荧光定量PCR检测慢性乙型肝炎HBV—DNA的临床应用

目的探讨血清HBV-DNA检测在慢性乙型肝炎病程中的临床价值及重叠HCV感染时的影响。方法采用荧光定量PCR技术检测89例慢性乙型肝炎患者血清HBV-DNA含量及与血清乙肝标志物的检测结果相比较。结果89例慢性HBV感染者中最高为3.65×108cop ies/m l,6例阴性。全部病例若按<105、105~107、>107等将病毒量分为低、中、高三度,则低滴度占16.87%、中滴度占56.63%和高滴度占26.50%。HBeAg阳性的慢性肝炎及ASC病毒血症水平较高,抗-HBe阳性的慢性肝炎及肝硬化病人血清HBV-DNA水平较低;重叠HCV感染者血清HBV-DNA水平显著低于单纯HBV感染者。结论HBV-DNA定量可作为估计肝脏炎症程度的间接指标并指导抗病毒治疗时机的选择。     

乙肝病毒DNA荧光定量PCR检测及其意义

目的 探讨荧光定量PCR法检测的乙型病毒DNA与乙肝病毒标志物之间的关系。方法 362例血清标本同时进行乙肝病毒标志物和HBV DNA的检测,按照不同的乙肝病毒标志阳性情况分级后,进行乙肝病毒DNA与乙肝病毒标志物的分析研究。结果 乙肝病毒标志物HBsAg HBeAg HBcAb阳性组HBV DNA阳性率97.7%,拷贝数在10^4-10^8之间;HBsAg HBeAb HBcAb阳性组阳性率56％,拷贝数在10^2－10^7之间;HBsAg HBcAb阳性组阳性率54％,拷贝数在10^2－10^7之间;HBsAg HBeAg组阳性率100％,拷贝数在10^7之间;HBeAb HBcAb组3例,有1例阳性,拷贝数10^2;HBsAb组阳性率14.3%,拷贝数在10^3－10^7之间;189例全阴性有2例阳性（1.06%）,拷贝数在10^4－10^5之间。结论 HBV DNA在各种模式的HBV标志阳性血清甚至全阴性的血清中均可检出,但检出率相差甚大,从1.06%－100％;HBV DNA乙肝病毒标志中HBeAg阳性者其HBV DNA阳性率及拷贝数较高;HBsAg及其抗体阳性者仍可检出HBV DNA,说明仅仅依靠乙肝病毒标志进行早期诊断以及判断病人是否具有传染性是不够的。     

荧光定量PCR技术在乙肝诊断治疗中的应用

目的：评价荧光定量PCR技术在HBV－DNA诊断治疗及药效评价中的应用价值。方法：应用荧光定量PCR技术,对50名健康体检者和81名乙肝患者进行血清HBV－DNA检测。结果：HBsAg、HBeAg、抗－HBc阳性乙肝患者血清中存在高水平HBV－DNA;HBsAg、抗－HBe、抗－HBc阳性乙肝患者血清中存在低水平HBV－DNA;HBsAg、抗－HBc阳性乙肝患者血清中未检出HBV－DNA。结论：荧光定量PCR技术在乙肝诊断、治疗过程监测及药效评价方面有应用价值。     

实时荧光定量PCR检测HBV DNA与ELISA检测HBV M结果的关系

目的:探讨实时荧光定量PCR(FQ-PCR)检测HBV DNA与ELISA检测HBV M结果的关系.方法:采用实时FQ-PCR和ELISA方法分别对240例乙肝患者进行HBV DNA定量测定和HBV M检测.结果:240例HBsAg阳性血清中HBV DNA阳性率为74.58%.HbsAg、HbeAg、HBcAb和HbsAg、HbeAg阳性组的HBVDNA含量及HBV DNA阳性率均明显高于HbsAg、HbeAb、HBcAb和HbsAg、HBcAb组(P＜0.05,P＜0.01).122例HBeAg阳性的血清中97.54%的HBV DNA阳性;118例HBBeAg阴性的血清中有50.85%HBV DNA阳性.结论:实时FQ-PCR检测HBV DNA准确灵敏,是HBV感染及复制的直接证据.HBV M和HBV DNA的检测各有其独特的临床检测意义,在乙型肝炎的诊断治疗中均具有重要的临床价值.     

荧光定量PCR检测土拨鼠肝炎病毒核酸方法的建立

目的建立土拨鼠肝炎病毒(woodchuck hepatitis virus,WHV)核酸的荧光定量PCR(Real-time PCR)检测方法,应用于土拨鼠肝炎病毒模型的研究。方法分别根据土拨鼠肝炎病毒核心抗原(WHcAg)和表面抗原(WHsAg)的DNA序列设计13对扩增引物,从中筛选无非特异性扩增及引物二聚体且灵敏度高的引物,用于土拨鼠血清中WHV DNA的Real-time PCR检测。建立感染土拨鼠肝炎病毒的土拨鼠血清中WHV核酸的Real-timePCR检测方法。结果根据WHsAg基因的5’端设计的一对引物WHVSF1与WHVSR1,检测灵敏度可达1×101拷贝/μL,病毒拷贝数与Real-time PCR Ct值的标准曲线的R2值为0.997,且电泳未见明显非特异性条带及引物二聚体。结论建立了土拨鼠血清中WHV DNA的Real-time PCR检测方法,该方法为进一步研究土拨鼠肝炎病毒模型奠定了基础。     

乙型病毒性肝炎血清HBV DNA定量检测

聚合酶链反应（ＰＣＲ）是检测乙型肝炎病毒血症的敏感技术，我们用定量ＰＣＲ检测１４８例乙型病毒性肝炎（乙肝）患者血清 ＨＢＶ　ＤＮＡ，并对其中部分病例作前 Ｃ区 １８％位变异的检测， 以探讨他们的临床意义。１　材料与方法１．１　对象 １４８例均为我院１９９８年７月～１９９９年３月住院的单纯乙肝患者，男１０９例，女３９例，年龄３～６１岁，平均３２．８岁，其中急性肝炎１６例，慢性肝炎轻度４０例，中度５４例，重度１７例，重症肝炎１６例，静止期肝硬化５例。诊断参照１９９５年北京全国传染病寄生虫病学术会议修订的…     

HBV—DNA荧光定量检测在乙肝治疗中的应用探讨

我国是乙型肝炎病毒感染的高发区 ,据报道全国有 1.2亿人为乙肝病毒携带者。由于我国乙型肝炎病毒感染后慢性化病人如此庞大 ,又有部分病人会发展为肝硬化与肝癌 ,故乙型肝炎病毒感染成了当前威胁国民健康的主要疾病。其及早诊断及正确治疗应受到极大关注。近两年 ,判断HBV的感染及其状况的指标 ,除应用单项HBsAg及乙肝两对半、抗HBc-IgM外 ,HBV -DNA定量是首选方法 ,尤其在目前应用抗病毒药物治疗的效果评价中HBV -DNA定量检测是非常好的观察指标 ,很受专家好评和肯定。本文观察了 2 6 5例乙肝患者治疗过程中HBV -DNA的变化情…     

HBV DNA荧光定量PCR与乙型肝炎病毒血清标志物检测的相关性探讨

目的探讨鞍山地区HBV DNA荧光定量PCR与乙型肝炎病毒血清标志物检测的相关性。方法用深圳匹基生物工程股份有限公司生产的HBVDNA荧光定量PCR检测试剂。结果乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)、乙型肝炎病毒核心抗体(抗-HB)三项均阳性，患者血清标本中检出HBV DNA阳性率高达98．4％；HBsAg、乙型肝炎病毒e抗体(抗-HBe)、乙型肝炎病毒核心抗体(抗-HBc)三项均阳性，患者血清标本中检出HBV DNA阳性率达63．1％。结论HBV DNA荧光定量PCR检测在临床上对乙型肝炎基因诊断，特别是进行抗病毒治疗和治疗监测方面具有重要意义。     

荧光定量PCR及斑点杂交检测HBV DNA与血清HBV标志物的关系

目的　比较荧光定量PCR和斑点杂交检测血清HBVDNA与血清HBV标志物 (HBVM )的相互关系。方法　采用荧光定量PCR(FQ -PCR)、斑点杂交和酶联免疫吸附法 (ELISA)同时检测 2 13份肝炎患者血清 ,并对结果进行分析比较。结果　 2 13份肝炎患者血清中FQ -PCR及斑点杂交法检测HBVDNA阳性数分别为 12 5例、80例 ,阳性检出率分别为 58.7%和 3 7.6% ,2种方法阳性检出率有显著性差异 (P <0 .0 5)。除HBsAg、HBeAg阳性组和HBsAb阳性组FQ -PCR和斑点杂交HBVDNA阳性检出率相同外 ,其余各组FQ -PCRHBVDNA检出率明显高于斑点杂交 (P <0 .0 5) ,HBeAg阳性 2组的 2种方法HBVDNA检出率明显高于HBeAg阴性各组 (P <0 .0 5)。随着FQ -PCR检测HBVDNA拷贝数的增加 ,斑点杂交法阳性检出率也明显增加。结论　FQ -PCR和斑点杂交法检测HBVDNA均可直接反映乙肝患者HBV感染、复制及病程变化 ,而FQ -PCR能真实地反映病毒的负荷量 ,对乙肝临床诊断及抗病毒治疗疗效观察较斑点杂交与HBVM更具有指导意义     

乙型病毒性肝炎血清HBV DNA的定量研究

我国是乙型病毒性肝炎的高发区。乙型肝炎病毒感染的诊断主要依赖于血清特异性抗原抗体和HBVDNA的检测，其中HBVDNA是直接反映机体内HBV的存在和复制的标志，也是传染性的指标。近年来开展了HBVDNA的定量检测，进一步为临床的诊治提供了依据和帮助。本文就乙型肝炎血清HBVDNA的     

荧光定量聚合酶链反应测定乙型肝炎患者血清HBV—DNA及其意义

目的探讨荧光定量聚合酶链反应（简称 ＦＱ－ＰＣＲ）检测 ＨＢＶ－ＤＮＡ的临床意义。方法对 １１５例乙型肝炎患者的血清同时进行乙肝两对半、ＡＬＴ、ＡＳＴ及ＨＢＶ－ＤＮＡ测定。结果大三阳患者血清ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性率为 １００％,平均含量为 １０７．２３±１．６４拷贝／ｍｌ;小三阳患者血清 ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性率为 ５９．６％,平均含量为 １０６．２１±１．５１拷贝／ｍｌ;两组之间的 ＨＢＶ－ ＤＮＡ含量差异有显著性。乙肝两对半全阴性 ２２例,有 ６例 ＨＢＶ－ ＤＮＡ阳性,其平均浓度为１０４．１２±１．３８拷贝／ｍｌ与大、小三阳患者的浓度差异有非常显著性。结论ＦＱ－ＰＣＲ法检测乙肝患者血清ＨＢＶ－ＤＮＡ具有快速、特异、灵敏等优点,它对乙型肝炎的诊断、治疗、预防具有重要的临床意义。     

荧光定量PCR技术及其在生物检测中的应用

荧光定量PCR技术是近年来发展起来的一种核酸定量技术。该技术在PCR反应体系中引入了荧光标记的探针,具有高度的灵敏性、特异性和精确性等特点。荧光定量PCR技术根据其探针的作用方式分为:Taqman技术、Amplisensor技术、Molecular beacon技术、复合探针法、ScorpionsTM探针技术、Amplifluor TM通用检测系统、SYBR荧光染料等类型。目前该技术已广泛应用于HBV病毒、HCV病毒、SARS病毒、禽流感病毒、炭疽芽孢杆菌、霍乱弧菌、寄生虫、病毒感染的定量监测、食品卫生检疫等生物检测领域。     

血清乙肝DNA荧光定量PCR测定的临床应用

目的　了解乙型肝炎患者血清标志物 (即两对半 )与乙型肝炎病毒核酸定量之间的关系。方法　用ELISA法检测 45 1例乙型肝炎患者两对半同时荧光定量聚合酶链反应〔FQ -PCR〕检测技术HBVDNAL浓度 ,并对其结果进行分析比较。结果　多种两对半结果模式均检测到HBVDNA ,其中乙型肝炎大三阳患者血清HBVDNA检出率为 97.5 % ,平均拷贝数为 3 .0 6× 10 4 copies/L ;小三阳患者血清HBVDNA检出率为 63 .3 % ,平均拷贝数为 7.0 1× 10 3copies/L。结论　传统的两对半检测并不能正确反映乙肝患者的病情发展状况 ,同时进行乙型肝炎血清标志物的检测及HBVDNA的定量PCR检测 ,更有利于临床对HBV感染的诊断、对治疗方案的选择及疗效判定     

乙型病毒性肝炎血清HBV DNA定量检测的临床意义

聚合酶链反应（ＰＣＲ）是检测乙型肝炎病毒血症的敏感技术，我们用定量ＰＣＲ检测１４８例乙型病毒性肝炎（乙肝）患者血清ＨＢＶＤＮＡ，并对其中部分病例作前Ｃ区１８９６位变异的检测，以探讨它们的临床意义。１　材料与方法１１　对象　１４８例均为我院１９９８年７月～１９９９年３月住院的单纯乙肝患者，男１０９例，女３９例，年龄３～６１岁，平均３２８岁。其中急性肝炎１６例，慢性肝炎轻度４０例，中度５４例，重度１７例；重症肝炎１６例，静止期肝硬化５例。诊断参照１９９５年北京全国传染病寄生虫病学术会议修订的标准…     

荧光探针定量PCR及其临床应用

荧光探针定量ＰＣＲ（ＦＱ－ＰＣＲ）由ＰＣＲ与荧光素标记的探针杂交技术相结合，可用来检测临床标本中各种病原微生物的ＲＮＡ／ＤＮＡ。具有快速、简便、敏感、特异之优点。因其在单一试管内进行ＰＣＲ扩增，可避免普通ＰＣＲ由于污染所造成的假阳性，并可定量检测各种病原微生物的ＲＮＡ／ＤＮＡ含量。     

荧光定量PCR检测HBV-DNA与ELISA法乙肝免疫学检测的探讨

目的探讨HBV感染者乙肝免疫学检测与HBV—DNA的关系,为合理治疗乙肝患者提供较准确的依据。方法用ELISA方法检测HBV感染者乙肝免疫学检测,用PCR方法检测HBV—DNA,并对结果进行分析。结果HBsAg（＋）HBe般（＋）HBcAb（＋）组（大三阳组）患者血清HBV—DNA检出率97．06％（66／68）,平均拷贝数为（2．15E＋07）mL;HBsAg（＋）HBeAb（＋）HBcAb（＋）组（小三阳组）患者血清HBV—DNA检出率为62．64％（57／91）,平均拷贝数为（2．47E＋04）mL;HBsAg（＋）HBcAh（＋）组血清HBV—DNA检出率为52．94％（18／34）,平均拷贝数为（6．39E＋04）mL。结论HBsAg和HBeAg阳性与HBV～DNA复制密切相关。乙肝免疫学检测和HBV—DNA检测将成为指导乙型肝炎防治的重要手段。     

荧光定量多聚酶链反应检测HBV-DNA

目的　探讨荧光定量多聚酶链反应 (FluorescencequantitativePCR ,FQ PCR)检测HBV DNA的可行性及优缺点。方法　采用FQ PCR、斑点杂交分别检测由ELISA定性的 2 0 3份血清样品 (大三阳、小三阳、乙肝疫苗免疫者、健康人 )。结果　FQ PCR和斑点杂交阳性检出率分别是 96 4 9%、2 8 2 4 % (大三阳 ) ,85 96 %、5 88% (小三阳 ) ,P <0 0 5 ;斑点杂交阴性血清FQ PCR定量高达4 7× 10 5COPY/ml。结论　FQ PCR检测HBV DNA灵敏、可靠 ,优于斑点杂交法