大鼠抗人血红蛋白单克隆抗体的制备及其特性定鉴

将人血红蛋白(Hb)免疫LOU/M(IgK-1a)大鼠,取脾细胞与IR983F大鼠骨髓瘤细胞融合,制备了3株大鼠抗Hb单克隆抗体(McAb)2A10、9B5,4F12杂交瘤细胞株。3种McAb腹水效价分别为1:16×10~4、1:3.2×10~4、1:323×10~4。培养上清效价分别为1:256、1:16、1:8。亚类测定分别为IgM、IgG2_a、IgG2_4、染色体记数2A10为60±5,9B5为72±6。3种McAb的亲和常数分别为1.28×10~6M~(-1)、6.35×10~7M~(-1),3.64×10~8M~(-1)。特异性检测表明3种McAb与人Hb及人红细胞的亲和力明显高于其它种类动物的红细胞,与无关蛋白无结合活性。用这些McAb检测Hb最低可测到1υg水平,检测人红细胞可检测到4～8个RBC/ml(相当于90～190ngHb/ml)。大大高于目前临床常用的测定潜血方法。     

抗利尿激素单克隆抗体的制备及初步应用

作者应用B淋巴细胞杂交瘤技术,成功地建立了分泌抗抗利尿激素(ADH)的McAb细胞株,所获的3株细胞分泌的McAb分别为IgG1,IgG2a,IgG2b。其诱生腹水滴度可达1×10~(-5)～5×10~(-5),灵敏度为2.5ng/ml。抗体亲和力K值在(3～4)×10~(-9)L/M之间,受温度影响明显。McAb与11种神经肽进行竞争抑制试验,均无交叉反应。静脉注射McAb可使新西兰兔尿量明显增加。用免疫组化的方法对大鼠下丘脑神经细胞进     

以人IgG作免疫原同时获取抗人γ重链及κ、λ轻链单克隆抗体的研究

本文报道用纯化的IgG免疫BALB/c小鼠,同时获得抗人γ重链及抗κ、λ轻链三种单克隆抗体。经鉴定,抗人γ重链McAb只与IgG反应,不与其它Ig及轻链反应。抗κ及λ链McAb除分别与游离的κ、λ轻链反应外,也与和Ig分子中重链结合的κ、λ反应。免疫电转印法测定,抗γ链McAb识别分子量为50KD的重链抗κ、λMcAb识别分子量为22KD的轻链。将所得抗κ、λ单克隆抗体分别与正常人周血单个核细胞进行反应,染色结果表明κ链表达与λ链表达细胞之比为2∶1;两种抗体配对混合后的反应结果与多克隆抗体Sm Ig一致。实验结果表明所获抗体符合抗γ、κ、λ单克隆抗体的特点。     

以人IgG作免疫原同时获取抗人γ重链及κ、λ轻链单克隆抗体的研究

本文报道用纯化的IgG免疫BALB／c小鼠，同时获得抗人γ重链及抗κ、λ轻链三种单克隆抗体．经鉴定，抗人γ重链McAb只与IgG反应，不与其它Ig及轻链反应。抗κ及λ链McAb除分别与游离的κ、λ轻链反应外，也与和Ig分子中重链结合的κ、λ反应。免疫电转印法测定，抗γ链McAb识别分子量为50KD的重链抗κ、λ McAb识别分子量为22KD的轻链。将所得抗κ、λ单克隆抗体分别与正常人周血单个核细胞进行反应，染色结果表明k链表达与λ链表达细胞之比为2；1：两种抗体配对混合后的反应结果与多克隆抗体SmIg一致。实验结果表明所获抗体符合抗γ、κ、λ单克隆抗体的特点。     

抗伊氐锥虫表膜抗原单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立及其在检测循环抗源(CA)中的应用

本文利用淋巴细胞杂交瘤技术,建立了三株抗伊氏锥虫表膜抗原的McAb杂交瘤细胞系(1C_2、2A_3、5B_7)。鉴定结果:①诱生的腹水效价为1C_2 2×10~(-4)、2A_3 4×10~(-4)、5B_764×10~(-4),培养上清效价为1C_2 1/512、2A_3 1/512、5B_7 1/1024。②三株细胞所产生的McAb均为IgM类免疫球蛋白。③染色体数为1C_2 82、2A_3 96、5B_7 106条。④McAb在伊氏锥虫作抗原定位,均结合于虫体表面。⑤与伊氏锥虫表膜以外的抗原成分反应较弱,与锥虫     

抗重组人表皮生长因子单克隆抗体的制备及生物学特性鉴定

目的　制备出高效价的抗重组人表皮生长因子 (EGF)单克隆抗体。方法　以重组人表皮生长因子作为抗原 ,免疫Balb/c小鼠 ,以未免疫的Balb/c小鼠脾细胞为饲养细胞 ,运用细胞杂交瘤技术制备 ,间接ELISA法筛选产生针对人表皮生长因子的单克隆抗体细胞株 ;以体内诱生法产生腹水 ,并采用ProteinA Sepharose柱对其纯化 ,快速定性试纸鉴定McAb的Ig亚类 ,采用间接ELISA法相加实验鉴定抗原识别表位。结果　获得 3株产生针对人表皮生长因子的单克隆抗体细胞株EGF B2 、EGF C7、EGF A8,Ig亚分别为IgG1κ型 ,IgG1λ型 ,IgG3 κ型 ,亲和力常数分别为 2 .76× 10 10 、3.2× 10 9、1.4 5× 10 9。结论　成功制备 3株稳定分泌抗rhEGF的杂交瘤细胞株 ,产生的McAb特异性好 ,亲和力高 ,为探讨EGF的作用机制及临床应用奠定了基础 ,为肿瘤的诊断与治疗提供具有实用价值的研究工具 ,此外 ,为EGF的纯化提供实验材料     

抗尿激酶单克隆抗体的研究——Ⅰ.分泌抗尿激酶单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立

用市售的尿激酶(UK),免癌BALB/c小鼠。取脾细胞,与小鼠骨髓瘤细胞FO融合,获得六株分泌抗尿激酶单克隆抗体的杂交瘤细胞,分别命名为1UB_5、1UD_2、3UA_2、3UD_(12)、3UG_2、3UH_7。其中,1UB_5及1UD_2连续传代培养4个月以上,其培养液抗体的ELISA效价仍为10~(-2)～10~(-3)。两株细胞经扩大培养后,注入C_(57)×BALB/c杂交后的F_1代小鼠,诱生的腹水抗体效价为5×10~(-6)～10~(-7)1UB_5、1UD_2所分泌的抗体经ELISA鉴定,分属IgG_1和IgG2a。用高纯度的低分子量UK包被,ELISA检测后表明,两株细胞所分泌的为抗高分子量UK的McAb。 抗UK的McAb用于粗制品UK的纯化及监察某些肿瘤发生与发展的进一步工作正在进行之中。     

骨髓瘤蛋白(IgDλ)独特型单克隆抗体的制备

本文用从1例骨髓瘤患者(IgDλ)尿中提取的λ链作为抗原,免疫Balb/c小鼠,通过两次融合,分别经3～4次克隆后获得86株分泌单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞,经鉴定其中15株为抗独特型McAb。其中12株仅与同源性λ链和IgD反应,不与正常人λ链,k链,IgG、IgA、IgM、IgD、IgE及白蛋白(HSA)和一系列副球蛋白反应.间接免疫荧光法证明,抗独特型McAb与骨髓瘤患者外周血淋巴细胞和骨髓细胞阳性率高达23%,不与正常人群外周血淋巴细胞和骨髓细胞反应,其中部分McAb与实验室培养的浆细胞瘤株呈现阳性反应.     

Annexin A2单克隆抗体制备及初步鉴定

制备Annexin A2特异性单克隆抗体(McAb),为Annexin A2的体内外功能的研究提供有力的抗体工具。以原核表达的全长p36蛋白(Annexin A2单体)免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术制备针对Annexin A2的McAb。以间接ELISA法筛选出目的杂交瘤细胞株并进行染色体计数;分析McAb的亚型,检测其效价、浓度及亲和常数;以细胞荧光染色,Western blot和RT-PCR鉴定McAb特异性。结果得到1株能稳定分泌特异性针对p36的McAb的细胞株F8,其抗体亚类重链为IgG2a,轻链为κ型;腹水纯化后效价为1∶4 000;亲和常数为3.4×109L/mol。成功获得了能稳定分泌AnnexinA2特异性McAb的细胞株。     

抗鸡巴氐杆菌荚膜抗原及菌体表面抗原的单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立

用美国标准菌株×75(5:A)、P1059(8:A)制备荚膜A型抗原及×75和P1059菌体抗原,分别免疫BALB/c小鼠,取脾细胞分别与Sp 2/O、NS-1、NS-0骨髓瘤细胞融合,用ELISA检测建立了抗荚膜A型杂交瘤细胞系2株(1B_1、2B_7),抗×75菌体表面抗原的杂交瘤细胞株13株(1A_7、1A_6、1D_4、1D_(10)、2B_5、2A_3、3C_1、5C_3、2C_2、1B_5、1A_4、3D_6、4A_7),抗P1059菌体表面抗原的杂交瘤细胞株1株(3B_7)。     

抗单纯疱疹病毒单克隆抗体的研究——Ⅱ、单克隆抗体介导ADCC效应的探讨

本文用HSV-1SM44株感染BHK细胞,经放射性同位素~(51)Cr标记制备靶细胞,以正常小鼠脾细胞为效应细胞,应用5株抗HSV McAb,建立了McAb介导ADCC-~(51)Cr释放试验的测定方法,对McAb介导的ADCC效应测定的有关试验条件做了选择,确定了最适工作条件。ADCC测定结果表明,5株抗HSV McAb介导ADCC的活性不同,McAb 1A12,2A8,1G8无ADCC活性;而1D10和2C5 2株McAb 1:10稀释时的~(51)Cr释放率分别为27.09和25.07％,进一步稀释至10~(-2)或10~(-3)时,这2株McAb仍有ADCC活性。结果提示,不同的HSV抗原决定簇诱导产生的抗体,在介导ADCC免疫保护作用上是有差异的。并为McAb用于临床治疗HSV感染的可能性提供了实验资料。     

O1群小川型霍乱弧菌单克隆抗体的制备与鉴定

目的制备抗O1群小川型霍乱弧菌(VibriocholeraeO1serotypeOgawa)特异性单克隆抗体(McAb),为霍乱的早期快速诊断提供有力的抗体工具。方法以灭活的O1群小川型霍乱弧菌免疫Balbc小鼠,通过杂交瘤技术制备针对O1群小川型霍乱弧菌的McAb,以间接ELISA法对所需的杂交瘤细胞株进行筛选,分析其亚类,检测其效价及相对亲和力,以间接ELISA和Westernblot鉴定McAb特异性,并进行McAb结合表位分析。结果融合了602株能分泌抗O1群小川型霍乱弧菌McAb的杂交瘤细胞株,最后得到5株能稳定分泌特异性的针对该McAb的细胞株,其抗体亚类分别为3株IgG1,1株IgG2b,1株IgG3;腹水效价均达1×10-6;亲和常数在1×108～1×109之间。间接ELISA法及Westernblot证实所获的McAb可与O1群小川型霍乱弧菌发生特异性反应。ELISA相加实验结果显示除有2株McAb识别相同的抗原表位外,其余均识别不同的抗原表位。结论获得霍乱弧菌O1群小川型特异性McAb,为O1群小川型霍乱早期快速诊断和发病机理的研究提供基础。     

单克隆抗体亲和层析法纯化HFRS病毒血凝素抗原的初步研究

用蔗糖-丙酮法从HFRS病毒陈栋感染的乳小白鼠鼠脑中提取粗制血凝素,将此粗制血凝素通过抗HFRS病毒血凝素McAb 3G_1与Sepharose 4B偶联的免疫吸附柱,获得初步纯化的HFRS病毒血凝素抗原,经鉴定具有较高的血凝滴度和较好的免疫原性。用SDS-PAGE和Wes-tern-blot技木分析该纯化的血凝素抗原,并与同法纯化的正常鼠脑抗原比较,证明该特异性血凝素抗原分子量为5×10~4道尔顿。用2株抗HFRS病毒以及10株抗HFRS病毒血凝素McAb,以ELISA阻断试验分析纯化50K血凝素,结果有10株McAb可阻断McAb3 G_1与其结合,其抗原决定簇之间有部分相同或重叠,提示这些具有不同特性的抗原决定簇确实位于同一结构蛋白上。以上结果表明,该50k血凝素蛋白特性及结构均较复杂,尚待进一步研究。     

放免技术分析MCAb 3D3与肺腺癌细胞株的体外结合特性

本文利用氯胺T碘标技术对肺癌单抗(McAb 3D3)体外结合特性进行分析,McAb 3D3与肺腺癌细胞株L342的结合常数为3.2×10~8mol~(-1),每个L342细胞表面McAb 3D3的平均结合位点数为2.5×10~6个。RIA观察各种处理因素对L342细胞表面结合位点与~(131)I-McAb 3D3结合抑制率的影响,1％NaIO4、0.2％蛋白酶K、100％甲醇和100％丙酮的结合抑制率分别为72％、46％、14％和16％。结果提示,McAb 3D3所针对的3D3抗原是一种糖蛋白。     

抗福氏痢疾杆菌单克隆抗体的制备及其特性研究

本文用福氏痢疾杆菌4a、4b煮沸致死菌体免疫BALB/c小鼠,取其脾淋巴细胞在PEG介导下与Sp2/0细胞融合,经筛选、克隆化获得3株抗福氏痢疾杆菌McAb的杂交瘤细胞系。经连续传代6个月、液氮冷存6个月后,复苏仍能稳定分泌高效价的McAb。经鉴定,3株代号为401、420、421的McAb的Ig类型为IgG2b、IgG3和IgG3,轻链为λ、κ、κ;染色体数目为101～105条。交叉试验表明,3株McAb与志贺氏、宋内氏、鲍氏菌及常见肠道菌如大肠杆菌,变形杆菌、枯草杆菌、伤寒杆菌、鼠伤寒沙门氏菌、克雷伯氏菌、小肠结肠耶氏菌等及革兰氏阳性杆菌等均不发生交叉反应。McAb的表位分析表明,McAb真正识别的表位在福氏菌脂多糖的特异性多糖即O-侧链上,从而进一步证实了McAb的特异性。     

抗人尿激酶单克隆抗体制备和鉴定

用人高分子量尿激酶(HMW-UK)为抗原,通过杂交瘤技术获得了两株阳性杂交瘤细胞(2B8、3A2)。采用葡萄球菌 A 蛋白(SPA)亲和层析或 Water's650快速蛋白分离系统纯化抗 UK 单克隆抗体(McAb).3A2McAb 为 IgG 1亚类,特异地识别 HMW-UK 和低分子量 LMW-UK,抑制 UK 活性,表明3A2McAb 所作用的位点为 UK 的 B 链,即活性中心。EIA 测定3A2McAb 与 UK 的亲和常数为8.43×10~8M~(-1)。2B_8McAb 亦为IgG_(?)亚类,特异地识别 HMW-UK 及其氨基端1～135氨基酸片段(ATF),不抑制活性,EIA 测定2B_8McAb 与UK 的亲和常数为2.8×10~9M~(-1)。2B_8McAb 可用于导向溶栓的研究以及 UK 与其受体间反应的研究。     

抗重组人白细胞介素18单克隆抗体的制备与特性研究

目的 :获得有生物活性的小鼠抗重组人白细胞介素 18(rhIL 18)单克隆抗体。方法 :采用重组hIL 18免疫BALB C小鼠 ,应用杂交瘤技术 ,ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞株并经多次克隆化。结果 :建立了 2株小鼠抗hIL 18单克隆抗体杂交瘤细胞 1C7和 1F5 ,染色体数目分别为 92条和 90条 ,所分泌的抗体分别为IgG2a和IgG1,轻链均为κ型 ,腹水IgG抗体经亲和层析法纯化后纯度达 95 %以上 ,效价为 1× 10 - 4和 1× 10 - 5,Westernblot显示 2株单抗均能特异性识别 18 3kD处的rhIL 18蛋白。 1C7单抗的亲和常数Ka=1 7× 10 5,1F5的亲和常数Ka=1 3× 10 5。 2株单抗识别不同抗原表位。结论 :制备的 2株单抗为进一步研究IL 18的分子结构、生物学功能及其与免疫相关性疾病的关系提供了实验材料。     

脂蛋白(α)单克隆抗体对抗原决定簇的测定及应用研究

应田淋巴细胞杂交瘤技术,建立了4株抗人血清脂蛋白(α)(LP(a))杂交瘤细胞株(BH6、BH7、BH11和BH21),并以制备的单克隆抗体(McAb)对其抗原决定簇及免疫学特性进行了分析。Ig亚类测定:BH6为IgG1,BH7、BH11和BH21均为IgG2a,腹水效价为1×10~(-7)。特异性测定:LP(α)McAb与载脂蛋白(apo)AⅠ、AⅡ、B、CⅠ、CⅡ、CⅢ、E,人血清白蛋白,纤维蛋白溶酶原(pg)没有交叉反应。单抗相加试验和双抗体竞争试验结果证实,BH6和BH21为识别LP(α)上同一抗原决定簇的McAb;BH7和BH11则为针对LP(α)上另一抗原决定簇的McAb。分别利用单株和混合株McAb标记酶建立了可应用于人血清LP(α)含量测定的ELISA双抗体夹心法。     

两株抗鸡CARP单克隆抗体的制备及其生物学特性鉴定

目的:制备抗鸡CARP单克隆抗体(McAb)。方法:克隆并原核表达鸡CARPN端110个氨基酸,纯化CARP蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞融合,采用间接ELISA方法筛选阳性克隆;并利用ELISA、Western blot方法测定其效价和特异性。结果:获得2株能够稳定分泌抗鸡CARP的McAb杂交瘤细胞株,命名为4A8和4E6,亚型都属于IgG1,轻链为κ链;抗体腹水效价分别为3.2×104、1.28×105。Western blot检测到这两株抗体能够识别鸡CARP蛋白。结论:成功获得了2株能识别鸡CARP的杂交瘤及其分泌的特异性McAb。     

兔抗单克隆个体基因型抗体的制备鉴定

利用具有抑制恶性疟原虫生长能力的94D_1株单克隆抗体(McAb)免疫家兔。得到抗血清后,经Seharose 4 B—正常BALB/c小鼠IgG固相反复吸附3次以上,以除去其抗同种型和同种异型抗体,然后再经Sepharose4 B—9~4D_1株McAb亲和层析柱提纯,得到抗9_4D_1个体基因型抗体。这种抗体经免疫双扩散、IFA封闭试验、SPRIA等方法鉴定,证明具有较高的特异性。在双扩散中,仅与9_4D_1株McAb产生沉淀线;在IFA封闭试验中,能抑制