中国汉族人群CYP2D6、CYP3A4 SNP位点基因多态性分析

目的：通过对药物代谢酶CYP2D6和CYP3A4的相关单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism,SNP）筛选检测,获得其在中国汉族人群中遗传多态性分布的相关数据。方法：筛选11个关于CYP2D6、CYP3A4基因的SNP位点,取192份中国汉族无关个体健康自愿者的血液样本获得基因组DNA,根据单碱基延伸技术通过 GenomeLabTM SNPstreamR 基因分型系统进行SNP分型。结果：本次检测的11个SNP位点在研究人群中全部具有多态性（最小等位基因频率>0.01）,其中7个SNP（RS28624811、RS28670611、RS9623531、RS5758589、RS3735451、RS2246709、RS2404955、RS4646440）位点的等位基因频率在此人群与白种人相比差异具有统计学意义（P<0.01）。结论：汉族人群可能有继承特定的遗传信息,导致与其他人群具有不同药物代谢率。     

CYP3A4内含子10对CYP3A4基因表达的增强子作用

目的 探讨CYP3A4内含子10及其内SNP CYP3A4*1G对CYP3A4基因表达的调控作用.方法构建CYP3A4启动子启动转录的CYP3A4真核表达质粒, 将CYP3A4内含子10 (CYP3A4*1G野生型/突变型) 正向或反向插入该质粒的启动子上游, 从而构建出不同基因型、不同方向的CYP3A4内含子10调控的CYP3A4真核表达质粒.将构建好的各质粒分别转染入Hep G2细胞, 应用实时荧光定量PCR方法检测CYP3A4 m RNA表达水平.结果 构建的重组质粒经酶切验证与测序鉴定, 插入片段的序列和方向与预期完全一致.无论CYP3A4*1G野生型还是突变型, 反向组CYP3A4 m RNA表达水平均高于正向组 (P<0.01) ;而CYP3A4内含子10无论是正向还是反向, CYP3A4*1G野生型组CYP3A4 m RNA表达水平均高于突变型组 (P<0.01) .此外, 正向突变组CYP3A4 m RNA表达水平低于阳性对照组, 不但没有增强CYP3A4启动子的转录作用反而有所减弱.结论CYP3A4内含子10有类似于增强子的功能, 能够影响CYP3A4启动子对CYP3A4基因的转录, 且具有方向性和CYP3A4*1G等位基因依赖性.     

XRCC3基因多态性对AFB1-DNA加合物水平的影响

[摘要] 目的 探讨DNA修复酶基因X线修复交叉补体因子3（x-ray repair cross-complementing group 3, XRCC3) codon 241多态性对黄曲霉毒素B1（aflatoxin B1,AFB1）高污染区广西人群AFB1-DNA加合物水平的影响。方法 应用竞争性酶联免疫吸附法检测研究对象（966例）AFB1-DNA加合物水平,而XRCC3基因型分析则通过PCR-RFLP来完成。结果 (1)带有codon 241 Met等位基因的 XRCC3基因型（XRCC3-Thr/Met,XRCC3-Met/Met）与高AFB1-DNA加合物水平相关,其风险值分别为1.43 (1.08～1.89)和2.42 (1.13～5.22);(2) XRCC3多态性与长时间的AFB1暴露在AFB1-DNA加合物形成过程中存在协同作用(OR = 11.00,P < 0.01)。结论 AFB1在带有易感基因型XRCC3-Thr/Met和XRCC3-Met/Met的人群更易诱导产生DNA损伤（AFB1-DNA加合物）。     

可调控CYP4A1的逆转录病毒重组质粒的构建与鉴定

目的:运用分子生物学技术克隆CYP 4A1全长cDNA基因,进一步构建可由强力霉素诱导表达CYP4A1的逆转录病毒重组质粒。方法:运用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)从大鼠肝组织中扩增出CYP 4A1全长基因,克隆至pMD18-T载体,将构建正确的pMD18-CYP 4A1质粒采用双酶切亚克隆到逆转录病毒载体载体pRe-vTRE中,采用酶切反应、PCR鉴定和序列测定鉴定重组逆转录病毒载体pRevTRE/CYP 4A1;在脂质体介导下分别将质粒pRevTRE/CYP 4A1与逆转录病毒四环素调节质粒pRevTet-on转染至包装细胞PT67,分别经抗性筛选获得稳定产生病毒的包装细胞系后收集转染后的细胞上清。用荧光定量PCR测定病毒滴度。结果:经酶切鉴定、PCR鉴定和序列测定证实成功构建了pRevTRE/CYP 4A1逆转录病毒重组质粒;转染pRevTet-on的PT67细胞病毒滴度为7.2×1010copies/L,转染pRevTRE/CYP 4A1的PT67细胞病毒滴度为5.46×109copies/L。结论:成功构建了含四环素调控CYP 4A1基因的逆转录病毒重组质粒,建立了能产较高滴度逆转录病毒的包装细胞系,为CYP 4A1基因功能及其相关疾病的研究打下实验基础。     

CYP3A4和CYP286药物诱导剂体外筛选体系的建立

目的构建CYP酶药物诱导剂的体外筛选技术平台。方法利用双荧光素酶报告基因系统，将包含hPXR蛋白识别和结合调控元件的CYP3A4和286启动子序列插入报告基因上游，将表达载体和报告载体共转染HepG2细胞，用含有利福平或DMSO培养基培养48h后裂解进行双荧光素酶活性检测。结果经利福平处理的细胞裂解物荧光素酶比活性值与阴性对照组和溶剂组差异显著。结论本研究构建的CYP3A4和286体外筛选平台，可以有效地用于体外诱导剂的筛选。     

药物因素对CYP3A基因的调控

近年来对药物代谢酶CYP3A基因的遗传多态性的研究较多,作为参与药物氧化代谢的重要酶系,临床上约60%的药物由CYP3A代谢,许多经CYP3A代谢的底物同时又是它的诱导剂或抑制剂,因此阐明药物因素对CYP3A基因的调控对临床安全用药有非常重要的意义.     

药物因素对CYP3A基因的调控

近年来对药物代谢酶CYP3A基因的遗传多态性的研究较多,作为参与药物氧化代谢的重要酶系,临床上约60%的药物由CYP3A代谢,许多经CYP3A代谢的底物同时又是它的诱导剂或抑制剂,因此阐明药物因素对CYP3A基因的调控对临床安全用药有非常重要的意义。     

广东人群CYP3A4＊1G等位基因分布频率调查

目的 探讨CYP3A4＊ 1G等位基因在广东人群中的分布特征,为广东患者使用CYP3A4底物药提供参考依据.方法 提取192例广东人外周血DNA,分别用PCR扩增其CYP3A4基因跨越第10内含子20230G＞A位点的DNA片段,PCR产物用AfaⅠ酶切,通过酶切产物的电泳图谱判断基因型.结果 GG、GA、AA3种基因型的频率分别为63.5％、30.7％、5.7％.等位基因20230A即CYP3A4＊1G的频率为21.1％.结论 广东人群存在较高频率的CYP3A4＊1G等位基因,在使用CYP3 A4底物药时应密切关注患者是否存在该突变位点.     

酮康唑对健康成人肝细胞微粒体细胞色素P450同工酶3A4、1A2活性的作用

目的 观察酮康唑对健康成人肝细胞微粒体细胞色素P450同工酶3A4、1A2活性的作用,为临床上安全有效地联合用药提供实验依据.方法 采用健康成人肝细胞微粒体,分为对照组和处理组.酮康唑处理组分别加入不同浓度的酮康唑1 ml,对照组仅加入培养液,孵育15 min后再加入CYP450同工酶3A4和1A2的相应底物(分别为睾酮和非那西丁)再孵育20 min.反应终止后用高效液相色谱仪测量代谢产物(分别为6β-羟基睾酮与对乙酰氨基酚)的生成量,分别代表3A4和1A2的活性.结果 细胞色素P450同工酶3A4的相对活性百分比减小到对照组50%时(IC50)酮康唑的质量浓度为0.16mg/L.而同工酶3A4的相对活性百分比随质量浓度酮康唑增加逐渐减小,各处理组与对照组比较差异均有显著性意义(P＜0.05).低剂量细胞色素P450同工酶1A2的相对活性百分比处理组与对照组比较明显降低(P＜0.05),高剂量细胞色素P450同工酶1A2的相对活性百分比处理组与对照组比较则明显升高(P＜0.05).结论 酮康唑对健康成人肝细胞微粒体细胞色素P450同工酶3A4的活性有抑制作用.然而对细胞色素P450同工酶1A2的活性则是低剂量有抑制作用,衙高剂量有诱导作用.     

CYP3A4和CYP2B6药物诱导剂体外筛选体系的建立

目的构建CYP酶药物诱导剂的体外筛选技术平台。方法利用双荧光素酶报告基因系统,将包含hPXR蛋白识别和结合调控元件的CYP3A4和2B6启动子序列插入报告基因上游,将表达载体和报告载体共转染HepG2细胞,用含有利福平或DMSO培养基培养48h后裂解进行双荧光素酶活性检测。结果经利福平处理的细胞裂解物荧光素酶比活性值与阴性对照组和溶剂组差异显著。结论本研究构建的CYP3A4和2B6体外筛选平台,可以有效地用于体外诱导剂的筛选。     

CYP3A和MDR1基因多态性对环孢素A药代动力学的影响

环孢素A（CsA）属环状多肽化合物,作为基础免疫抑制剂广泛用于实体器官移植后的抗排斥反应,其主要经P-糖蛋白（P-gp）转运,细胞色素P450（CYP）3A酶代谢,CYP3A及多药耐药基因1（MDR1）的多态性可能影响CYP3A酶和P-gp的表达水平和生物活性,进而可能对CsA的药代动力学过程产生影响。本文就CYP3A和MDR1基因多态性对CsA药代动力学的影响进行综述,以期指导临床制定合理的个体化用药方案。     

宁夏回族人群CYP3A4*6等位基因多态性的研究

目的 了解宁夏回族人CYP3A4第9外显子的分布特点,为宁夏回族患者使用CYP3M底物药物提供参考依据.方法 收集到180例回族人群血样,应用聚合酶链反应(PCR)特异性扩增人CYP3A4第9外显子基因序列,对其进行测序;同时扩增产物用限制性内切酶HinfⅠ酶切,琼脂糖凝胶电泳后,观察酶切位点的限制性片段长度多态性(RFLP)图谱.结果 运用PCR-RHLP法分析了150例正常回族人、30例高脂血症回族志愿者基因的突变情况,发现有2例第17776位点有A插入引起移码突变,使2例杂合子CYP3A4基因第9外显子提前出现终止密码子.其中野生型纯合子频率为98.9%,杂合子频率为1.1%,突变型纯合子频率为0,突变等位基因频率为0.005.结论 本研究得到了CYP3A4第9外显子基因多态性在宁夏回族人群中的分布情况,为研究CYP3A4第9外显子基因多态性与临床药物效应的相互关系奠定了基础.     

注射用盐酸头孢他美对大鼠肝微粒体CYP1A2、CYP3A4和CYP2E1活性的影响

目的 研究注射用盐酸头孢他美对大鼠肝微粒体细胞色素P450(CYP450)酶系CYP1A2、CYP3A4和CYP2E1活性的影响。方法 将SD大鼠分成盐酸头孢他美给药组和生理盐水空白组,每组6只,雌雄各半,给药组尾静脉注射盐酸头孢他美50 mg/(kg·d),连续给药7 d,每天2次。HPLC法同时测定CYP450的3种同工酶特异性探针底物在SD大鼠肝微粒体内代谢产物生成量和原型探针底物降解量,判断酶亚型活性变化。分析柱Diamonsil C₁₈ (150 mm×4.6 mm,5 μm),流速1.0 mL/min。CYP1A2代谢样品测定条件为甲醇(0.1%甲酸)(A)-水(0.1%甲酸)(B),0~5 min: 18%A,5~10 min: 18%~60%A,10~15 min: 60%A,检测波长为247 nm;CYP3A4代谢样品测定条件为甲醇(A)-水(0.02%甲酸)(B),0~11 min: 40%~60%A,检测波长为223 nm;CYP2E1代谢样品测定条件为甲醇(A)-水(B),0~10 min: 37%~75%A,检测波长为287 nm。结果 探针底物及其代谢产物在测定浓度范围内线性关系良好(r≥0.999 7),精密度RSD<6％(n=5),提取回收率83.2%～97.5%。SD大鼠连续注射给予盐酸头孢他美后,CYP3A4的活性与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),可能存在诱导作用;CYP1A2和CYP2E1的活性与对照组比较差异无统计学意义 (P>0.05)。结论 静注给予盐酸头孢他美能诱导SD大鼠肝微粒体CYP3A4,对CYP1A2和CYP2E1没有诱导或抑制作用。提示经CYP3A4 代谢的药物在临床上与注射用盐酸头孢他美合用时,可能存在潜在药物-药物相互作用。     

CYP3A4 genetic polymorphisms predict cyclosporine-related clinical events in Chinese renal transplant recipients

Background  Cyclosporin A (CsA) is a substrate of both cytochrome P450 3A (CYP3A) and P-glycoprotein (P-gp), some of the single nucleotide polymorphisms (SNPs) in these genes are associated with interindividual variations in CsA pharmacokinetics. We studied the influence of these SNPs on the incidence of rejection and CsA nephrotoxicity, as well as pneumonia within one year after renal transplant and post-transplantation diabetes mellitus (PTDM), in order to find whether genetic evaluation may help to identify patients at risk and to modulate CsA therapy to optimize graft and patient outcomes.

Methods  A total of 208 renal transplant recipients receiving CsA were genotyped for ABCB1 (C1236T, G2677T/A, and C3435T), CYP3A4*1G, and CYP3A5*3 by direct sequencing method. Retrospective case control study was utilized to identify the association between CYP3A4*1G, CYP3A5*3, ABCB1 genetic polymorphisms and CsA-related outcomes.

Results  The patients with a CYP3A4*1G/*1G genotype were found to have a higher incidence of acute rejection compared with those with CYP3A4*1/*1.

Conclusion  CYP3A4*1G/*1G genotype predict increased risk of acute rejection, so genetic evaluation may partly help to identify patients at risk and to modulate CsA therapy to optimize graft and patient outcomes.

     

CYP2C19、CYP3A4基因多态性与十二指肠球部溃疡疗效的关系

目的检测肝脏细胞色素氧化酶CYP2C19、CYP3A4的基因多态性,并观察不同基因多态性患者予奥美拉唑治疗十二指肠溃疡的疗效,以明确CYP2C19、CYP3A4基因多态性对药物治疗效果的影响。方法65例十二指肠溃疡患者分别检测CYP2C19、CYP3A4基因多态性及幽门螺杆菌（Hp）,予奥美拉唑治疗及根治Hp治疗,观察治疗后腹痛缓解情况,并复查胃镜,观察溃疡缩小情况。结果在65例患者中,CYP2C19t3基因野生型为43例（66．15％）,突变型为12例（18．46％）,杂合型为10例（15．38％）,CYP3A4＊18未见基因多态性。CYP2C19＊3突变型腹痛缓解时间短于野生型及杂合型（P〈0．01）。治疗后2周CYP2C19＊3突变型患者溃疡缩小率大于野生型及杂合型（P〈0.01）,但治疗后4周无明显差异（P〉0．05）。结论在观察病例中可见CYP2C19基因多态性,未见CYP3A4基因多态性,CYP2C19基因多态性影响奥美拉唑治疗十二指肠溃疡的疗效。     

隐丹参酮对细胞色素P450酶CYP3A4和CYP2C9的影响

目的 研究丹参中脂溶性成分隐丹参酮对Chang肝脏细胞细胞色素P450酶（CYP450）CYP3A4、CYP2C9表达的影响,明确丹参主要成分对CYP450酶的作用,以阐明基于CYP450酶隐丹参酮与其他药物间相互作用的分子基础,为临床合理使用含隐丹参酮的丹参制剂提供依据。方法 采用CCK-8法考察隐丹参酮对Chang肝脏细胞活力的影响,以确定药物的给药剂量范围;通过Western bloting法考察隐丹参酮在给药后1、3和7 d对Chang肝脏细胞中CYP3A4和CYP2C9蛋白表达的影响;通过定量RT-PCR法考察隐丹参酮对Chang肝脏细胞中CYP3A4和CYP2C9 mRNA表达的影响。结果 给药1 d,隐丹参酮对CYP3A4蛋白及mRNA表达无显著影响。但随时间延长,给药3 d和7 d,隐丹参酮可抑制CYP3A4蛋白及mRNA的表达（P <0.05）。给药1、3和7 d,隐丹参酮对CYP2C9蛋白及mRNA的表达均无显著影响。结论 连续给予隐丹参酮可抑制CYP3A4 mRNA和蛋白的表达。提示临床在连续使用含隐丹参酮时,需要关注其与CYP3A4底物药物之间可能的相互作用。     

黄芩苷对Chang Liver细胞CYP3A4、CYP2C9和CYP2C19表达的影响

目的 在Chang Liver细胞中观察黄芩苷处理对CYP3A4、CYP2C9和CYP2C19表达的影响.方法 在Chang Liver细胞中分别加入DMSO 0.1% (v/v) (溶剂对照) 和不同浓度的黄芩苷 (0.01、0.1和1 μM) 24、36和48h后,用半定量RT-PCR的方法分别检测CYP3A4、CYP2C9和CYP2C19表达量的改变.结果 用不同浓度黄芩苷分别处理Chang Liver细胞24和36 h,CYP3A4、CYP2C9和CYP2C19的表达均呈现出增强的趋势;但是黄芩苷处理48 h后各浓度对CYP3A4和CYP2C9的表达产生显著的抑制效应 (P<0.01) . 结论黄芩苷对细胞中CYP3A4、CYP2C9和CYP2C19的表达具有影响作用,这种影响作用随药物处理时间不同而表现出双向效应.