免疫磁珠法分选人脑胶质瘤干细胞及其培养和鉴定

背景与目的:脑胶质瘤治疗效果一直不理想,这与胶质瘤细胞无限增殖能力和侵袭性生长有关,本研究旨在从人脑胶质瘤组织和细胞株中分离脑胶质瘤干细胞、进行体外培养并对其干细胞特性加以鉴定。方法:采用以CD133为标志的免疫磁珠法从人脑胶质瘤组织和细胞株中分离脑胶质瘤干细胞并进行体外培养,通过免疫荧光技术检测干细胞标志物CD133、Nestin,诱导分化后检查分化细胞标志物MAP2、GFAP、MBP以及电镜超微结构观察和移植SCID鼠致瘤实验,对其干细胞特性加以鉴定。结果:新鲜人脑胶质瘤组织和胶质瘤细胞株中存在一小部分CD133 的胶质瘤细胞,能表达干细胞的标志物CD133和Nestin,符合干细胞的超微结构特点,体外培养能连续传代;诱导分化后能产生MAP2、GFAP、MBP染色阳性的细胞;移植SCID鼠后能形成与亲本肿瘤表型一致的移植瘤。结论:新鲜人脑胶质瘤组织和胶质瘤细胞株中存在的一小部分CD133 胶质瘤细胞具有干细胞的属性,就是胶质瘤中的肿瘤干细胞,即胶质瘤干细胞。     

胶质瘤干细胞的分离、培养及初步鉴定

目的:探讨人脑胶质瘤干细胞的培养和分离方法。方法:取9例脑胶质瘤患者的手术标本进行处理,采用B27培养基进行培养,碱性成纤维细胞生长因子和表皮生长因子刺激细胞扩增;应用免疫组织化学染色对培养的细胞及其分化的细胞进行鉴定。结果:9例标本中共有7例成功培养出肿瘤细胞球,培养条件下呈悬浮状态生长,形成肿瘤细胞球,免疫细胞化学检测显示肿瘤球细胞表达胶质瘤干细胞的标志物CD133和Nestin,诱导分化后的肿瘤球细胞可以表达成熟神经细胞的标志物GFAP和TU-20。结论:体外的培养条件下,可以从胶质瘤组织中培养出胶质瘤干细胞,为胶质瘤的深入研究奠定基础。     

人恶性胶质瘤干细胞的分离与鉴定

目的:从人恶性胶质瘤中分离并鉴定胶质瘤干细胞。方法:采用神经干细胞无血清培养方法,分离胶质瘤干细胞,免疫细胞化学法、有限梯度稀释实验、二代球体形成分析、流式细胞分析等方法对胶质瘤干细胞进行鉴定。结果:3例患者原代培养胶质瘤细胞中CD133 细胞分别为7.4%、2.8%和4.2%。每100个原代胶质瘤细胞中可形成1个左右的胶质瘤细胞球;胶质瘤细胞球细胞均表达神经干细胞标记CD133和Nestin,不表达分化标志GFAP和MAP2,少数细胞表达分化标记MBP。每100个原代胶质瘤细胞球体细胞可形成6.07±2.15个悬浮生长的二代胶质瘤细胞球,二代细胞球细胞表达CD133和Nestin。胶质瘤细胞球细胞分化后细胞多数表达GFAP,少数表达MAP2和MBP。胶质瘤球体干细胞的增殖较原代胶质瘤细胞慢。胶质瘤球体细胞1×103个时可成瘤,原代培养的胶质瘤细胞需1×107。结论:采用神经干细胞培养条件可以很简便的分离出悬浮生长的胶质瘤球体干细胞。分离出的胶质瘤球体干细胞表达CD133抗原,具备肿瘤干细胞的基本特征。     

人脑胶质瘤组织中分离与培养肿瘤干细胞

目的 从胶质瘤组织中培养、分离肿瘤干细胞,并初步探讨其生物学特性。方法采集8例人脑胶质瘤手术标本,剪碎、胰酶消化,滤网过滤收集细胞。淋巴细胞分离液除去其中的红细胞,用含EGF、LIF和bFGF的无血清培养液培养,形成细胞球体后经免疫磁珠分离获取CD133^＋细胞,用有限稀释法继续在上述无血清培养基中培养得到肿瘤细胞球后连续传代培养。取第5代肿瘤干细胞,用含10％FBS培养液诱导分化。分化前后用Nestin、MAP2、GFAP免疫细胞化学染色检测肿瘤干细胞及其分化细胞的相应标志物。结果在1例间变性星形细胞、室管膜细胞混合瘤中克隆到了CD133^＋细胞,这些细胞在体外培养时,能稳定维持于球形生长状态（3个月,14代）,在适合的环境中随时能自我更新和增殖,并分化成MAP2^＋的瘤性神经元和GFAP^＋的瘤性胶质细胞,而CD133^-细胞则无此特性。结论在胶质瘤组织中有肿瘤干细胞存在,这些细胞在体外能长期培养和传代,可为进一步研究胶质瘤的细胞生物学和分子生物学特征开拓新途径。     

SHG-44胶质瘤干细胞球的表型特点及其移植瘤病理特征

目的 研究SHG-44胶质瘤干细胞球的分子表型、致瘤能力及其移植瘤的病理学特征.方法 应用神经干细胞培养基(NSCM)培养SHG-44胶质瘤细胞株,获取其胶质瘤干细胞球,纯化培养后行细胞免疫(ICC)荧光染色检测CD133、兔抗人巢蛋白(nestin)、A2B5、小鼠抗人波形蛋白(vimentin)、血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR-2)和IDH R132H的表达;含血清培养基诱导其分化,ICC检测CD133、nestin、vimentin、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、β-Ⅲ tubulin和半乳糖神经鞘氨醇酶(GalC)的表达情况;建立SHG-44胶质瘤干细胞球原位移植瘤模型,免疫组织化学检测CD133、nestin、VEGFR-2、GFAP、S-100和CD34的表达;比较SHG-44细胞原位模型和SHG-44干细胞球移植瘤的病理学特征.结果 应用神经干细胞培养法能成功获取SHG-44胶质瘤干细胞球.第10代SHG-44胶质瘤干细胞球和SHG-44胶质瘤细胞的CD133阳性细胞比例分别为(71.63±5.92)％和(1.95±1.45)％.SHG-44胶质瘤干细胞球的nestin、vimentin、VEGFR-2和A2B5阳性细胞比例分别为(84.06±7.58)％、(29.11 ±3.44)％、(64.44±3.69)％和(14.08 ±2.19)％.SHG-44胶质瘤干细胞球中可见IDH R132H突变的细胞群.含血清培养基诱导分化后,CD133、nestin、vimentin、GFAP、β-Ⅲ tubulin和GalC阳性细胞比例分别为(1.89±1.27)％、(6.67±2.75)％、(93.75±2.95)％、(91.33±4.75)％、(82.36±4.02)％和(8.92±3.19)％.原位移植瘤组织中GFAP、S-100和VEGFR-2蛋白表达呈阳性,CD133和nestin蛋白表达呈阴性.极少量特异抗人CD34阳性细胞围绕成管状.SHG-44胶质瘤干细胞球颅内原位移植瘤局部浸润能力高于SHG-44胶质瘤细胞颅内原位移植瘤.结论 神经干细胞培养法可成功从SHG-44胶质瘤细胞株中获取胶质瘤干细胞,属于CD133+ A2B5-亚群,高表达VEGFR-2,具备自我更新及多向分化能力,可参与血管拟态的形成.     

人脑胶质瘤干细胞SHG-44s的克隆及初步鉴定

目的:探讨人脑胶质瘤体外细胞系中存在肿瘤干细胞的可能性.方法:将SHG44细胞系和SHG44-9细胞株,分别应用含血清培养基(DMEM 10?S)和无血清培养基(DMEM/F12,添加bFGF、LIF和EGF)培养.用CD133免疫磁珠分离干细胞、Hoechst33342和NESTIN流式细胞仪、Nestin、NSE、GFAP免疫细胞化学染色检测肿瘤干细胞及其分化细胞.结果:CD133磁珠分离得到的干细胞的比例:在血清组SHG44和SHG44-9分别为0.021%和0.035%:无血清组分别为1.2%和2.3%.而Hoechst33342和CD133标记后流式细胞仪检测干细胞比例:血清组中SHG44、SHG44-9分别为1.5%、0.37%;无血清组分别为16.4%和29.1%.并且这些细胞能够增殖和分化成神经元和胶质细胞.而Nestin标记后SHG44、SHG44-9中分别有51.05%、77.53%阳性细胞.结论:体外长期传代培养的人脑胶质瘤细胞系中存在肿瘤干细胞SHG44s,CD133磁珠和Hoechst33342流式细胞仪分离和检测胶质瘤干细胞是行之有效的方法,而Nestin 细胞是干细胞分化后的祖细胞或前体细胞,不能作为分离和检测干细胞特异性标记物使用.     

髓母细胞瘤中脑肿瘤干细胞的分离培养及鉴定

背景与目的:长期以来,脑肿瘤等实体肿瘤中是否存在肿瘤干细胞一直存在争论,最近已经有报道从胶质瘤和髓母细胞瘤等脑肿瘤及其它系统实体肿瘤中成功分离出肿瘤干细胞。本研究旨在利用简化的无血清培养基和悬浮培养方法,从人髓母细胞瘤中分离培养脑肿瘤干细胞,观察其在体外的增殖、分化,鉴定其特异性标志物CD133和Nestin的表达,验证肿瘤组织切片中CD133阳性细胞的存在,为脑肿瘤干细胞的进一步研究打下基础。方法:术中取11例患者髓母细胞瘤组织,分离成单细胞悬液,接种于含表皮生长因子、成纤维生长因子以及B27添加剂的无血清培养基中悬浮培养,以分离其中的脑肿瘤干细胞;对其增殖形成的脑肿瘤干细胞球连续传代培养;并进行单克隆形成实验,以确定原代肿瘤组织中肿瘤干细胞的百分率,观察脑肿瘤干细胞球的形成过程。然后,将脑肿瘤干细胞球接种于含血清培养基,观察脑肿瘤干细胞的分化现象。最后,利用免疫荧光法检测脑肿瘤干细胞特异性标志物CD133和Nestin在脑肿瘤干细胞球中的表达;利用免疫组化法检测组织切片中CD133阳性细胞的分布,并计算CD133阳性细胞百分率。结果:本组11例髓母细胞瘤中均仅有少数肿瘤细胞能够在无血清培养基中存活并悬浮生长、增殖形成克隆性脑肿瘤干细胞球,传代后脑肿瘤干细胞仍保持很强的自我更新和增殖能力。单克隆形成实验表明原代肿瘤细胞中具有单克隆形成能力的肿瘤干细胞百分率为(31.18±6.18)%。在含血清培养基中脑肿瘤干细胞发生贴壁分化,产生具有多种细胞形态的分化细胞。脑肿瘤干细胞表达神经干细胞的特异性标志物CD133和Nestin;肿瘤组织切片中CD133阳性细胞呈巢状或散在分布,占全部肿瘤细胞的(33.06±8.57)%。结论:人髓母细胞瘤组织中存在一定量的具有自我更新和增殖能力、表达CD133和Nestin的脑肿瘤干细胞,并能在体外将其分离、培养和诱导分化。     

TGF-β2通过基质金属蛋白酶通路影响胶质瘤干细胞的侵袭能力

目的： 研究TGF-β2对胶质瘤干细胞侵袭能力的影响及其可能机制。 方法： 收集2016年4月至2017年4月中国医科 大学附属第一医院神经外科手术切除的8例人多形性成胶质细胞瘤组织标本,通过胰蛋白酶消化法进行胶质瘤细胞原代培养,部 分胶质瘤细胞加入含有EGF、bFGF、B27的DEME/F12培养基中进行无血清培养获得悬浮生长的肿瘤细胞球,免疫荧光染色及分 化实验验证肿瘤球是否为胶质瘤干细胞。ELISA方法检测胶质瘤干细胞分泌TGF-β2的水平,转染TGF-β2 siRNA后应用Tran- swell方法检测TGF-β2对胶质瘤侵袭能力影响,Western blotting检测TGF-β2对胶质瘤干细胞中基质金属蛋白酶（matrix metallo- proteinase,MMP）表达影响。 结果： 通过免疫荧光染色及分化实验证明原代培养的悬浮生长肿瘤细胞球为胶质瘤干细胞,肿瘤 细胞球表达CD133,在含血清培养基中可以分化为神经元和胶质细胞。胶质瘤干细胞比原代培养的胶质瘤 TGF-β2 分泌水平 明显升高[(74.13±3.63) vs (46.13±2.61) pg/ml, P<0.05]。沉默 TGF-β2 可以降低胶质瘤干细胞侵袭细胞数[(105.71±8.69) vs (63.67±5.93)个,P<0.05],并抑制MMP-2和MMP-9表达（均P<0.05）。 结论： TGF-β2 通过 MMP-2 和 MMP-9 通路增强胶质瘤 干细胞的侵袭能力。     

应用长春新碱分离与鉴定U87细胞系中的胶质瘤干细胞

背景与目的:研究表明,肿瘤干细胞具有化疗抵抗性.本研究拟利用肿瘤干细胞对化疗药物耐受的特性,在培养基中添加长春新碱的方法从人胶质瘤细胞系U87中分离鉴定肿瘤干细胞.方法:U87细胞于含血清培养基中贴壁后,换用含有5 ng/ml长春新碱的神经干细胞培养基培养,获得第一代肿瘤细胞球后,将单细胞接种于神经干细胞培养基中,获得第二代肿瘤细胞球.免疫荧光检测巢蛋白(nestin)、胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)、β-微管蛋白Ⅲ(β-tubulin Ⅲ)、髓鞘碱性蛋白(myelin basic protein,MBP)在第二代肿瘤细胞球及其分化细胞中的表达.结果:成功地获得了第一代肿瘤细胞球以及来源于单细胞的第二代肿瘤细胞球;细胞间紧密相贴,表面较光滑;神经干细胞标志物nestin在第二代肿瘤细胞球中呈阳性表达;第二代肿瘤细胞球分化细胞中可检测到nestin、GFAP、β-tubulin Ⅲ、MBP的表达.结论:U87细胞系中存在具有自我更新及多向分化能力的胶质瘤干细胞,采用神经干细胞培养基中添加长春新碱的方法能简单有效地从胶质瘤细胞系中分离培养出胶质瘤干细胞.     

胶质瘤干细胞的研究新进展

胶质瘤干细胞存在于多种脑胶质瘤组织和细胞系。胶质瘤干细胞具有类似神经干细胞的特性,但在基凶表达、分化、动物体内成瘤性、耐药性和耐辐射性等方面又不同于神经干细胞。CD133和nestin作为目前公认的神经干细胞表面标志．被应用于胶质瘤干细胞的分离鉴定。靶向胶质瘤干细胞的树突细胞疫苗的开发和靶向肿瘤干细胞信号传导通路的实验研究为脑胶质瘤的治疗提供了新途径。     

9L脑胶质瘤干细胞模型建立及MRI成像表现

目的:建立9L脑胶质瘤干细胞F344大鼠载瘤模型,采用3.0T磁共振成像评价肿瘤生长。方法:采用流式细胞仪分选CD133表达阳性细胞群,免疫荧光检测分选后细胞群的干细胞标记CD133、Nestin的表达情况。利用三维立体定向技术建立脑胶质瘤干细胞大鼠载瘤模型,定期行MR检查,观察颅内肿瘤生长情况。HE染色和免疫组织化学染色法观察肿瘤组织细胞形态和GFAP、S-100蛋白表达情况。结果:分选后细胞群CD133、Nestin蛋白表达阳性;干细胞荷瘤大鼠中位生存时间为（21.00±0.33）天;接种后1~3周MR扫描示肿瘤持续生长,增强扫描瘤体显像清晰,第3周末瘤周水肿显著;病理结果示肿瘤浸润生长,局部见出血、坏死,免疫组化示肿瘤组织胶质纤维GFAP阳性, S-100蛋白弱阳性。结论:流式技术分选9L脑胶质瘤干细胞建立的F344大鼠脑胶质瘤模型稳定可靠,符合恶性胶质瘤生物学特点;3.0T MR扫描仪能够动态观察脑胶质瘤生长状态。     

Integrin α3 is overexpressed in glioma stem-like cells and promotes invasion

Background:

Glioma stem-like cell (GSC) properties are responsible for gliomagenesis and recurrence. GSCs are invasive but its mechanism remains to be elucidated. Here, we attempted to identify the molecules that promote invasion in GSCs.

Methods:

Neurospheres and CD133⁺ cells were collected from glioblastoma (GBM) specimens and glioma cell lines by sphere-formation method and magnetic affinity cell sorting, respectively. Differential expression of gene candidates, its role in invasion and its signaling pathway were evaluated in glioma cell lines.

Results:

Neurospheres from surgical specimens attached to fibronectin and laminin, the receptors of which belong to the integrin family. Integrin α3 was overexpressed in CD133⁺ cells compared with CD133⁻ cells in all the glioma cell lines (4 out of 4). Immunohistochemistry demonstrated the localisation of integrin α3 in GBM cells, including invading cells, and in the tumour cells around the vessels, which is believed to be a stem cell niche. The expression of integrin α3 was correlated with migration and invasion. The invasion activity of glioma cells was linked to the phosphorylation of extracellular signal–regulated kinase (ERK) 1/2.

Conclusion:

Our results suggest that integrin α3 contributes to the invasive nature of GSCs via ERK1/2, which renders integrin α3 a prime candidate for anti-invasion therapy for GBM.     

胶质瘤中肿瘤干细胞的分布及与p53、MGMT的关系

目的：探讨胶质瘤中肿瘤干细胞标志物CD133的表达及其与p53、MGMT的关系。方法：采用免疫组化法检测45例不同病理级别胶质瘤标本中CD133和p53、MGMT蛋白的表达。结果：CD133在各病理级别的胶质瘤中均有表达,高恶性度组中CD133表达高于低恶性度组（P〈0.05）。在CD133阳性组中p53、MG-MT的表达明显高于CD133阴性组（P均〈0.05）。结论：不同恶性程度的胶质瘤标本中均存在肿瘤干细胞,肿瘤干细胞可作为判断胶质瘤恶性程度和预后的重要指标。     

TWIST调控miR-145表达促进胶质瘤干细胞侵袭、迁移的实验研究

目的:探究转录因子TWIST对胶质瘤干细胞侵袭、迁移的影响,并探讨与微小RNA（microRNA,miR）-145之间的关系。方法:以人神经胶质瘤细胞U251为研究对象,提取干细胞并经免疫荧光染色CD133、胶质纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein,GFAP）鉴定。实验分组:对照组、过表达对照组、TWIST过表达组、沉默对照组、TWIST沉默组,分别用pcDNA3、pcDNA3-TWIST、pGPH1-shNC、pGP-TWIST-shRNA转染提取并鉴定后的干细胞。实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测各细胞中TWIST mRNA和miR-145水平;蛋白质免疫印迹实验检测细胞中TWIST、基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase,MMP）-2、MMP-9蛋白水平;Transwell检测细胞侵袭和迁移情况;划痕实验检测细胞迁移情况;双荧光素酶鉴定miR-145与TWIST的靶向关系。结果:干细胞分选与鉴定:CD133阳性干细胞约占5.6%左右;分选后细胞用CD133和GFAP染色显示双阳性。与对照组相比,TWIST过表达组细胞中TWIST mRNA和蛋白水平,细胞侵袭、迁移数量,愈合率,细胞中MMP-2、MMP-9蛋白水平升高（P＜0.05）,miR-145水平降低（P＜0.05）;TWIST沉默组细胞中TWIST mRNA和蛋白水平,细胞侵袭、迁移数量,愈合率,细胞中MMP-2、MMP-9蛋白水平降低（P＜0.05）,miR-145水平升高（P＜0.05）;过表达对照组、沉默对照组上述指标差异均无统计学意义（P＞0.05）。miR-145与TWIST存在结合位点并经双荧光素酶靶向关系验证。结论:升高TWIST能够促进胶质瘤干细胞侵袭、迁移,且能靶向miR-145发挥作用。     

mTOR信号通路调控CD133阳性胶质瘤干细胞自我更新的分子机制

背景与目的：mTOR（mammalian target of rapamycin）信号通路异常活化和高级别胶质瘤患者的预后不良相关。本研究探讨mTOR信号通路调控胶质瘤干细胞（GSCs）自我更新相关的分子机制。方法：采用CD133免疫磁珠分选CD133阳性胶质瘤干细胞。Western blot检测mTOR信号通路组分p-S6K、p-S6和干细胞自我更新相关基因Bmi-1的表达水平;Rapamycin（RPA）阻断mTOR信号通路后,用肿瘤球形成实验评价干预mTOR信号通路对胶质瘤干细胞自我更新的影响;统计学处理采用SPSS11.0统计分析软件分析。结果：CD133阳性胶质瘤干细胞表达较高水平的mTOR信号通路组分p-S6K、p-S6和干细胞自我更新相关分子Bmi-1。通过rapamycin阻断mTOR信号通路,可诱导胶质瘤干细胞谱系分化,同时显著降低肿瘤球形成能力（P〈0.05）,而自噬抑制剂3-MA处理不能逆转rapamycin的效应。结论：mTOR信号通路能够调控胶质瘤干细胞自我更新,阻断mTOR通路下调胶质瘤干细胞自我更新潜能。     

U251源性脑肿瘤干细胞的耐药性及耐药酶的表达

背景与目的：从胶质瘤中分离的肿瘤干细胞（cancer stem cells,CSCs）是胶质瘤的种子细胞和复发的源泉,它们不能被有效的杀死导致胶质瘤的预后不理想。本研究旨在探讨胶质瘤来源的肿瘤干细胞对化疗药物的耐药性及相关耐药酶的表达。方法：用免疫磁珠法从U251细胞中分选肿瘤干细胞（U251-CSC）后继续培养;MTT比色试验法观察化疗药物替尼泊苷（Vm-26）、卡莫司汀（BCNU）和顺铂（DDP）对U251和U251-CSC的增殖抑制作用,流式细胞仪检测3种化疗药物引起的细胞凋亡;Western blot免疫印迹法检测3种耐药酶LRP、MGMT和TopoⅡα的表达。结果：在3种药物作用下,U251的生长抑制比U251-CSC明显,U251的细胞凋亡率高于U251-CSC;U251-CSC表达LRP、MGMT和TopoⅡα的强度高于U251。结论：胶质瘤肿瘤干细胞对化疗药物Vm-26、BCNU和DDP有高耐药性,原因可能是肿瘤干细胞高表达耐药酶LRP、MGMT和TopoⅡα。     

CD133/prominin1 is prognostic for GBM patient's survival, but inversely correlated with cysteine cathepsins' expression in glioblastoma derived spheroids

Introduction

CD133 is a marker for a population of glioblastoma (GBM) and normal neural stem cells (NNSC). We aimed to reveal whether the migratory potential and differentiation of these stem cells is associated with CD133 expression and with cathepsin proteases (Cats).

Materials and methods.

The invasiveness of normal NNSC, GBM/CD133+ cell lines and GBM spheroids was evaluated in 3D collagen, as well as of U87-MG and normal astrocytes (NHA) grown in monolayers in 2D Matrigel. Expression of Cats B, L and S was measured at mRNA and activity levels and their relation to invasiveness, to CD133 mRNA in 26 gliomas, and to the survival of these patients.

Results

The average yield of CD133+ cells from GBM samples was 9.6 %. Survival of patients with higher CD133 mRNA expression was significantly shorter (p< 0.005). Invasion, associated with proteolytic degradation of matrix, was higher in normal stem cells and GBM spheroids and cells than in isolated GBM CD133+ cells. In glioma samples, there was no correlation between CD133 mRNA expression and Cat mRNAs, but there was an inverse correlation with Cat activities.

Conclusions

The study confirms CD133 as a prognostic marker for the survival of GBM patients. We demonstrated that NNSC have higher invasion potential and invade the collagen matrix in a mode different from that of GBM, initiating stem cell spheres. This result could have implications for the design of new therapeutics, including protease inhibitors that specifically target invasive tumour stem cells. Increased activity of cathepsins in CD133– cells suggests their role in the invasive behaviour of GBM.     

CD133~+胶质母细胞瘤细胞的分离与恶性行为特征

背景与目的:在恶性胶质瘤中存在一类恶性度极高的前体细胞,它们控制着肿瘤的生长与恶性演进,也是肿瘤复发的根源。本研究对胶质母细胞瘤进行肿瘤干细胞的分离与恶性行为特征分析,旨在验证胶质瘤干细胞的存在,并为未来该领域研究打下基础。方法:充分消化术中切除的胶质母细胞瘤组织块至单细胞悬液,流式细胞术检测CD133+肿瘤细胞百分率,免疫磁珠分选法分离CD133+和CD133-胶质母细胞瘤细胞;免疫荧光法检测两类细胞中巢蛋白(nestin)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和神经元特异性烯醇化酶(NSE)的表达水平;Transwell双室培养体系检测两类瘤细胞的侵袭能力,血清依赖实验检测两类瘤细胞在低营养条件下的生存能力,软琼脂克隆形成实验检测瘤细胞的克隆形成能力;去胸腺小鼠腹股沟皮下接种瘤细胞,观察成瘤率。结果:流式细胞术检测CD133+肿瘤细胞百分率为(2.31±0.57)%。CD133+细胞高表达nestin,低表达GFAP和NSE;CD133-细胞则相反。与CD133-细胞比较,CD133+细胞具有更高的细胞侵袭能力、低营养耐受能力和克隆形成能力。CD133+细胞在小鼠体内成瘤率为87%(26/30),CD133-细胞为7%(2/30)。结论:CD133+胶质母细胞瘤细胞具有更高的恶性细胞表型,提示其具有高度研究价值。