亲环素A蛋白表达水平与人脑胶质瘤分级相关性研究

目的:探讨亲环素A(CypA)蛋白表达水平与人脑胶质瘤分级之间的关系.方法:采用免疫组化ABC法观察不同病理级别人脑胶质细胞瘤标本45例和正常脑组织10例中CypA蛋白表达情况,比较各级之间表达率的差异.结果:正常脑组织CypA蛋白表达率为0,45例脑胶质瘤组织CypA蛋白总阳性表达率为60.0%,较正常脑组织有显著差异;各级脑胶质瘤CypA蛋白表达阳性率分别为Ⅰ级16.7%,Ⅱ级40.0%,Ⅲ级69.2%,Ⅳ级81.3%,低级别(Ⅰ～Ⅱ级)组为31.3%.高级别(Ⅲ～Ⅳ级)组为75.9%,两组之间CypA蛋白表达有显著差异(P＜0.01).结论:CypA蛋白的表达水平与人脑胶质瘤病理分级相关.     

重组日本血吸虫32kDa蛋白和铁蛋白联合免疫保护作用的研究

目的研究重组日本血吸虫32kDa蛋白和铁蛋白联合免疫对感染小鼠的免疫保护作用。方法大量制备重组日本血吸虫32kDa蛋白(rSjGST-Sj32)和铁蛋白(GMCSF-SjFer)。48只昆明小鼠随机分为A,B,C,D4组,每组12只。B组和C组分别为rSjGST-Sj32和GMCSF-SjFer免疫组,每鼠注射50μg重组蛋白加弗氏完全佐剂(FCA);D组为联合免疫组,每鼠注射50μg重组32kDa蛋白和50μg铁蛋白的混合物加FCA;A组为FCA对照组。分别于0、2、6w共免疫3次。第3次免疫后2w,每鼠经腹部皮肤攻击感染40±1条尾蚴,感染后第45天剖杀所有小鼠,比较各组间减虫率和鼠肝卵减少率。结果联合免疫组与FCA对照组相比,获得了36.53%的减虫率和68.44%的每条雌虫肝组织产卵减少率,而单独rSjGST-Sj32免疫组的减虫率及每条雌虫肝组织产卵减少率分别为22.80%和43.12%,均显著低于联合免疫组(P<0.05及P<0.001);单独GMCSF-SjFer免疫组分别为21.05%和41.91%,均显著低于联合免疫组(P<0.05及P<0.001)。结论rSjGST-Sj32蛋白和GMCSF-SjFer蛋白联合免疫可显著地提高这两种蛋白单独应用时的免疫保护作用。     

溃疡性结肠炎患者血清抗亲环素A抗体的检测意义

目的本研究对溃疡性结肠炎（Ulcerative colitis,UC）患者血清中抗Cyclophilin A抗体（ACA）水平进行了测定,旨在探讨ACA与UC的关系。方法用纯化的Cyclophilin A（CyPA）抗原包被微孔反应板建立检测ACA的间接ELISA方法,对67例活动期UC患者,75例内科其他疾病患者及100名健康体检者进行检测。并对49例经治疗缓解后的UC患者ACA水平进行随访。结果 ACA水平以吸光度（A）值（492nm）表示,正常对照组（n=100）A值为（0.09±0.05）,以（x±3s）为正常上限,其A值〉0.24为阳性。各组被检患者血清中ACA水平与阳性率（%）为UC（n=67）（0.33±0.20）,52.2%;内科其他疾病（n=75）（0.10±0.06）,1.3%。UC患者血清中ACA水平明显高于对照组（P〈0.01）及其他疾病组（P〈0.01）。对49例UC患者血清中ACA水平进行随访观察发现,活动期明显高于缓解期（P〈0.01）。结论以上结果提示ACA可能与UC有一定的关系,检测ACA可作为UC的参考诊断指标。     

亲环素A抑制剂研究进展

亲环素A是亲环素家族重要成员,是重要的免疫抑制药物环孢素A的体内结合蛋白,除了具有肽脯氨酰顺反异构酶活性,亲环素A在一系列生物途径中发挥作用,如蛋白折叠、装配、转运、神经生长调节和HIV病毒复制。总结了天然产物抑制剂、肽类抑制剂和有机合成分子等亲环素A抑制剂的发现和发展历程,对亲环素A抑制剂的研究进展进行了综述。     

日本血吸虫亲免素基因的扩增及序列分析

[目的]研究日本血吸虫亲免素基因编码序列的结构及进行初步的功能预测.[方法]用5'端和3'端锚定PCR从尾蚴文库中扩增,以获取日本血吸虫中国大陆株亲免素基因完整的开放阅读框(open readingframe,ORF);用生物信息学技术确认其是否为亲免素编码基因并进行结构功能的初步分析和预测.[结果]用5'端和3'端锚定PCR从尾蚴文库中获得了亲免素基因5'端和3'端所缺序列,得到的亲免素基因cDNA的总序列长为1 438 bp,其ORF长1 296 bp,编码431个氨基酸.利用生物信息学技术鉴定其为日本血吸虫亲免素基因的完整cDNA序列.并用RT-PCR从日本血吸虫尾蚴mRNA扩增出亲免素基因的ORF.[结论]成功获得了日本血吸虫亲免素编码基因的全长cDNA,为进一步的功能研究打下了基础.     

亲环素A 与恶性肿瘤的研究进展

亲环素家族最先被认为是环胞素A( Cyclosporine A，CsA) 的胞内结合蛋白，在进化上有高度的保守
性，广泛表达于原核生物和真核生物中，在人体内有七个主要的亚型。亲环素A( cyclophilin A，CyPA) 作为亲环
素家族中最重要的一员，在自然界中广泛表达，发挥着肽基脯氨酰顺反异构( peptidylprolyl cistrans isomeras，PPIase)
活性和分子伴侣效应，辅助细胞内蛋白质的正确折叠，参与免疫抑制，介导炎性反应，平衡细胞内外胆固醇。
CyPA 在许多恶性肿瘤中均表达增高，在某些恶性肿瘤中，CyPA 的表达增高与肿瘤的恶性转化密切相关。而且
CyPA 直接受信号通路中与促进肿瘤发展密切相关的两个关键调控因子: p 53 与缺氧诱导因子－1α 的调控。本
文详细描述了亲环素家族，尤其是CyPA 的异常高表达对恶性肿瘤形成、发展的重要作用。这些特征表明，CyPA
是一个潜在的恶性肿瘤靶向治疗的靶点。     

亲环素A与恶性肿瘤的研究进展

亲环素家族最先被认为是环胞素A（Cyclosporine A,CsA）的胞内结合蛋白,在进化上有高度的保守性,广泛表达于原核生物和真核生物中,在人体内有七个主要的亚型。亲环素A（cyclophilin A,CyPA）作为亲环素家族中最重要的一员,在自然界中广泛表达,发挥着肽基脯氨酰顺反异构（peptidylprolyl cistrans isomeras,PPIase）活性和分子伴侣效应,辅助细胞内蛋白质的正确折叠,参与免疫抑制,介导炎性反应,平衡细胞内外胆固醇。CyPA在许多恶性肿瘤中均表达增高,在某些恶性肿瘤中,CyPA的表达增高与肿瘤的恶性转化密切相关。而且CyPA直接受信号通路中与促进肿瘤发展密切相关的两个关键调控因子：p 53与缺氧诱导因子-1α的调控。本文详细描述了亲环素家族,尤其是CyPA的异常高表达对恶性肿瘤形成、发展的重要作用。这些特征表明,CyPA是一个潜在的恶性肿瘤靶向治疗的靶点。     

亲环素A与HIV－1的感染性

亲环素A（CyPA）是免疫抑制药物环孢素A的受体,是胞质内一种具有肽基－脯氨酸顺／反异构酶活性的蛋白质。CyPA在HIV－1的生命周期中能掺入病毒颗粒,其掺入为HIV－1的感染性所必需。本文简要综述CyPA在HIV－1复制中的作用,以及这方面的研究对抗HIV－1治疗的意义。     

亲环素A在心血管系统中的作用

亲环素A是一种在生物体内普遍存在的蛋白质,具有肽脯氨酰顺反异构酶活性,并作为一种分子伴侣,参与体内多种蛋白的成熟、折叠、活化、稳定及定位。亲环素A具有很多生物学功能,包括免疫调节、细胞生长、肿瘤发生和血管疾病。其中,它在心血管疾病中的作用涉及环孢霉素A和MAPK家族。本文就亲环素A在心血管系统中的作用作一综述。     

亲环素A与头颈部肿瘤的研究进展

亲环素家族(cyclophilins,Cyps)最先被认为是环胞素A(cyclosporine A,CsA)的胞内结合蛋白,是由一组具有肽基脯氨酰顺反异构酶活性(peptidyl-prolyl cis-trans isomeras,PPIase)的蛋白质所组成,目前,已知人类中有7大类16种亲环素蛋白。亲环素A(cyclophiline A,CypA)是亲环素家族中重要的一员,是最早被发现的亲环素,也是Handschumacher在1984年从小牛胸腺中最早被提纯的亲环素。CypA在病毒感     

日本血吸虫Nanos样蛋白基因的获得、表达及初步鉴定

目的 获得日本血吸虫Nanos样蛋白基因的cDNA 序列,克隆、表达和纯化原核蛋白并初步鉴定.方法 应用PCR法扩增获得日本血吸虫Nanos样基因的完整开放阅读框(ORF),将该基因亚克隆到原核表达载体pET28a(+),诱导表达并纯化融合蛋白.用纯化后的蛋白免疫家兔,制备该蛋白的多克隆抗体,分别用 ELISA 和 W...     

重组日本血吸虫副肌球蛋白的表达与纯化

用基因重组技术 ,将日本血吸虫副肌球蛋白 (rSj97)基因亚克隆至表达载体pQE30上。在IPTG诱导下 ,重组日本血吸虫副肌球蛋白在大肠杆菌中得以高效表达。通过快速蛋白质液相色谱仪 (FPLC) ,经TALON柱和离子交换柱两步分离纯化 ,获得大量高纯度的重组日本血吸虫副肌球蛋白 ,为水牛现场试验提供了充足的抗原     

Sjcb2基因原核表达载体的构建及表达

目的 探讨日本血吸虫（Schistosoma japonicum，Sj）中国大陆株（Chinese strain）组织蛋白酶B肽链内切酶基因（Cathepsin B endopeptidase）的原核表达载体pWR450-1的构建及表达情况。方法根据Genbank中Cathepsin B endopeptidase全序列（Genbank登录号为AY226984）设计特异性引物应用聚合酶链反应技术扩增基因全长，克隆入pUCm—T载体，酶切后亚克隆入原核表达载体pWR450-1并进行表达；利用SDS—PAGE及Western blotting观察日本血吸虫组织蛋白酶B肽链内切酶表达情况。结果成功构建了Sjcb2／pWR450-1原核表达重组质粒，该重组质粒在大肠杆菌中可经IPTG诱导表达分子量约为86kD的融合蛋白，Western blotting分析表明，该融合蛋白能被兔阳性血清所识别。结论 日本血吸虫组织蛋白酶B肽链内切酶可在原核表达载体pWR450-1中表达，为研究其功能打下了必要的基础。     

心肝宝对兔日本血吸虫性肝损害保护作用的研究

目的采用酶组织化学技术，观察心肝宝对日本血吸虫性肝损害的保护作用。方法将实验家兔分为正常对照组、血吸虫感染组、血吸虫感染后用吡喹酮治疗组和血吸虫感染后经吡喹酮治疗再给心肝宝组。剖杀4组兔，立即取肝脏冷冻切片(15μm)，用酶组织化学方法观察SDH、MAO、Mg^2 -ATPase和ACP的变化。结果心肝宝治疗后家兔肝脏的SDH、MAO和Mg^2 -ATPase活性明显提高到最强阳性或强阳性，ACP活性明显下降为阳性。结论心肝宝对改善被血吸虫损害的肝脏的新陈代谢功能，提高肝脏的解毒，分泌、排泄胆汁的功能和保护肝细胞等有着极其显的作用。     

日本血吸虫重组SjTsp2/Sj29 ku蛋白疫苗对小鼠免疫效果的研究

目的探讨日本血吸虫重组Tsp2/Sj29 ku表膜蛋白疫苗对小鼠的抗病免疫效果。方法 pet32a/SjTsp2/Sj29 ku重组菌经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷( IPTG)诱导表达,制备纯化的重组蛋白。29只6周龄雌性昆明鼠随机分为蛋白疫苗组、硫氧还蛋白组和空白对照组,前两组各10只,空白对照组9只。蛋白疫苗组,第一次免疫每鼠经背部皮下多点注射用等体积弗氏完全佐剂乳化的50μg SjTsp2/Sj29 ku重组表膜蛋白,第12、24天每鼠皮下多点再次注射用等体积弗氏不完全佐剂乳化的50μg该重组蛋白。硫氧还蛋白组的免疫方法同蛋白疫苗组。空白对照组用生理盐水代替蛋白,免疫方法同前。末次免疫后第10天,每鼠经腹部皮肤感染日本血吸虫尾蚴(30±2)条。于感染45 d后剖杀全部实验小鼠,计算减虫率和减卵率。眼眶取血,分离血清,间接性ELISA法检测IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3和IgM抗体亚型,同时检测血清细胞因子γ干扰素( IFN-γ)、白介素4( IL-4)水平。结果 pet32a/SjTsp2/Sj29 ku菌经IPTG诱导可大量表达,经变性、复性获得纯化的日本血吸虫Tsp2/Sj29 ku重组表膜蛋白。蛋白疫苗组与空白对照组比较,减虫率和减卵率显著升高( P<0.05)。硫氧还蛋白组与空白对照组之间比较,减虫率和减卵率差异均无统计学意义( P>0.05)。蛋白疫苗组小鼠血清中IgG1、IgG2a、IgG2b显著高于空白对照组(P<0.05),而IgG3和IgM较空白对照组差异无统计学意义(P>0.05)。蛋白疫苗组小鼠血清IFN-γ、IL-4细胞因子显著高于空白对照组( P<0.01)。结论日本血吸虫 Tsp2/Sj29 ku重组表膜蛋白疫苗对小鼠抗感染有一定的保护性;该重组蛋白免疫引起的是 Th1/Th2混合型免疫反应。     

抗日本血吸虫病天然分子疫苗免疫猪血清筛选日本血吸虫尾蚴cDNA文库结果分析

目的通过天然分子疫苗免疫猪血清作为探针筛选日本血吸虫尾蚴cDNA文库,应用表达序列标签获得日本血吸虫新基因.方法制备天然分子免疫猪血清,将筛选的尾蚴cDNA文库中大肠杆菌XL1-Blue侵入大肠杆菌BM25.8后环化成质粒,筛选出已转入质粒的菌株.提取质粒DNA,进行测序,得到一个表达序列标签(EST).通过NCBI网站的BLASTx及BLASTn公共数据库,编辑分析EST序列并进行同源性比较.结果从26个克隆样品中筛选出8个阳性克隆,其中有一个新基因(GenBank登录号DQ097517),该基因全长861 bp,有完整的阅读框架,与蜜蜂(Apis mellifera)SMC3蛋白编码的mRNA基因序列同源性最高.结论疫苗免疫猪血清可作为筛选日本血吸虫新基因的有效探针,新发现1个日本血吸虫相关基因.     

日本血吸虫P14钙结合蛋白样蛋白基因真核表达载体的构建、表达和鉴定

目的 从日本血吸虫成虫cDNA中扩增出钙结合蛋白样蛋白SjP14编码基因,并亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+),制备重组分子疫苗.方法 提取日本血吸虫成虫总RNA,逆转录cDNA,设计引物常规PCR法扩增出SjP14编码基因,通过线性T克隆载体pGEM-T连接,亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+),经转染...     

Congenital infection of rabbits with Schistosoma japonicum and protective immunity of offspring

Background Recently congenital infection with Schistosoma japonicum (S. japonicum) has been domonstrated in pigs, rabbits, mice and dogs. We explored the rabbit as an animal model for the congenital infection of schistosomiasis japonica and assessed the effect of a congenital S. japonicum infection on the resistance of rabbit kittens to a postnatal challenge infection.Methods Sixteen pregnant New Zealand white rabbits were infected with a single dose of S. japonicum cercariae. The exposed animals were divided into three groups according to the gestation age at the time of infection. Diagnosis of prenatally acquired S. japonicum infection in the rabbit kittens was primarily based on serological tests in combination with parasitological and histopathological findings. Congenitally infected kittens were challenged percutaneously with 100 S. japonicum cercariae to assess the effect of a congenital S. japonicum infection on kitten resistance to a postnatal challenge infection.Results The overall prevalence of congenital infection in offspring of infected mothers was 20% (12/60). The congenital infection rate in group L (late gestation) was much higher than in group E (early gestation) and group M (mid-gestation) (P&lt;0.05). After a postnatal challenge infection, prenatally infected kittens had a 54.66% worm reduction rate, 41.45% egg reduction rate, and 51.76% granuloma size reduction rate compared to nave kittens.Conclusions This study demonstrates the possibility of congenital infection of S. japonicum in rabbits and the resistance of congenitally infected kittens to a postnatal challenge infection. These results have important implications not only for epidemiological investigations, but also in designing government control programs for schistosomiasis.     

日本血吸虫重组蛋白SjGST的表达纯化及单克隆抗体的制备和特性鉴定

目的：获取高纯度的日本血吸虫重组GST蛋白（rSjGST）,并制备单克隆抗体。方法：纯化rSjGST后,以其作为抗原,免疫Balb/c雌鼠,并用杂交瘤技术制备抗rSjGST的单克隆抗体,以ELISA方法测定抗体的效价,以蛋白质免疫印迹法测定抗体的特异性。结果：纯化出大量的高纯度rSjGST,并且筛选出能够稳定分泌抗rSjGST单抗的杂交瘤细胞株3C12。用试剂盒检测出单抗的亚型为IgG1。结论：依靠大肠埃希菌表达系统,高效表达出rSjGST,成功制备单克隆抗体,为血吸虫病免疫诊断提供了研究基础。