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目的 探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)基因修饰的组织工程化复合物对牙龈组织缺损再生的影响.方法 本研究于2007年7月至2009年1月在福建省高校口腔医学重点实验室进行.利用bFGF基因转染Beagle 犬牙龈成纤维细胞(GFs),并将其接种于脱细胞真皮基质(ADM)形成组织工程化复合物,植入Beagle犬的人工牙周组织缺损区,通过对治疗前后牙周指标测量分析,评价该组织工程化复合物对牙龈组织再生的影响.结果 实验前后附着丧失差值测定显示GFs与ADM复合物组及转染bFGF基因的GFs复合物组之间无显著性差异,与空白对照组相比均有明显增加(P＜ 0.05).角化龈宽度差值,6周时转染基因组有明显增加,12周时两实验组均比空白对照组明显增加(P＜0.05).结论 复合GFs的ADM可能有助于改善附着丧失的程度及角化龈宽度,而bFGF的作用并不肯定.组织工程技术能有效促进牙龈组织再生.     

hBMP-7基因转染的骨髓基质细胞与BME-10X胶原膜复合物的体外构建

目的:观察人骨形成蛋白-7(hBMP-7)基因转染的骨髓基质细胞(BMSCs)与胶原膜BME-10X复合后,BMSCs在BME-10X上的生长状态。方法:利用脂质体介导法将hBMP-7基因转染Beagle犬BMSCs,传代与胶原膜BME-10X复合,荧光显微镜、扫描电镜、透射电镜观察。结果:转染细胞复合胶原膜后生长良好,24h细胞已贴附、伸展。透射电镜可见细胞与材料表面连接紧密,包膜部分增厚,形成类似半桥粒样结构。结论:hBMP-7基因转染BMSCs在胶原膜BME-10X上生长良好,hBMP-7基因转染的BMSCs与胶原膜复合物有望应用于牙周组织工程。     

骨保护素基因修饰联合细胞移植技术促进牙周组织再生的实验研究

目的观察骨保护素（OPG）基因修饰的自体骨髓基质细胞（BMSCs）联合细胞移植技术促进Beagle犬牙周组织再生的情况,为探索基因治疗牙周病提供依据。方法将真核分泌表达穿梭载体pSecTag2/B-opg瞬时转染第3代自体犬BMSCs后,采用免疫化学和Western blot的方法检测OPG蛋白的表达,倒置相差显微镜和扫描电镜观察转染后的BMSCsOPG在聚乳酸-羟基乙酸共聚物（PLGA）支架上的黏附、聚集情况。选用4只成年Beagle犬,将其下颌双侧第2、3、4前磨牙作为实验牙,在每颗牙的颊侧构建牙槽骨缺损4 mm×4 mm×3 mm,并随机分为4组,即BMSCsOPGPLGA（转染后细胞复合支架组）、BMSCs-PLGA（未转染细胞复合支架组）、PLGA（支架对照组）、空白对照组。术后6周处死动物,组织学观察,测量新生牙槽骨（NB）、新生牙骨质高度（NC）、新生结缔组织的附着（CT）量。测量结果以SPSS 15.0软件包进行q检验。结果免疫细胞化学和Western blot鉴定结果证实,转染细胞内有OPG蛋白的高表达。扫描电镜显示BMSCs可以在材料表面、孔洞中良好地黏附、迁移,术后6周组织学观察可见转染后细胞复合支架组新生牙槽骨接近正常骨结构;未转染细胞复合支架组可见少量新生牙槽骨,胶原纤维丰富;支架对照组和空白对照组无明显硬组织形成。新生组织测量结果显示：转染后细胞复合支架组NB、NC、CT较对照组均显著增加（P<0.05）。结论BMSCsOPG-PLGA细胞支架复合物联合细胞移植技术能显著促进犬牙周缺损的组织再生,为基因治疗联合组织工程治疗牙周缺损提供可能性。     

人转化生长因子β1基因转染牙龈成纤维细胞促进牙周组织再生的动物实验

目的 评价人转化生长因子β1(human transform growth factor-β1,hTGF-β1)基因转染犬自体牙龈成纤维细胞(gingival fibroblast,GF)在治疗人工Ⅱ度根分叉骨缺损中作为组织工程种子细胞所发挥的作用.方法 将hTGF-β1基因转染后的犬自体GF作为组织工程种子细胞,与海螵蛸骨天然纳米羟基磷灰石(cuttlebone-transformed nanometer hydroxyapatite,CBHA)体外复合,制备犬下颌前磨牙区的Ⅱ度根分叉人工骨缺损模型,应用随机化完全区组设计方法将36颗犬前磨牙分为以下4组:①阴性对照组:不作任何处理直接缝合;②阳性对照组:置入牙周韧带细胞(periodontal ligament cell,PDLC)-CBHA复合物;③转染GF组:置入hTGF-β1基因转染犬GF-CBHA复合物;④未转染GF组:置入犬GF-CBHA复合物.每组9颗牙.对各组进行组织学观察和测量,并作示踪实验.结果 与阴性对照组比较,转染GF组、阳性对照组均可显著促进根分叉区牙周组织的再生(P＜0.01),两组的新生牙骨质高度(NC)、新生牙槽骨高度(NB)及新生结缔组织高度(NCT)分别为:(2.97±0.50)、(4.29±0.26)及(4.73±0.06)mm;(3.09±0.26)、(4.46±0.25)及(4.69±0.10)mm,且两组之间差异无统计学意义(P＞0.05).未转染GF组虽可促进牙槽骨再生[NB=(3.46±0.32)mm],但牙根有一定程度的吸收;示踪实验显示:转染后的GF在新生牙槽骨及牙周膜组织中均可发现.结论 hTGF-β1基因转染后的犬自体GF作为组织工程种子细胞,与CBHA体外复合后在人工Ⅱ度根分叉骨缺损的治疗中有显著的促牙周组织再牛的作用,参与了新牛牙槽骨及牙周膜的形成.     

人碱性成纤维细胞生长因子真核表达质粒的构建及其在犬牙龈成纤维细胞中的表达

目的:构建pIRES2-EGFP-bFGF真核表达质粒并检测其在Beagle犬牙龈成纤维细胞(GFs)中的表达.方法:双酶切获得bFGF片段并克隆到真核表达载体pIRES2-EGFP中,Hind Ⅲ单酶切、序列分析鉴定获得的质粒;脂质体介导转染Beagle犬GFs;免疫组织化学,RT-PCR,ELISA检测bFGF基因的表达.结果:bFGF成功插人真核表达载体pIRES2-EGFP中,转染GFs 12 h后即可观察到转染的GFs表达绿色荧光蛋白,48 h后转染效率达到20%.免疫组织化学,RT-PCR,ELISA证实重组pIRES2-EGFP-bFGF在GFs中的表达.结论:成功构建真核表达质粒pIRES2-EGFP-bFGF,并可在GFs中表达.     

羊富血小板胶细胞基质促牙周组织再生的动物实验研究

目的:探讨羊富血小板胶-牙周膜成纤维细胞基质(Prgel-periodontal ligament fibroblasts matrix)的合成,并观察将其植入实验动物牙周组织缺损区后促牙周组织再生的可能作用.方法: 制备羊牙周组织缺损模型,随机分成 Prgel组、Prgel-PDLFs组和空白对照组.采用密度梯度离心法从羊新鲜全血中获取富血小板血浆(platelet -rich plasma,PRP),按一定比例将牛凝血酶和氯化钙加入PRP中合成富血小板胶(platelet -rich gel, Prgel).体外培养、扩增羊牙周膜成纤维细胞PDLFs,然后将细胞与Prgel培养合成富血小板胶-细胞基质,植入动物牙周组织缺损区.分别于植入后4 周和10 周处死动物,进行常规组织学检查及CT影像学分析.结果: 组织学检查及CT影像学分析显示, 3 组均在牙根面可见新生牙骨质样组织、牙周膜和牙槽骨样组织的形成,与空白组相比,Prgel- PDLFs组和Prgel组新生牙周组和Prgel组新生牙周组织明显增多,有统计学意义(P<0.01).Prgel- PDLFs组新生牙周组织量比Prgel组多,有统计学意义(P<0.01).结论:体外合成的Prgel-PDLFs基质可明显促进牙周组织的再生.     

中文文摘

PTEN基因联合多西环素抑制黏液表皮样癌细胞系端粒酶活性的研究；低强度脉冲超声波对Beagle犬牙槽骨缺损的修复效应；激光表面强化技术对牙用铸造合金耐腐蚀性能影响的研究；碱性成纤维细胞生长因子对牙周膜成纤维细胞整合素β1亚单位mRNA表达的影响;     

Rh-bFGF与Bio-Oss骨胶原联合促进牙周骨缺损再生的实验研究

目的:评价重组人成纤维细胞生长因子(rh-bFGF)与牛无机骨胶原(Bio-Oss collagen)复合物和Bio-Gide联合应用对犬牙周组织再生的作用。方法:选用4只成年杂种犬,在双侧上、下颌前磨牙缺失区的近、远中牙槽嵴手术制备5mm×5mm×5mm的3壁骨内缺损。采用3种不同方法进行处理,实验组1:rh-bFGF与Bio-Oss胶原复合物植入, Bio-Gide覆盖;实验组2:Bio-Oss胶原复合物植入,Bio-Gide覆盖;对照组:单纯Bio-Gide覆盖。根据临床、影像学和组织学测量指标对治疗结果进行评价。采用SAS 6．2统计软件包进行配对t检验。结果:术后8周,所有3壁骨内缺损均有数量不等的新生牙槽骨、牙骨质和结缔组织。其中2个实验组的新生牙槽骨(3．7mm±0．3mm,2．3mm±0．2mm)与对照组(1．2mm±0．1mm)相比有显著性差异(P<0．01);实验组1与实验组2相比也有显著性差异(P<0．05)。而新生牙骨质和新生结缔组织附着在各组之间均无显著性差异(P>0．05)。结论:应用rh-bFGF／Bio-Oss胶原复合物更有利于牙槽骨再生,并且不会出现根吸收和骨固连等牙周再生治疗常见的不良结局。植入rh-bFGF／Bio-Oss胶原复合物对牙骨质再生和牙周韧带形成无显著作用。     

胶原-羟基磷灰石人工骨与胶原膜引导牙周组织再生的动物实验研究

人工构建4只成年Beagle犬下颌后牙区牙周缺损模型,分别随机采用:胶原-羟基磷灰石人工骨/胶原膜、胶原-羟基磷灰石人工骨、空白对照治疗,每组8颗牙,12周后处死动物,进行组织学观察并测量新生组织高度。结果:与单纯植入胶原-羟基磷灰石人工骨组相比,胶原-羟基磷灰石人工骨/胶原膜组获得了更多的新附着,表现为有较多的新生牙槽骨、新生牙周膜和新生牙骨质样组织生长,2组之间新生组织差异有显著性(P<0.05)。结论:胶原-羟基磷灰石人工骨与胶原膜联合运用修复牙周牙槽骨缺损引导牙周组织     

纳米羟基磷灰石材料复合碱性成纤维细胞因子促进牙周组织再生的实验研究

目的:探讨新型纳米羟基磷灰石材料—纳米羟晶/胶原仿生骨材料(nHAC)作为生长因子载体和牙周组织工程支架材料应用的可行性,观察评价其对牙周组织再生修复的影响和意义。方法:将人牙周膜细胞(HPDLCs)接种于nHAC三维支架上复合培养,体外扫描电镜观察HPDLCs在nHAC支架上的附着、生长情况,并将碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)与nHAC复合植入动物人工牙周组织缺损,表面覆盖聚四氟乙烯(e-PTFE)膜,以空白对照组和单纯置膜组作为对照。术后8周进行组织学观察和测量,分析评价其牙周组织的再生情况。结果:扫描电镜可见nHAC具有良好的多孔网状结构,PDLCs在nHAC支架上贴附紧密,生长旺盛,伸展充分,动物实验结果显示nHAC/bFGF/膜复合植入组较空白对照组和单纯置膜组有更多新生的牙槽骨、牙周膜和牙骨质生成,结果具有显著性差异。结论:nHAC具有良好的三维空间结构和细胞相容性,与bFGF复合植入牙周缺损后可显著促进牙周组织再生,提示nHAC有望成为理想的生长因子载体和牙周组织工程支架材料。     

胶原-羟基磷灰石人工骨与胶原膜引导牙周组织再生的动物实验研究

目的：将胶原-羟基磷灰石人工骨与胶原膜联合应用于修复牙周缺损的动物实验,探讨其用于引导牙周组织再生的可行性。方法：人工构建4只成年Beagle犬下颌后牙区牙周缺损模型,分别随机采用：胶原-羟基磷灰石人工骨/胶原膜、胶原-羟基磷灰石人工骨、空白对照治疗,每组8颗牙,12周后处死动物,进行组织学观察并测量新生组织高度。结果：与单纯植入胶原-羟基磷灰石人工骨组相比,胶原-羟基磷灰石人工骨/胶原膜组获得了更多的新附着,表现为有较多的新生牙槽骨、新生牙周膜和新生牙骨质样组织生长,2组之间新生组织差异有显著性（P〈0.05）。结论：胶原-羟基磷灰石人工骨与胶原膜联合运用修复牙周牙槽骨缺损引导牙周组织再生的效果优于单纯植入人工骨。     

转染人骨形成蛋白-7基因对骨髓基质细胞体外生物学活性的影响

目的：观察hBMP-7基因转染对Beagle犬骨髓基质细胞（BMSC）生物学特性的影响。方法：利用脂质体介导法将hBMP-7基因转染Beagle犬BMSC，观察细胞形态及生长情况，检测碱性磷酸酶、骨钙素及钙化结节等成骨细胞表型。结果：目的基因转染后细胞形态略有变化，增殖能力无明显改变，凋亡率无明显变化，碱性磷酸酶活性明显增高，骨钙素表达增强，钙化结节增大。结论：hBMP-7基因转染可以加速BMSC向成骨细胞表型转化。hBMP-7基因转染的BMSC有望成为牙周组织工程理想的种子细胞。     

松质骨基质作为细胞载体应用于牙周组织工程的实验研究

目的 研究评价松质骨基质(CBM)作为细胞载体应用于牙周组织工程的可行性及意义。方法 将体外培养的犬自体牙周膜细胞(PDLCs)接种到CBM三维支架上,扫描电镜观察PDLCs在CBM支架上的生长、附着情况;同时,将PDLCs/CBM复合植入动物牙周组织缺损,以空白组及仅植入CBM组为对照组,术后8周观察评价其牙周组织的再生情况。结果 扫描电镜显示PDLCs在CBM上伸展充分,生长旺盛,而CBM具有良好的多孔网状结构。动物实验结果可见PDLCs/CBM复合植入组较对照组有更多的新生牙骨质、新生牙周膜和新生牙槽骨生成,缺损处牙周组织几近完全再生,且未见上皮长入。结论 CBM可作为细胞载体用于牙周组织工程研究,有望用作牙周组织工程的支架材料。     

富血小板胶细胞基质在羊实验性牙周炎牙周缺损中的应用

目的：探讨羊富血小板胶-牙周膜成纤维细胞基质（PRgel-PDLFs）的合成,观察其促进羊中度牙周炎牙周再生的可能作用。方法：建立羊中度牙周炎模型;采用密度梯度离心法从羊新鲜全血中获取富血小板血浆（platelet-rich plasma,PRP）,并按一定比例加入牛凝血酶和氯化钙合成富血小板胶（platelet-rich gel,PRgel）,然后将其与成纤维细胞PDLFs培养合成PRgel-PDLFs基质,并将其植入动物模型牙周吸收缺损区,10周后处死动物,进行常规组织学检查及CT影像学分析。结果：组织学检查及CT影像学分析均显示,3组在牙根面均可见新生牙骨质样组织、牙周膜和牙槽骨样组织的形成,与空白组相比,PRgel-PDLFs组和PRgel组新生牙周组织明显增多,有统计学意义（P〈0.01）。PRgel-PDLFs组新生牙周组织量比PRgel组多,有统计学意义（P〈0.01）。结论：体外合成的PRgel-PDLFs基质可明显促进羊牙周炎吸收组织的再生。     

牙周膜成纤维细胞与三种可吸收引导组织再生膜生物相容性实验研究

目的：探讨牙周膜成纤维细胞与可吸收引导组织再生膜生物相容性，为牙周组织工程中支架材料选择提供依据。方法：将人牙周膜成纤维细胞与三种商品化引导组织再生膜：BME-10XR(中国医学科学院生物医学工程研究所)、BioMeshR(韩国Samyang公司)及Bio-GideR(美国Osteohealth公司)体外复合培养，进行形态学观察、细胞附着及增殖的检测。结果：人牙周膜成纤维细胞可在三种可吸收膜上附着、增殖，并复层生长。细胞在三种膜上的附着无显著性差异(P＞0．05)；在BMK-10XR及Bio-GideR上生长、繁殖明显好于BioMesh R(P＜0．05)。结论：BME-10X R及Bio-Gide R具有良好的生物相容性，有望成为牙周膜成纤维细胞的载体材料应用于牙周组织工程研究.     

自体移植冻存骨髓基质细胞修复犬牙周缺损的实验

目的 观察冻存对骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSC)体内形成牙周支持组织能力的影响.方法 在5只Beagle犬的26个实验牙位制备牙周缺损.区组随机法分成3组,空白组(8颗)植入载体胶原膜,未冻存组(9颗)和冻存组(9颗)接种未冻存或冻存细胞与胶原膜复合物,8周后观察牙周组织再生情况.结果 冻存组和未冻存组牙槽骨再生百分比分别为(83.7±10.6)%、(85.0±6.8)%,两组新生牙骨质和牙周膜百分比均为100%,差异无统计学意义(P>0.05);空白组牙槽骨再生百分比为(24.7±9.2)%,牙骨质再生百分比为(21.0±4.8)%,牙周膜再生百分比为(24.8±5.4)%,均较冻存组和未冻存组显著减少,差异有统计学意义(P<0.05).结论 冻存对BMSC体内分化形成牙周组织的能力无显著影响.     

羊富血小板胶细胞基质在2种牙周缺损模型中的修复效果

目的 探讨羊富血小板胶-牙周膜成纤维细胞基质(PRgel-PDLFs)促进不同原因造成的牙周缺损再生的效果.方法 用新鲜全血制取富血小板血浆(PRP),并加入催化剂与成纤维细胞一起培养合成PRgel-PDLFs基质;然后将24只山羊随机分为急性牙周缺损组和慢性牙周炎缺损组,模型建成后所有动物一侧植入PRgel-PDLFs基质于牙周缺损区,另一侧为手术空白组,术后10周,进行CT影像学检查和组织学测量分析.结果 10周后CT影像学和组织学检查显示:两组均在牙根面见新生牙骨质样组织、牙周膜样组织和牙槽骨样组织,且PRgel-PDLFs组再生的牙周组织明显多于空白组(P＜0.01);急性缺损组和慢性牙周炎缺损组的组织再生量相近,差异没有统计学意义(P＞0.05).结论 PRgel-PDLFs基质能够促牙周组织再生,且对急性牙周缺损和慢性牙周炎造成的牙周缺损修复效果相近.     

细胞-支架构建方式的牙周组织工程实验研究

目的　观察评价细胞 支架构建方式的组织工程方法对牙周组织再生修复的影响和意义。方法　体外培养动物自体牙周膜细胞 (PDLCs) ,传代扩增后接种到纳米羟基磷灰石材料 (nHAC)三维支架上 ,扫描电镜观察PDLCs在nHAC支架上的附着及生长情况 ;同时 ,将PDLCs nHAC复合物植入动物牙周组织缺损中 ,术后 8周观察 ,评价其牙周组织的再生情况。结果　扫描电镜显示 ,nHAC具有良好的多孔网状结构 ,PDLCs在nHAC上贴附牢固 ,生长旺盛。动物实验可见 ,PDLCs nHAC植入组较对照组有更多的新生牙槽骨、新生牙周膜和新生牙骨质生成 ,缺损处牙周组织几乎完全再生 ,且未见上皮长入。结论　应用细胞 支架构建方式的牙周组织工程方法能获得理想的牙周组织再生和重建。     

基因修饰的组织工程化骨修复骨质疏松症骨缺损的实验研究

目的 探讨人类骨形成蛋白2（hBMP-2）基因修饰的组织工程化骨修复骨质疏松症者骨缺损的可行性及方法。方法24只6个月龄雌性SD大鼠建立去势模型，按体重编号，随机分组。3个月后实验组骨髓问质干细胞（BMSC）转染hBMP-2质粒，对照组未作干预，在体外构建自体细胞组织工程化骨，植入下颌骨缺损区。结果术后4周时实验组有新生骨质形成，8周时成熟骨基质形成；对照组新生骨质数量明显少于实验组，且材料边缘及中央处有脂肪样结构形成。结论hBMP-2基因修饰的组织工程化骨可用于骨质疏松症者骨缺损的治疗。     

细胞外基质磷酸糖蛋白在大鼠牙周组织缺损愈合过程中的表达

目的:观察细胞外基质磷酸糖蛋白(matrix extracellular phosphoglycoprotein,MEPE)在大鼠牙周组织缺损愈合过程中的表达,初步探讨MEPE在牙周组织再生中可能发生的作用。方法:24只成年健康雄性Wistar大鼠随机分2组:术后14 d组和术后28 d组各12只,行左侧下颌骨开窗术,制备牙周组织缺损模型,HE染色观察牙周组织缺损愈合情况,免疫组织化学染色法观察MEPE在牙周组织缺损愈合过程中各组织的表达。结果:术后14 d,术区有部分新生牙槽骨形成,部分牙周纤维附着于根面牙本质上;术后28 d,术区完全被新生牙槽骨覆盖,在新生牙槽骨和牙本质之间可见牙周膜和部分牙骨质生成,牙周膜大部分附着于根面上;牙周组织缺损愈合过程中,MEPE在健康对照侧仅呈弱阳性表达,而在缺损区牙槽骨和牙周膜相关细胞中均呈阳性表达。结论:在牙周组织缺损愈合过程中,细胞外基质磷酸糖蛋白参与牙槽骨以及牙周膜的再生。