成人接种乙型肝炎疫苗后细胞免疫应答的动态变化

目的探讨人体接种乙型肝炎(乙肝)疫苗后细胞免疫的动态变化,了解疫苗介导的细胞免疫应答与体液免疫应答的关联。方法8例成人按0、1、2月程序接种乙肝疫苗,于首针免疫后3、8、21、34和65 d采静脉血,分离外周血单个核细胞(PBMC),对PBMC进行细胞分选,获得纯度95%以上的CIM~ 和CD8~ T淋巴细胞,应用酶联免疫斑点法(ELISPOT)测定PBMC、CD4~ 和CD8~ T淋巴细胞体外刺激后所产生的细胞因子IFN-γ、IL-2和IL-4的斑点数(SFC),并收集乙肝疫苗免疫前(0 d)和免疫后3、8、21、30、34、60、65和150 d血样,测定乙肝表面抗体(抗-HBs)。同时设立阴、阳性对照各2例。结果人接种乙肝疫苗后,CD4~ 、CD8~ T淋巴细胞产生不同细胞因子趋势和强度不同: IFN-γ(由CD8~ 、CIM~ T淋巴细胞产生)出现较早,且较为稳定,而CD4~ T淋巴细胞产生的IL-2和IL-4出现较晚,但其升高与第2、3针乙肝疫苗免疫有关;免疫后IL-4阳转率与抗-HBs阳转率呈显著正相关,IL-2、IL-4的SFC与抗-HBs滴度也呈显著正相关。结论成人接种乙肝疫苗后可早期检测出以IFN-γ为主的细胞免疫,IL-4和IL-2阳转与抗-HBs升高有关。     

卡介苗对人外周血单个核细胞分泌IL-12/IL-10水平的影响

目的研究卡介苗(BCG)对人外周血单个核细胞(PBMC)IL-12/IL-10分泌水平的影响。方法以SKOV3细胞培养的上清液作用于PBMC,产生免疫抑制效应,再以不同浓度的BCG作用,采用酶联免疫(ELISA)法检测BCG作用前后IL-12/IL-10分泌水平,并进行比较。结果 SKOV3细胞培养上清作用PBMC后,IL-12分泌水平显著下降(P0.05),IL-10分泌水平显著上升(P0.01)。以质量浓度为0.25、0.125、0.062 5g/L的BCG作用上述培养细胞,IL-12分泌量显著上升(P0.01),IL-10分泌量显著下降(P0.01),以上效应均随BCG浓度的增加而增强(P值均0.01)。结论 BCG不仅可作为疫苗进行预防接种,还可作为Th1细胞免疫的诱导剂,改变受肿瘤细胞影响的PBMC部分细胞因子的分泌水平,在肿瘤、自身免疫性疾病治疗方面发挥一定的作用。     

病毒性肝炎患者外周血单个核细胞中Caspase-3与凋亡

肝炎病毒的感染及复制不仅发生在肝细胞中，而且也发生在免疫细胞中，包括骨髓及外周血单个核细胞(PBMC)。凋亡的发生与肝细胞的变化及肝脏的病理过程密切相关。Caspases家族是凋亡的重要控制基因之一，而其中Caspase-3是凋亡过程中的一个重要调节子。Caspase-3的活性与病毒性肝炎的炎症程度及病情发展有关，通过Caspase-3对凋亡的调控，可能会对病毒性肝炎的治疗和控制起重要作用，     

PBMC转运与乙型肝炎病毒宫内传播关系

目的探讨乙型肝炎病毒经外周血单个核细胞（PBMC）引起宫内传播的可能性。方法采用双重原位杂交（DISH）技术检测54名谷胱甘肽-S-转移酶M1基因（GSTM1）缺失型的新生儿（其母该基因为表达型）PBMC涂片中GSTM1和乙型肝炎病毒DNA。结果54名新生儿PBMC涂片中检出孕妇GSTM1信号34人,占62.96%;检出乙型肝炎病毒信号18人,占33.33%,检出2者双阳性信号15人,占27.78%。且母-胎PBMC转运与新生儿PBMC中乙型肝炎病毒感染有统计学关联（χ^2=9.96,P=0.002）。结论孕期孕妇感染乙型肝炎病毒的PBMC可通过细胞转运途径导致乙型肝炎病毒宫内传播。     

母血HBV DNA含量与新生儿HBV感染关系

目的 探讨HBsAg阳性孕妇外周血乙型肝炎病毒(HBV)DNA含量及细胞转运与新生儿HBV感染的关系.方法 用荧光定量PCR方法定量检测HBsAg阳性孕妇血清HBV DNA;用等位基因特异性PCR及半巢式PCR技术扩增HBsAg阳性孕妇新生儿外周血中母亲DNA,通过检测谷胱甘肽-S-转移酶(GSTM1)、血管紧张素转换酶(ACE)等位基因确定母-胎细胞转运;用巢式PCR检测新生儿血清、外周血单个核细胞(PBMC)中HBV DNA.结果 随着孕妇血清HBV DNA含量的增加,新生儿HBV DNA阳性的危险性呈现增高趋势(X~2=13.16,P<0.05,趋势X~2=12.42,P<0.05),而孕妇血清HBV DNA含量与新生儿PBMC HBV DNA阳性无关(总X~2=2.41,P>0.05,趋势X~2=0.35,P>0.05);孕妇血清HBV DNA含量与母-胎细胞转运无关(总X~2=4.14,P>0.05,趋势X~2=0.001,P>0.05);母-胎细胞转运与新生儿外周血PBMC HBV DNA阳性有关(X~2=10.26,P<0.05),而与新生儿外周血HBV DNA阳性无关(X~2=0.49,P>0.05).结论 HBsAg阳性孕妇血清HBV DNA含量、母-胎细胞转运与新生儿HBV感染有关,分别是新生儿血清、PBMC HBV感染的重要危险因素.     

IL-13与支气管哮喘

支气管哮喘是由多种细胞和细胞成分参与的气道慢性炎症性疾病，以肺部可逆性阻塞、气道黏膜炎症和气道高反应性为特征。随着分子生物学和免疫学的发展，人们逐渐认识到T淋巴细胞释放的多种多功能的细胞因子在炎症反应中起着关键的作用。TH0细胞可分化为TH1型和TH2型细胞，其中，TH1型细胞能产生IFN-7，IL-2等细胞因子；TH2型细胞能产生IL-4，IL-5，IL-13，IL-6等细胞因子。TH1／TH2型细胞因子平衡，在哮喘发病机制中起着重要作用，其中IL-13作为近年发现的细胞因子正成为研究热点。     

慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞中凋亡分子表达水平及临床意义

目的 探讨慢性乙型肝炎（CHB）患者外周血单个核细胞（PBMC）中凋亡分子表达水平及临床意义。方法 以2018年1月至2020年7月郑州市某医院消化内科诊治的CHB患者为研究对象,比较不同病情程度患者PBMC中凋亡分子（Caspase-3、Caspase-6、Caspase-8）mRNA表达量、辅助T细胞（Th）1细胞因子[白细胞介素（IL）-2、干扰素γ（IFN-γ）]、Th2细胞因子（IL-4、IL-10）水平,采用Pearson相关性分析凋亡分子与IL-2/IL-10、IFN-γ/IL-4的相关性。根据凋亡分子表达均数分为低表达者、高表达者,比较不同表达CHB患者HBV-DNA载量,并分析凋亡分子与乙型肝炎病毒（HBV）-DNA的关系。结果 本研究共纳入CHB患者116例,男83例,占71.6%。患者年龄27~78岁,以45~59岁所占比例最大,占50.9%。轻、中、重度患者分别为36、45、35例,分别占31.0%、38.8%、30.1%。不同病情程度的CHB患者PBMC中Caspase-3 mRNA、Caspase-6 mRNA、Caspase-8 mRNA表达量差异均有统计学意义（均P<0.01）。重度患者IL-2、IFN-γ、IL-2/IL-10、IFN-γ/IL-4低于中度、轻度患者,IL-4、IL-10高于中度、轻度患者（均P<0.01）。以HBV-DNA载量1× 10⁵ copy/mL为界分为高载量与低载量,HBV-DNA高载量患者PBMC中Caspase-3 mRNA、Caspase-6 mRNA、Caspase-8 mRNA表达量高于HBV-DNA低载量患者（P<0.01）;且3者mRNA与IL-2/IL-10、IFN-γ/IL-4呈负相关（P<0.05）,与HBV-DNA载量呈正相关（P<0.05）。结论 PBMC中凋亡分子（Caspase-3、Caspase-6、Caspase-8）mRNA表达随CHB患者病情加重而升高,并与Th1/Th2失衡及HBV-DNA载量具有相关性,抑制凋亡分子表达可为Th1/Th2失衡的纠正及控制HBV的复制提供新思路。     

慢性乙型肝炎患者树突状细胞分离培养及其功能测定

目的探讨树突状细胞（DCs）在慢性乙型肝炎发病过程中的功能特点，为进一步研究慢性乙型肝炎的发病机制提供科学依据。方法对10例慢性乙型肝炎患者、10例乙型肝炎病毒（HBV）携带者及10例正常对照者的外周血DCs进行体外培养，应用流式细胞技术检测DCs表面分子HLA-DR、CD80、CD86的表达，并采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测DCs上清液白细胞介素（IL）-12的水平，比较DCs在慢性乙型肝炎不同感染阶段的功能特点。结果培养7天的DCs在透射电镜下观察，DCs充满每个视野，细胞体积较大，细胞表面突起较丰富，胞浆内粗面内质网及溶酶体丰富，线粒体结构较清楚，核大而圆，核膜清晰，染色质分布较均匀。正常对照组的HLA-DR、CD80和CD86的表达率均〉54％，而慢性乙型肝炎及HBV携带者组上述DCs表面分子的表达率普遍降低，与正常对照组比较，差异有显著性（P〈0．01），慢性乙型肝炎与HBV携带者组之间的差异无统计学意义（P〉0．05）。培养第7天DCs上清IL-12的表达水平在慢性乙型肝炎、HBV携带者组明显低于正常对照组（P〈0．05），而慢性乙型肝炎与HBV携带者组之间无明显差异（P〉0．05）。结论慢性乙型肝炎患者及HBV携带者均存在DCs表型和功能的缺失。     

IFN-α2b对慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞内HBV-DNA阴转和对CD25的诱导作用

目的探讨IFN-α2b对慢性乙型肝炎患者HBV-DNA的治疗效果及对CD25的诱导作用. 方法将患者分为A(66例)、B(44例)两组,分别采用IFN-α2b和常规治疗,PCR法动态检测患者外周血单个核细胞(PBMC)内和血清中HBV-DNA,生物素-链霉亲和素(BSA)法检测CD25表达水平,实时(real-time) PCR法检测CD25 mRNA含量,动态检测抗-IFN-IgG水平. 结果 IFN-α2b治疗24、48周后,患者PBMC内、血清中HBV-DNA和HBeAg阴转率分别为36.36%、39.39%、40.91%和42.42%、51.52%、53.03%,与常规组相比差异有显著性(P<0.05～P<0.01);干扰素治疗后,ALT、AST、ALT/AST水平分别为(33.4±12.6)U/ml、(34.3±10.7)U/ml、(0.9±0.2)U/ml,与常规组相比差异有显著性(P<0.01);慢性乙型肝炎患者静息态和诱导态CD25水平均降低,干扰素治疗后,静息态和诱导态CD25水平显著升高,其CD25 mRNA含量亦同步升高,与常规组相比差异有显著性(P<0.01);IFN-α2b治疗48周抗-IFN-IgG阳性率仅6.06%,与常规组相比差异无显著性(P>0.05). 结论 IFN-α2b对PBMC、血清HBV-DNA和HBeAg均有较好阴转效果,阴转率明显高于常规疗法;IFN-α2b可诱导慢性乙型肝炎患者表达CD25,促进T细胞活化发挥抗病毒作用;IFN-α2b自身免疫原性较弱,治疗过程中诱导机体产生低水平的抗-IFN-IgG,对IFN-α2b的抑制作用较弱.     

Caspase-9活性检测在慢性乙型肝炎患者PBMC凋亡中的意义

目的探讨慢性乙型肝炎(乙肝)患者外周血单个核细胞(PBMC)凋亡率在乙肝病毒(HBV)感染慢性化机制中的意义及凋亡PBMC的半胱氨酸基-天冬氨酸特异性蛋白酶9(Caspase-9)活性在PBMC凋亡过程中的意义。方法采用流式细胞仪检测25例慢性乙肝患者及15例健康对照者PBMC的凋亡率,并用比色法检测凋亡PBMC内Caspase-9的活性。结果慢性乙肝患者HBV DNA阳性组PBMC凋亡率及PBMC内Caspase-9活性均高于HBV DNA阴性组(均P<0.01)及健康对照组(均P<0.01),HBV DNA阴性组上述两指标均高于健康对照组(分别P<0.05;P<0.01)。慢性乙肝患者PBMC中Caspase-9活性与其凋亡率呈正相关(P<0.01)。结论慢性乙肝患者PBMC存在凋亡现象,可能为乙肝慢性化机制之一;其中的Caspase-9活性增高,提示Caspase-9可能参与了慢性乙肝患者PBMC的凋亡过程。     

血液透析患者感染乙型和丙型肝炎病毒的调查

采用基因扩增技术，对医院５８例血液透析患者进行医院性感染乙型和丙型肝炎病毒的调查分析。发现乙型肝炎病毒感染者４例，感染率为６．９０％；丙肝病毒感染者１２例，感染率为２０．６９％。随透析次数的增加，丙肝病毒的感染机率明显增加。提示血液透析患者接受疫苗免疫的重要性。由于透析前患者接受过乙型肝炎疫苗的免疫，调查者中有３４．４８％的患者产生了保护性抗体，且乙型肝炎病毒感染率远低于丙型肝炎。指出了血液透析是传播病毒性肝炎的危险因素，并对其防治措施进行了探讨。     

HBsAg阴性的慢性HC病人血清中HBV-DNA检测

目的:检测慢性HC病人血清中HBV—DNA阳性率。方法:用巢式PCR对3 8例HBsAg阴性的HC病人作HBV—DNA检测,选出3 0例慢性HB病人血清作对照组。结果:测定组HBV—DNA阳性为4 5 % ( 1 7/ 3 8) ,血清转氨酶值、肝炎活动度、肝纤维化程度、HBV感染标志物等指标在2种HC病人(HBV—DNA阴性和阳性)中差异均无显著性(P >0 .0 5 )。结论:用PCR可以在一部分HBsAg阴性的慢性HC病人血清中检测到HBV—DNA。HBV可能抑制HCV复制。用PCR多次重复测定HBV—DNA可以作为排除HCV、HBV混合感染的方法。     

慢性乙型肝炎患者血清HBV DNA与HBeAg、HBeAb组的关系

[目的]研究不同感染阶段的慢性乙型肝炎病毒感染者血清中HBV DNA载量与HBeAg(HBsAg、HBeAg、HBcAb,所谓大三阳)、HBeAb(HBsAg、HBeAb、HbeAb,所谓小三阳)组的相关性和临床意义. [方法]采用日立7600-010型全自动生化分析仪(ALT)、酶联免疫吸附实验(ELISA)、荧光定量聚合酶联反应(FQ-PCR)检测慢性乙型肝炎患者1481例血清HBV DNA含量,并进行分析. [结果]HBV DNA的载量与HBeAg存在呈相关性.结果发现免疫清除期、免疫残留期、免疫耐受期3中感染模武,在慢性HBV感染者不同时期阳性构成比分别为28.43%、37.14%、34.44%. [结论]FQ-PCR法检测HBV DNA具有特异性强、灵敏度高、重复性好、结果可靠的特点,对于乙肝感染的早期诊断、有无传染性和病毒的复制情况、药物疗效的观察和判断具有指导意义.     

甘肃省乙型肝炎疫苗接种与乙型肝炎病毒感染关系探讨

[目的]分析乙肝疫苗接种和乙肝病毒感染的关系,为今后控制乙肝提供参考。[方法]通过多阶段随机抽样的方法,抽取1～59岁的自然人群,对每名对象的接种情况进行问卷调查,并抽取1ml血清,利用ELASA方法检测HBsAg、抗-HBs和抗-HBc,对接种情况与感染情况进行相关性分析。[结果]随着年龄的升高,1～14岁儿童的首针及时接种率和全程合格接种率有逐步下降的趋势,而感染率有升高的趋势。进行相关性分析,首针及时接种率和乙肝感染率之间呈负相关,相关系数为-0.598,P﹤0.05;全程合格接种率与乙肝感染率无相关性,P﹥0.05。考虑到有可能是首针及时接种率的影响,排除首针及时接种率的干扰,重新计算全程合格接种率与乙肝感染率的相关性,P﹥0.05,由此看来全程合格接种率与乙肝感染率之间不存在相关关系。[结论]提高乙肝疫苗首针及时接种率对控制乙肝至关重要。     

乙肝泰胶囊对慢性乙肝患者IL-2、IL-4的影响

目的通过乙肝泰胶囊抑制乙型肝炎病毒复制来观察慢性乙型肝炎患者体内代表Th淋巴细胞免疫功能的免疫细胞因子IL-2和IL-4能否恢复。方法79例慢性乙型病毒性肝炎患者给子口服乙肝泰胶囊。在乙肝泰胶囊治疗前和治疗期间每3个月抽血检查HBV-DNA、肝功能、乙肝两对半、IL-2和IL-4。结果完全应答组乙肝泰胶囊治疗期间IL-2升高,IL-4降低,且治疗期间各时间点同治疗前相比有统计学意义(p<0.05);部分应答组治疗期间IL-2升高,IL-4降低,但前者仅治疗第3、6个月同治疗前相比有统计学意义(p<0.05),后者仅治疗第3个月同治疗前相比有统计学意义(p<0.05);无应答组治疗期间IL-2,IL-4含量同治疗前相比均无统计学意义(p>0.05);细胞因子含量和病毒含量这二者之间的改变有一定的联系。结论乙肝泰胶囊通过降低慢性乙型肝炎患者体内的病毒含量能够恢复代表辅助性T淋巴细胞免疫功能的免疫细胞因子IL-2和IL-4。     

DETECTION OF HEPATITIS C VIRUS ANTIBODIES AND HEPATITIS C VIRUS RNA IN PATIENTS WITH ALCOHOLIC LIVER DISEASE

The prevalence of hepatitis C virus (HCV) antibody was determinedin 130 patients with alcoholic liver disease using a second-generationanti-HCV enzyme immunoassay (ELISA 2) and confirmed by a sensitivepolymerase chain reaction procedure measuring HCV RNA. Hepaticdisease was evaluated by clinical and biochemical studies and,whenever possible, by liver biopsy. Seventy-one patients werediagnosed as having cirrhosis, and 59 alcoholic hepatitis (n= 33) or fatty liver (n = 26). The prevalence of anti-HCV inthe total group was 9.2% and did not differ significantly inthe cirrhotics (11.3%) as compared with the non-cirrhotics (6.8%).HCV RNA was detected in six out of eight cirrhotics and threeOut of four non-cirrhotics who were ELISA 2 positive. A positivetest for antibodies to hepatitis core antigen (anti-HBc) wasmore frequent in anti-HCV-positive patients (75%) than in theanti-HCV-negative group (14%, P<0.001). Anti-HBc was alsofound more frequently in the cirrhotics (25.4%) than in thealcoholics without cirrhosis (11.9%). However, the prevalenceof hepatitis B surface antigen was equally low in both groups(cirrhotics 1.4%, non-cirrhotics 1.7%). No correlation was observedbetween the prevalence of anti-HCV antibodies and the severityof liver dysfunction. These results indicate that HCV, and especiallyHCV-viraemia, is less frequent in alcoholics in southern Germanythan suspected in previous studies, and that the prevalenceof HCV markers in alcoholics has been overestimated by ELISA1 used alone.     

慢性乙型肝炎病毒感染者合并甲型肝炎病毒感染的临床特点与转归

目的　观察慢性乙型肝炎重叠甲型肝炎病毒感染的临床特点及其病情转归。方法　以血清HBsAg和抗HAV -IgM均阳性患者 37例作为重叠组 ,测定血清谷丙转氨酶、总胆红素及统计恢复正常天数并与单纯慢性乙型肝炎进行对照分析。结果　重叠组慢性肝炎重度、慢性重型肝炎例数明显高于单纯慢性乙型肝炎 (P <0 0 5 ) ;血清谷丙转氨酶和总胆红素水平及恢复正常天数、病程均高于单纯慢性乙型肝炎 (P <0 0 1)。结论　慢性乙型肝炎重叠甲型肝炎病毒感染后病情趋向重症化 ,病程延长。     

乙肝疫苗对单项抗-HBc、抗-HBe及抗-HBc均阳性者抗-HBs产生的探讨

[目的]探讨接种乙肝疫苗对促进乙肝抗-HBc单项阳性及抗-HBe、抗HBc 2项同时阳性者产生抗-HBs的作用。[方法]对抗-HBc单项阳性及抗-HBe、抗HBc 2项同时阳性者,进行乙肝疫苗接种。接种全程结束后1个月,抽血作抗-HBs检查。[结果]接种乙肝疫苗后,抗-HBs总阳转率为92.59%,抗-HBc阳性者抗-HBs阳转率为94.74%,抗-HBe、抗-HBc 2项同时阳性者阳转率为87.5%。男性抗-HBs阳转率为93.33%,女性为91.67%。[结论]接种乙肝疫苗对抗-HBc单项阳性及抗-HBe、抗-HBc 2项同时阳性者,有促进抗-HBs产生的作用。     

人胎肝干细胞体外感染乙型肝炎病毒模型的建立

目的 建立一种稳定的基于人胎肝干细胞的维持乙型肝炎病毒(HBV)复制和传代的体外细胞培养模型,为深入研究乙肝病毒的生命周期和发病机制提供必要的工具.方法 原代分离12～20周胎龄的胎肝干细胞,用乙肝病毒阳性血清感染胎肝干细胞;荧光定量PCR追踪检测细胞上清和细胞内乙肝病毒DNA及细胞内乙肝病毒复制中间体-闭合环状双链D...     

ANTIGENEMIA HBs AND OTHER SEROLOGICAL MARKERS OF HEPATITIS B VIRUS INFECTION IN PATIENTS WITH ACUTE AND CHRONIC ALCOHOLISM

Serological markers of hepatitis B virus infection were studiedin a group of recently presenting alcoholic out-patients andcompared with a group of long-stay in-patients suffering fromchronic alcoholism. All markers of infection were increasedin the chronic group and Were thought to be related to admissionto the Alcohol Unit. Although both groups had normal liver functiontests, the patients with the longer alcohol history had evidenceof two coexisting causes of liver disease and may, therefore,have a much poorer prognosis.