脂多糖处理人皮肤成纤维细胞培养上清液对肝脏急性期反应物的诱导

采用生物化学分型、药敏谱分型与质粒及其限制性内切酶分型方法，对64株来自住院病人与医疗用品上的肺炎克雷伯菌进行了分型，分别分为27、24与46型。前二法具有简便、实用等优点，但用于医院感染监测时其分辨力偏低。质粒分析的操作虽稍复杂，但其分辨力却较高．7株无质粒菌株，仍需借助前二法分型．在医院感染监测中，本文运用前述3法联合分型，能较好地查明与肺炎克雷伯菌相关的医院感染病例的感染源与传播途径。     

急性期反应物提高皮肤成纤维细胞对绿脓杆菌内毒素的耐受性

目的:探讨急性期反应物α1酸性糖蛋白(AGP)和α1抗胰酶蛋白(AT)对人皮肤成纤维细胞(HDFs)的保护作用.方法:用培养的人皮肤成纤维细胞作为观察对象,分为不同浓度绿脓杆菌脂多糖(LPS)处理组,每个脂多糖处理组再分为不同浓度AGP或AT处理的亚组,用半自动细胞溶解测试法计算残存细胞,并计算绿脓杆菌LPS的30%细胞致死量(LDs0).结果:在存在LPS的环境中,HDFs存活数量减少,其存活数与LPS剂量呈负相关;AGP和AT均能提高HDFs的存活率.结论:绿脓杆菌LPS对HDFs有直接的毒性效应(抑制其增殖,甚至致死),急性期反应物AGP和AT能提高HDFs对绿脓杆菌LPS的耐受性.     

黄芩苷对脂多糖诱导人牙龈成纤维细胞表达炎症因子的影响

  目的  从PI3K/Akt/NF-κB信号通路探讨黄芩苷对脂多糖(LPS)诱导的人牙龈成纤维细胞(HGFs)损伤的影响及机制。  方法  运用LPS诱导建立人牙龈成纤维细胞损伤模型,设置正常对照组、模型组和模型+黄芩苷(1、10和20μg/mL)组,每组设3个复孔,经不同浓度的黄芩苷干预后,Western blotting检测p-Akt、Akt、NF-κB p65等蛋白的表达,采用qPCR法检测炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6等基因的表达。用PI3K抑制剂LY294002作用半小时后,再用黄芩苷干预,qPCR和Western blotting法检测Akt、p-Akt、NF-κB p65、TNF-α、IL-1β、IL-6等基因和蛋白的表达。  结果  与模型组比较,黄芩苷低、中、高剂量能有效降低TNF-α、IL-6、IL-1β mRNA的表达水平,促进p-Akt蛋白表达,抑制NF-κB p65核蛋白表达,并呈剂量依赖性(均P < 0.05)。与模型组比较,模型+黄芩苷组p-Akt表达升高(P＜0.05),NF-κB p65表达降低(P＜0.01)。PI3K抑制剂LY294002作用后,模型+黄芩苷组p-Akt/Akt表达量(0.63±0.18)较模型组(0.56±0.14)升高(P＜0.05),模型+黄芩苷组NF-κB p65、IL-6、IL-1β、TNF-α表达量较模型组降低(均P＜0.01)。黄芩苷对LY294002作用后,p-Akt/Akt、NF-κB p65、IL-6、IL-1β、TNF-α表达量与模型组比较,差异无统计学意义。  结论  黄芩苷可抑制LPS诱导的人牙龈成纤维细胞损伤引起的炎症反应,其作用机制可能与促进Akt的磷酸化,抑制NF-κB p65核转录和炎性因子的释放有关。      

脂多糖对正常人皮肤成纤维细胞胶原合成的影响

目的:研究脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对正常人皮肤成纤维细胞胶原合成的影响,以阐明LPS在皮肤创伤愈合中的可能作用.方法:体外培养正常人皮肤成纤维细胞,采用3H-脯氨酸掺入法观察不同浓度(0、0.005、0.01、0.05、0.1、0.5和1.0 μg·ml-1)的LPS对成纤维细胞胶原合成的影响.结果:LPS刺激浓度在0.005 μg·ml-1时,皮肤成纤维细胞胶原蛋白合成增加;随着刺激浓度增加,刺激作用增强;但当LPS浓度为0.5 μg·ml-1时,促胶原合成作用开始降低;当浓度达到1.0 μg·ml-1时则呈现抑制效应.结论:在一定浓度范围内LPS促进成纤维细胞胶原合成,表明LPS在皮肤创伤愈合中可能具有重要作用.     

黄芩苷对脂多糖诱导牙周膜成纤维细胞表达炎症因子的影响

【】目的：探讨黄芩苷对脂多糖促人牙周膜成纤维细胞炎症因子表达的影响。方法：将培养后的人牙周膜成纤维细胞用不同浓度的黄芩苷处理,CCK8实验观察不同浓度黄芩苷对人牙周膜成纤维细胞的细胞毒性。将培养后的人牙周膜成纤维细胞分为空白对照组、LPS组、黄芩苷组和LPS+黄芩苷组。空白对照组仅加入2%胎牛血清的培养液;LPS组加入加入100μg/mLLPS ;黄芩苷组分别加入黄芩苷200、500ng/mL ;LPS+黄芩苷组加入100μg/mL LPS,同时分别加入黄芩苷 200ng/mL 、500ng/mL。24h收集细胞, 检测各组IL-6、IL-8、IL-1βmRNA表达的变化。结果： 500ng/mL浓度以下黄芩苷添加至细胞没有明显的细胞增殖毒性。单独加入黄芩苷200ng/mL和500ng/mL的黄芩苷组和空白对照组比较,IL-6、IL-8、IL-1β均无明显变化(P＞0.05)。 和空白对照组比较,LPS组IL-6、IL-8、IL-1β明显上升,差异有统计学意义 (P<0.05),同时加入LPS和200ng/ml黄芩苷,相比单独加入LPS组,IL-6、IL-8、IL-1β明显下降,差异有统计学意义(P<0.05)。而同时加入LPS和500ng/mL黄芩苷,相比单独加入LPS组,IL-6、IL-8、IL-1β明显上升,差异有统计学意义 (P<0.05) 结论：黄芩苷在低浓度时显示有抑炎作用,而在浓度增加达到500ng/mL时显示有促炎作用。     

环孢素A联合脂多糖对牙周膜成纤维细胞生物学活性的影响

 目的 探讨环孢素A(CsA)联合牙龈卟啉单胞菌脂多糖(Pg-LPS)对人牙周膜成纤维细胞(PDLFs)生物学活性的影响。方法 将CsA（100 ng/mL）、LPS（100 ng/mL）分别单独及联合作用于人PDLFs,采用考马斯亮蓝染色、ELISA、Von kossa染色等方法检测其对PDLFs总蛋白量、碱性磷酸酶(ALP)、骨形成蛋白2（BMP-2）及矿化结节形成的影响。 结果 CsA单独及与LPS联合应用可促进细胞总蛋白的合成,增加细胞ALP活性及BMP-2的表达,并促进细胞矿化结节的早期形成;LPS单独应用可增加细胞的ALP活性,但对细胞的总蛋白合成、BMP-2的表达及矿化结节的早期形成无明显影响。。结论 一定浓度的CsA促PDLFs合成、分化作用明显,CsA联合LPS在促进细胞分化方面具有一定的协同作用。     

皮肤成纤维细胞培养的体会

国内已有一些科研单位开展了皮肤成纤维细胞的培养技术〔１〕，因其在核型分析中稳定性好，并能够表达其来源个体的基因组中与代谢有关的绝大多数基因，利用理化方法予以检测。此外皮肤组织取材方便、安全，易为患者接受，可以动态观察，细胞株可储存备用，故有着重要的实...     

石棉纤维诱导的细胞因子对肺成纤维细胞作用的研究

用肺泡灌洗法获取兔肺巨噬细胞，进行体外培养，取其上清液分别用同位素掺入法和ＭＴＴ比色法测定上清液中炎性细胞因子ＴＮＦ和ＩＬ－６的活性。并将上清液与人胚肺成纤维细胞（ＷＩ－３）培养，并用抗ＴＮＦ抗体和ＩＦＮγ进行成纤维细胞增殖和胶原合成抑制试验。结果显示，石棉纤维能刺激ＡＭ释放ＴＮＦ和ＩＬ－６，其活性分别为１１９８Ｕ／ｍ，１５１１Ｕ／ｍｌ，均主于ＴｉＯ２对照组。浓度与效应之间有剂量反应关系。石棉纤维     

递增剂量脂多糖致伤对大鼠SIRS-肺损伤的影响

目的 梯级剂量脂多糖（LPS）致伤对大鼠全身炎症反应综合征（SIRS）-肺损伤严重程度的影响。方法 经Wistar大鼠尾静脉注射梯级剂量LPS（2、4、6、8mg/kg）致伤,观察呼吸频率、死亡率,检测PaO2、观察外周血WBC计数及分类大白细胞构成比、观察肺W/D值以及病理学检查。结果 ①LPS致伤,可以导致大鼠呼吸困难,PaO2降低,外周血WBC计数异常（LPS）小剂量使其升高,大剂量使其降低）,外周血大白细胞构成升高,肺组织W/D值升高,肺病理改变加重;②LPS≥6mg/kg致伤,上述变化非常显著。结论 ①LPS致伤,可以诱发大鼠发生SIRS-肺损伤;②LPS 6mg/kg是导致大鼠SIRS-肺损伤失控,发生ARDS的临界剂量。     

脂多糖对牙周膜成纤维细胞IL-8和RANKL基因表达的调节作用

目的:研究牙龈卟啉单胞菌（P. g.）脂多糖（LPS）对人牙周膜成纤维细胞（hPDLFs）中白细胞介素８（ＩＬ－８）和NF-κB 受体活化因子配体 (RANKL)基因表达的调节。 方法:取第4代hPDLFs细胞在含有10%胎牛血清（ＦＣＳ）的DMEM培养基中培养至完全融合后,分别用0.01、0.1、1、10 、100 mg/L P.g. LPS 作用hPDLFs 10 h,实时荧光定量PCR检测IL-8和RANKL mRNA的表达水平。 结果:P.g. LPS 浓度依赖性地刺激hPDLFs中IL-8 和RANKL mRNA的表达水平升高,10 mg/L P.g. LPS上调IL-8 mRNA水平,达到峰值（P＜0.01）;100 mg/L P.g. LPS显著增强RANKL mRNA水平（P＜0.01）。结论:高浓度的 P.g. LPS明显刺激hPDLFs中IL-8和RANKL的基因表达增强。     

IL-13对正常人表皮成纤维细胞产生炎症因子作用的实验研究

目的探讨白介素-13（IL-13）对正常人表皮成纤维细胞（NHDF）产生炎症因子的影响。方法使用不同浓度IL-13（0.1、1、10ng/ml）刺激体外培养的NHDF,应用ELISA方法检测IL-13刺激NHDF24h后,白介素-6（IL-6）,白介素-8（IL-8）,巨噬细胞趋化蛋白-1（MCP-1）和嗜酸性粒细胞趋化因子（Eotaxin）的蛋白表达水平。结果0.1ng/mlIL-13刺激下,IL-6、MCP-1和Eotaxin的蛋白表达水平分别为（727.33±39.88）pg/ml、（414.67±13.01）pg/ml、（124.67±8.67）pg/ml;1ng/mlIL-13刺激下,分别为（1222.50±49.95）pg/ml、（705.33±25.15）pg/ml、（205.33±16.59）pg/ml;10ng/mlIL-13刺激下,分别为（1502.83±5.31）pg/ml、（1329.17±56.08）pg/ml、（457.50±15.32）pg/ml,均明显高于对照组[（283.50±15.86）pg/ml、（205.17±3.76）pg/ml、（13.50±5.01）pg/ml,P〈0.05或0.01],并具有浓度依赖性。IL-8蛋白表达水平与对照组无显著性差异（P〉0.05）。结论IL-13可刺激NHDF产生IL-6、MCP-1和Eotaxin,这些炎症因子的大量表达可能参与了IL-13在皮肤组织纤维化过程中的病理性作用。     

汉防己甲素对大肠杆菌脂多糖所致急性肺损伤大鼠炎症介质的影响

目的 探讨中药单体汉防己甲素(trandrine,Tet)干预对静脉注射内毒素(LPS)所致急性肺损伤(ALI)的影响及其可能机制.方法 将健康雄性Wistar大鼠32只,随机分为4组:即正常组、模型组、Tet预防组和Tet治疗组.除正常组外,其他3组采用大肠杆菌LPS静脉注射造成急性肺损伤模型,Tet预防组和Tet治疗组分别于注射LPS前后30 min内缓慢注射T注射液(20 mg/kg),正常组给予等量生理盐水.于初始(0)、0.5、2,4、6 h 5个时间点采集动脉血测定动脉血氧分压(PaO2)和动脉血二氧化碳分压(PaCO2).实验结束时测定肺组织湿干重比(W/D),检测支气管肺泡灌洗液(BALF)白细胞总数及总蛋白含量;ELISA法测定外周血及BALF中炎症介质TNF-α及BALF中IL-1β、IL-6浓度;测定肺组织一氧化氮(NO)浓度.结论 模型组在LPS输注完毕后PaO2逐渐下降,PaCO2逐渐下降(P<0.05),Tet预防组0.5、2、4、6 h,Tet治疗组2、4、6 h PaO2高于模型组(P<0.05),PaCO2与模型组差异无统计学意义(P<0.05);模型组肺组织W/D值和NO含量、BALF中自细胞计数、总蛋白含量、IL-1β、TNF-α、IL-6浓度显著性增高(P<0.05),两T组均能减轻上述变化(P<0.05).结论 Tet早期干预能减轻内毒素所致急性肺损伤的炎症介质失衡.     

自噬对脂多糖诱导的大鼠急性肺损伤的影响

目的：研究自噬对脂多糖诱导的大鼠急性肺损伤的影响。方法将48只SD大鼠平均分为4组：（1）生理盐水对照组（NS组）;（2）脂多糖（LPS）模型组（L组）;（3）LPS＋自噬组（L＋ A）;（4）LPS＋自噬抑制组（L＋I）。血气分析检测动脉血氧分压（PaO2）、动脉二氧化碳分压（PaCO2）和pH值;计算肺组织干湿比;HE染色观察肺组织病理学变化并进行肺损伤评分;酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清和肺泡灌洗液中微管关联蛋白LC3b、髓过氧化物酶（MPO）、巨噬细胞炎性蛋白‐2（MIP‐2）、白细胞介素‐1β（IL‐1β）、肿瘤坏死因子‐α（TNF‐α）的表达。结果与NS组比较,L组动脉血PaO2、pH值降低,PaCO2升高（P＜0．05）;与L组相比,L＋A组动脉血PaO2、pH值上升,PaCO2下降（P＜0．01）;L＋I组动脉血PaO2、pH值降低,PaCO2升高（P＜0．01）,差异具有统计学意义。L组和L＋I组血清和肺泡灌洗液中LC3b水平降低,M PO、M IP‐2、IL‐1β和T N F‐α水平均升高,而L＋ A组正好相反。结论自噬对脂多糖诱导的大鼠急性肺损伤起到改善或保护作用。     

油酸-内毒素序贯致伤引起大鼠急性肺损伤的特点

目的通过复制油酸-内毒素(OA-LPS)介导的大鼠急性肺损伤(ALI)模型并观察大鼠血浆IL-13含量等变化,探讨序贯致伤所引起的急性肺损伤特点.方法采用OA-LPS序贯致伤Wistar大鼠,观察伤后大鼠PaO2、肺含水量、血浆IL-13含量及病理学的变化.结果 OA-LPS组大鼠呼吸窘迫,PaO2早期低于8 kPa,死亡率升高,肺含水量显著增加,肺水肿、炎细胞浸润等病变严重,伴透明膜形成,血浆IL-13含量显著升高;尤其在间隔4 h两次致伤以后,上述各指标变化最大.结论 OA-LPS序贯致伤大鼠,可以介导严重的ALI/ARDS,即在第一次致伤后,给予第二次低剂量致伤,可以引发ARDS,与机体抗炎细胞因子水平异常升高可能有关;并且,在两次致伤之间还存在一个"相对敏感期".     

利多卡因对兔内毒素性急性肺损伤的预防作用

目的　研究利多卡因对兔内毒素性急性肺损伤的预防作用。方法　雄性健康新西兰兔 2 4只 ,分 3组 :空白组 (S -S ,输注生理盐水 ) ,内毒素组 (L -S ,输注内毒素后输注生理盐水 ) ,预防组 (Ld2 -L ,输注内毒素前 10min输注利多卡因负荷量 2mg·kg- 1 ,然后 2mg·kg- 1 ·h- 1 ) ,控制呼吸 ,吸氧浓度 95 % ,输注内毒素后 6h杀兔。观察氧合指数 (PaO2 FiO2 )、肺动态顺应性 (Cdyn)、支气管肺泡灌洗液 (BALF)白蛋白含量、肺湿 干重比值、肺组织超氧化物歧化酶 (SOD)、丙二醛 (MDA)和髓过氧化物酶 (MPO)以及肺形态学变化。结果　内毒素组PaO2 FiO2 、Cdyn 和肺组织SOD活性明显下降 ;BALF白蛋白含量、肺湿 干重比值和肺组织MDA和MPO含量明显上升 ;肺泡结构严重毁坏 ,肺泡间隔增宽 ,大量炎症细胞浸润。利多卡因预防可明显减轻这些变化。结论　利多卡因对兔内毒素性急性肺损伤有明显的预防作用     

远志皂苷对脂多糖诱导的帕金森病模型大鼠的作用及机制研究

目的 通过模拟中药口服、疗程用药的方式,探究远志皂苷(Tenuigenin,TEN)对细菌脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导的帕金森病(Parkinson's disease, PD)模型大鼠的作用及机制。方法 实验分5个组,通过动物行为学测试、大鼠黑质及血浆中炎性反应因子含量测定、黑质多巴胺(dopamine,DA)能神经元存活率检测和主要脏器组织形态学切片观察,研究TEN对炎症性PD模型大鼠的作用及机制。结果 TEN能够改善炎症性PD模型大鼠的行为学损伤,降低黑质DA能神经元的病死率,抑制黑质炎性反应因子含量,对主要脏器的组织形态学无影响。结论 TEN对PD模型大鼠具有神经保护作用,其机制与抗感染活性密切相关。