻（T0）、输入后第1（T1）、7（T2）、14（T3）、28（T4）、42 d（T5）断尾取血检测谷丙转氨酶（ALT）和谷草转氨酶（AST）。6周后处死小鼠,比较肝脏质量指数,肝病理学切片检测肝损伤程度,PCR检测大鼠Sry基因片段植入小鼠肝脏的情况。结果：MSCs CD44、CD90均表达阳性,而CD45表达阴性;2个细胞移植组在T1~5时点ALT和AST浓度差异有统计学意义（P＜0.05）;与肝损伤对照组比较,MSCs移植组ALT和AST浓度在T1~5时点均降低; MSCs移植组肝损伤修复程度明显好于MNCs移植组和肝损伤对照组;仅MSCs移植组肝内有大鼠Y染色体阳性细胞存在。结论：体外分离培养及扩增的大鼠MSCs可植入到CCl4诱导性肝损伤小鼠的肝组织中,并改善CCl4导致的肝损伤。     

小鼠骨髓干细胞移植对生殖细胞生成的影响

目的:探讨绿色荧光蛋白转基因小鼠骨髓干细胞移植对不育模型小鼠生殖细胞的影响。方法:用白消安造小鼠无精子症模型,将绿色荧光转基因小鼠骨髓细胞处理后移植到无精子症模型小鼠睾丸网内,在小鼠分组干预后用Western-Blot方法检测各组小鼠睾丸VASA基因表达水平。结果:模型鼠睾丸病理切片显示睾丸曲细精管内生殖细胞显著减少(P<0.05),Western-Blot结果显示VASA基因蛋白水平较正常鼠显著降低(P<0.05)移植成功组小鼠VASA基因蛋白表达水平较模型对照组高(P<0.05),但仍低于正常鼠水平。结论:1含骨髓干细胞的骨髓混合细胞移植到无精子症模型小鼠睾丸网内,可明显促进生殖细胞生成。2VASA基因表达水平可作为睾丸性不育动物模型评价指标。     

转GDNF基因的BMSCs移植对大鼠脑出血突触可塑性的影响

目的:探讨转胶质细胞源性神经营养因子基因的骨髓基质干细胞移植到脑出血大鼠后对其突触可塑性的影响。方法:采用胶原酶诱导大鼠尾壳核出血模型,于建模后第3 d在脑出血部位分别注射生理盐水、BMSCs和GDNF/BMSCs悬液20μl。将48只模型大鼠随机分为生理盐水组、BMSCs组和GDNF/BMSCs组,各组又根据取材时间不同分为1周组和2周组,每亚组8只。通过免疫组织化学与RT-PCR观察出血灶周边突触素Syn和生长相关蛋白GAP-43的蛋白与基因的表达。结果:在1周和2周两个时间点,GDNF/BMSCs组与BMSCs和生理盐水组相比Syn和GAP-43的m RNA以及免疫阳性产物显著增加。结论:GDNF/BMSCs移植较单纯BMSCs更能促进脑出血周边区域神经再生修复。     

汉丹肝乐对小鼠急性肝损伤的保护作用

中药复方胶囊剂汉丹肝乐（Ｈａｎ－Ｄａｎ－Ｇａｎ－Ｄｅ）灌胃给药,可使四氯化碳（ＣＣｌ４）及Ｄ－氨基半乳糖胺（Ｄ－Ｇａｌ）所致的急性肝损伤小鼠血清丙氨酸转氨酶（ＡＬＴ）、碱性磷酸酶（ＡＫＰ）活性及丙二醛（ＭＤＡ）含量明显下降,并使肝糖原含量明显增加。提示汉丹肝乐具有保护小鼠急性肝损伤的作用。     

自体骨髓干细胞肝内移植的护理

目的探讨自体骨髓干细胞肝内移植对肝硬化治疗的护理,为今后相同的病例提供护理经验。方法以自体骨髓干细胞做为供体,在体外分离纯化后移植患者肝内,使受损的肝功能得以恢复和重构。本文对21例患者从术前准备和术中医护患的配合,术后病情的观察和周密的护理,增强患者战胜疾病的信心。结果减少患者活动受限和并发症的发生,使手术顺利进行,成功率100%。结论在自体骨髓干细胞移植治疗肝硬化过程中,护士的充分的准备,医护患的良好的沟通与配合是自体骨髓干细胞移植成功的重要保证。