条件性恐惧记忆形成中大鼠海马CA1/CA3区丝裂原活化蛋白激酶p38表达变化

目的 探讨大鼠恐惧记忆形成过程中海马CA1/CA3区丝裂原活化蛋白激酶p38(p38MAPK)表达及活性变化.方法 电击组及对照组大鼠各9只,分别给予或不给足底电击,1h和24h 后检测大鼠的僵住反应,然后处死动物,分别提取海马CA1和CA3区蛋白,western blot检测p38 MAPK和磷酸化p38 MAPK表达情况.结果 电击组的大鼠在lh和24h的僵住反应的时间分别为(49.1±18.6)s,(75.7±19.6)s,明显高于对照组[分别为(14.0±4.5)s,(32.1±22.7)s],差异有统计学意义(n=9,P ＜0.05);在24h电击组大鼠海马CA1区p38 MAPK及磷酸化p38 MAPK (Thr180/Tyr182)表达平均灰度值比值分别为9.4±2.6和7.8±2.1,与对照组(1.0±0.1和1.0±0.2)比较表达显著增加(n=9,P＜0.05);24h电击组大鼠海马CA3区p38 MAPK及磷酸化p38 NAPK(Thr180/Tyr182)表达平均灰度值比值分别为6.2±3.3和2.6±0.6,与对照组(2.1±0.5和1.4±0.5)比较表达显著增加(n=9,P＜0.05).结论 条件性恐惧记忆形成中大鼠海马CA1/CA3区p38 MAPK蛋白表达升高,活性增强.p38 MAPK可能参与了条件恐惧长时记忆的形成.     

消退训练对大鼠条件性恐惧行为及海马CA1区突触超微结构的影响

目的 研究消退训练对大鼠条件性恐惧行为和海马CA1区突触超微结构的影响.方法 成年雄性SD大鼠40只,简单随机抽样分为正常组(n=8)、消退对照组(n=16)和消退组(n=16).在训练后不同时间(消退后7、21 d,恐惧建立后8、22 d)进行恐惧行为测试.采用透射电镜观察各组大鼠海马CA1区突触超微结构.结果 ①在消退后7d和21 d,消退组的消退保持成绩显著高于消退对照组(P＜0.05,P＜0.01),而与正常组无显著差异(P＞0.05).②消退训练后7d,消退组海马突触数密度显著高于消退对照组(P＜0.05),与正常组之间无显著差异(P＞0.05);消退训练后21 d,3组之间均无显著差异(P＞0.05).③消退训练后7d和21 d,消退组海马突触间隙宽度显著低于正常组(P＜0.05,P＜0.01),并且在消退训练后21 d,消退组突触间隙宽度显著低于消退对照组(P＜0.05).④与正常组相比,消退训练后7d和21 d,消退组PSD厚度均显著升高(P＜0.01);且在消退训练后21 d,消退组PSD厚度显著高于消退对照组(P＜0.05).⑤各组之间活性区长度均无显著差异(P＞0.05).结论 恐惧建立后24h进行消退训练能够部分改变条件性恐惧引起的海马CA1区突触超微结构的变化,减轻条件性恐惧大鼠的僵立行为.     

普萘洛尔对条件性恐惧大鼠恐惧记忆保持与海马CA3区神经元形态的影响

目的研究不同时间给予普萘洛尔对条件性恐惧大鼠恐惧记忆保持及海马CA3区神经元形态的影响。方法成年雄性SD大鼠24只,采用声音结合强烈足底电击建立大鼠条件性恐惧模型。大鼠建模成功后分为对照组(不给药,只在相应时间点进行恐惧水平测验)、立即给药组(15 min内给予普萘洛尔)和24 h后给药组(24 h后给予普萘洛尔),每组8只。给药组在建模后前3 d每天恐惧测试前给予普萘洛尔后再检测各组大鼠条件性恐惧记忆水平,于第20天完成恐惧记忆测试后处死大鼠,用高尔基染色法检测大鼠海马神经元形态和数量,电镜观察海马超微结构的变化。结果①条件性恐惧建模后,第1天3组大鼠恐惧水平差异无统计学意义(P>0.05);第2、3、20天时,两给药组大鼠恐惧水平逐渐降低,且3组大鼠在同一时间点恐惧水平差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01),立即给药组恐惧水平最低,对照组恐惧水平最高。建模后第20天,对照组大鼠恐惧水平仍然较高。②建模后第20天,两给药组海马神经元CA3区锥体细胞数量[立即给药组(4.94±2.67)个,24 h后给药组(4.65±1.98)个]均大于对照组[(3.58±2.03)个],其中立即给药组明显大于对照组(P<0.05)。③电镜显示对照组海马CA3区超微结构出现异常改变,而两给药组超微结构变化不明显。结论条件性恐惧水平与海马结构发生的形态学异常变化有关,而早期应用β受体阻断剂普萘洛尔阻断β受体抑制去甲肾上腺能神经系统活性,可以在一定程度上降低条件性恐惧、减轻海马神经元结构功能损害。     

损毁海马CA3区多巴胺能系统对大鼠条件性恐惧记忆的影响

目的 研究大鼠海马CA3区多巴胺(DA)能系统在条件性恐惧记忆形成与保持中的作用.方法 条件性恐惧训练前2周向双侧海马CA3区注入6-羟基多巴胺(6-OHDA)进行损毁,训练后用Western blotting检测前额叶皮层、CA1、杏仁体GluR1及NR2B的表达变化.结果 (1)与生理盐水组[(66.44±16.58)％,(73.43±23.57)％,(55.27±20.57)％]比较,6-OHDA损毁组恐惧记忆获得的僵住反应[ (65.58±5.33)％]差异无统计学意义(P＞0.05),短时恐惧记忆的僵住反应[(39.24±12.83)％]与长时恐惧记忆的僵住反应[(31.15±6.51)％]明显减少(P＜0.05).(2)与生理盐水组比较,6-OHDA损毁组大鼠前额叶皮层,海马CA1区的GluR1蛋白表达差异无统计学意义(P＞0.05),杏仁体BLA区的GluR1蛋白表达升高(P＜0.01).与生理盐水组比较,6-OHDA损毁组大鼠前额叶皮层的NR2B蛋白表达升高(P＜0.01),海马CA1区的NR2B蛋白表达差异无统计学意义(P＞0.05),杏仁体BLA区的NR2B蛋白表达降低(P＜0.01).结论 大鼠海马CA3区多巴胺能系统功能下调能损害恐惧记忆的巩固但不影响其获得,还可以调节其他脑区记忆相关蛋白的表达.     

大鼠脑缺血/再灌注后海马CA1区HSP90的表达

目的观察大鼠脑缺血/再灌注后海马CA1区热休克蛋白90（HSP90）的表达。方法应用免疫印迹法观察大鼠脑缺血/再灌注后不同时间点海马CA1区HSP90的表达。结果缺血/再灌注30 min后HSP90的表达开始增高,6 h达最高峰,持续升高至第3天,6 h后HSP90的表达与对照组相比较有显著性差异（P〈0.05）。结论大鼠脑缺血/再灌注早期可诱导海马CA1区HSP90的合成及表达增加,表明HSP90参与了脑缺血有关的病理及生理过程。     

海马CA3区突触结构在记忆中的变化

目的探讨突触结构的可塑性变化与记忆保持的关系。方法昆明品系1月龄小白鼠60只,进行一次性被动回避反应学习,在记忆形成前与后的不同时期取脑海马CA3区,用电子透镜检测其突触结构的变化。结果在学习后24h、记忆保持良好(步人潜伏期>300s)时,穿孔突触由学习前占突触总数的6. 3％增加到40.8％(P<0.01,其中轴棘穿孔突触为31.2％,轴树穿孔突触为9.6％);突触活性区长度(>320nm)由学习前占6.2％增至30.8％(P<0.05)。记忆减退(学习后6d)、消退(学习后12d)变化均逐渐减至接近学习前的水平。结论海马CA3区突触结构在一次性被动回避反应的记忆保持中有可塑性     

海马CA3区突触结构在记忆中的变化

目的探讨突触结构的可塑性变化与记忆保持的关系.方法昆明品系1月龄小白鼠60只,进行一次性被动回避反应学习,在记忆形成前与后的不同时期取脑海马CA3区,用电子透镜检测其突触结构的变化.结果在学习后24h、记忆保持良好(步入潜伏期>300s)时,穿孔突触由学习前占突触总数的6.3%增加到40.8%(P <0.01,其中轴棘穿孔突触为31.2%,轴树穿孔突触为9.6%);突触活性区长度(>320nm)由学习前占6.2%增至30.8%(P <0.05).记忆减退(学习后6d)、消退(学习后12d)变化均逐渐减至接近学习前的水平.结论海马CA3区突触结构在一次性被动回避反应的记忆保持中有可塑性变化.     

大鼠发育过程中海马CA1区nNOS的表达

目的 :研究出生后不同发育阶段大鼠海马CA1区nNOS的表达及形态学变化 ,分析nNOS的表达与海马神经元的发育、突触的形成及海马学习记忆功能的关系 .方法 :用免疫组织化学方法和图像分析对生后 1,2 ,3,4wk和 3mo龄及老龄 (2 4～ 2 8mo)大鼠海马CA1区nNOS的表达进行定位和定量分析 ,并进行光、电镜形态学检查 .结果 :大鼠海马CA1区nNOS免疫阳性细胞面数密度 :2wk (36 .2± 4 .2 )mm-2 和 3wk (33.1± 4 .1)mm-2 组高于 1wk (2 4 .9± 4 .8)mm-2 ,4wk(2 4 .6± 5 .9)mm-2 ,3mo (2 5 .4± 5 .6 )mm-2 和老龄组 (2 4 .3± 8.3)mm-2 (P <0 .0 1) ,而前两组之间及后 4组之间均无显著差异 (P >0 .0 5 ) .nNOS免疫阳性细胞积分吸光度值 :以 2wk(8.5± 2 .2 )和 3wk (8.1± 1.9)组为最高 ,其次为 4wk (4.9± 0 .5 )和 3mo (5 .2± 0 .9)组 ,1wk(3.3±0 .8)和老龄组 (3.2± 0 .7)最低 (P <0 .0 1) ;2wk和 3wk组之间、4wk与 3mo组之间、1wk和老龄组之间均无显著差异(P >0 .0 5 ) .结论 :NO与海马的发育、突触的形成和成熟以及学习记忆具有密切关系 .     

大鼠弥漫性脑损伤后海马CA1区IGF—1表达的变化

目的：探讨弥漫性脑损伤(DBI)后大鼠海马CAI区胰岛素样生长因子—1(IGF—1)表达的变化及意义。方法：用Marmarou方法制作大鼠弥漫性脑损伤模型，用免疫组织化学方法观察伤后不同时间大鼠海马CAI区IGF—1的表达。结果：致伤后海马CAI区IGF—l阳性细胞数3天后开始增加，5天后达到高峰，此后逐渐回落。结论：IGF一1参与了DBI的病理生理过程。可能为临床治疗重型颅脑损伤提供新的理论依据。     

出生后大鼠海马CA3区细胞增殖核抗原的表达变化研究

目的：为探讨大鼠出生后大脑海马发育规律。方法：应用免疫组化方法检测大鼠出生后第1天、2天、3天、5天、10天、20天、30天海马CA3区细胞增殖核抗原的表达。结果：出生后早期细胞增殖逐渐增多，第10天后逐渐减少。至第30天时停止繁殖。结论：大鼠海马CA3区神经细胞增殖在出生后仍能持续一段时间。     

血管性痴呆大鼠海马CA1区自噬及微管相关蛋白1轻链3的表达

目的 观察血管性痴呆(vascular dementia,VD)模型大鼠海马CA1区自噬及微管相关蛋白1轻链3 (microtubule-associated protein 1 light chain 3,MAP1LC3,LC3)的表达,探讨自噬在血管性痴呆发病中的可能作用。方法 大鼠随机分为假手术组(sham组)、血管性痴呆模型组(VD组)和Wortmannin自噬抑制剂组(WM组),每组又随机分为模型制备后1、2、4、8、12周5个亚组。采用四血管阻断法制作血管性痴呆模型,Morris水迷宫法检测学习记忆能力,透射电镜观察自噬体的形成,蛋白质印迹法检测LC3Ⅱ/LC3Ⅰ 的比值作为自噬活性的指标。结果 与假手术组相比,VD组大鼠平均逃避潜伏期延长(P<0.05或0.01),穿越平台次数减少(P<0.05或0.01);与VD组比较,WM组大鼠逃避潜伏期缩短(P<0.05或0.01),穿越平台次数增加(P<0.05或0.01)。VD组大鼠海马CA1区1周时神经细胞核膜凹陷,胞核浓缩,线粒体肿胀,可见自噬体、溶酶体;4周时自噬体、溶酶体数量显著增多;12周时仍可见自噬体。WM组神经元损伤较VD组减轻,自噬体数量减少。VD组大鼠海马CA1区LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值在1周时升高,4周时达到高峰,8周时开始下降,12周时仍较高。WM组各时间点LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值较VD组低,差异有统计学意义(P<0.05或0.01)。结论 血管性痴呆大鼠海马CA1区自噬活性被激活,可能参与了血管性痴呆的发生发展。     

大鼠海马CA3区突触素的增龄性变化

目的探讨海马CA3区突触素P38免疫反应产物的分布及增龄性变化的规律。方法SD大鼠分为幼年组（1～2月龄）、青年组（4～5月龄）、 中年组（11～12月龄）和老年组（≥24月龄）,常规石蜡海马连续冠状切片,尼氏染色、突触素P38免疫组织化学染色,图像分析仪测量其免疫反应阳性产物的光密度值。结果海马CA3区P38免疫反应阳性产物呈板层分布,主要分布在辐射层,其平均光密度（AOD）值以青年组最大,与之比较成年组、老年组均减少,以老年组减少最显著,各组之间差异有统计学意义（P＜0.05）。结论大鼠海马CA3区辐射层突触素P38含量随增龄而逐渐减少。     

Effect of behavior training on learning,memory and the expression of NR2B,GluR1 in hippocampus of rats offspring with fetal growth restriction

Objective:To study effects of behavior training on learning,memory and the expression of NR2B,GluR1 in hippocampus of rat's offspring with fetal growth restriction(FGR).Methods:The rat model of FGR was established by passive smoking method.The rats offspring were divided into the FGR group and the control group,then randomly divided into the trained and untrained group,respectively. Morris water maze test was proceeded on postnatal month(PM2/4)as a behavior training method,then the learning-memory of rats was detected through dark-avoidance and step-down tests.The expressions of NR2B and GluR1 subunits in hippocampal CA1 and CA3 areas were detected by immunohistochemical method.Results:In the dark-avoidance and step-down tests,the performance record of rats with FGR was worse than that of control rats,and the behavior-trained rats was better than the untrained rats,when the FGR model and training factors were analyzed singly.The model factor and training factor had significant interaction(P<0.05).The expressions of NR2B and GluR1 subunits in hippocampal CA1 and CA3 areas of rats with FGR reduced.In contrast,the expressions of GluR1 and NR2B subunits in CA1 area of behavior-trained rats increased,when the FGR model and training factors were analyzed singly. Conclusion:These findings suggested that the effect of behavior training on the expressions of NR2B and GluR1 subunits in CA1 area should be the mechanistic basis for the training-induced improvement in learning-memory abilities.     

Effect of behavior training on learning,memory and the expression of NR2B,GluR1 in hippocampus of rats offspring with fetal growth restriction

Objective： To study effects of behavior training on learning, memory and the expression of NR2B, GluR1 in hippocampus of rat＇ s offspring with fetal growth restriction（FGR）. Methods： The rat model of FGR was established by passive smoking method. The rats offspring were divided into the FGR group and the control group, then randomly divided into the trained and untrained group, respectively. Morris water maze test was proceeded on postnatal month（PM2/4） as a behavior training method, then the learning-memory of rats was detected through dark-avoidance and step-down tests. The expressions of NR2B and GluR1 subunits in hippocampal CA1 and CA3 areas were detected by immunohistochemical method. Results： In the dark-avoidance and step-down tests, the performance record of rats with FGR was worse than that of control rats, and the behavior-trained rats was better than the untrained rats, when the FGR model and training factors were analyzed singly. The model factor and training factor had significant interaction（P 〈 0.05）. The expressions of NR2B and GluR1 subunits in hippocampal CA1 and CA3 areas of rats with FGR reduced. In contrast, the expressions of GluR1 and NR2B subunits in CA1 area of behavior-trained rats increased, when the FGR model and training factors were analyzed singly. Conclusion： These findings suggested that the effect of behavior training on the expressions of NR2B and GluR1 subunits in CA1 area should be the mechanistic basis for the training-induced improvement in learning-memory abilities.     

氧化苦参碱对癫痫大鼠海马组织内ERK信号转导通路及NR2B表达的影响

目的研究氧化苦参碱（Oxymatrine,Oxy）对青霉素致痫大鼠海马内P—ERK1／2与NR2B表达含量的影响,探讨其抑制癫痫的可能机制。方法78只sD大鼠随机分为正常组、青霉素（Penicilin,PEN）致痫组、苯巴比妥钠（phenobarbital sodium,PBS）阳性药物对照组和Oxy预处理组,采用免疫组织化学SABC法检测大鼠海马内P—ERK1／2和NR2B阳性神经元在不同时间点的表达。结果与青霉素模型组比较,Oxy组1．5h大鼠海马内P—ERK1／2与NR2B6．0h组阳性细胞数减少（P〈0．01）。结论Oxy拮抗癫痫发作的机制可能与调节癫痫大鼠脑内的P—ERK1／2水平进而使NR2B的水平降低有关。     

Effects of extinction training on conditioned fear behaviour and synaptic structure in hippocampal CA1 area in fear conditioned rats

目的 研究消退训练对大鼠条件性恐惧行为和海马CA1区突触超微结构的影响.方法 成年雄性SD大鼠40只,简单随机抽样分为正常组(n=8)、消退对照组(n=16)和消退组(n=16).在训练后不同时间(消退后7、21 d,恐惧建立后8、22 d)进行恐惧行为测试.采用透射电镜观察各组大鼠海马CA1区突触超微结构.结果 ①在消退后7d和21 d,消退组的消退保持成绩显著高于消退对照组(P＜0.05,P＜0.01),而与正常组无显著差异(P＞0.05).②消退训练后7d,消退组海马突触数密度显著高于消退对照组(P＜0.05),与正常组之间无显著差异(P＞0.05);消退训练后21 d,3组之间均无显著差异(P＞0.05).③消退训练后7d和21 d,消退组海马突触间隙宽度显著低于正常组(P＜0.05,P＜0.01),并且在消退训练后21 d,消退组突触间隙宽度显著低于消退对照组(P＜0.05).④与正常组相比,消退训练后7d和21 d,消退组PSD厚度均显著升高(P＜0.01);且在消退训练后21 d,消退组PSD厚度显著高于消退对照组(P＜0.05).⑤各组之间活性区长度均无显著差异(P＞0.05).结论 恐惧建立后24h进行消退训练能够部分改变条件性恐惧引起的海马CA1区突触超微结构的变化,减轻条件性恐惧大鼠的僵立行为.     

大鼠海马CA3区神经元突触的老龄性改变

目的:观察老龄大鼠海马CA3区神经元突触超微结构的改变,探讨老龄动物海马学习记忆功能减退的形态学基础.方法:应用透射电镜技术,观察青年组(3～5月龄)和老龄组(24～26月龄)Wistar大鼠海马神经元的超微结构.结果:老龄组海马CA3区神经元的主要变化:突触连接缩短或间断、突触前后膜融合;突触小胞大量集聚、小胞大小不等;树突棘内棘器远离突触后膜,其扁平小囊增多并扩张.结论:老龄大鼠海马CA3区神经元突触发生了明显的变性改变,这可能是导致学习记忆障碍的形态学基础.