黄连素对肺腺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的:研究黄连素(BBR)对A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响,初步探讨BBR抑制A549细胞转移的机制。方法:用不同浓度的BBR作用于A549细胞,MTT法测定A549细胞增殖水平,流式细胞仪检测A549细胞的凋亡,Transwell实验测定A549细胞的迁移和侵袭能力,Westernblot测定A549细胞中与EMT相关的蛋白E-cadherin、Vimentin、Slug、Snail的表达。结果:BBR以浓度及时间依赖的方式抑制A549细胞的增殖;流式细胞仪检测发现BBR作用于A549细胞后凋亡率呈剂量依赖性增加;Westernblot显示BBR作用A549细胞后,E-cadherin表达升高,Vimentin、Slug、Snail表达降低,Transwell实验显示BBR作用于A549细胞后,能够抑制其迁移和侵袭。结论:BBR能抑制A549细胞增殖,诱导其凋亡,通过促进E-cadherin表达和抑制Vimentin、Slug、Snail的表达来抑制EMT的发生,从而抑制了A549细胞的迁移和侵袭。     

黄连素对肺腺癌A549细胞增殖、迁移与黏附的影响

背景与目的：研究表明,黄连素在清热解毒、抗菌消炎的同时,还具有诱导肿瘤细胞凋亡的作用,但最近的研究认为黄连素还能抑制肿瘤细胞的转移和扩散。为了进一步探讨黄连素对肿瘤细胞转移的作用及机制,本研究对黄连素作用后的肺腺癌A549细胞的增殖、迁移及黏附能力进行了检测。方法：应用MTT法检测不同浓度黄连素作用后细胞增殖情况;通过划痕试验和黏附试验测定黄连素作用前后细胞迁移和黏附能力;半定量RT-PCR法检测MMP2、MMP9的mRNA表达;明胶酶谱法测定MMP2、MMP9的活性。结果：黄连素能显著抑制A549增殖,并呈现一定的量效和时效关系（P〈0.05）;细胞的迁移率和黏附率明显降低,并且呈现剂量依赖性（P〈0.05）;经黄连素作用后的A549细胞,MMP2和MMP9的mRNA的表达明显降低,MMP2和MMP9降解明胶的能力下降,尤以100μg/mL的作用最为明显（P〈0.05）。结论：黄连素能够抑制A549细胞的迁移和黏附能力,其机制可能与下调MMP2和MMP9的mRNA表达,从而降低其活性有关。     

川芎嗪联合丹参酮ⅡA对人肺巨细胞癌PG-BE1、PG-LH7细胞增殖、黏附及侵袭的影响

[目的]探讨不同浓度川芎嗪(TMP)联合丹参酮ⅡA(TanⅡA)对人肺巨细胞癌细胞高转移亚系PG-BE1(PB)、低转移亚系PG-LH7(PL)增殖、黏附及侵袭的影响.[方法]不同浓度的TMP+TanⅡA作用于PB、PL细胞24h、48h、72h后,CCK8检测不同给药组对PB与PL细胞的增殖抑制作用,采用人造基底膜实验与Transwell小室侵袭实验检测细胞黏附及侵袭能力的差异.[结果] TMP+TanⅡA对PB、PL细胞增殖的影响随着浓度增加抑制率增高;随着作用时间的延长,对PB细胞抑制作用增强,对PL细胞抑制作用减弱.TMP+TanⅡA对PB、PL细胞黏附的抑制作用随着药物浓度的增加而增强;在侵袭实验中,TMP+TanⅡA对PB细胞侵袭的抑制率高于PL细胞,其抑制作用也随着药物浓度的增加而增强.[结论]TMP +TanⅡA对人肺巨细胞癌细胞高转移亚系PB、低转移亚系PL具有明显的增殖、黏附及侵袭抑制作用.细胞种系不同,药物的作用时间与浓度对细胞的抑制率也不同.     

苏木对PG细胞增殖、黏附及侵袭能力的影响

[目的]探讨苏木对人肺癌PG细胞增殖、黏附、侵袭能力的影响。[方法]分别于常氧和低氧环境中培养细胞．苏木提取液作用PG细胞后,MTT法检测细胞增殖、流式细胞术检测CD29表达水平、Transwell小室侵袭实验检测细胞侵袭能力。[结果]作用48h后,低氧环境下不同浓度苏木作用后的PG细胞增殖速度高于常氧环境（P〈0．05）。CD29表达水平在各实验组之间均有差异（P〈0．05）,中、高浓度苏木与对照组比较有明显的抑制作用（P〈0．05）。在常氧和低氧环境中,高、中、低浓度苏木组对PG细胞的侵袭能力均有抑制作用。[结论]苏木对PG细胞的增殖、黏附及侵袭有抑制作用。     

siRNA沉默MMP-2基因对肺癌A549细胞侵袭能力的影响

目的 探讨siRNA靶向抑制MMP-2基因的表达对肺癌A549细胞侵袭的抑制作用.方法 化学合成一对针对MMP-2基因的干扰序列siRNA和一对阴性对照的无义序列siRNA-N,转染肺癌A549细胞,同时以未转染A549细胞作为空白对照.于转染后48 h,分别采用半定量RT-PCR技术和Western blotting法从mRNA和蛋白水平检测干扰效果;采用Boyden侵袭小室检测转染MMP-2siRNA后对A549细胞侵袭能力的影响.结果 与空白对照组和转染阴性对照siRNA-N组相比,A549细胞转染MMP-2 siRNA 48 h后,MMP-2基因转录水平和蛋白水平的表达均受到抑制.转染MMP-2 siRNA组细胞穿膜数与空白对照组和转染阴性对照siRNA-N组相比明显下降.结论 靶向MMP-2的siRNA不仅能特异性抑制MMP-2 mRNA和蛋白的表达,且能有效抑制A549肺癌细胞的侵袭,为肺癌的基因治疗提供了有效的靶点.     

川芎嗪对人肺腺癌 A549细胞增殖、迁移和侵袭的作用与机制

目的：探讨川芎嗪（tetramethylpyrazine,TMP）对人肺腺癌 A549细胞增殖及侵袭的影响。方法：川芎嗪治疗组分别用0.1μg/ ml、1μg/ ml、10μg/ ml、100μg/ ml、250μg/ ml 浓度的川芎嗪干预 A549细胞,同时设无药的阴性对照组及加顺铂的阳性对照组。24、48、72、96小时后,MTT 法检测川芎嗪对 A549细胞株增殖的抑制作用,划痕实验和 Transwell 法观测川芎嗪对 A549细胞株迁移侵袭能力的影响,采用细胞流式术检测川芎嗪对 A549细胞周期和凋亡的干预作用。结果：川芎嗪显著抑制 A549细胞的增殖,抑制 A549的迁移和侵袭,流式细胞术显示川芎嗪诱导 A549细胞发生 G1期阻滞和早期凋亡（P <0.05）。结论：川芎嗪对非小细胞肺癌A549细胞的抑制作用可能是通过诱导 G1期细胞阻滞和早期凋亡引起的。     

siRNA沉默 B7-H4 表达对人肺腺癌A549细胞增殖、侵袭和迁移的影响

目的:探讨靶向B7-H4基因的小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)对人肺腺癌细胞A549增殖、侵袭和迁移的影响。方法:体外化学合成B7-H4特异性siRNA(B7-H4-siRNA),转染A549细胞,MTT法、流式细胞术、Western blotting分别检测A549细胞的增殖、细胞周期,以及B7-H4和Cyclin D1蛋白的水平;Transwell实验检测A549细胞体外侵袭和迁移能力。结果:B7-H4-siRNA成功转染入A549细胞,Western blotting结果显示,B7-H4-siRNA转染抑制A549细胞中B7-H4和Cy-clin D1蛋白的表达。B7-H4-siRNA转染后A549细胞增殖活性明显下降,B7-H4-siRNA组A549细胞的倍增时间明显长于未转染组、Ctrl-siRNA组和转染试剂对照组[(33.78±0.26)h vs(28.69±0.18)、(27.32±0.13)、(26.93±0.19)h,P<0.05]。B7-H4-siRNA转染使A549细胞阻滞在G1期。B7-H4-siRNA组A549细胞的侵袭细胞数明显少于未转染组[(89.80±0.99)个vs(186.20±1.33)个,P<0.05]。B7-H4-siRNA组A549细胞的迁移细胞数明显少于未转染组、Ctrl-siRNA组和转染试剂对照组[(60.20±0.37)个vs(102.57±0.52)、(100.72±0.31)、(98.65±0.21)个,P<0.05〗。结论:B7-H4-siRNA能沉默A549细胞中B7-H4的表达,抑制A549细胞的增殖、侵袭和迁移,B7-H4可能成为肺癌基因治疗的候选靶点。     

白藜芦醇抑制EGF诱导人肺腺癌A549细胞侵袭

背景与目的侵袭转移是人肺腺癌死亡的主要原因,表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)可通过活化ERK和PI3K-Akt信号通路,促进人肺腺癌A549细胞侵袭。本实验旨在研究白藜芦醇抑制EGF诱导体外A549细胞侵袭的作用,并初步探讨其机制。方法采用MTT法确定白藜芦醇对A549细胞无明显毒性的浓度范围,并以该浓度范围内的白藜芦醇作用EGF诱导的A549细胞,Transwell小室法检测其抑制细胞侵袭作用,明胶酶谱法分析细胞的MMP-2活性变化,Westernblot检测EGF信号通路相关蛋白表达。结果30μM内的白藜芦醇无明显的细胞毒性,20μM处理的受EGF诱导的A549细胞侵袭能力明显降低,MMP-2分泌减少,胞内p-ERK1/2和PI3K(0.5h-6h)含量下降。结论20μM白藜芦醇可有效抑制A549细胞侵袭,其机制可能是通过抑制ERK通路和PI3K-Akt通路中相关蛋白激活,最终降低MMP-2的分泌。     

针对layilin的shRNA抑制透明质酸诱导人肺腺癌A549细胞体外黏附和侵袭

背景与目的 透明质酸参与了多种肿瘤细胞黏附侵袭行为。layilin是一种新发现的与细胞骨架有密切联系的透明质酸受体。本研究的目的是观察针对layilin的短发夹RNA（shorthairpinRNA，shRNA）对体外培养的人肺腺癌A549细胞layilin表达及受透明质酸诱导黏附侵袭行为的影响。方法 设计和构建带有U6启动子的能产生针对layilin的shRNA的RNA干扰质粒，转染至A549细胞，以RT—PCR、Westernblot和免疫荧光检测A549细胞转染前后layilin表达，以平板黏附模型和Boyden小室模型检测A549细胞转染前后黏附和侵袭能力。结果和转染前相比，转染了RNA干扰表达质粒的A549细胞layilin表达明显减少（P〈0．01），而且受透明质酸诱导而黏附于平板和穿过Boyden小室隔膜的A549细胞数皆明显减少（P〈0．01）。结论 针对layilin的shRNA能明显抑制透明质酸诱导的人肺腺癌A549细胞体外黏附和侵袭能力。     

siRNA沉默 TLR4 表达对人肺腺癌A549细胞增殖和侵袭的影响

【摘要】目的:探讨靶向TLR4基因的小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)对人肺腺癌细胞A549增殖和侵袭的影响。方法：设计并合成针对TLR4基因的3条siRNA(siRNA₇₂₂、siRNA₁₆₇₃和siRNA₂₅₆₀)及1条与TLR4基因无同源性的阴性对照siRNA,用Real-time PCR方法测定干扰后A549细胞上TLR4 mRNA的表达水平,筛选出有效抑制靶基因表达的siRNA并确定最佳转染时间;采用TLR4特异性siRNA(TLR4-siRNA)转染A549细胞,CCK-8法和Transwell小室法分别检测A549细胞的增殖和侵袭能力。结果：与阴性对照相比siRNA₁₆₇₃在转染48h后对TLR4基因的抑制最为明显,TLR4-siRNA转染后A549细胞增殖活性明显下降,TLR4-siRNA组A549细胞的侵袭细胞数明显少于阴性对照组【(23.60 ± 2.88)个vs(59.80 ± 5.54)个(P<0.01)】。结论：TLR4-siRNA能沉默A549细胞中TLR4基因的表达,抑制A549细胞的增殖和侵袭,TLR4可能成为肺癌基因治疗的候选靶点。     

HuR siRNA对肺腺癌A549 细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的：探讨HuR siRNA 对人肺腺癌A549 株细胞增殖、迁移及侵袭的影响及其可能机制。方法：HuR siRNA 瞬时转染肺腺癌A549 细胞24 h 后,CCK-8 实验、集落形成实验检测细胞的增殖能力,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell 实验检测细胞侵袭能力,qPCR和Western blotting 检测HuR及基质金属蛋白酶（MMP）-9 基因mRNA和蛋白质表达。结果：HuR siRNA能够抑制人肺腺癌A549 细胞的增殖、迁移及侵袭;HuR siRNA 显著降低A549 细胞HuR、MMP-9 mRNA和蛋白表达（P＜0.01）。结论：下调HuR能抑制肺腺癌A549细胞增殖、迁移及侵袭,其机制与下调MMP-9 有关。     

乙酰肝素酶反义寡核苷酸对肺癌A549细胞黏附、侵袭和凋亡的影响

目的:探讨乙酰肝素酶(heparanase,HPSE)反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide,ASODN)对人肺癌A549细胞黏附、侵袭和凋亡的影响。方法:设计并合成HPSE特异性ASODN(HPSE-ASODN),脂质体介导转染A549细胞。West-ern blotting检测A549细胞中HPSE蛋白的表达。黏附实验和侵袭实验检测HPSE-ASODN对A549细胞黏附和侵袭的影响,Hoecht 3222染色法检测HPSE-ASODN对A549细胞凋亡的影响。结果:与对照组和脂质体组相比,HPSE-ASODN转染下调A549细胞中HPSE蛋白的表达,且显著抑制A549细胞的黏附和侵袭(P<0.01);HPSE-ASODN转染可诱导A549细胞凋亡,凋亡率明显高于未转染组和脂质体组[(44.7±18.9)%vs(1.2±3.3)%、(5.8±20.1)%,P<0.01]。结论:HPSE-ASODN能下调肺癌A549细胞中HPSE蛋白的表达,抑制A549细胞的黏附和侵袭,诱导其凋亡。     

HPV-16癌蛋白对肺癌细胞A549迁移和侵袭的影响及其机制

目的:探讨HPV-16 E6和E7癌蛋白对肺癌细胞A549迁移和侵袭能力的影响及其机制。方法:A549细胞分别转染含HPV-16 E6、E7的EGFP质粒,采用划痕实验观察转染后不同时间的迁移能力,Transwell侵袭实验检测侵袭能力,Western blotting和实时定量PCR分别分析MMP-2和MMP-9的蛋白、mRNA表达。结果:同对照细胞相比,转染含HPV-16 E6、E7质粒的细胞迁移能力增强,在36h 和48h时趋势较为明显;转染HPV-16 E6、E7组的侵袭细胞数分别为每高倍视野121.3±13.3、129.7±5.5,其显著高于对照组（P＜0.01）。而且,转染HPV-16 E6、E7的细胞中MMP-2和MMP-9的蛋白和mRNA表达显著增加（P＜0.01）。结论:HPV-16 E6和E7癌蛋白可增强A549细胞的迁移和侵袭能力,其机制与上调MMP-2和MMP-9表达有关。     

GOLM1在肺腺癌组织中的表达及对A549细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响

目的:探讨高尔基磷蛋白2(Golgi phosphoprotein 2,GOLPH2,又称为GP73或GOLM1)在肺腺癌组织中的表达及对A549细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响.方法:从GEPIA数据库分析肺腺癌组织中GOLM1 mRNA表达情况及与肺腺癌患者预后的相关性;利用慢病毒siRNA技术下调人肺腺癌A549细...     

光甘草定对肺腺癌A549细胞恶性生物学行为的影响及其分子机制

目的：探讨光甘草定对肺腺癌细胞A549 恶性生物学行的影响及其分子机制。方法：常规方法培养A549 细胞和人正常肺上皮细胞BEAS-2B,用不同浓度的光甘草定和或顺铂对其进行处理,通过结晶紫染色、CCK-8 法检测光甘草定、顺铂对A549、BEAS-2B细胞增殖活力的影响,Transwell 小室实验、细胞划痕实验检测光甘草定对A549 细胞侵袭、迁移能力的影响,流式细胞术检测光甘草定对A549 细胞凋亡的影响,3D超低黏附板培养法培养A549 细胞后采用CCK-8法检测光甘草定对A549 细胞增殖的影响,WB法检测光甘草定对A549 细胞中上皮间质转化（EMT）相关蛋白表达的影响;构建A549 细胞移植瘤模型后检测光甘草定、顺铂对移植瘤的生长以及移植瘤组织中EMT相关蛋白表达的影响。结果：光甘草定、顺铂呈剂量依赖性地显著抑制A549 细胞的增殖（P<0.05 或P<0.01）、细胞迁移（P<0.05 或P<0.01）和侵袭能力（P<0.05 或P<0.01）,光甘草定能诱导A549 细胞凋亡（P<0.01）,抑制A549 细胞中N-cadherin、snail 和vimentin 蛋白的表达,促进E-cadherin 蛋白表达;光甘草定、顺铂均能抑制A549移植瘤的生长,抑制移植瘤组织中Ki67、N-cadherin、snail 和vimentin 蛋白的表达、促进E-cadherin 蛋白的表达。结论：光甘草定可通过抑制A549细胞的增殖、迁移和侵袭,诱导A549细胞凋亡,其机制可能与其抑制细胞的EMT进程而产生抑癌作用有关。     

白藜芦醇对肺癌紫杉醇耐药细胞的增殖抑制作用及其机制

目的：研究白藜芦醇作用后人肺腺癌紫杉醇耐药细胞对紫杉醇敏感性的改变,并探讨其作用机制。方法：建立人肺腺癌紫杉醇耐药细胞A549/Taxol-R,用不同浓度白藜芦醇、紫杉醇单独或联合干预A549/Taxol-R细胞,MTT法检测细胞增殖抑制率;概率单位法计算半数抑制浓度（IC₅₀）;观察不同浓度白藜芦醇处理后,紫杉醇对A549/Taxol-R细胞IC₅₀的变化;流式细胞术检测细胞凋亡水平;Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和Caspase-3的表达。结果：白藜芦醇对A549/Taxol-R细胞增殖的抑制率具有浓度和时间的双重依赖性（P均 < 0.05）。白藜芦醇处理后,紫杉醇对A549/Taxol-R细胞的IC₅₀值下降,从（17.50±1.24）μg/mL降低至（4.18±0.62）μg/mL。白藜芦醇和紫杉醇联合干预的A549/Taxol-R细胞凋亡率、坏死率高于单独干预组（P < 0.05）,联合干预组A549/Taxol-R细胞的Bax、Caspase-3的表达较单独干预组上调,而Bcl-2的表达则相对下调（P < 0.05）。结论：白藜芦醇可能通过促进细胞的凋亡来增强人肺腺癌紫杉醇耐药细胞对紫杉醇的敏感性,其机制可能和促进Bax、Caspase-3的表达,下调Bcl-2的表达有关。