心肌康对慢性病毒性心肌炎小鼠心肌细胞凋亡及Fas／FasL蛋白表达影响的实验研究

目的：观察心肌康对慢性病毒性心肌炎小鼠心肌细胞凋亡及Fas／FasL蛋白表达的影响，探讨心肌康的作用机制。方法：给Balb／c小鼠多次接种嗜鼠心肌柯萨奇B3病毒制作慢性VMC模型，首次感染病毒50天后将存活小鼠分为模型组、心肌康组及氯沙坦组，同时设正常对照组，分别予以相应药物干预30天，采用原位末端标记法（TUNEL）检测心肌细胞凋亡及免疫组化方法检测Fas／FasL蛋白表达。结果：正常组未见到心肌细胞凋亡，模型组心肌细胞凋亡，凋亡率较正常组显著增加（P〈0．05），心肌康组和氯沙坦组凋亡率较模型组显著降低（P〈0．05）。模型组Fas／FasL蛋白表达较正常组显著增多（P〈0．01），心肌康组和氯沙坦组较模型组显著降低（P〈0．01）。结论：心肌细胞凋亡参与了慢性病毒性心肌炎的发病，心肌康能够抑制VMC心肌细胞的凋亡，通过下调Fas／FasL蛋白表达，对心肌细胞起到保护作用。     

心肌康对慢性病毒性心肌炎小鼠心肌细胞凋亡及Fas/FasL蛋白表达影响的实验研究

目的:观察心肌康对慢性病毒性心肌炎小鼠心肌细胞凋亡及Fas/FasL蛋白表达的影响,探讨心肌康的作用机制。方法:给Balb/c小鼠多次接种嗜鼠心肌柯萨奇B3病毒制作慢性VMC模型,首次感染病毒50天后将存活小鼠分为模型组、心肌康组及氯沙坦组,同时设正常对照组,分别予以相应药物干预30天,采用原位末端标记法(TUNEL)检测心肌细胞凋亡及免疫组化方法检测Fas/FasL蛋白表达。结果:正常组未见到心肌细胞凋亡,模型组心肌细胞凋亡,凋亡率较正常组显著增加(P<0.05),心肌康组和氯沙坦组凋亡率较模型组显著降低(P<0.05)。模型组Fas/FasL蛋白表达较正常组显著增多(P<0.01),心肌康组和氯沙坦组较模型组显著降低(P<0.01)。结论:心肌细胞凋亡参与了慢性病毒性心肌炎的发病,心肌康能够抑制VMC心肌细胞的凋亡,通过下调Fas/FasL蛋白表达,对心肌细胞起到保护作用。     

抗柯萨奇B病毒性心肌炎胶囊提取物总皂苷抑制心肌细胞凋亡的实验研究

目的观察抗柯萨奇B病毒性心肌炎胶囊提取物总皂苷抑制急性心肌损伤小鼠心肌细胞凋亡的作用及机制。方法选用BALB/c小鼠60只,雌雄各半,随机分为6组,即正常对照组,模型组,复方丹参滴丸组,抗柯高、中、低剂量组,每组10只,正常对照组、模型组给予蒸馏水灌胃,给药组灌胃给药,均每日1次,连续7 d。从实验的第6 d开始,除正常对照组外,其它组小鼠腹腔注射盐酸异丙肾上腺素3 mg/(kg·d),连续2 d,建立急性心肌损伤模型,检测各组小鼠心肌损伤标志物肌钙蛋白T(cTnT)、肌钙蛋白I(cTnⅠ)含量以及细胞凋亡基因Bcl-2和Bax的蛋白表达。结果模型组小鼠cTnⅠ和cTnT均降低,与正常对照组比较差异有统计学意义(P0.01);各给药组cTnⅠ和cTnT均高于模型组,复方丹参滴丸组、抗柯高、中剂量组与模型组比较差异尤为显著(P0.01)。抗柯高、中、低剂量组心肌细胞凋亡率明显低于模型组,复方丹参滴丸组和抗柯高、中剂量组Bcl-2的表达与模型组比较显著升高(P0.01);各给药组Bax的表达与模型组比较明显降低(P0.01)。结论抗柯萨奇B病毒性心肌炎胶囊提取物总皂苷有抑制急性心肌损伤小鼠心肌细胞凋亡的作用,通过上调心肌组织中Bcl-2的表达、下调Bax的表达,减轻心肌损伤标志物的释放来抑制心肌细胞的凋亡。     

心肌活力饮对实验性扩张型心肌病大鼠心肌细胞凋亡及凋亡相关基因的影响

目的观察心肌活力饮对扩张型心肌病大鼠心肌细胞凋亡及凋亡相关基因的影响，探讨该药治疗扩张型心肌病的作用机理。方法60只动物随机分成6组，除正常对照组外，其余各组大鼠分别腹腔注射阿霉素，制造扩张型心肌病模型。各用药组分别予心肌活力饮、黄芪生脉饮灌胃给药。4周后采用流式细胞仪检测心肌细胞凋亡及凋亡相关基因p53和Fas的蛋白表达。结果模型组心肌细胞的凋亡率显著高于正常对照组（P〈0．01），凋亡促进基因p53和Fas的蛋白表达增高（P〈0．05）。心肌活力饮（5、10、20g原药材／kg）组大鼠心肌细胞相关凋亡基因p53和Fas的蛋白表达量比模型组减少（P〈0．05或P〈0．01），心肌细胞的凋亡率也明显降低（P〈0．01）。结论心肌活力饮可以减少实验性扩张型心肌病大鼠心肌细胞的凋亡，并且可能是通过抑制心肌细胞相关凋亡基因p53和Fas的表达而发挥此作用的。     

黄芩 柴胡及其配伍提取物对心肌炎小鼠心肌组织CVB3m RNA复制及IFNm RNA表达的影响

目的：研究黄芩、柴胡及其配伍提取物对心肌炎小鼠心肌组织CVB3mRNA复制及IFNmRNA表达的影响。方法：将Balb/c小鼠随机分为：柴胡组、黄芩组、配伍组,模型组和正常对照组。腹腔注射CVB3m病毒诱导Balb/c小鼠心肌炎模型,采用RT-PCR技术,检测各组小鼠给药后不同时间点心肌组织中CVB3m RNA的复制和IFNm RNA的表达情况。结果：3个给药组心肌组织中CVB3m-RNA的量明显低于模型对照组,其中黄芩组和配伍物组抗病毒作用明显;柴胡组和配伍组均可诱生干扰素,与模型组比较有显著差异。结论：黄芩提取物组具有明显抗病毒作用;柴胡在疾病早期具有明显抗病毒作用,且具有明显诱生干扰素的作用;配伍提取物组具有明显抗病毒和诱生干扰素作用,在疾病极期表现明显优势。     

苏木乙酸乙酯提取物对急性病毒性心肌炎小鼠心肌细胞凋亡和相关Bcl-2、Bax蛋白表达的影响

目的:观察苏木乙酸乙酯提取物对CVB3小鼠心肌细胞凋亡和相关Bc1-2、Bax蛋白表达的影响,探讨苏木乙酸乙酯提取物在急性病毒性心肌炎的作用机制。方法:50只雄性Balb/c小鼠随机分为3组:空白组10只,苏木乙酸乙酯提取物组(苏木组)20只,模型对照组(模型组)20只。模型组、苏木组每只小鼠腹腔注射1×TCID_(50)为10~(-7)CVB3Nancy标准株病毒液0.3 ml,建立VMC小鼠模型,连续给药14天,第14天无菌摘取心脏,浸泡于4%多聚甲醛溶液中。采用HE染色观察心肌病理变化、TUNEL法检测心肌细胞凋亡及免疫组化法检测心肌细胞Bcl-2、Bax的蛋白表达。结果:与空白组比较,模型组、苏木组小鼠心肌细胞凋亡指数增加,有显著性差异(P0.05);与模型组比较,苏木组心肌组织中细胞凋亡指数明显减少,具有显著性差异(P0.05)。Bcl-2蛋白在空白组呈高表达,模型组呈低表达,苏木组较模型组明显增强,呈中表达。Bax蛋白在空白组呈低表达,模型组呈高表达,苏木组较模型组明显减弱,呈中表达。结论:苏木乙酸乙酯提取物能够上调Bcl-2蛋白表达,抑制Bax蛋白表达,抑制心肌组织的细胞凋亡,这可能是苏木治疗病毒性心肌炎的作用机制之一。     

苏木乙酸乙酯提取物对慢性病毒性心肌炎模型小鼠Bcl-2、Bax的影响

目的观察苏木乙酸乙酯提取物对慢性病毒性心肌炎(VMC)小鼠Bcl-2、Bax的影响,从而探讨其在慢性病毒性心肌炎抗细胞凋亡的作用机制,为治疗慢性病毒性心肌炎提供客观的理论依据。方法采用雄性Balb/c小鼠腹腔反复注射柯萨奇病毒B3(Coxsackieviruses B3,CVB3)的方式,建立慢性病毒性心肌炎动物模型。145只雄性Balb/c小鼠,随机选取10只,作为空白组,其余135只腹腔反复注射CVB3,45 d后成活小鼠随机分为3组,环孢素组给予环孢素溶液初始剂量30 mg/(kg·d),维持剂量20 mg/(kg·d)灌胃;苏木组给予苏木乙酸乙酯提取物溶液700 mg/(kg·d)灌胃;空白组及模型组给予0.2%羧甲基纤维素钠0.2 mL/d灌胃,各组小鼠给药20 d后,分别采用心脏超声检测小鼠心脏功能变化、苏木素-伊红(HE)染色法观察小鼠心肌病理形态改变及免疫组化法检测心肌细胞Bcl-2、Bax蛋白表达水平。结果 (1)与模型组相比,环孢素组、苏木组的左心室射血分数(EF)、左心室短轴缩短率(FS)均明显增加,与环孢素组相比,苏木组的EF、FS均明显增加。(2)与模型组相比...     

益气养阴活血化淤方对实验性病毒性扩张型心肌病小鼠细胞凋亡因子Fas／FasL蛋白表达的影响

目的通过观察小鼠心肌细胞凋亡因子Fas／FasL蛋白表达的水平,探讨益气养阴、活血化淤方的作用机制及Fas／FasL系统在细胞凋亡中的重要作用。方法210只Balb／c小鼠,随机分为4组。空白对照组30只;模型组、中药高剂量组、中药低剂量组各60只,采用多次接种柯萨奇B3m病毒的方式,建立重复感染的早期病毒性扩张型心肌病动物模型,中药高剂量组、中药低剂量组用益气养阴、活血化淤方治疗,于治疗4周后观测小鼠心肌病理形态学改变,免疫组化方法检测Fas／FasL蛋白表达。结果模型组心肌组织中Fas／FasL蛋白的阳性表达较空白组增多（P〈0．05）,中药高剂量组和中药低剂量组较模型组显著降低（P〈0．05）。结论益气养阴,活血化淤方能够下调扩张型心肌病小鼠Fas／FasL蛋白表达,对心肌细胞起到保护作用。     

益气养阴通络法对急性心肌梗死大鼠心肌细胞凋亡Bax、Bcl-2、Caspase3表达的影响

目的:观察益气养阴通络法对大鼠心肌细胞凋亡Bax、Bcl-2和Caspase3表达的影响,并探讨其作用机制。方法:健康SD大鼠60只,随机分为6组,正常组、模型组、西药组(盐酸地尔硫卓片)、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组。对模型组、中药组、西药组实验动物进行造模,复制急性心肌缺血的模型。西药组及中药组分别给予盐酸地尔硫卓片、中药双参通脉颗粒灌胃2周。采用Western Blotting法检测各组心肌组织中Bax、Bcl-2、Caspase3的表达水平。结果:与正常组比较,模型组Bcl-2表达均显著降低,Bax、Caspase3表达升高(P0.01或P0.05)。与模型组比较,各组Bcl-2表达均显著升高,Bax、Caspase3表达均降低(P0.01或P0.05)。与模型组比较,中药治疗组中,高剂量组Bcl-2表达明显升高,Bax、Caspase3表达明显降低(P0.05);西药组与模型组相比,Bcl-2表达明显升高(P0.01),Caspase3表达明显降低(P0.05),Bax表达有降低趋势(P0.05)。中药组高剂量组与西药组相比,Bcl-2表达无明显差异(P0.05)。结论:益气养阴通络法能够上调急性心肌梗死大鼠心肌细胞Bcl-2表达,下调Bax、Caspase3表达。     

桂枝对MRL小鼠心肌细胞凋亡及Caspase 3基因表达的影响

目的 探讨中药桂枝对MRL小鼠心肌细胞凋亡的作用及对Caspase 3基因表达的影响.方法 将MRL小鼠分为空白组、强的松组和桂枝组,检测MRL小鼠心肌组织凋亡细胞,计算心肌细胞凋亡指数(AI),RT-PCR法检测心肌细胞凋亡基因Caspase 3表达,观察桂枝对MRL小鼠心肌细胞凋亡的影响.结果 桂枝能调控心肌细胞凋亡基因Caspase 3表达,即抑制Caspase 3表达,明显抑制心肌细胞凋亡(心肌细胞凋亡指数显著下降).其疗效明显优于空白组(P<0.05),有显著性差异,与强的松组疗效相当(P>0.05).结论 桂枝可能通过调控凋亡基因而抑制心肌细胞凋亡,从而延缓或部分逆转MRL心肌损害的发生、发展.     

珍珠菜提取物ZE4对SMMC-7721肿瘤细胞凋亡的诱导作用

目的探讨珍珠菜提取物（ZE4）诱导肿瘤细胞凋亡的作用。方法采用AO-EB双染法、Hoechst染色法观察ZE4给药后对人肝癌细胞株SMMC-7721肿瘤细胞形态学的影响;免疫荧光法检测ZE4给药后SMMC-7721细胞内凋亡蛋白及其配基（Fas/FasL）、肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）、可溶性死亡受体5（DR5）、抑制凋亡蛋白（Bcl-2）及调控蛋白胱氨酸蛋白酶（Caspase3）的表达。结果Hochest染色和AO/EB双染结果表明,100μg/mlZE4可诱导SMMC-7721细胞发生凋亡,细胞凋亡的数目和形态改变随给药时间延长而变化明显;免疫荧光法检测结果表明,ZE4可通过上调Fas/FasL基因,上调TRAIL及DR5表达,下调Bcl-2表达,上调Caspase3表达等途径诱导细胞凋亡。结论珍珠菜提取物ZE4可诱导SMMC-7721肿瘤细胞发生凋亡,具有良好的抗肿瘤效果。     

川楝素通过线粒体途径诱导人肝癌细胞凋亡

目的 探讨川楝素对人肝癌细胞SMMC-7721 (P53+)、Hep3B (P53－)凋亡及其对相关蛋白Bcl-2、Bax和Fas表达的影响。     

温心胶囊对大鼠实验性缺血心肌细胞凋亡及Bcl-2、Fas蛋白表达的影响

目的：探讨临床有效中药复方温心胶囊防治冠心病心肌缺血的分子作用机制。方法：采用盐酸异丙肾上腺素连续多点皮下注射制备大鼠心肌缺血模型。运用透射电镜技术及TUNEL法,观察温心胶囊对缺血损伤大鼠心肌细胞凋亡的影响,并运用免疫组化的方法观察其对细胞凋亡相关基因Bcl-2、Fas蛋白表达的影响。结果：异丙肾上腺素所致心肌缺血损伤可明显诱导大鼠心肌细胞发生凋亡,显著引发Fas基因蛋白表达增强,并轻度引发Bcl-2基因蛋白表达增强,温心胶囊可显著下调Fas基因的蛋白表达,上调Bcl-2基因的蛋白表达,明显抑制和阻断心肌细胞发生凋亡。结论：通过调节缺血心肌Bcl-2、Fas基因的蛋白表达从而抑制和阻断细胞凋亡的发生,可能是中药复方温心胶囊防治冠心病心肌缺血损伤的分子作用机制之一。     

雄黄微生物提取液诱导K562/ADM细胞凋亡的作用机制研究

目的：观察雄黄微生物提取液对K562/ADM细胞的诱导凋亡作用,探讨其作用机制、并初步探寻雄黄溶解后表现药理活性的化学物种。方法：应用噻唑蓝（MTT）比色法、Annexin V-PI双染法染色、DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术（FCM）观察K562/ADM细胞凋亡,FCM测定K562/ADM细胞Fas、Bcl-2、Caspase3的活性变化,并以H3AsO3（As2O3在该溶液中的主要存在形式）作为阳性对照。结果：雄黄微生物提取液可抑制K562/ADM细胞增殖;K562/ADM呈典型凋亡形态改变;DNA电泳可见梯状条带出现;FCM分析显示：G1期细胞比例增高,G2-M和S期阻滞;Fas蛋白表达明显上调、Bcl-2蛋白表达显著下调、Caspase-3活性明显增强。结论：雄黄微生物提取液可通过Fas/Bcl-2途径,激活Caspase-3而诱导K562/ADM细胞凋亡。砷酸（V）、甲基砷酸盐（V）可能是雄黄溶解后表现药理活性的主要化学物种。     

心脑舒通胶囊对大鼠缺血再灌注脑损伤后细胞凋亡的影响

目的:探讨心脑舒通胶囊对大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经细胞凋亡,及其对凋亡调控因子蛋白表达的影响。方法:采用线栓法阻塞大脑中动脉致大鼠局灶性脑缺血再灌注模型(MCAO),24 h后断头取脑,免疫组织化学法测定大脑皮层中Bax,Bcl-2,Fas,Fas-L以及caspase-3蛋白的表达,TUNEL法检测皮层区神经细胞凋亡。结果:缺血再灌注模型组大脑皮层内Bax,Fas,Fas-L和caspase-3蛋白明显升高,Bcl-2蛋白表达和Bcl-2/Bax明显降低,与假手术组比较,均有显著性差异(P<0.01)。心脑舒通胶囊能明显降低缺血侧大脑皮层内Bax蛋白表达,增加皮层内Bcl-2蛋白表达和Bcl-2/Bax;减少皮层内Fas和Fas-L蛋白表达,降低皮层内caspase-3蛋白和基因表达,显著减少凋亡的神经细胞数量,与模型组比较,有统计学意义(P<0.01)。结论:心脑舒通胶囊保护受损的脑组织,其机制可能与降低脑组织神经细胞凋亡,调节凋亡调控因子的蛋白表达有关。     

熊胆粉对肝癌移植瘤裸鼠STAT3通路的影响

目的观察熊胆粉对肝癌皮下移植瘤裸鼠信号转导与转录激活因子3（STAT3）通路及其下游靶基因的影响,探讨熊胆粉治疗肝癌的作用机制。方法采用人肝癌细胞株HepG_2构建裸鼠皮下移植瘤模型,待皮下移植瘤形成后,将裸鼠随机分为熊胆粉组和对照组,每天分别给予熊胆粉和生理盐水,连续给药3周,每周测量体重和瘤体积2次,给药结束,剥取瘤体称量瘤重及计算抑瘤率;采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记测定法（TUNEL）检测瘤组织的细胞凋亡情况;逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测Bcl2-associated X蛋白（Bax）、B细胞淋巴瘤/白血病-2（BcI-2）、周期蛋白依赖性蛋白激酶4（CDK4）、细胞周期蛋白D1（cyclinD1）mRNA表达;免疫组化测定磷酸化的信号转导与转录活化因子3（p-STAT3）、增殖细胞核抗原（PCNA）、Bax、Bcl-2、CDK4、cyclinD1蛋白表达。结果熊胆粉显著抑制肿瘤的体积和瘤重,与对照组比较,差异均有统计学意义（P〈0.01）。TUNEL法结果显示熊胆粉显著促进肝癌细胞凋亡。RT-PCR结果显示熊胆粉促进Bax表达而抑制Bcl-2、CDK4、cycIinD1 mRNA表达。免疫组化结果显示熊胆粉促进Bax表达而抑制p-STAT3、PCNA、BcI-2、CDK4、cyclinD1蛋白表达。结论熊胆粉可以通过调控STAT3通路抑制肝癌细胞增殖,促进肝癌细胞凋亡。     

黄芪水煎剂对肾缺血再灌注损伤大鼠肾小管细胞凋亡的影响

目的:探讨黄芪水煎剂(AE)对肾缺血再灌注损伤大鼠肾小管细胞凋亡的影响及机制。方法:雄性SD大鼠随机分为假手术组(Sham)、缺血再灌注损伤组(IR)及IR+不同剂量(0.5、1.0、2.0g/kg)AE预处理组(每组8只),夹闭双侧肾动脉45min再灌注6h后采用原位末端标记法(TUNEL)检测肾小管细胞凋亡,荧光试剂盒检测肾组织Caspase 3活性;实时定量PCR法检测Bcl-2、Bax mRAN表达。结果:与Sham组相比,IR组凋亡细胞数、Caspase 3活性及Bax mRNA表达均显著升高,而Bcl-2 mRNA表达明显降低(P0.05);AE预处理组凋亡细胞数、Caspase 3活性及Bax mRNA表达均明显减少,而Bcl-2mRAN表达明显升高(P0.05)。结论:AE能显著抑制IR大鼠肾小管细胞凋亡,机制可能与其调节Bcl-2、Bax表达有关。     

太白银莲花皂苷-A诱导人胶质瘤U87细胞凋亡及其机制研究

目的探讨太白银莲花皂苷A诱导胶质瘤U87细胞株细胞凋亡作用及机制。方法以四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测太白银莲花皂苷A对U87细胞和VEC304细胞存活率的影响;Hoechst 33342核染色后荧光显微镜下观察细胞核形态学变化;透射电子显微镜观察太白银莲花皂苷A处理后U87细胞超微结构;流式细胞仪AnnexinV/IP双染检测太白银莲花皂苷A处理后U87细胞凋亡比率;免疫印迹法(Western blot)检测致凋亡分子Fas、Fas-L、Pro-Caspase8、Pro-Caspase3、Bcl-2、Bax等表达情况。结果极低浓度(<5 mg/L)下太白银莲花皂苷A处理后U87细胞生存率明显下降,同比正常EVC304细胞生存率影响不显著;Hoechst 33342核染色及透射电镜下均可见典型细胞凋亡形态学变化;流式细胞仪分析显示低浓度太白银莲花皂苷A(1.75 mg/L IC50)处理后U87细胞系早期凋亡细胞比率随时间递增,呈明显时间依赖性;免疫印迹实验发现太白银莲花皂苷A处理U87细胞6,12,24 h后细胞Fas及Fas-L表达递增,Pro-Caspase8、Pro-Caspase3递减,活化Caspase-3片段12 h达到峰值,Bcl-2表达差别不显著,Bax表达未测出。结论太白银莲花皂苷A能够诱导U87细胞凋亡,并且其机制与Fas介导的表面受体凋亡通路有关。     

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??OBJECTIVE To study the protective effects and mechanisms of aqueous extract from Descurainia sophia on doxorubicin(Dox)-induced cardiomyocyte injury.METHODS The Dox induced H9c2 cell apoptotic model was established, then the cells were divided into normal group (NC), model group (Dox), positive group (resveratrol,RSV), and different doses of aqueous extract of Descurainia sophia (DS). The viability of H9c2 cells was detected by MTT assay. The apoptosis rate, mitochondrial membrane potential and reactive oxygen species (ROS) level were detected by flow cytometry. The levels of T-SOD, LDH, MDA and GSH-PX were measured. And the protein expression levels of caspase-3, Bcl-2, Bax and p53 were detected by western blot, HPLC-MS identification of aqueous extract from Descurainia sophia.RESULTS After treating with DS products, the survival rate of H9c2 was increased (P<0.01), the apoptosis rate was significantly decreased (P<0.01),mitochondrial membrane potential was significantly increased (P<0.01), the level of ROS was significantly decreased (P<0.05), T-SOD and GSH-PX activities were significantly increased (P<0.01), the levels of LDH and MDA content were significantly decreased(P<0.01). Moreover, DS reduced the expression of caspase-3 (P<0.01), regulated the expression of Bax/Bcl-2 (P<0.01), decreased the expression of p53 (P<0.05). Seven components were identified from DS by HPLC/MS analysis.CONCLUSION DS can effectively protect cardiomyocyte, and its mechanism is probably associated with correcting functional disorders of oxidative stress of cardiomyocytes, and inhibit mitochondrial apoptotic pathway.