参附注射液对脂多糖诱导的大鼠肺泡巨噬细胞核因子-κB的激活和细胞因子产生的影响

目的 研究脂多糖(LPS)诱导的大鼠肺泡巨噬细胞核因子-κB(NF-κB)的激活和细胞因子的释放以及参附注射液(SF)的干预作用,进一步探讨SF对肺脏保护机制.方法 通过支气管肺泡灌洗获取大鼠肺泡巨噬细胞(Ams).对获取的Ams进行LPS刺激(10 ng/ml,2 h)或预先用SF(5 μl/ml,10 μl/ml)孵育30 min,然后加入LPS(10 ng/ml)分别刺激2 h.用RT-PCR法检测Ams中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的基因表达水平.ELISA法检测培养上清中TNF-α和IL-8的水平.Western blot法检测Ams中NF-κB抑制蛋白-α(IκBα)和NF-κB的水平.结果 LPS能够增加Ams中TNF-α mRNA表达水平和培养上清中TNF-α和IL-8的水平.同时LPS促进了IκBα的降解,诱导了NF-κB的激活.与LPS组比较,SF能够减少Ams中TNF-α mRNA表达水平和培养上清中TNF-α和IL-8的水平;抑制LPS诱导的IκBα的降解和NF-κB的激活.结论 SF通过抑制Ams中IκBα的降解,减少了NF-κB的激活,从而减少了LPS诱导的大鼠Ams细胞因子的产生.     

白藜芦醇对小鼠肺泡巨噬细胞释放IL-6、TNF-α的影响

目的:探讨白黎芦醇(Res)对小鼠肺泡巨噬细胞释放细胞因子IL-6,TNF-α的影响。方法:经从小鼠支气管肺泡灌洗中获得肺泡巨噬细胞,分5组进行培养,A组(LPS 10mg/L),B组(LPS 10mg/L+Res 50μg/ml),C组(LPS 10mg/L+Res 100μg/ml),D组(LPS 10mg/L+Res 150μg/ml),E组(LPS 10mg/L+Res 200μg/ml).各组在培养4,6,12,24h提取上清液,应用ELISA法测定上清液中IL-6,TNF-α含量。结果:在LPS刺激下IL-6于12h达释放高峰,在高峰期随着白黎芦醇浓度的逐步加大,IL-6的含量相应逐渐降低,E组IL-6含量明显低于只有内毒素刺激的A组(P<0.05)。同样在LPS刺激下TNF-α于6h达释放高峰,在高峰期随着白黎芦醇浓度的逐步加大,TNF-α含量也相应逐渐降低,而C组、D组、E组TNF-α含量明显低于A组(P<0.05)。结论:白黎芦醇对小鼠肺肺泡巨噬细胞过度释放炎症性细胞因子IL-6,TNF-α具有明显抑制作用。     

盐酸克林霉素对脂多糖刺激人牙周膜细胞分泌TNF α的影响

目的 研究盐酸克林霉素(clindamycin hydroehloride)对脂多糖(LPS)刺激的人牙周膜细胞(HPDLCs)分泌肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响.方法 将原代培养的HPDLCs分为6组.空白对照组每孔只加入DMEM培养液;LPS组,每孔加100 μg/ml LPS于DMEM培养液;药物组同时分别加不同浓度盐酸克林霉素(2.5,10,40,160μ/ml)和100μg/ml LPS于DMEM培养液.采用酶联免疫方法(ELISA)检测各组中TNF-α的含量.结果 与空白对照组相比,LPS组TNF-α的水平显著升高;与LPS组相比,药物组TNF-α的水平呈降低趋势,且10,40,160αg/ml浓度的药物组与u)s组比较TNF-α表达具有统计学差异(P<0.05),而10,40,160 μg/ml浓度药物组之间比较,TNF-α表达差异无统计学意义(P>0.05).结论 LPS能促进HPDLCs分泌TNF-α,盐酸克林霉素在浓度为10,40,60 μg/ml时能显著抑制LPS促HPDLCs分泌TNF-α的作用,揭示了盐酸克林霉素的抗炎作用机制.     

大鼠肺泡巨噬细胞内毒素耐受性与炎症因子表达的变化

目的　观察大鼠肺泡巨噬细胞对内毒素 (lipopolysaccharide,LPS)重复刺激的耐受性与炎症因子IL -1β,TNF -α ,IL - 10 ,IL - 18mRNA表达变化 ,研究二者之间的联系。 方法　将从 30只Wistar雄性大鼠分离所得肺泡巨噬细胞 ,随机等分为正常对照组 (A) ,LPS单次刺激组 (B)和LPS二次重复刺激组 (C)。运用ELISA和RT -PCR方法分别检测各组大鼠肺泡巨噬细胞分泌TNF -α及IL - 1β ,TNF -α,IL - 10 ,IL - 18mRNA表达的变化。 结果　大鼠肺泡巨噬细胞TNF -α分泌和IL - 1β ,TNF -α ,IL - 10 ,IL - 18mRNA表达A组分别为 :(0 . 4 5± 0. 0 1) ,(0 . 91±0 . 0 5 ) ,(0 6 0± 0 . 0 7) ,(0 . 80± 0. 0 6 ) ,(0 . 75± 0. 0 5 ) μg/L;B组分别为 :(0 .76± 0 . 0 3) ,(1 .4 2± 0 . 11) ,(1. 2 3± 0. 0 8) ,(1 .77± 0 . 15 ) ,(1 .2 2± 0 . 12 ) μg/L,B组与A组比较显著增加 (P <0 .0 1) ;C组分别为 :(0 .4 9± 0 . 0 5 ) ,(0 . 84.± 0 0 6 ) ,(0 . 70± 0 . 0 5 ) ,(0 . 95± 0 .16 ) ,(0 . 87± 0. 0 5 ) μg/L,C组与B组比较 ,明显减少 (P <0 . 0 5 ,或 <0. 0 1)。结论　LPS重复刺激可使大鼠肺泡巨噬细胞对LPS产生耐受性 ;LPS耐受性的产生与IL - 1β,TNF -α,IL - 10 ,IL - 18mRNA表达下降相关     

氯胺酮对脂多糖诱导的大鼠肺泡巨噬细胞抗氧化能力的影响

目的 研究氯胺酮对脂多糖(LPS)刺激的大鼠肺泡巨噬细胞(AM)抗氧化能力的影响.方法 体外培养大鼠肺泡AM株NR8383经氯胺酮(10、100、1 000 μmol/L)预处理,LPS刺激24 h后,应用试剂盒检测细胞培养上清液中总抗氧化能力(T-AOC)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平.结果 与磷酸盐缓冲液(PBS)组比较,LPS组培养上清液中T-AOC和GSH-Px水平均明显下降.低浓度氯胺酮预处理组(10 μmol/L)与LPS组比较,差异无统计学意义.而较高浓度氯胺酮预处理组(100、1 000 μmol/L) 与LPS组比较,差异有统计学意义(P<0.01).结论 一定浓度氯胺酮对LPS刺激的NR8383细胞T-AOC和GSH-Px水平降低具有明显改善作用.     

严重烧伤大鼠离体肺泡巨噬细胞CD14表达调控的实验研究

目的 探讨严重烧伤对体外培养大鼠肺泡巨噬细胞(AM)CD14膜蛋白(CD14)和 mRNA基因表达变化的影响,以及抗CD14抗体对AM产生肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)的调控作用.方法 (1)成年SD大鼠84只,分为烧伤组和内毒素(LPS)组(每组42只),每组均分为1,2,4,6,8,10和12 h共7个时相点,并设对应的对照组(各6只大鼠).大鼠烧伤和LPS注射后检测外周血LPS浓度.(2)成年SD大鼠168只,分为烧伤血清组、血清抗体组、LPS组、LPS抗体组(每组42只),每组均分为1,2,4,6,8,10和12 h共7个时相点,并设对应的对照组(各6只大鼠);各组大鼠行全肺在体支气管肺泡灌洗分离AM,并按时相点分别进行体外培养.以上4组分别加入烧伤血清、烧伤血清+抗体、LPS、LPS+抗体,在以上相同时相点终止培养,RT-PCR、免疫组织化学及ELISA方法 分别检测4组AM在各时相点CD14 mRNA表达、蛋白表达及分泌TNF-α和IL-6的变化.结果 (1)烧伤组与烧伤对照组、LPS组与LPS对照组比较发现,烧伤及LPS注射后大鼠各时相点外周血LPS浓度均明显高于对照组.(2)烧伤血清组、LPS组与对应的对照组比较发现,烧伤血清组、LPS组大鼠AM各时相点CD14 mRNA表达、蛋白表达均明显增高,AM培养上清中TNF-α和IL-6浓度亦相应显著增高(P<0.01).以烧伤血清与AM培养1 h后,烧伤血清组培养上清中TNF-α和IL-6浓度即显著增加.与烧伤血清组比较,血清抗体组AM在各时相点CD14 mRNA表达、蛋白表达显著降低(P<0.01),TNF-α和IL-6浓度亦显著降低(P<0.01).与LPS组比较,LPS抗体组AM在各时相点CD14 mRNA表达、蛋白表达显著降低(P<0.01),TNF-α和IL-6浓度亦显著降低(P<0.01).结论 严重烧伤后外周血LPS浓度增加,离体AM CD14 mRNA表达和蛋白表达均显著增加,使LPS对免疫系统的激活作用显著增大;AM分泌TNF-α和IL-6明显增加,而抗CD14抗体可以明显拮抗AM合成和分泌炎性介质.提示严重烧伤后通过调节CD14的作用而减少炎性介质的合成和分泌是可行的.     

严重烧伤大鼠在体肺泡巨噬细胞CD14基因表达对细胞因子影响的实验研究

目的:全身炎症反应综合征(SIRS)是炎症介质过度释放的全身炎症反应,文中探讨严重烧伤和内毒素对在体SD大鼠肺泡巨噬细胞(AM)CD14基因表达的影响及调控作用以及体外培养AM的CD14膜蛋白表达对AM产生肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)的影响及调控作用. 方法:①在体部分:对20%m度烧伤大鼠行外周血脂多糖(LPS)浓度检测.大鼠烧伤和LPS注射后在各时相点分别处死并分离提取AM,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法观察膜表面CD14mRNA表达变化.②体外部分:各组大鼠行全肺在体支气管肺泡灌洗(BAL)分离AM进行体外培养,分别加入烧伤血清、烧伤血清+抗体、内毒素、内毒素+抗体,用RT-PCR及ELISA方法分别检测4组AM在各时相点CD14mRNA表达及分泌TNF-α和IL-6的变化. 结果:①烧伤及LPS注射后大鼠各时相点外周血LPS浓度均明显高于假烫组.②烧伤血清组、LPS组大鼠AM各时相点CD14 mRNA表达均明显增高,TNF-α和IL-6浓度亦相应显著增高(P＜0.01).烧伤血清作用1 h后TNF-α和IL-6浓度即显著增加;血清抗体组AM的CD14mRNA表达显著降低(P＜0.01),TNF-α和IL-6浓度亦显著降低(P＜O.01).内毒素抗体组AM在各时相点CD14mRNA表达显著降低(P＜0.01),TNF-α和IL-6浓度亦显著降低(P＜0.01).结论:严重烧伤后外周血LPS浓度增加,在体和离体AM CD14 mRNA表达均显著增加,这使LPS对免疫系统的激活作用显著增大,AM分泌TNF-α和IL-6明显增加,抗CD14抗体可以拮抗炎性介质的合成和分泌.提示严重烧伤后通过调节CD14的作用而减少炎性介质的合成和分泌是可行的.     

高迁移率族蛋白1在内毒素急性肺损伤大鼠肺泡巨噬细胞吞噬功能改变中的作用

目的探讨高迁移率族蛋白1（HMGB1）在内毒素急性肺损伤大鼠肺泡巨噬细胞吞噬功能改变中的作用。方法脂多糖（LPS）注射复制大鼠急性肺损伤模型，在LPS致伤后不同时相点（有或无正丁酸钠SB干预时）获取肺组织及肺泡巨噬细胞（AM）。RT—PCR检测肺组织HMGB1 mRNA表达，应用鸡红细胞吞噬实验检测AM的吞噬功能，并对二者做平行比较。结果与对照组比较，LPS致伤后6、12、24h时相点AM吞噬率及吞噬指数明显降低；SB干预组AM吞噬功能于24h时相点出现较明显下降。与LPS组比较，6～12h时相点AM吞噬功能无明显降低，差异有统计学意义（P〈0．01）；LPS致伤后6～24h肺组织HMGB1 mRNA表达明显增高。正丁酸钠（SB）处理组动物肺组织于伤后6～12h肺组织HMGB1 mRNA表达均显著抑制，与LPS组比较，差异有显著性意义（P〈0．05）；相关性分析显示，肺泡巨噬细胞吞噬率及吞噬指数与肺组织HMGB1表达水平呈显著负相关。结论HMGB1高表达可能参与AM吞噬功能改变；AM吞噬功能减低可能是HMGB1参与急性肺损伤发生、发展的机制之一。     

生长激素预处理对体外循环大鼠肝脏炎性反应的影响

目的 探讨生长激素(growth hormone, GH)预处理对体外循环(cardiopulmonary bypass, CPB)大鼠肝脏炎性反应的影响及机制.方法 建立大鼠CPB模型,分为GH预处理组(GH组)、CPB对照组(CPB组)和假手术组(SM组),按照CPB后不同时间取静脉血及肝组织,检测血清LPS、TNF-α浓度及肝功能,RT-PCR法检测肝组织CD14 mRNA、TNF-α mRNA.结果 CPB后CPB组、GH组LPS、TNF-α浓度比CPB前血清LPS(0.25±0.03) IU/L和TNF-α(0.95±0.38) μg/L显著升高,肝组织CD14 mRNA、TNF-α mRNA的表达明显增多,肝功能损害明显;GH组同时相点血清LPS和TNF-α浓度以及肝组织CD14 mRNA、TNF-α mRNA的表达均比CPB组显著降低(P＜0.05, P＜0.01),肝功能损害明显减轻.结论 GH预处理可明显降低CPB后血清LPS水平,减少肝组织CD14 mRNA、TNF-α mRNA的表达,从而降低血清TNF-α浓度,改善CPB后机体炎症反应,减轻肝损害.     

黄芩苷对脂多糖诱导的人单核细胞THP-1的炎症反应的作用

目的 探讨黄芩苷(baicalin)对脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导的人单核细胞THP-1的炎症反应的作用。 方法 利用LPS建立人单核细胞THP-1的炎症模型,实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time quantitatFive polymerase chain reaction, RT-qPCR)方法检测白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-6、IL-8、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony-stimulating factor,GM-CSF)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的相对表达,确定最优的LPS刺激浓度。乳酸脱氢酶检测试剂盒检测黄芩苷的细胞毒性,优选其最佳使用浓度范围。对LPS诱导的人单核细胞THP-1炎症模型予以不同浓度的黄芩苷预处理,利用RT-qPCR法检测黄芩苷对LPS诱导的人单核细胞THP-1的IL-1β、IL-6、IL-8、GM-CSF和TNF-α的表达升高的影响。 结果 与对照组相比,1 μg/mL的LPS处理人单核细胞THP-1 24 h后均可显著引起IL-1β、IL-6、IL-8、GM-CSF和TNF-α的表达升高(P<0.05),黄芩苷在浓度为10、30、100 μmol/L时处理人单核细胞THP-1 24 h和48 h,无明显细胞毒性。30 μmol/L和100 μmol/L的黄芩苷可降低LPS诱导的人单核细胞THP-1的IL-1β、IL-6、IL-8、GM-CSF和TNF-α的表达升高。 结论 黄芩苷可显著抑制LPS诱导的人单核细胞THP-1的炎症反应。     

瑞舒伐他汀抑制NF-κB活化下调LPS诱导小胶质细胞TNF-α表达的实验研究

目的 探讨瑞舒伐他汀能否通过抑制NF-κB活化下调LPS诱导的小胶质细胞TNF-α的表达.方法 将BV2细胞分为3组即对照组（Control组）、LPS组和瑞舒伐他汀＋LPS（Ros＋ LPS组）.在干预24小时后使用RT-PCR法和western blot法对BV2细胞TNF-α mRNA和蛋白的表达水平进行检测;并使用western blot法对细胞NF-κB p65磷酸化水平（Phospho-NF-κB p65/NF-κB p65比值）进行分析.结果 与Control组相比较,在LPS干预24小时后BV2细胞TNF-α mRNA和蛋白的表达水平以及phospho-NF-κB p65/NF-κB p65比值均明显升高,差异均有统计学意义（P均＜0.05）;但LPS组较Ros＋ LPS组TNF-α mRNA和蛋白的表达的升高以及Phospho-NF-κB p65/NF-κB p65比值的增加更加显著,差异均有统计学意义（P均＜0.05）.结论 瑞舒伐他汀可能通过抑制NF-κB的活化下调了小胶质BV2细胞TNF-α的合成和释放.     

替米沙坦对脂多糖诱导3T3-L1脂肪细胞生成炎性因子的影响

目的探讨血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂替米沙坦对小鼠3T3-L1脂肪细胞合成白细胞介素6（IL-6）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）的影响。方法脂肪细胞诱导至90%成熟,随机分为5组：对照组,脂多糖（LPS）组,LPS＋替米沙坦组,其中替米沙坦设0.1μg/ml、1μg/ml和10μg/ml 3个浓度梯度。对照组中加DMSO,LPS＋替米沙坦组中加不同浓度替米沙坦,孵育2h后,再向LPS组和LPS＋替米沙坦组加入LPS（1μg/ml）,与替米沙坦共同孵育细胞1h。酶联免疫吸附法（ELISA）检测各组IL-6和TNF-α的蛋白分泌水平,Q-PCR检测各组IL-6和TNF-αmRNA基因表达。结果脂多糖处理后IL-6分泌较对照组增加约2.7倍,IL-6mRNA表达增加4倍。替米沙坦干预后各组IL-6浓度较脂多糖组均明显下降,10μg/ml组降低67%,IL-6mRNA表达随替米沙坦浓度升高而下降,10μg/ml组下降约63%。此外,与对照组相比,脂多糖处理组TNF-α分泌增加1.3倍,其mRNA表达增加3.5倍,替米沙坦干预后,各组TNF-α蛋白分泌及mRNA表达均较脂多糖组明显降低,大剂量替米沙坦干预后（10μg/ml）,TNF-α蛋白分泌下降约85%,mRNA表达下降约23%。结论替米沙坦通过影响脂肪细胞炎性因子的产生发挥抗炎作用,10μg/ml大剂量时作用尤为明显。     

Role of liver X receptors alpha agonist on expressions of LPS-induced inflammatory response associated factor IRAK-4 and NF-kappaB in Kupffer cells

Objective： To explore the role of activated liver X receptor α （LXRα） on the expressions of interleukin-1 receptor associated kinase-4 （IRAK-4） and NF-kappaB （NF-κB） in the inflammatory response which induced by LPS in the Kupffer cells and to investigate the possible mechanisms of LXRα negative regulation of inflammatory response. Methods： The Kupffer cells were isolated from male Kunming mice by collagen perfusion in situ. And these cells were divided into 4 groups： normal control group, LPS treatment group, LXRct agonist T0901317 treatment group, LPS and T0901317 combined treatment group. The LPS treatment group were treated with a final concentration of 1 μg/ml LPS in RPMI 1640 and cultured for 6 h, the T0901317 treatment group were treated with a final concentration of 5 μg/ml in RPMI 1640 and cultured for 24 h, and the combined treatment group received pre-culture for 24 h with a final concentration of 1μg/ml T0901317 in RPMI 1640 and then cultured for 6 h with a final concentration of 5 μg/ml LPS in RPMI 1640. All groups were cultured for 30 h. The expression of LXRα, IRAK-4 and NF-κB at mRNA and protein levels were detected by real-time PCR and Western blotting, and the TNF-α and IL-1β levels were detected by ELISA. Results： The levels of LXRα mRNA and protein were highest in T0901317 group, and lowest in LPS group （P〈0.05）. The level of IRAK4 and NF-κB mRNAs and proteins were evidently lower in the Combined-treated group than in LPS group （P〈0.05）. And the level of TNF-α and IL-1 were observed highest in LPS group （P〈0.05）, but no difference among the Control group, T0901317 group and Combined-treated group （P〉0.05）. Conclusion： These date suggest that the LXR agonists can effectively up-regulate the expressions of LXRα mRNA and protein and inhibit the inflammatory response. This may be via down-regulating the expressions of IRAK4 and NF-κB at mRNA and protein levels.     

大黄素对脂多糖所致肾脏炎症的抑制作用

目的探讨大黄素对脂多糖（LPS）诱导的肾小管上皮细胞（TECs）免疫炎症的抑制作用。方法原代培养的BALB/C小鼠肾小管上皮细胞,模型组用100 ng/mL的LPS诱导,干预组在LPS诱导的同时,分别用0.1、0.2、0.4μg/mL浓度的大黄素干预,于24 h后分别提取细胞总RNA及蛋白。用流式细胞术检测TEC TLR4膜蛋白水平,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测样受体（TLR）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）及白介素-6（IL-6）mRNA的表达。结果正常肾小管上皮细胞可见TLR4表达,用100 ng/mL LPS刺激后TLR4 mRNA的表达由（0.25±0.22）上调至（0.62±0.11）,且TNF-α、IL-6因子表达亦分别上调6.4倍和2.1倍,与正常组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。不同浓度大黄素干预后则TLR4、TNF-α、IL-6 mRNA表达较模型组下降2.0～5.7倍,与模型组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）,下降程度与大黄素浓度相关,部分存在一定的量效依赖关系。结论大黄素能够下调LPS诱导的肾小管上皮细胞TLR4的表达,并减少下游炎症因子TNF-α及IL-6的激活,从而减轻肾脏局部免疫炎症反应、保护肾功能。     

芦丁对脂多糖致小鼠急性肺损伤的保护作用

目的探讨芦丁对脂多糖（LPS）诱导的急性肺损伤（ALI）小鼠的保护作用及可能机制。方法30只C57BL/6小鼠随机分为
对照组,模型组（LPS组）和治疗组（LPS+芦丁组）。利用HE染色观察肺组织病理变化,测量肺湿/干重比（W/D）,ELISA法检测
支气管肺泡灌洗液（BALF）中TNF-α和IL-1β水平,利用RT-PCR法和Western blot法检测α-ENaC的表达水平。结果病理检查
示模型组肺组织有明显的炎症充血水肿,治疗组较模型组炎症充血水肿明显减轻。模型组W/D值,BALF中TNF-α和IL-1β含
量均较对照组明显增高,而α-ENaC mRNA和蛋白表达水平较对照组显著降低。与模型组相比,治疗组W/D值,BALF中TNF-α
及IL-1β含量明显降低,而α-ENaC mRNA和蛋白表达水平明显增加。结论芦丁能够抑制急性肺损伤炎症反应,增加肺泡上皮
钠通道蛋白表达,有效减轻LPS所致的小鼠急性肺损伤。
     

髓样分化蛋白2在脂多糖所致大鼠急性肺损伤中的作用

目的研究髓样分化蛋白2(MD-2)在脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤(ALI)大鼠肺组织中的表达及其作用。方法 20只健康雄性SD大鼠随机分为LPS组和对照组,通过支气管肺泡灌洗分离肺泡巨噬细胞,采用RT-PCR、Western blot和免疫组化方法分别检测MD-2 mRNA和蛋白的表达,ELISA方法测定血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平。将MD-2 siRNA转染大鼠肺泡巨噬细胞系NR8383,以终浓度1μg/mL的LPS刺激细胞,采用RT-PCR和Western blot方法分别测定细胞MD-2mRNA和蛋白的表达,ELISA方法测定细胞培养上清液TNF-α水平。结果 LPS组大鼠肺泡巨噬细胞和肺组织标本中MD-2 mRNA和蛋白的表达均显著高于对照组(P0.01),血清TNF-α水平明显升高(P0.01)。在LPS刺激下,NR8383细胞MD-2 mRNA和蛋白的表达显著增加(P0.01),细胞培养上清液中TNF-α水平升高(P0.01)。经MD-2 siRNA处理后,NR8383细胞在LPS刺激下MD-2mRNA和蛋白的表达未见明显增加(P0.05),细胞培养上清液中TNF-α水平未见明显升高(P0.05)。结论 MD-2在LPS所致ALI大鼠肺组织中表达显著上调,沉默肺泡巨噬细胞MD-2基因可抑制LPS刺激引起的细胞因子分泌增加,提示MD-2在LPS所致大鼠ALI中起重要作用。     

混合游离脂肪酸对大鼠肺微血管内皮细胞Toll样受体4表达的影响及其介导的炎症反应机制

目的研究混合游离脂肪酸（FFA）对大鼠肺微血管内皮细胞（RRPMVECs）Toll样受体4（TLR4）的激活作用及其介导的链式炎症反应机制。方法以不同浓度的FFA处理体外培养的RPMVECs,Westernblotting检测TLR4蛋白的表达。用干扰小RNA（siRNA）转染体外培养的RPMVECs（TLR4 siRNA组和杂序siRNA组）,设立阴性对照组。分别用0．1mmol／LFFA、10ng／mL脂多糖（LPS）和5ng／mL肿瘤坏死因子-α（TNF-α）处理各组细胞,以未加药细胞作为相应的空白组。Real-TimePCR检测TLR4mRNA和NF-κB抑制蛋白激酶β（IKKβ）mRNA的表达,Westernblotting检测磷酸化核因子κB抑制因子（p-IκBα）和核因子κB（NF-κB）的表达,ELISA法检测细胞培养上清液中炎症因子白介素-1β（IL-1β）的表达。结果RPMVECs的TLR4蛋白相对表达量在0．1mmol／LFFA处理后显著增高（P〈0．05）,并随FFA浓度的升高而增加。在杂序siRNA和阴性对照组,TLR4mRNA的相对表达量在LPS和FFA处理后显著升高（P〈0．05）,TNF-α处理无明显变化;而在TLR4干扰组,3种处理后TLR4mRNA的表达均无显著变化。在杂序siRNA和阴性对照组,3种方式处理后RPMVECs的IKKβmRNA、p-IκBα及IL-1β的相对表达量均显著升高（P〈0．05）,而TLR4siRNA干扰抑制了其在FFA和LPS处理组的表达,但对TNF-α组无抑制作用。结论FFA通过TLR4／IKKβ／NF-κB信号通路介导RPMVECs的炎症反应。