Ⅰ型登革病毒感染后不同病程病毒核酸及其IgM抗体的变化规律

目的 探讨Ⅰ型登革病毒感染后病毒核酸及其IgM抗体在患者体内的变化规律,为指导临床快速、准确地诊断登革热提供理论支持.方法 回顾性分析2014年7-11月收集的Ⅰ型登革病毒感染者临床资料和血清标本,应用实时荧光定量RT-PCR和ELISA法分别检测病毒核酸和IgM抗体,分析不同病程两者的变化规律.结果 共检出222例阳性患者,其中病毒核酸阳性137例,IgM抗体阳性146例,两者同时阳性61例.病程急性期(发病l～5d)病毒核酸阳性率为75％ ～ 100％,IgM抗体阳性率在发病第1～2天较低,但第3～5天快速升高至50％ ～ 70％;进入恢复期(发病6～10 d)病毒核酸阳性率即快速降低,8d后仅20％左右,但IgM抗体阳性率显著升高达95％～100％.急性期和恢复期病毒核酸与IgM抗体检测结果构成比差异有统计学意义(x2=63.41,P＜0.05).结论 Ⅰ型登革病毒感染者急性期病毒核酸阳性率在75％以上.恢复期IgM抗体阳性率在95％以上.根据病程合理选择检测方法,可提高登革热的诊断效率.     

珠海口岸入境人员登革热病毒感染监测与结果分析

目的 掌握珠海口岸对来自东南亚登革热疫区的船员中登革热病毒感染情况,为做好登革热病毒监测和预防工作提供政策依据.方法 采用ELISA方法检测288名入境船员和83名对照组的血清登革病毒特异性抗体.结果 288名不同国籍入境船员中,登革病毒IgG抗体阳性者181例,阳性率为62.85%,东南亚七国201名船员中登革病毒感染者162名,感染率为80.60%,地区构成比为89.50%,并有8例IgM抗体阳性;而中国和韩国船员87名,感染者为19例,感染率为21.84%,地区构成比为10.50%,登革病毒感染有明显地区差别(P＜0.01).45名珠海地区健康体检者,登革病毒IgG抗体和IgM抗体均为阴性,而38例不明原因发热者IgG抗体阳性者4例,阳性率为10.53%,但IgM抗体阴性,为继往感染.结论 针对珠海口岸入境人员登革病毒感染者的流行病学特点,建立完善的入境人员登革热病监测和预报系统很有必要,应选择敏感度高的检测手段,以防止漏诊和登革热病例的输入.     

输入性登革热的实验室诊断

目的通过实验室检测发现并确诊1例输入性登革热阳性病例。方法采用实时荧光(RT-PCR方法对病人血清进行检测,并对RT-PCR扩增产物进行核苷酸序列测定,检测结果使用BLAST进行比对;并采用间接ELISA法和捕获ELISA法分别检测登革热特异性抗体IgG、IgM。结果通过实时荧光RT-PCR方法检测出该病例呈登革热病毒核酸Ⅲ型阳性;对RT-PCR扩增产物进行序列比对,结果显示与登革病毒III型同源性很好;ELISA法检测登革热特异性抗体IgG、IgM均为阴性。结论通过实验室确诊,该病例为登革热阳性病例。     

西双版纳州2016年登革1型和2型病毒疫情的流行病学调查

目的 了解云南省西双版纳州2016年登革热流行特征和登革病毒血清型、基因型及其传播来源.方法 收集登革热病例资料,采集患者急性期血清标本,用RT-PCR法检测登革病毒核酸,并进行登革病毒C/PrM区核苷酸序列测定和进化分析.结果 2016年西双版纳州共确诊登革热病例53例,其中本地感染病例24例(勐腊县21例和景洪市3例),输入性病例29例(来自缅甸24例和老挝5例).流行月份为7-11月.病例年龄以20～49岁组为主,男女性别比为1.9∶1.蚊媒监测景洪5-10月布雷图指数(Breteau index,BI)为8.4～21,勐腊6-10月BI为7.6～18.2,勐海县9-10月BI为8.4～8.8,其它月份BI均小于5.从患者血清中获得13株登革病毒的C/PrM区基因核苷酸序列,进化分析表明,10株为登革病毒血清型1型(DENV-1)中的基因Ⅰ型(Genotype-Ⅰ,G-Ⅰ),3株为登革病毒血清型2型(DENV-2)的亚洲基因Ⅰ型(Asian genotypeⅠ,AG-Ⅰ),均为东南亚地区的优势基因型.无论DENV-1或DENV-2均与近几年云南省瑞丽市、临沧市和东南亚地区的同型流行株具有较近的亲缘关系.结论 西双版纳州2016年发生了包括本地和输入性病例并存的DENV-1 G-Ⅰ和DENV-2 AG-Ⅰ流行,并证实相邻的缅甸和老挝边境地区存在这两种血清型登革病毒流行,来自缅甸和老挝的输入性病例是引起西双版纳本地流行的主要原因.此为西双版纳首次发生DENV-1和DENV-2 AG-Ⅰ的本地流行.     

登革热的实验室早期诊断

目的建立登革热实验室早期诊断方法。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测登革病毒(DENV)NS1抗原,实时聚合酶链反应(Real-time PCR)检测DENV RNA并分型,对2014年广东省暴发流行期间疑似登革热的病例进行实验室早期诊断,并对两种检测方法进行比较分析。结果272例研究对象中267例临床诊断为登革热,DENV NS1抗原阳性245例,阳性率为90.1%(245/272);DENV RNA阳性256例,阳性率为94.1%(256/272)。256例核酸阳性病例中DENV-1型224例,占87.5%(224/256);DENV-2型15例,占5.9%(15/256);DENV-1型和DENV-2型同时阳性17例,占6.6%(17/256)。两种方法检出的符合率为93.0%(253/272)。结论2014年广东省登革热暴发流行主要以DENV-1为主,同时存在DENV-2型散在流行及少数DENV-1型和DENV-2型合并感染;ELISA方法检测DENV NS1抗原及Real-time PCR检测DENV RNA的两种检测方法,有助于登革热的早期检出。     

登革热疫点22年后的血清流行病学调查

目的了解曾发生登革热流行的旧疫区健康人群抗登革病毒的抗体水平及分布。方法在1986年曾爆发Ⅱ型登革热疫情的黄埔区鱼珠街一带,对2周内无临床症状的健康人群横断面采样,收集血清,ELISA法检测血清中抗登革病毒IgG抗体,并和非疫点健康人群抗登革病毒IgG抗体阳性率进行比较。RT—PCR法检测抗体阳性者血清中登革病毒。结果登革热疫点健康人群抗登革病毒IgG抗体阳性率为23.3％,非疫点健康人群抗登革病毒IgG抗体阳性率为3．8％,两者差异有统计学意义（P〈0．01）;登革热疫点人群抗体阳性率与年龄成正相关,0～20、21～30、31—40、41～50、51—60、61～70和70岁以上各年龄组的抗体阳性率分别为3．8％、5．8％、9．1％、26．5％、27．7％、32．5％和35．1％。30岁以下年龄组与31～40岁年龄组、31～d0岁年龄组与41～60岁年龄组、41-60岁年龄组与61岁年龄组间的抗登革病毒IgG抗体阳性率差异分别具有统计学意义（P〈0．05）。登革热疫点和非疫点15岁以下中小学生滤纸血样标本中均未检测到抗登革病毒IgG抗体。RT—PCR法未检测到抗体阳性者血清中有登革病毒。结论登革热疫点人群抗登革病毒IgG阳性率明显高于非疫点人群,疫点人群抗体阳性率随年龄增长而上升,提示登革热疫点在登革热疫情后,登革病毒可能在蚊媒体内存在低密度的循环。     

不明原因发热病人血清中2型登革病毒特异性抗体的检测

目的：了解贵州省夏秋季不明原因发热病人中2型登革病毒的感染情况。方法：收集贵州省不同地区2002和2003年夏秋季不明原因发热病人血清364份，用间接酶联免疫吸附测定（ELISA）检测抗2型登革病毒特异性IgM，IgG类抗体。结果：病人血清抗2型登革病毒特异性IgG类抗体平均阳性率为12．6％，特异性IgM类抗体平均阳性率为18．4％，特异性IgG，IgM类抗体均阳性为4．7％。42份病人双份血清中，抗2型登革病毒特异性IgG类抗体效价增高4倍或以上为13份（31％）；结论：贵州省夏秋季发热病人部分为2型登革病毒感染。     

河南省1例柬埔寨输入登革热病例的病原分子分型与全基因序列分析

目的鉴定河南省1例来自柬埔寨的登革热输入性病例的登革病毒(dengue virus,DENV)血清型和基因型及其序列特征和传播来源。方法患者血液标本来源于2019年国家疾病监测系统网络直报的登革热疑似病例。样品经快速检测DENV NS1抗原和IgM/IgG抗体,再提取血清中核酸,应用荧光RT-PCR法进行DENV血清型鉴定,同时用Vero和BHK-21细胞对血清标本进行病毒分离培养,阳性培养物扩增全基因组序列,进行序列系统进化分析。结果该病例实验室确诊为DENV 1型感染,并从血清标本中分离到病毒株,测序后拼接成全长10670 nt的全基因组序列,经系统进化分析,该病毒株属于DENV 1型基因Ⅰ型,与东南亚流行株具有较高同源性和较近亲缘关系。结论2019年河南省来自柬埔寨的输入性病例的病原体为DENV 1型基因I型,此为近年来东南亚输入我国的常见血清型和基因型。     

2008-2016年湖南省登革热病例及病原学监测结果

目的分析2008-2016年湖南省登革热病例及病原学监测结果,阐明近年湖南省登革热流行病学和病原学特征。方法对湖南省2008-2016年报告的输入性登革热病例信息进行流行病学三间分析,对蚊媒监测中采集的蚊虫开展登革热等虫媒病毒分离和检测,对2 802例健康人群开展IgG抗体水平检测和分析,对实验室确诊病例开展登革热病毒血清型分型,对部分毒株E基因进行序列测定,构建系统发生树。结果 2008-2016年湖南省累计报告输入性登革热病例156例,20～50岁占病例总数的71.37%,14个市州均有病例分布;327 600只白蚊伊蚊登革热等虫媒病毒检测均为阴性,未分离到登革热病毒;2 802例健康人群登革热病毒IgG抗体阳性率为6.71%,不同年龄组之间差异有统计学意义(χ~2=13.81,P=0.001);36例输入性病例存在4个血清型,DENV-1占63.89%,系统发生树提示DENV-1病毒主要来源于广东。结论湖南省无本地登革热感染病例,输入性病例以DENV-1血清型为主,健康人群抗体阳性率较高,存在输入性病例引起本地流行的风险。     

登革病毒NS1蛋白的原核表达及其在登革热快速诊断中的应用

【目的】重组表达1型登革病毒(DENV-1)和3型登革病毒(DENV-3)NS1蛋白,制备多克隆抗体,建立特异、敏感的登革病毒NS1抗原ELISA检测法。【方法】RT-PCR扩增DENV-1和DENV-3 NS1全长基因,经T-A克隆后,将目的基因分别与质粒PET30a(+)连接构建重组质粒,转化大肠杆菌BL21感受态细胞。阳性克隆经IPTG诱导表达,并对目的蛋白进行纯化。用纯化的NS1蛋白免疫BALB/c小鼠,制备鼠抗NS1多克隆抗体。应用NS1多克隆抗体建立登革病毒NS1抗原双抗体夹心ELISA检测法。【结果】成功构建了高效表达DENV-1和DENV-3 NS1蛋白的原核表达系统,获得纯化的NS1蛋白;用重组NS1蛋白免疫BALB/c小鼠后获得高效价(>1:30 000)的抗DENV-1和DENV-3 NS1的特异性抗体;用NS1多克隆抗体建立了登革病毒NS1抗原双抗体夹心ELISA检测法,该法可特异性检出登革病毒NS1抗原,敏感性达到1 ng/mL,与黄病毒的其它成员无交叉反应,表明具有良好的特异性。【结论】本研究成功构建了DENV-1和DENV-3 NS1蛋白的原核表达系统,高效表达了具有良好免疫原性及免疫反应性的DENV-1和DENV-3重组NS1蛋白;建立了检测登革病毒NS1抗原的双抗体夹心法,并证明该检测法具有较高的灵敏度和特异性,具有良好的应用前景。     

登革热38例临床分析

将1991年38例登革热患者临床表现与1985～1986年37例比较发现:消化道症状较多而出血较少。在大多数病例实验室结果显示心肌酶升高、肝、肾功能受损,外周血白细胞及血小板计数减少。38例中的大多数患者感染Ⅰ型或Ⅳ型登革热病毒。     

2013年广州市荔湾区登革热疫情流行病学特征分析

目的分析广州市荔湾区2013年登革热疫情流行病学特征,探讨预防控制措施。方法对各医院报告的荔湾区病例进行流行病学个案调查,采集病例血液样本开展血清学或病原学检测,并划定疫点进行蚊媒调查和病例搜索。结果广州市荔湾区2013年报告本地登革热病例781例,发病率为86.95/10万,无死亡病例;流行季节为7月下旬至11月下旬,高峰为9月下旬至11月上旬;男女性别比1∶1.14;发病年龄最大92岁,最小2岁,以中青年为主。全区疫情以城乡结合部为主,随后向老城区扩散,最后波及21个行政街,有8个较大暴发点;病毒型别主要为登革Ⅰ型。结论2013年荔湾区发生登革热大流行,持续时间长,波及范围广,疫情主要发生在城乡结合部。病媒控制不理想是疫情扩散的主要原因。荔湾区存在不利于登革热防控的自然和社会因素。     

2004年广州首例输入性登革热的临床分析

目的 了解2004年广州首例输入性登革热(DF)病例的流行病学、临床、病原学检查特点。方法对患者流行病学及临床资料进行回顾性分析,并采用酶联免疫吸附试验(ELISA)、免疫印迹法及免疫层析法检验登革病毒DEV-IgM／IgG抗体,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定DEV-RNA。结果患者起病前在印尼工作,回国第2天(7月16日)以发热起病,伴头痛、肌肉酸痛等症状,白细胞、血小板、T淋巴细胞计数减少。对多份血清进行平行检测,DEV-IgM持续阳性,DEV-IgG在起病第3周出现,RT-PCR测定DEV-RNA呈阳性。7月29日确诊为登革热。结论该患者为2004年广州市首例输入性登革热确诊病例,有流行病学依据,临床表现轻,抗体出现早,病情恢复快。     

广州市2002年登革热爆发疫情流行病学特征分析

目的：分析广州市2002年登革热疫情流行病学特征，为今后登革热预防控制提供依据。方法在全市建立和完善登革热疫情报告、监测和媒介监测网络；访视报告的每个病例或可疑病例，并在疫点周围展开病例搜索；采集登革热病例、疑似病例、疫点部分人群血作血清学或病原学检测；对非疫点、疫点蚊媒进行凋查。结果：广州市2002年共报告登革热病例1423例，发病率为20.14／10万，无死亡病例。疫情以城市居民区为主，随后向城郊、农村扩散，最后涉及全市12个区、县级市，共102个行政街(镇)。以街(镇)为单位计算，最高的发病率达212．4／10万。流行季节为5月中旬～11月下旬，高峰为7～9月；3～12月份全市平均布雷图指数为5．0～19．8；病毒为登革Ⅰ型；潜伏期为2～8d；爆发疫点人群隐性感染率达17％；各年龄组人群均易感，但低年龄组发病率略低。结论：2002年广州市发生登革热大流行，其持续时间、波及范围为广州市历史之最．总体流行态势处于半自然状态。早期病例未及时诊断，疫情发现迟，疫情控制不力是疫情扩散的主要原因。广州市存在有利登革热流行的自然、社会因素；近3年连续流行同一型别病毒，登革热是否有本地化趋势应密切关注。     

1978~2014年我国登革热的流行病学分析

自1978年以来,我国几乎每年都有登革热病例报告,表现为间断性流行,有每隔4~7年发生1次流行的趋势。高发年龄段
为20~60岁,男女发病比例接近;4个血清型均有流行,但以1型为主。1997年以后,登革热疫情得到一定的控制,但2013年开
始,登革热发病率明显上升,尤其是2014年,流行规模更是达到1986年以来的新高。截至11月23日广东省登革发病人数已经
达到44894 人,疫情的严重性已经引起高度关注。本文对1978年以来我国登革热的流行状况、地区和人群分布以及今年登革
热疫情大爆发的影响因素等进行了分析。
     

登革热的免疫病理研究

为了探索登革热的发病机理，本实验将登革热病毒注入30只乳鼠腹腔内，3d后取乳鼠脑、心、肺、肝、肾等切片，用间接免疫荧光法检测登革热病毒抗原。登革热病毒抗原定位于神经原、血管内皮细胞和单核巨噬细胞胞浆内。提示登革热病毒对内皮细胞的直接损伤作用在登革热的发病机理中起重要作用。     

血清新蝶呤检测对登革病毒感染的早期评估

目的探讨血清新蝶呤检测在登革病毒感染早期诊断中的潜在应用价值。方法检测110例登革热(DF)病人血中新蝶呤的含量,将其与50份水痘病人和40份流感病人血中新蝶呤的含量进行比较,155份来自健康献血员的血清作为对照。结果急性期登革热病人血中新蝶呤的平均含量为48.2nmol/L,高于水痘病人、流感病人和健康对照者血中的平均含量(分别为36.3nmol/L、18.8nmol/L和6.7nmol/L,P<0.001)。在已经确诊的登革热病人中,症状出现第一天即可检测到血中新蝶呤含量升高,且在病程第四天升至最大值54.3nmol/L。血中新蝶呤含量升高的水平与热程相关,因而可以用来确定病程长短。结论登革热病人血中新蝶呤含量较健康对照者以及其它病毒感染者显著升高(P<0.001),可以作为早期确定登革热严重程度的指标。     

广州市2011年登革热疫情流行病学特征分析

目的分析广州市2011年登革热疫情流行病学特征,为登革热预防控制工作提供参考依据。方法对广州市疫情监测与报告信息系统和实验室监测信息系统,以及相关的现场调查报告、疫情简报等进行统计与分析。结果广州市2011年报告登革热病例51例,本地感染33例,输入性病例18例,累计发病率0．4／10万,无死亡病例,输人性病例占全年报告病例的35．29％。除1、2、7月外,其余月份均有病例;共报告突发公共卫生事件1起,为海珠区龙凤街登革热暴发疫情（16例）。实验室监测表明,2011年广州市病毒流行株为登革I型病毒。结论2011年广州市登革热流行处于散发流行状态,输人性病例或异地来广州就诊的登革热病例对广州市登革热流行存在潜在风险。     

广州市番禺区2014—2016年155例登革热实验室检测分析

目的 分析广州市番禺区登革热患者的实验室检测结果 ,为登革热的诊断与防治提供依据。方法 对2014年5月—2016年10月在广州市番禺区中心医院确诊的登革热患者实验室检测结果进行回顾性分析。结果 155例登革热患者年龄4~88岁;男性患者66例,≥ 60 岁者51例。登革热患者外周血中登革热患者组AST、LDH、HBDH、CK、CK-MB、APTT和CRP分别为(75.39±63.75)U/L、(345.79±146.09)U/L、(247.47±95.27)U/L、(340.98±506.73)U/L、(42.30±47.91)U/L、(42.28±9.48)s和(7.45±10.41)mg/L,均高于健康对照组的(20.01±5.79)U/L、(184.95±42.31)U/L、(147.40±32.79) U/L、(97.85±43.84)U/L、(13.46±5.55)U/L、(29.76±4.90) s和(1.79±2.28) mg/L,差异有统计学意义(P<0.05);登革热患者组血白细胞均数、血小板均数、K⁺、Na⁺、CREA和PT分别为(2.84±1.50)×10⁹/L、(79.00±41.25)×10⁹/L、(3.49±0.40)mmol/L、(137.86±3.62)mmol/L、(89.78±24.81) μmol/L和(11.03±2.23) s低于健康对照组的(6.67±1.93)×10⁹/L、(237.49±61.25)×10⁹/L、(4.07±0.34) mmol/L、(139.33±1.73) mmol/L、(95.99±15.40) μmol/L和(12.39±1.25) s,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 2014—2016年期间广州市番禺区登革热病毒感染流行人群中大多数患者为成年人。患者血小板和白细胞计数明显减少,患者凝血功能障碍,部分患者出现肝功能、心肌功能异常及肾功能受损。