降纤I号对体外培养肝星状细胞TGF-β的影响

肝纤维化是指肝脏慢性炎症或损伤导致肝脏及内纤维结缔组织异常增生,是所有慢性肝病共有的病理改变.目前认为肝星状细胞(HSC)的活化与增生是肝纤维化进展的中心环节[1],有众多的细胞因子参与其中,尤以转化生长因子β(TGF-β)最为关键,为此我们拟观察降纤I号对体外培养肝星状细胞增殖及TGF-β表达的影响.     

辛酰化和非酰化ghrelin对胰岛β细胞的作用

目的：探讨辛酰化和非酰化ghrelin对胰岛β细胞的作用及其作用途径。方法：分别用不同浓度辛酰化ghrelin及非酰化ghrelin作用于NIT-1胰岛β细胞,48 h后观察二者是否有促进胰岛β细胞增殖的作用,并随后用阻断剂NF449分别与辛酰化ghrelin及非酰化ghrelin共同作用于NIT-1胰岛β细胞,验证二者促进增殖作用途径是否为Gαs途径。结果：MTT法结果提示10^-9～10^-7mol/L ghrelin和10^-10～10^-7mol/L非酰化ghrelin均能促进胰岛β细胞增殖,并且二者都是通过Gαs途径促进胰岛β细胞增殖。结论：辛酰化ghrelin和非酰化ghrelin都通过Gαs途径促进胰岛β细胞增殖。     

高瘦素影响小鼠细胞因子分泌及脾淋巴细胞增殖的实验研究

目的：探讨高瘦素（Leptin）水平在不同免疫状态下对小鼠细胞因子分泌及脾淋巴细胞增殖状况的影响。方法：选用8周龄的清洁级BALB／c雄性小鼠共50只，分成5组，分别腹腔注射外源性鼠Leptin和Leptin抗体，形成小鼠的不同Leptin水平状态；应用普乐可复（FK506）将小鼠分为正常免疫和免疫抑制状态两类，两种状态各设对照组，测定脾淋巴细胞增殖情况，ELISA方法检测外周血中IL-2、IL-4、IFN-γ和Leptin的浓度。结果：正常免疫状态下，Leptin组的脾细胞增殖与对照组无差异，细胞因子除IFN-γ升高外，IL-2、IL-4均无差异；Leptin抗体组显示脾细胞增殖能力下降，各细胞因子测定显示差异；免疫抑制状态下，Leptin组的IL-2、IFN-γ水平上升、IL-4分泌降低，这种结果也在几乎所有体外加入Leptin的各组中出现。结论：Leptin可以起免疫调节作用，增加IFN-γ、IL-2的合成，降低IL-4的产生，使免疫应答向Th1细胞方向偏离。在正常免疫状态下，Leptin的免疫调节作用不明显，而在免疫抑制情况下，这种调节作用得到体现。     

糖尿病性白内障晶状体上皮细胞的Fas、P53基因表达

目的探讨糖尿病性白内障及老年性白内障晶状体上皮细胞(LEC)的凋亡与Fas、P53基因的关系。方法在白内障超声乳化手术中取糖尿病性及老年性白内障患者的晶状体前囊膜标本45例,应用光镜,电镜观察LEC的凋亡情况,应用RT-PCR定量检测Fas蛋白,P53蛋白在白内障LEC中的表达。结果两种白内障LEC中均有Fas,P53蛋白表达。Fas蛋白在糖尿病性白内障LEC中的表达平均是老年性白内障的13.34倍,P53蛋白在糖尿病性白内障LEC中的表达平均是老年性白内障的7.3倍,两者差异有统计学意义(P0.05)。结论两种白内障LEC均出现凋亡,Fas、P53基因在糖尿病性白内障LEC凋亡中起重要作用。     

茶多酚抑制人宫颈癌HeLa细胞增殖及其机制的研究

目的 探讨茶多酚(Tea Polyphenols,TP)对人宫颈癌HeLa细胞增殖的影响及其机制.方法 MTT比色法检测TP对HeLa细胞增殖的影响;荧光染色及DNA琼脂糖凝胶电泳分析等方法检测TP对HeLa细胞凋亡的影响;Western blot检测Bcl-2、Bax、P53蛋白表达.结果 TP处理HeLa细胞48 h后,细胞生长明显抑制,荧光染色可见明显的核固缩、碎裂现象;DNA凝胶电泳图谱观察到“梯子状”改变;随着药物浓度的增加,Bcl-2蛋白表达量下降,Bax、P53蛋白表达量增加.结论 TP抑制HeLa细胞的生长,诱导其凋亡,其作用机制可能是通过上调P53蛋白,直接激活Bax基因表达,同时抑制Bcl-2蛋白表达来诱导细胞凋亡.     

前列腺素E2对白细胞介素13诱导的肺成纤维细胞转分化的影响

目的：观察前列腺素E2（PGE2）对白细胞介素13（IL-13）诱导的肺成纤维细胞的影响。方法：采用体外细胞培养、免疫细胞化学技术、流式细胞术等技术,检测PGE2对IL-13诱导的成纤维细胞表达a-平滑肌肌动蛋白（a-SMA）的影响。结果：IL-13诱导肺成纤维细胞转分化为肌成纤维细胞（MF）,表达a-SMA增强（P〈0.01）,PGE2抑制了IL-13的诱导作用（P〈0.01）,单独应用PGE2对肺成纤维细胞转分化无影响。结论：PGE2可抑制IL-13对肺成纤维细胞的转分化。     

晶状体上皮细胞胞间通讯的研究进展

晶状体是眼的透明屈光介质系统中的重要组成部分，一旦发生混浊影响眼的功能，就被称为白内障。晶状体的透明性是其最主要的光学特性，除了因为晶状体内部没有血管和神经以外，也与晶状体细胞间格外紧密规整的排布有关。晶状体表面的上皮细胞能够终生保持分裂增殖能力，成熟的细胞不停地被新生的细胞所覆盖包裹，并逐渐向长梭形的纤维细胞分化，失去细胞器，最终被可溶性的晶状体蛋白所充盈。晶状体细胞不会因为死亡而脱落，所以晶状体的体积会随着年龄而有相应的增长。那么，对于可能超过百岁的人类，固态的、体积持续增大的这些大量的晶状体细胞，在没有血管的情况下是如何完成代谢和保持内环境相对稳定的呢？许多学者的研究都已经表明，     

不同浓度钙对人腹膜间皮细胞影响的实验研究

[目的]观察不同浓度钙对体外培养的人腹膜间皮细胞（human peritoneal mesothelial cells,HPMCs）及细胞外基质的影响.[方法]采用人腹膜间皮细胞株体外培养,用乳酸脱氢酶（LDH）和四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）评估细胞的活力和增殖能力;采用免疫细胞化学法来检测纤维连接蛋白（FN）的表达.[结果]不同浓度钙均可促进HPMCs增殖（P〈0.01）,而以1.25 mmol/L及1.0 mmol/L钙作用最明显,且呈时间依赖关系.不同浓度钙组与对照组相比均可明显升高LDH水平,其中以1.25 mmol/L钙的LDH水平最低（P〈0.01）,且呈时间依赖关系.2.0 mmol/L和1.75 mmol/L钙可明显上调FN的表达（P〈0.01）.[结论]高钙可明显损伤HPMCs及促进FN合成,其在腹膜纤维化的发生中可能起了一定作用;而浓度为1.25 mmol/L钙可保护腹膜,并在一定程度上有预防腹膜纤维化的作用.     

降纤Ⅰ号对体外培养肝星状细胞TGF-β的影响

肝纤维化是指肝脏慢性炎症或损伤导致肝脏及内纤维结缔组织异常增生，是所有慢性肝病共有的病理改变。目前认为肝星状细胞（HSC）的活化与增生是肝纤维化进展的中心环节，有众多的细胞因子参与其中，尤以转化生长因子β（TGF-β）最为关键，为此我们拟观察降纤Ⅰ号对体外培养肝星状细胞增殖及TGF-β表达的影响。     

莫西沙星对脂多糖诱导A549细胞分泌IL-8和TNF-α的影响

目的观察莫西沙星（Moxifloxacin,MXF）对脂多糖（LPS）诱导A549细胞产生IL-8和TNF-α以及蛋白激酶C（PKC）活性的影响。方法 LPS诱导体外培养A549细胞,加入不同浓度的MXF与其孵育后,观察PKC的活性情况,同时IL-8和TNF-α分泌的含量。结果 MXF能明显抑制LPS诱导的IL-8和TNF-α产生,同时能抑制PKC的活性。结论 MXF可抑制LPS诱导A549细胞产生细胞因子,其效应可能与PKC的抑制有关。     

氯胺铜对脓毒症大鼠细胞因子及肠粘膜屏障的影响

目的 :探讨氯胺铜对脓毒症大鼠血清肿瘤坏死因子 (TGF-α)、一氧化氮 (NO)的影响。方法 :应用盲肠结扎打孔法制作大鼠脓毒症模型 ,4 8只雄性 SD大鼠随机分为假手术组、脓毒症组、氯胺酮预防组、氯胺酮治疗组。术后 2 4 h检测血清 TGF-α、NO水平。结果 :氯胺酮组动物死亡率较脓毒症组低 (P<0 .0 5 ) ,血清 TGF-α、NO浓度降低 (P<0 .0 1) ,肠粘膜上皮炎症损伤程度均有减轻 (P<0 .0 5 )。结论 :氯胺酮对脓毒症肠粘膜屏障具有明显的保护作用。     

消旋羟蛋氨酸钙对人肾系膜细胞增殖影响及其机制研究

【目的】体外观察消旋羟蛋氨酸钙对人肾系膜细胞（HMC）的影响。【方法】10mM消旋羟蛋氨酸钙对HMC体外干预,检测干预后转化生长因子-β1（TGF-β1）和乳酸脱氢酶（LDH）的变化,并采用MTT和流式细胞仪检测细胞增殖、凋亡和细胞周期。【结果】10mM消旋羟蛋氨酸钙干预HMC,实验组与对照组相比,TGFB1含量增加;细胞LDH表达水平没有改变;同时细胞出现增殖抑制。细胞流式分析发现,实验组干预后出现了细胞周期G1期阻滞并观测到了细胞凋亡。【结论】10mM的消旋羟蛋氨酸钙可以诱导TGF-β1的表达增加;同时诱导细胞周期G1阻滞并伴随细胞凋亡。     

早产鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的分离纯化、原代培养及鉴定

【目的】建立一套可靠的早产鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞（AECⅡ）分离、纯化和培养技术,用于体外研究早产儿肺部疾病。【方法】采用胰酶和胶原酶消化胎龄20d早产鼠肺组织块,经差速离心和反复贴壁法,分离、纯化早产鼠AECⅡ,并进行原代培养。用细胞角化蛋白（cytokeratin）进行二氨基联苯胺（DAB）及荧光免疫细胞化学显色,和透射电镜对所分离的细胞进行鉴定。【结果】AECⅡ体外培养24～48h,增殖代谢旺盛,进入对数生长期,生长状态最佳。cytokeratin在DAB免疫细胞化学及荧光免疫细胞化学中均有表达。透射电镜观察可见细胞内板层小体。【结论】该方法所得细胞产量大、纯度高,是一种可靠的早产鼠AECⅡ的分离纯化培养技术,对体外研究早产儿肺部疾病如高氧肺损伤等有重要意义。     

辛伐他汀对大鼠肺成纤维细胞功能及其抑制通路的影响

背景他汀类药物可以通过阻断甲羟戊酸的合成,抑制某些膜联结蛋白的翻译后修饰,从而阻断某些细胞内信号传导通路,抑制多种细胞的增殖.目的探讨辛伐他汀对肺成纤维细胞的增殖、胶原合成及基质金属蛋白酶2分泌的影响.设计完全随机设计,对照实验.单位中国协和医科大学阜外心血管病医院器官移植研究室.材料实验于2004-06/2004-10在中国协和医科大学北京协和医院心内科实验室完成.培养的新生SD大鼠的肺盛纤维细胞,根据培养液中加入的干预药物浓度不同而分为辛伐他汀0,1,5,10,50μmol/L及辛伐他汀50 μmol/L+甲羟戊酸200 μmol/L组.方法用消化法培养新生SD大鼠的肺成纤维细胞,给予不同浓度的辛伐他汀干预.四氮唑蓝比色法检测细胞增殖,细胞免疫组化法测定细胞胶原的合成,酶联免疫吸附法测定细胞培养上清液基质金属蛋白酶2的含量.主要观察指标不同浓度辛伐他汀及辛伐他汀加甲羟戊酸干预后肺成纤维细胞增殖和胶原合成能力,以及基质金属蛋白酶2分泌量.结果①辛伐他汀5,10,50 μmol/L组四氮唑蓝比色A490值,肺成纤维细胞表达Ⅰ,Ⅲ型胶原的平均吸光度值(A值)及培养上清液中的基质金属蛋白酶2含量明显低于辛伐他汀0 μmol/L组(0.520±0.010,0.334±0.011,0.260±0.012,0.111±0.011;0.508±0.011,0.324±0.014,0.232±0.015,0.083±0.015;0.445±0.017,0.305±0.015,0.216±0.015,0.068±0.012;0.561±0.013,0.361±0.012,0.289±0.012,0.140±0.013,t=3.359～8.111,P＜0.05～0.01).②辛伐他汀50 μmol/L+甲羟戊酸200 μmol/L组四氮唑蓝比色A490值,肺成纤维细胞表达Ⅰ,Ⅲ型胶原的平均吸光度值(A值)及培养上清液中的基质金属蛋白酶2含量明显高于辛伐他汀50 μmol/L组(0.567±0.015,0.354±0.014,0.283±0.012,0.138±0.011,t=4.715～10.950,P＜0.01).结论辛伐他汀能抑制肺成纤维细胞增殖和胶原合成,并可减少基质金属蛋白酶2的分泌,抑制肺成纤维细胞黏附迁移功能,并可通过影响甲羟戊酸通路而具有抗细胞增殖作用.     

丹参多酚酸盐对电离辐射损伤血管内皮细胞影响的初步研究

目的：观察不同浓度的丹参多酚酸盐对电离辐射后人脐静脉内皮细胞（HUVEC）系ECV-304增殖抑制的影响，初步了解丹参多酚酸盐对血管内皮细胞的抗辐射保护作用。方法：ECV-304未干预组和不同浓度的丹参多酚酸盐干预组用4Gy的6MV-X射线进行照射，照前和照后24h分别用MTT法，观察药物对细胞增殖抑制的影响。结果：与照前对比，照后24h未干预组细胞增殖抑制率达到84%，而干预组随着药物浓度的增加，细胞的受抑制率逐渐降低。结论：丹参多酚酸盐对电离辐射损伤血管内皮细胞具有明显的保护作用，且具有药物浓度依赖性。     

LH对未成熟卵子体外培养成熟及发育潜能的影响

目的 探讨在体外培养液中添加LH(促黄体生成激素)对人未成熟卵母细胞体外培养成熟(IVM)及继续发育潜能的影响.方法 56例多囊卵巢综合征(PCOS)患者进行64个IVM周期治疗,其中36例共36周期在体外培养液中添加LH;另20例共28周期培养液中未添加LH.结果 LH组和对照组的卵母细胞体外培养成熟率、受精率、卵裂率、优胚率、平均胚胎移植数分别为:65.47％vs 73.02％、70.91％ vs 78.26％、92.31％ vs 86.11％、48.15％vs45.98％、2.07vs2.00,差异均无统计学意义(P＞0.05);胚胎种植率、临床妊娠率分别为:20％vs8.33％、41.67％ vs 28.57％,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 LH可能改善了未成熟卵母细胞体外成熟后胚胎的继续发育潜能.     

双氢青蒿素对人肺腺癌细胞株A549抑制作用的实验研究

目的观察双氢青蒿素对人肺腺癌细胞株A549的作用。方法采用四唑氮蓝（MTT）法测定不同浓度和时间双氢青蒿素对A549细胞的生长抑制作用;应用流式细胞术检测双氢青蒿素对A549细胞增殖和细胞周期的影响;应用透射电镜分析法检测双氢青蒿素对A549细胞凋亡的影响。结果双氢青蒿素对A549细胞有明显的体外增殖抑制作用,72 h的IC50值为580 nmol/L,且有明显的时间和剂量依赖关系;双氢青蒿素作用后G0/G1期细胞数增加;双氢青蒿素作用A549细胞后可以出现凋亡的形态学改变。结论双氢青蒿素对人肺腺癌A549细胞有生长抑制作用,其机制可能与诱导A549细胞周期阻滞和凋亡有关。     

肿瘤坏死因子α对心肌细胞线粒体和膜电位、胞内钙离子浓度的影响

目的：通过研究肿瘤坏死因子对培养的衰老心肌细胞的线粒体膜电位、胞内钙离子浓度[Ca^2＋]i的变化,探讨其在心肌细胞损伤中的作用机制.方法：实验于2001-09/2002-09在解放军总医院老年心血管病研究所分子生物学实验室及军事医学科学院电镜中心进行.常规培养心肌细胞.用噻唑兰检测不同浓度肿瘤坏死因子α（1000,3 000,5 000U/L）对心肌细胞活力的影响.以3 000U/L肿瘤坏死因子α刺激心肌细胞,Rhodamine123和Fluo-3/AM负载后通过共聚焦激光扫描显微镜测量线粒体膜电位和细胞内钙浓度（[Ca^2＋]i）的变化.结果：①噻唑兰法显示3种浓度的肿瘤坏死因子α作用24 h后,A值百分率最高,48 h后A值百分率下降.②3 000U/L肿瘤坏死因子α刺激心肌细胞后,共聚焦扫描图像显示心肌细胞[Ca2＋]i升高,作用0,2,12 h平均荧光强度分别为29.64&;#177;16.33,9645&;#177;29.42,104.52&;#177;22.17,有显著性差异（P＜0.05）.③3000 U/L肿瘤坏死因子α刺激后,激光共聚焦显微镜显示线粒体膜电位在75 s内可见荧光强度先稍有降低后升高,未用肿瘤坏死因子α处理组及肿瘤坏死因子α处理后5,10,15,20 min、2及12 h的MMP荧光强度分别为134&;#177;57,115&;#177;43,114&;#177;40,112&;#177;38,97&;#177;28,77&;#177;55,34&;#177;16,12 h后线粒体膜势能下降一半,统计学分析无显著意义.结论：肿瘤坏死因子α能增加[Ca^2＋]i、降低线粒体膜电位,可能是肿瘤坏死因子α介导心肌细胞损伤的重要机制之一.     

缺氧诱导肝癌细胞EMT转化及耐药的初步实验研究

[目的]观察缺氧对肝癌细胞侵袭转移能力的影响,并进一步探讨缺氧环境下肝癌细胞耐药机制.[方法]利用HepG2、SMMC-7721细胞建立肝癌细胞缺氧模型,利用倒置显微镜观察细胞形态学变化;Transwell迁移与侵袭实验检测肿瘤细胞体外侵袭转移能力;MTT法检测肿瘤细胞活性;Western blot检测EMT相关蛋白E-cadherin、Vinmentin、N-cadherin和肿瘤耐药基因ABCG2的表达;采用流式细胞术检测凋亡和细胞周期变化.[结果]缺氧培养48h后的肝癌细胞从上皮细胞样表型转化为间质细胞样表型;缺氧条件下肝癌细胞E-cadherin表达显著下降,Vim-entin和N-cadherin表达显著升高(P<0.05).同时,缺氧条件下肝癌细胞迁移和侵袭能力显著增强(P<0.05).缺氧可导致HepG2、SMMC-7721停滞于静止期(G0/G1)的细胞数显著增多,缺氧条件下肝癌细胞对cisplatin耐药性显著增加(P<0.05);缺氧条件下ABCG2蛋白表达增加(P<0.05).[结论]缺氧能诱导肝癌细胞EMT转化而致侵袭转移,同时可导致对cisplatin耐药.     

前列地尔对血管内皮保护作用的实验研究

目的：观察前列地尔（PGE1）短期干预对高脂饮食兔动脉粥样硬化（AS）及血管内皮功能的影响.方法：日本大耳白兔24只随机分为空白对照组、高脂对照组、氟伐他汀组、前列地尔组.于实验第8、12周测定一氧化氮（NO）与内皮素（ET）,并对主动脉进行组织形态学观察.结果：氟伐他汀及前列地尔干预4周后,与高脂对照组比较,NO明显升高（P〈0.01）,ET明显下降（P〈0.01）,而两组之间无明显差异（P〉0.05）.结论：前列地尔通过升高血清NO、降低ET抑制AS斑块形成.