链霉素耐药结核分枝杆菌临床分离株gidB基因突变研究

目的探索gidB基因突变在结核分枝杆菌链霉素耐药中的作用。方法结核分枝杆菌临床分离株中,60株为链霉素耐药,30株敏感。同时进行链霉素MIC测定并采用DNA测序法分析gidB,rpsL和rrs基因突变。结果20%的耐药株含有gidB单基因突变,80%的耐药株除gidB基因突变以外,还有rpsL或rrs基因突变。敏感株中也有gidB基因突变。gidB突变呈散在分布,未发现突变热点。结论gidB基因突变在结核分枝杆菌链霉素耐药中的作用尚不能肯定。     

结核分枝杆菌链霉素耐药临床分离株rpsL基因突变特征分析

目的了解我国结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis,MTB）rpsL基因突变特征及其与链霉素耐药的相关性,并评价其应用价值。方法对302株结核分枝杆菌临床分离株的rpsL基因采用聚合酶链反应-直接测序（PCR-DS）进行检测。结果 59株对INH、RFP、SM、EMB和PAS全部敏感,rpsL基因没有突变,61株对SM敏感的耐药株有6株突变,SM敏感菌株突变率为5.00%（6/120）。182株SM耐药MTB,rpsL基因突变率为70.33%,其中43位密码子赖氨酸转变为精氨酸（Lys43Arg）突变率为52.20%;88位密码子有4种突变类型,突变率为17.58%;86位密码子精氨酸转变为谷氨酰胺（Arg86Gln）突变率为0.55%。SM耐药株的rpsL基因突变率明显高于SM敏感株的基因突变率,两者之间的差异有统计学意义,χ2=125.05,P〈0.05。结论 rpsL基因突变与结核分枝杆菌链霉素耐药高度相关,其中Lys43Arg突变是主要突变类型,PCR-DS检测rpsL基因突变可以用于临床结核菌链霉素耐药的快速检测。     

结核分枝杆菌耐喹诺酮临床分离株gyrA基因突变的研究

目的 了解结核分枝杆菌喹诺酮(quinolones)耐药株耐药基因突变情况，评价其应用价值。方法 通过16S rRNA聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)技术分析77株分枝杆菌临床分离株；通过PCR-SSCP和直接测序技术分析结核分枝杆菌的gyrA基因突变的情况。结果 75株为结核分枝杆菌复合群。30株喹诺酮敏感株的gyrA基因的SSCP图谱中，11株与H37Rv相同，19株与卡介苗相同；与卡介苗gyrA基因的SSCP图谱相同的敏感株95位密码子为ACC，与H37Rv该图谱相同的敏感株95位密码子为AGC。45株喹诺酮耐药株中，34株(75．6％)gvrA基因SSCP图谱泳动异常，对25株泳动异常、出现频率较高耐药株测序证实15株(44．1％)为94位密码子GAC→GGC突变；10株(29．4％)为90位密码子GCG→GTG的突变。结论 结核分枝杆菌耐喹诺酮与gyrA基因突变有关，PCR-SSCP可能成为测定结核分枝杆菌耐喹诺酮类药基因型的快速、简便的方法。     

耐异烟肼结核分枝杆菌临床分离株耐药相关基因突变研究

目的阐明结核分枝杆菌耐异烟肼临床分离株katG、inhA、ahpC、kasA及oxyR基因突变特点。方法对144株结核分枝杆菌临床分离株(耐异烟肼菌株101株;异烟肼敏感株43株)的katG、inhA、kasA、ahpC及oxyR基因进行DNA片断扩增及DNA序列分析,与GeneBank中结核分枝杆菌标准序列进行比较。结果(1)耐异烟肼菌株中未发现katG完全缺失,81株耐药株(80.2%)katG存在点突变、缺失或插入,其中16个突变位点未见报道;39株(38.6%)耐药株第315位点突变,低耐药菌株(1μg/ml)第315位点突变率显著高于高耐药菌株(10μg/ml;χ2=9.31,P<0.05);58株(57.4%)耐药株第463位点突变。23株(53.3%)敏感株第463位点突变。(2)5株(4.9%)耐药株inhA发生突变。敏感株inhA无突变。(3)3株(2.9%)耐药株ahpC发生突变。敏感株ahpC无突变。(4)17株(16.8%)耐药株kasA发生突变。敏感株中3株菌株Gly312Ser突变。(5)在全部菌株中未发现oxyR基因突变。(6)综合本项研究中各基因的突变情况,共有91株耐异烟肼菌株发生与异烟肼耐药相关的突变。结论本项研究进一步证实了结核分枝杆菌耐异烟肼与katG、inhA、ahpC及kasA基因突变之间的关系,并且提示还有其他机制参与异烟肼耐药。     

链霉素耐药结核分枝杆菌临床分离株gidB基因突变研究

目的 探索gidB基因突变在结核分枝杆菌链霉素耐药中的作用.方法 结核分枝杆菌临床分离株中,60株为链霉素耐药,30株敏感.同时进行链霉素MIC测定并采用DNA测序法分析gidB,rpsL和rrs基因突变.结果 20%的耐药株含有gidB单基因突变,80%的耐药株除gidB基因突变以外,还有rpsL或rrs基因突变.敏感株中也有gidB基因突变.gidB突变呈散在分布,未发现突变热点.结论 gidB基因突变在结核分枝杆菌链霉素耐药中的作用尚不能肯定.     

结核分枝杆菌新疆临床分离株耐药情况调查

目的分析新疆部分地区结核分枝杆菌(MTB)临床分离株对抗结核药物的耐药情况,探讨本地区耐药结核病的发生率及特点。方法收集2008年11月～2009年10月新疆喀什、和田、皮山等南疆地区确诊的结核病患者痰液标本,进行MTB的分离培养及菌种初步鉴定,并应用比例法对分离菌株进行耐药性检测,与本课题组所做北疆地区耐药情况进行比对。结果共分离到102株分枝杆菌,88株(86.3%)属于结核分枝杆菌复合群,7株(6.9%)属于牛分枝杆菌,7株(6.9%)属于非结核分枝杆菌。88株结核分枝杆菌中对1种以上抗结核药物具有耐药性的有20株,总耐药率为22.7%(20/88),MDR-TB为6.8%(6/88)。新疆南疆地区4种一线抗结药物的耐药率:H15.9%、R8.0%、S12.5%、E3.4%,明显低于新疆北疆地区抗结药物的耐药率:H53.3%、R28.5%、S48.4%、E46.8%。结论新疆南疆地区结核总耐药率有所下降,耐多药率有上升趋势,在结核病防治工作中应给予高度重视;新疆南、北疆地区耐药情况不同,北疆耐药率明显高于南疆地区。     

耐异烟肼结核分枝杆菌临床分离株耐药基因突变及其分子流行病学调查研究

目的阐明结核分枝杆菌耐异烟肼临床分离株katG基因突变特点以及Spoligotyping分型和结核病流行关系。方法对123株结核分枝杆菌临床分离株，其中有药敏结果的98株，（耐异烟肼菌株45株；异烟肼敏感株53株）的katG基因进行DNA片断扩增然后进行SSCP分析；同时对其中的121株菌株进行Spoligotyping分型。结果45株耐INH结核杆菌株中，27株（60％）第315位点突变，低耐药菌株（1mg／L）第315位点突变率显著高于高耐药菌株（10mg／L；53株敏感株中无KatG基因315位密码子突变。对121株临床株的Spoligotyping DNA指纹分析，1型，（北京型）103株占84％（103／121），其它基因型18株，分散在13种基因型中。结论本项研究进一步证实了结核分枝杆菌耐异烟肼与katG基因突变之间的关系；北京型感染是北京地区结核病流行的重要原因。     

结核分枝杆菌embB基因306位点突变与耐药的相关性研究

embB基因突变，特别是其306位点（embB306）的点突变一直被认为是结核分枝杆菌耐乙胺丁醇的重要原因。但是，Hazbon等对来自世界各地的1020株菌株进行分析后认为，embB306突变不直接引起结核分枝杆菌乙胺丁醇耐药性，而是容易产生对任何药物的耐药性。Plinke等报道，embB306位点突变只发生在乙胺丁醇耐药菌株中，从而说明该位点突变与乙胺丁醇耐药有关。可见embB306位点突变与乙胺丁醇耐药的关系还存在着较大的分歧。     

山东省耐利福平结核分枝杆菌rpoB基因突变的研究

目的 分析山东省利福平耐药结核菌株rpoB基因突变特点.方法 本研究为回顾性调查,135株样本分别取自1997、2000及2003年的流行病学调查和医院的临床样本.采用PCR直接基因测序法分析rpoB基因突变.结果 135株结核菌中, 60株为利福平耐药菌株,其中 55株（91.7%）rpoB基因的利福平耐药决定区（RRDR）有突变.突变频率依次为密码子531（60.0%）,526（29.1%）和516 （7.3%）.1株耐药菌同时发生了少见的3个密码子（511,515,518）的多核苷酸突变.75株敏感菌株中, 仅3株（4.0%）有突变,均发生在密码子533,包括一个新发现的突变基因型CTG（Leu）→ATG（Met）.结论 来自山东省结核菌中,利福平耐药表型与rpoB基因突变的符合率为94.1%,并提示密码子533突变与利福平耐药表型相关性较低.     

结核分枝杆菌katG基因突变对异烟肼耐药性的影响

目的探讨结核分枝杆菌katG基因突变TGG328TTT(Trp328Phe)对异烟肼耐药性的影响。方法以结核分枝杆菌标准株H37Rv和临床突变株DNA为模板,采用PCR扩增野生型和双突变型(含Trp328Phe与Met420Thr)katG基因,采用重叠延伸PCR技术构建单突变型(Trp328Phe)katG基因。将各katG基因重组至质粒pET22b(+),再导入表达宿主菌BL21(DE3)pLySs中,IPTG诱导目的蛋白表达,亲和层析法对重组KatG蛋白进行分离纯化。通过各重组KatG蛋白与过氧化氢和邻联大茴香胺反应,检测受试菌过氧化氢酶和过氧化物酶的活性。结果成功获得纯化的KatG蛋白。相比野生型KatG(19.05U/mg和7.05×10-3 U/mg),单突变型KatG(10.50U/mg和2.23×10-3 U/mg)过氧化氢酶和过氧化物酶活性分别下降44.9%和68.3%,双突变型KatG(11.88U/mg和3.31×10-3 U/mg)则分别下降37.6%和53.0%。结论 katG基因(Trp328Phe)突变引起KatG酶活性部分缺失,与异烟肼耐药有关,可作为耐药菌株基因检测的标志用于基因芯片的开发。双突变时KatG蛋白活性较高,提示katG-328TTT具有代偿性突变的作用。     

贵阳市结核分枝杆菌链霉素和乙胺丁醇耐药相关基因突变的检测与分析

目的了解贵阳市及周边地区结核分枝杆菌链霉素和乙胺丁醇耐药相关基因rpsl、rrs和embB的突变特征。方法对39株结核分枝杆菌临床分离株(乙胺丁醇和链霉素均耐药菌株19株,均敏感菌株20株)的rpsl、rrs和embB基因片段进行PCR扩增和测序,以H37Rv菌株序列为参考,比较耐药菌株和敏感菌株的突变特征。结果19株耐药菌株中有14株检出rpsl基因突变,突变率为73.7%(14/19),其中12株为AAG43AGG突变,1株为AAG43AAT突变,1株为AAG88AGG突变;20株敏感菌株中有1株发生rpsl基因AAG43AGG突变,突变率为5.0%;耐药菌株和敏感菌株均未检测出rrs基因突变。19株耐药菌株中有16株检出embB基因突变,突变率为84.2%(16/19),突变包括6株ATG306GTG突变,ATG306ATA、ATG306ATT和ATG306ATC突变各1株; GGC406GCC和GGC406AGC突变各3株,1株CAG497CGG突变;20株敏感菌株未检测出突变。结论贵阳地区结核分枝杆菌菌株链霉素和乙胺丁醇耐药相关基因突变具有多样性;优势突变分别为rpsl43和embB306位点突变。     

结核分枝杆菌吡嗪酰胺耐药相关基因研究进展

吡嗪酰胺是治疗结核病的重要抗结核药物之一,特别是用于耐多药结核病的治疗。近年来结核分枝杆菌对吡嗪酰胺的耐药逐渐增多,其耐药机制尚未明确。本文针对结核分枝杆菌吡嗪酰胺耐药及其与基因变异之间的关系研究进展进行综述,以供研究者参考。     

31株结核分枝杆菌异烟肼耐药相关基因检测及序列分析

目的了解贵阳地区分离的结核分枝杆菌katG基因、inhA启动子和oxyR-aphc间隔区基因突变特征。方法对31株结核分枝杆菌临床分离株（异烟肼耐药株17株,异烟肼敏感株14株）的katG基因、inhA启动子和oxyRaphc间隔区进行DNA片段的PCR扩增,并进行测序分析。结果 17株异烟肼耐药菌株中有16株检出katG基因突变,其中70.5%（12/17）为315位密码子变异,且变异类型均为AGC→ACC,敏感株未发现315位点突变。11株敏感菌和4株耐药菌在463位密码子发生变异,变异类型均为CGG→TGG,变异率分别为78.6%（11/14）和23.5%（4/17）,差异无统计学意义。有12株耐药株的变异类型为katG基因双重位点突变,其中10株为katG315（AGC→ACC）和463（CGG→TGG）位变异,463（CGG→TGG）和299（GGC→AGC）变异及463（CGG→TGG）和419（GAC→CAC）位变异各1株。2株异烟肼耐药菌检出oxyR-aphC启动区G32A突变,其中1株为联合katG463和299位突变。结论贵阳株结核杆菌菌株异烟肼耐药基因突变具有多态性,主要的变异类型为katG315位点突变。     

rpoB基因点突变与结核分枝杆菌对利福平耐药相关性的研究

目的了解浙江地区分离的结核分枝杆菌临床菌株对利福平（RFP）的耐药率及该菌rpoB基因点突变与RFP耐药性的关系。方法从浙江地区肺结核病人的痰液或咽拭子标本中分离并鉴定结核分枝杆菌72株。采用K-B纸片法和E-试验法检测上述结核分枝杆菌临床菌株对RFP的耐药性。采用PCR检测上述结核分枝杆菌临床菌株rpoB基因携带率。通过对RFP敏感或耐药各10株结核分枝杆菌临床菌株rpoB基因T-A克隆后测序，了解该基因氨基酸序列第516、526和531位点突变情况及其与RFP耐药性的关系。结果38．9％（28／72）结核分枝杆菌临床菌株对RFP耐药。所有结核分枝杆菌临床菌株均携带rpoB基因。1株RFP敏感的结核分枝杆菌临床菌株rpoB基因氨基酸序列中出现S526L点突变。5株RFP耐药的结核分枝杆菌临床菌株rpoB基因氨基酸序列中出现S526L点突变，另5株发生H531D点突变，但均未发现516位氨基酸突变或526和531位氨基酸联合突变。结论浙江地区分离的结核分枝杆菌临床菌株有较高的RFP耐药频率。上述结核分枝杆菌临床菌株对RFP耐药性与rpoB基因氨基酸序列526或531位点突变密切相关。     

gidB mutations in streptomycin-resistant Mycobacterium tuberculosis clinical

目的　探索gidB基因突变在结核分枝杆菌链霉素耐药中的作用。方法 结核分枝杆菌临床分离株中,60株为链霉素耐药,30株敏感。同时进行链霉素MIC测定并采用DNA测序法分析gidB,rpsL和rrs基因突变。结果 20%的耐药株含有gidB单基因突变,80%的耐药株除gidB基因突变以外,还有rpsL或rrs基因突变。敏感株中也有gidB基因突变。gidB突变呈散在分布,未发现突变热点。结论 gidB基因突变在结核分枝杆菌链霉素耐药中的作用尚不能肯定。     

宁波地区流动人口耐多药肺结核二线抗结核药物耐药状况及耐药基因突变特征分析

目的 了解宁波地区流动人口耐多药肺结核(multidrug-resistant Mycobacterium tuberculosis,MDR-TB)患者临床分离菌株二线抗结核药物耐药状况及耐药基因突变特征。方法 以2017—2019年浙江省宁波地区结核病耐药监测收集的133例MDR-TB患者作为研究对象(流动人口占42.11%,56/133;户籍人口占57.89%,77/133),采用1%比例法对患者临床分离菌株进行卡那霉素(kanamycin,KAN)、阿米卡星(amikacin,AMK)、卷曲霉素(capreomycin,CAP)、氧氟沙星(ofloxacin,OFX)、左氧氟沙星(levofloxacin, LVX)5种二线抗结核药物的耐药检测。同时采用PCR DNA直接测序法检测rrs、tlyA、eis、gidB、gyrA、gyrB 6个二线抗结核药物耐药相关基因的突变特征。结果 56株流动人口MDR-TB 患者临床分离菌株KAN 耐药率(7.14%,4/56),AMK耐药率(5.36%,3/56),CAP耐药率(1.79%,1/56),OFX耐药率(28.57%,16/56),LVX耐药率(33.93%,19/56)与77株户籍人口患者临床分离菌株KAN 耐药率(7.79%,6/77),AMK耐药率(6.49%,5/77),CAP耐药率(3.90%,3/77),OFX耐药率(31.37%,24/77),LVX耐药率(25.97%,20/77)比较差异无统计学意义(X²_KAN=0.020,P=0.888; X²_AMK =0.074,P=0.786; X²_CAP =0.036,P=0.850; X²_OFX =0.104,P=0.747; X²_XLV =0.990,P=0.320)。56株流动人口MDR-TB 患者临床分离菌株准广泛耐药率(Pre-XDR)(33.93%,19/56),广泛耐药率(XDR-TB)(3.57%,2/56)与77株户籍人口患者临床分离菌株准广泛耐药率(Pre-XDR)(24.68%,19/77),广泛耐药率(XDR-TB)(7.79%,6/77)比较差异无统计学意义(X²_Pre-XDR=1.360,P=0.243;X²_XDR-TB=0.411,P=0.521)。56株流动人口MDR-TB患者临床分离菌株rrs突变率(8.93%,5/56)、tlyA突变率(1.79%,1/56)、eis突变率(3.57%,2/56)、gidB突变率(5.36%,3/56)、gyrA突变率(39.29%,22/56)和gyrB突变率(3.57%,2/56)与77例户籍人口患者临床分离菌株rrs突变率(5.19%,4/77)、tlyA突变率(11.69%,9/77)、eis突变率(0.00%,0/77)、gidB突变率(2.60%,2/77)、gyrA突变率(31.17%,24/77)和gyrB突变率(2.60%,2/77)比较差异无统计学意义(X²_rrs=0.247、X²_tlyA=3.259、X²_eis=0.901、X²_gidB=0.133、X²_gyrA=0.944、X²_gyrB=0.000,均P>0.05)。6个基因的突变类型中,rrs 2种、tlyA 1种、eis 2种、gidB 2种,gyrA 5种、gyrB 4种,均以点突变为主。结论 尽管本地区流动人口MDR-TB患者临床分离菌株二线抗结核药物耐药形势较为严峻,但流动人口可能不是MDR-TB二线抗结核药物耐药防控的重点人群。     

174株结核分枝杆菌耐药情况分析

目的分析我所183株痰培养阳性菌株的耐药情况。方法采用药敏比例法对183株阳性菌株进行菌种鉴定及药物敏感性试验。结果共分离出174株结核分枝杆菌,且4种一线抗结核药物异烟肼(INH)、利福平(RFP)、乙胺丁醇(EMB)、链霉素(SM)的总耐药率为25.3%,耐多药率为8.0%。4种抗结核药物的耐药率由高到低依次为SM、INH、EMB、RFP。结论陕西省结核耐药情况仍较严重。     

结核分枝杆菌rpoB基因突变特征的初步探讨

目的 了解浙江省耐利福平结核分枝杆菌rpoB基因突变特征.方法 对65株临床分离菌株rpoB基因509-631位点分别进行PCR-SSCP检测和DNA序列测定,观察不同耐药株rpoB基因突变的规律.结果 耐利福平分离株96.4%（27/28）存在rpoB基因突变,其中526位突变率64.3%（18/28）,513位突变率21.4%（6/28）,531位突变率7.1%（2/28）,529位突变率3.6%（1/28）;耐其他抗结核药18.5%（5/27）存在rpoB基因突变,突变位点具有随机性.所有敏感菌株均无突变.结论 rpoB基因突变与利福平耐药密切相关,浙江省rpoB基因突变主要以526位突变为主,其次为513位,两者占总数的86%（24/28）,而耐其他抗结核药菌株也存在rpoB基因的突变,但没有明显规律,且均对利福平敏感.     

耐多药结核分枝杆菌对喹诺酮类药物的耐药性与gyr基因突变的初步研究

目的分析耐多药结核分枝杆菌（Multiple drug-resistant tuberculosis,MDR-TB）临床分离株的gyr基因突变特点,探讨MDR-TB对喹诺酮类药物耐药产生与gyr基因突变的关系。方法采用比例法对耐多药结核临床分离菌株进行氧氟沙星的药物敏感性检测,应用DNA直接测序法检测MDR-TB的gyr基因突变情况。结果 125株MDR-TB临床分离株中,50株对喹诺酮类耐药,耐药率为40%。50株耐药菌株中,40株gyr基因发生突变：其中39株gyrA基因突变,突变率为78%,突变位点包括90,91和94位氨基酸;5株gyrB基因突变,其中4株合并gyrA基因突变,gyrB基因突变位点为500,506,534和539位氨基酸。结论 MDR-TB中的喹诺酮类药物耐药态势比较严峻,其对喹诺酮类药物耐药机制主要与gyrA基因突变有关。