小柴胡汤君臣药及其配伍提取物 对感染CVB3m心肌细胞的血清药理学研究

目的:探讨小柴胡汤(XCT)君臣药及其配伍提取物对感染CVB3m心肌细胞的抗病毒与保护作用,并试阐述机制。方法:制取3种提取物的含药血清,并测定体外对CVB3m毒力的影响。培养乳鼠心肌细胞建立心肌炎模型,从3个方面检测:应用MTT法检测含药血清对心肌细胞的保护率;检测各孔上清液中乳酸脱氢酶(LDH)及天冬氨酸氨基转移酶(AST)的释放量;RT-PCR法检测感染CVB3m的心肌细胞中CVB3m的含量。结果:黄芩提取物含药血清对CVB3m有直接灭活的作用。3个方面检测结果均显示:含药血清组与空白血清组比较,有显著性差异(P<0.01),黄芩组和配伍组分别与柴胡组比较,均有显著性差异(P<0.01),配伍组与黄芩组比较,无显著性差异。结论:黄芩提取物有直接灭活病毒的作用,黄芩和配伍提取物具有明显的抑制病毒复制和对病毒感染后细胞的保护作用,等量配伍提取物没有表现出作用增强的优势。     

柴胡黄芩提取物对CVB_(3m)感染小鼠心肌损伤影响的实验研究

目的 :观察柴胡、黄芩提取物对CVB3m感染小鼠心肌细胞损伤的保护作用。方法 :通过建立CVB3m腹腔注射诱导的BALB/c小鼠VMC模型 ,观察柴胡、黄芩提取物对CVB3m感染小鼠发病后症状积分、各组小鼠VMC的发病率和死亡率、心脏重量系数、心肌病理组织学、心脏超微结构变化影响 ,全面评价柴胡、黄芩提取物对VMC小鼠的整体保护作用。结果 :1 感染小鼠多在 3～ 4天后出现病态表现 ,症状严重者可导致死亡 ,死亡多发生在 3～ 7天。模型组 10 0 %发病 ,总死亡率 70 % ,平均生存时间为 8 9天 ;柴胡提取物组的发病率与模型组无显著差异 ,而死亡率明显低于模型组 ;黄芩提取物组的发病率及死亡率均明显低于模型组。 2 病毒感染后 ,小鼠心脏重量增加 ,体重下降 ,心脏重量系数增高 ,发病症状积分也渐增高 ,模型组尤为明显 ,与正常组比较有差异显著 (P <0 0 5 )。柴胡提取物组、黄芩提取物组对感染小鼠心肌病理组织学、电镜超微结构改变均有明显改善作用。结论 :柴胡、黄芩提取物对感染小鼠有明显的整体保护作用 ,使小鼠死亡率明显降低 ,生存质量明显提高 ,对心肌细胞损伤有明显保护作用。     

益心康对感染柯萨奇病毒B3的大鼠体外心肌细胞CVB3 mRNA复制及相关细胞因子的影响

[目的]通过检测益心康药液作用于感染柯萨奇病毒B3(CVB3)后的乳鼠心肌细胞中柯萨奇病毒mRNA的复制情况及其所释放的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及转化生长因子-β(TGF-β)表达情况,进一步探讨益心康对病毒性心肌炎的病毒复制及相关细胞因子的作用机制。[方法]使益心康的药液作用于乳鼠心肌细胞,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测心肌细胞中柯萨奇病毒mRNA的复制情况及其所释放的TNF-α及TGF-β的表达水平。[结果]益心康在CVB3感染的病毒性心肌炎的发病及发展过程中有抑制CVB3复制的作用,同时可以减少相关细胞因子TNF-α、TGF-β的分泌。益心康组(D组)、益心康加地塞米松组(E组)的细胞中的CVB3 mRNA、TNF-α、TGF-β表达水平明显低于病毒感染组(P<0.01),同时低于利巴韦林组(P<0.05),均有统计学意义;D组、E组之间P>0.05,无统计意义。[结论]益心康对柯萨奇病毒感染心肌细胞具有显著保护作用。     

柴胡、黄芩及其配伍提取物含药血清对CVB3m感染乳鼠心肌细胞的保护作用研究

目的:探讨柴胡、黄芩及其配伍提取物保护细胞的不同作用环节和机制。方法:应用"通法"制取3种提取物含药血清,体外培养乳鼠心肌细胞,观察其形态学变化,细胞病变及搏动百分比;MTT法检测CVB3m感染的心肌细胞保护率;检测3天、5天各孔上清液中乳酸脱氢酶(LDH)及天冬氨酸氨基转移酶(AST)的释放量。结果:3组含药血清均不同程度的减轻心肌细胞病变,提高搏动百分比;OD值均明显高于正常对照组(P<0.05);感染CVB3m后3～5天,空白血清组各孔培养液中LDH及AST的释放量迅速上升,含药血清组其释放量明显降低(P<0.05)。结论:3种含药血清均有不同程度的保护细胞作用,黄芩和配伍提取物含药血清对病毒感染后的细胞具有明显保护作用。等量配伍提取物含药血清在体外保护细胞方面没有表现出作用增强的优势。     

黄芪对柯萨奇B3病毒核糖核酸作用的研究及其机理探讨

以体外转录合成、同位素３５Ｓ标记的肠道病毒特异负股ＲＮＡ为探针，对急性柯萨奇Ｂ３病毒（ＣＶＢ３）心肌炎小鼠心肌中的ＣＶＢ３－ＲＮＡ进行ＲＮＡ－ＲＮＡ原位杂交检测，利用图像分析仪对阳性杂交信号进行图像处理与定量分析；观察黄芪对ＣＶＢ３－ＲＮＡ含量的影响；同时对黄芪的抗病毒机理及其与β－干扰素的关系进行了初步探讨。结果发现在病毒感染的心肌组织中，黄芪组心肌坏死面积明显小于生理盐水对照组。黄芪对ＣＶＢ３－ＲＮＡ的复制有良好的抑制作用，其机制与β－干扰素（β－ＩＦＮ）无关。     

苦参碱对体外培养小鼠心肌细胞感染柯萨奇B3病毒的影响

近年来，病毒性心肌炎发病率显著上升，尤其在青壮年中，而临床上尚缺乏有效的防治药物。许多报道已证实了该病的致病原因主要与肠道病毒，特别是ＣＶＢ３病毒有关［１］。但目前国内外对本病尚无公认的有效治疗措施而致使临床治疗处于被动的状态。本实验采用细胞化学染色，心肌酶及ＭＤＡ含量测定等方法观察苦参碱（Ｓｏｐｈｏｒａ Ｆｌａｖｅｓｃｅｎｓ Ａｉｔ ＳＦＡ）对ＣＶＢ３感染的心肌细胞的保护作用，旨在为临床治疗病毒性心肌炎（ＶＭＣ）的药物选择提供实验依据。１材料和方法１．１材料出生１～２ｄ的ＢＡＬＢ／Ｃ乳鼠由我院实…     

生脉散复方制剂对体外感染柯萨奇B3病毒的大鼠心肌细胞的影响

目的探讨生脉散复方制剂对病毒性心肌炎的影响。方法取新生SD大鼠心室肌培养48 h后接种103TCID50的柯萨奇B3病毒,观察生脉散合炙甘草汤加减液Ⅰ、生脉散合炙甘草汤加减液Ⅱ对感染病毒大鼠心肌细胞的影响。结果生脉散合炙甘草汤加减液Ⅱ明显减轻感染病毒后心肌病变,改善细胞搏动,明显降低心肌细胞释放酶(乳酸脱氢酶、磷酸肌酸激酶)活性,减轻超微结构病变。结论生脉散合炙甘草汤加减液Ⅱ对感染柯萨奇B3病毒SD大鼠培养心肌细胞具有抗病毒和明显的保护作用。生脉散合炙甘草汤加减液Ⅱ的作用优于不加虎杖的生脉散合炙甘草汤加减液Ⅰ。     

黄芩 柴胡及其配伍提取物对心肌炎小鼠心肌组织CVB3m RNA复制及IFNm RNA表达的影响

目的：研究黄芩、柴胡及其配伍提取物对心肌炎小鼠心肌组织CVB3mRNA复制及IFNmRNA表达的影响。方法：将Balb/c小鼠随机分为：柴胡组、黄芩组、配伍组,模型组和正常对照组。腹腔注射CVB3m病毒诱导Balb/c小鼠心肌炎模型,采用RT-PCR技术,检测各组小鼠给药后不同时间点心肌组织中CVB3m RNA的复制和IFNm RNA的表达情况。结果：3个给药组心肌组织中CVB3m-RNA的量明显低于模型对照组,其中黄芩组和配伍物组抗病毒作用明显;柴胡组和配伍组均可诱生干扰素,与模型组比较有显著差异。结论：黄芩提取物组具有明显抗病毒作用;柴胡在疾病早期具有明显抗病毒作用,且具有明显诱生干扰素的作用;配伍提取物组具有明显抗病毒和诱生干扰素作用,在疾病极期表现明显优势。     

病毒性心肌炎慢性期Th细胞凋亡蛋白的表达以及清心Ⅱ号的干预作用

目的：初步探讨病毒性心肌炎（Viral Myocarditis VMC）慢性期Th细胞凋亡的部分调控机制,并观察清心Ⅱ号对这一环节的干预作用。课题的完成将为进一步阐明病毒性心肌炎的发病机制及清心Ⅱ号治疗本病的作用机理提供重要的实验依据。方法：按照文献方法建立病毒性心肌炎慢性期小鼠模型后,随机分为模型组和清心Ⅱ号治疗组,正常组和模型组给予蒸馏水灌胃,治疗组给予清心Ⅱ号水溶液灌胃。疗程结束后分别采集T细胞和Th细胞,透射电镜观察T细胞凋亡;运用流式细胞术检测Th细胞凋亡;并用western-blot技术检测NF-κB,caspase-3,caspase-9蛋白在Th细胞上的表达。结果：（1）在VMC慢性期,各组均可见凋亡的T淋巴细胞,相对而言,模型组凋亡细胞数量较多。（2）与正常组比较,慢性期小鼠Th细胞凋亡显著升高（P〈0.01）;与模型组比较,治疗组小鼠Th细胞凋亡显著下降（P〈0.01）;治疗组与正常组相比较,两者之间无明显差异（P〈0.01）。（3）NF-κB,caspase-3,caspase-9蛋白在Th细胞上的表达：与正常组相比较,模型组小鼠caspase-3,caspase-9和NF-κB蛋白在Th细胞上的表达有极显著差异;与模型组相比较：治疗组caspase-3和NF-κb蛋白表达受到明显抑制;而caspase-9的表达则未受到抑制。结论：病毒性心肌炎小鼠慢性期存在Th细胞过度凋亡的现象;清心Ⅱ号干预后Th细胞过度凋亡的现象受到抑制,这一作用的途径可能是清心Ⅱ号抑制了NF-κB,caspase-3在Th细胞上的表达,但未显示出对cspase-9蛋白表达的抑制。     

苦瓜素对小鼠柯萨奇B3病毒性心肌炎的治疗作用

病毒性心肌炎(viral myocarditis，VMC)是常见的获得性心肌疾病之一，近年来发病率逐年上升，成为青少年猝死的重要原因，严重危害人类健康，但目前尚无有效的抗病毒药物治疗。苦瓜为葫芦科属植物苦瓜Mornordica charantia L.的果实，已有数百年的药食两用史。最近国内外学者从苦瓜果肉、种     

黄芪对小鼠急性病毒性心肌炎作用的心肌细胞电生理研究

本实验应用常规细胞内微电极技术及实时微机数据处理系统记录心肌细胞电活动参数：静息电位（ＲＰ）、动作电位振幅（ＡＰＡ）、超射（ＯＳ）、动作电位零相最大除术速率（Ｖｍａｘ）；动作电位时间（ＡＰＤ５０和ＡＰＤ９０）和心肌细胞异常波形动作电位，研究了不同时期使用黄芪对急性实验性小鼠柯萨奇Ｂ３病毒（ＣＢ３Ｖ）性心肌炎模型心肌细胞异常电活动的影响。结果发现在感染病毒同时和感染病毒后３天开始每天给小鼠腹腔注射黄     

醋柴胡小分子水溶性部位对甲氨蝶呤药物代谢动力学的影响

目的:探讨P-糖蛋白抑制剂醋柴胡小分子水溶性部位(MHE)对甲氨蝶呤药动学行为的影响。方法:SD雄性大鼠分别灌胃甲氨蝶呤或甲氨蝶呤联合MHE后,于不同时间点眼眶静脉丛采血,利用20%高氯酸沉淀蛋白法处理血样,采用高效液相色谱法分析,非隔室模型估算药代动力学参数。结果:与单用组比较,联用组甲氨蝶蛉药时曲线下面积AUC0-t增加16.6%,AUC0-∞增加33.8%,生物半衰期(t1/2)延长了1.2倍,平均驻留时间(MRT0-t)增加了26.1%,而药物清除率(CL)下降了20.3%,但2组的药代动力学参数无显著性差异。结论:MHE具有增强甲氨蝶呤生物利用度的趋势,二者联合用药需要关注毒副反应的发生。     

芪红胶囊对柯萨奇病毒引起细胞凋亡的影响

目的 探讨柯萨奇病毒是否能够引起心肌细胞凋亡,以及芪红胶囊对凋亡发生是否有抑制作用。方法 将培养细胞分为4组：病毒感染对照组、芪红胶囊加病毒组、芪红胶囊对照组和正常细胞对照组。应用原位末端标记法(TUNEL)、Hoechst33258染色和Annexin-V／PI染色观察各组细胞凋亡发生情况;并通过流式细胞仪分析各组细胞的凋亡发生率;应用RT-PCR方法观察与凋亡相关细胞因子的表达改变。结果 病毒感染对照组细胞经Hoechst33258染色发现病毒感染后的细胞核出现强亮度的蓝色荧光,可观察到凋亡细胞的典型变化;Annexin-V／PI染色可见HeLa细胞膜呈强绿色荧光,细胞核显强红色荧光;通过流式细胞仪检测PI染色的细胞DNA,发现病毒感染组出现明显凋亡峰;芪红胶囊加病毒组凋亡发生率明显下降,正常对照组细胞未发生凋亡;同时芪红胶囊能够调节与凋亡相关细胞因子的表达。结论 芪红胶囊能够抑制柯萨奇病毒引起的细胞凋亡。     

贝母素乙抑制MEK/ERK的磷酸化对新生小鼠柯萨奇B病毒性心肌炎心肌细胞凋亡和炎症水平的影响

目的:探究贝母素乙抑制MEK/ERK的磷酸化对新生小鼠柯萨奇B病毒性心肌炎心肌细胞凋亡和炎症水平的影响。方法:48只新生BALB/c小鼠中随机挑8只作正常对照组,剩余小鼠采用柯萨奇B3病毒感染小鼠构建CVB3心肌炎动物模型,建模成功后再随机分为曲美他嗪1 mg/kg阳性对照组、模型对照组和贝母素乙2. 5、5、10 mg/kg组;分别尾静脉注射或者灌胃相应药物,连续处理28 d,1次/d;检测小鼠心脏功能指标(心率HR、左心射血分数LVEF、左心室缩短分数FS、左心室壁厚度LVWT及左心室收缩末期容积LVESV);采用ELISA法检测血清中心损标记物肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌红蛋白(Mb)、炎症因子白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)及一氧化氮合酶(i NOS)的含量,HE染色观察心肌损伤情况,RT-PCR和Western blotting检测Caspase-3、Caspase-9、丝裂原活化的细胞外信号调节激酶(MEK)/细胞外调节蛋白激酶(ERK)的磷酸化水平。结果:与正常对照组相比,CVB3模型组小鼠心肌细胞...     

柴胡提取物对大鼠海马原代培养神经元5-HT3受体介导离子通道的影响

目的: 探讨柴胡提取物（Radix Bupleuri Extract,RBE）含药血清对抑郁情绪模型大鼠原代培养的海马神经元5-羟色胺3受体（5-HT₃R）通道电流的作用。方法：复制抑郁情绪大鼠模型,以柴胡提取物进行药物干预,采用旷场实验和糖水偏好实验评价模型, 制备各组大鼠血清并灭活除菌,对原代培养的大鼠海马神经元干预24 h后,采用全细胞膜片钳技术检测各组神经元5-HT₃R通道电流。结果:与正常组相比,模型组大鼠旷场实验总分显著性降低（P<0.01）,糖水偏好系数显著降低（P<0.01）,模型组大鼠血清孵育的海马神经元电流密度值明显增加（P<0.01）;与模型组相比,柴胡提取物组和氟西汀组旷场实验总得分明显提高（P<0.05,P<0.01）,糖水偏好系数均明显增加（P<0.05,P<0.05）,柴胡提取物和氟西汀含药血清孵育的海马神经元电流密度值均明显减少（P<0.01,P<0.01）。结论：柴胡提取物能改善抑郁情绪模型大鼠异常的5-HT3R通道电流,这可能是其发挥抗抑郁情绪的中枢机制之一。     

柴胡黄芩配伍应用对小鼠急性癫痫模型的影响

目的:观察柴胡黄芩配伍应用对小鼠急性癫痫模型的影响。方法:60只昆明小鼠被随机分为6组,即模型组(A组),柴胡黄芩5∶2组(B组),柴胡黄芩1∶1组(C组),柴胡组(D组),黄芩组(E组),地西泮组(F组),每组各10只,制备小鼠最大电休克(MES)急性癫痫模型;另取180只昆明小鼠按上述分组方法分别制备小鼠戊四氮(PTZ)、士的宁(STR)、匹罗卡品(PLCP)急性癫痫模型。结果:B、F组可显著降低MES小鼠惊厥率(P<0.05),明显延长PTZ小鼠发作性阵挛潜伏期、发作性强直潜伏期以及死亡潜伏期(P<0.05),以及STR小鼠死亡潜伏期(P<0.01)。仅F组可延长PLCP小鼠强直及死亡潜伏期(P<0.01)。结论:柴胡黄芩配伍应用有抗惊厥、抗癫痫作用,其中以柴胡黄芩5∶2组效果最为明显。     

柴胡-白芍不同比例配伍应用的抗惊厥作用

目的:观察柴胡-白芍不同比例配伍应用对实验性惊厥小鼠的影响.方法:将雄性昆明种小鼠随机分为7组,即模型组(A),阳性药对照组(B),柴胡-白芍2∶1组(C),柴胡-白芍1∶1组(D),柴胡组(E),白芍组(F),柴胡-白芍1∶2组(G).模型组给予等量生理盐水,阳性药对照组用量为苯妥英钠0.025 g·kg-1或地西泮0.004 g·kg-1,柴胡-白芍不同比例配伍组用量为10.4 g·kg-1,各组小鼠连续ig给药7d,末次给药60 min后造模,观察各用药组对小鼠最大电惊厥(MES)模型、戊四氮模型、士的宁模型及匹鲁卡品模型的阵挛潜伏期、强直潜伏期、死亡潜伏期及死亡数的影响.结果:与A组相比较,在MES模型中,B,F组可以显著降低惊厥发生率(P＜0.05);在戊四氮模型中,B,C,D组均能显著延长实验小鼠的阵挛潜伏期、强直潜伏期(P＜0.05),B,C组能显著延长实验小鼠的死亡潜伏期(P＜0.05);在士的宁模型中,B组能够显著延长实验小鼠的阵挛潜伏期、死亡潜伏期(P＜0.05),其余各组对实验小鼠的阵挛潜伏期、死亡潜伏期,无显著影响;在匹罗卡品模型中,B,C,D,E,G组均能显著延长实验小鼠的死亡潜伏期(P＜0.05).结论:柴胡-白芍配伍应用具有良好的抗惊厥的作用,其抗惊厥作用优于单用柴胡或白芍,其中以柴胡-白芍2∶1配伍比例的抗惊厥作用最好.     

养心透毒方对病毒性心肌炎小鼠心肌组织的保护作用

目的 观察养心透毒方对柯萨奇病毒(CVB3)感染小鼠造成的CVB3病毒性心肌炎(VMC)的保护作用。方法 将HeLa细胞培养的CVB3制成悬液,测定半数组织细胞感染量(TCID50),小鼠腹腔接种CVB3培养液建立VMC模型。小鼠随机分为正常组,模型组,利巴韦林+辅酶Q10(CoQ10)组,养心透毒方低、高剂量组,灌胃给药4周。应用酶联免疫法检测各组小鼠IgG和IgM阈值,测定血清肌钙蛋白T(cTnT)、白细胞介素-2(IL-2)、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平,组织匀浆测定心肌IL-2和TNF-α含量,HE染色观察小鼠的心肌组织病理形态学改变。结果 养心透毒方低、高剂量组IgM、IgG阳性的动物数均少于模型组。模型组心肌组织及血清IL-2、TNF-α含量与正常组比较均有显著性差异(P＜0.05),心肌组织有明显病理改变。养心透毒方可使小鼠心肌组织坏死程度减轻,心肌炎症浸润减少,降低组织和血清的IL-2和TNF-α含量(P＜0.05)。结论 养心透毒方能减少小鼠CVB3病毒的感染率,降低组织中炎症因子的水平,对小鼠早期VMC具有防治作用。     

白藜芦醇抗小鼠柯萨奇病毒感染性心肌炎作用的研究

研究白藜芦醇对小鼠柯萨奇病毒感染性心肌炎的干预作用并探讨其作用机制。制作柯萨奇病毒感染性心肌炎小鼠动物实验模型，采用病毒唑、黄芪注射液和黄芪煎液作为中西药物治疗对照，观察白藜芦醇腹腔内注射和经饮水给药对模型小鼠的一般情况、生存率、心肝脾形态等变化，及血清丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)等生化指标及心脏组织病理学的影响。结果：与病毒唑、黄芪注射液和黄芪煎液相比，白藜芦醇对柯萨奇病毒感染性心肌炎小鼠的一般情况、生存率、心肝脾变化、血清MDA和NO等生化指标及心脏组织病理学均有良好的改善作用。提示：白藜芦醇对小鼠柯萨奇病毒感染性心肌炎有良好的拮抗作用。     

HPLC研究柴胡和赤芍配伍的化学成分变化

目的：研究柴胡和赤芍配伍后的成分变化。方法：用HPLC法对单药煎液和两药共煎液的各峰进行检测和分析。结果：柴胡和赤芍配伍合煎后有六个化学成分的含量发生变化，并有一个新峰产生。结论：中药配伍并非是单味药的简单加和。