家族性高胆固醇血症患者低密度脂蛋白受体基因新突变一例

目的 分析中国家族性高胆固醇血症（FH）患儿低密度脂蛋白受体（LDL－R）基因突变的情况，并为在婴幼儿时期此病的症前筛查提供确诊方法。方法 以患儿及其父母的基因组DNA为模板，首先用聚合酶链反应（PCR）扩增该基因的启动子和全部18个外显子，然后用单链构象多态性（SSCP）方法分析PCR产物，最后对电泳结果异常进行DNA测序。结果 在1个家系中检测出患儿和其父亲LDL－R基因的一种新突变，即在第4外显子的444位碱基发生杂合突变（T→A），相应的氨基酸由半胱氨酸变成终止密码子，其母亲LDL－R基因正常。结论 LDL－R基因此位点的突变可引起FH，PCR－SSCP方法可用于筛查出的高危人群的确诊。     

家族性高胆固醇血症患者低密度脂蛋白受体基因复合纯合突变一例

目的 检测家族性高胆固醇血症(FH)患者低密度脂蛋白受体(LDL—R)基因点突变，分析基因型与临床表型间的关系，探讨其分子病理机制。方法以1例临床诊断为FH纯合子患儿及其父母的基因组DNA为模板，用降落PCR方法，在同一程序中分别对LDL—R基因的启动子和全部18个外显子片段进行扩增，琼脂糖凝胶电泳检测，扩增产物直接进行核苷酸序列分析，并检索FH突变数据库(www．ucl．ac．uk／fh)。此外采用PCR-限制性内切酶技术，检测载脂蛋白(Apo)B100基因Q3500R突变，以排除家族性Apo B100缺陷症。结果该患儿及其父亲第4外显子发生Cys^122→Tyr(C122Y)杂合错义突变，同时患儿及其母第9外显子发生Thr^273→Ile(17383I)杂合错义突变，因此该患儿LDLR基因第4、9外显子各存在一个杂合突变，上述突变尚未在FH突变数据库见到。未检测出患儿及其父母Apo B100Q3500R突变。结论此患儿为LDL—R基因存在C122Y、T3831合纯合突变并分别来自其父母；以上两位点突变可引起FH；是FH患者LDL-R基因的一种新突变类型。     

家族性高胆固醇血症患者低密度脂蛋白受体新突变类型与表型关系的研究

目的　检测中国汉族家族性高胆固醇血症 (FH)家系低密度脂蛋白受体 (LDLR)基因突变类型 ,研究基因型与表型间的关系 ,探讨FH发病的分子病理机制。方法　先证者及家系成员进行血脂测定、心电图、心脏及大血管彩色多普勒超声检查后采用聚合酶链反应 ( polymerasechainreaction ,PCR) 变性高效液相色谱 (DHPLC)法结合扩增产物直接序列分析检测LDLR基因启动子和全部 18个外显子片段 ,结果与GenBank公布的该基因正常序列比对找出突变并检索FH突变数据库(www .ucl.ac .uk/fh)。此外 ,采用PCR 限制性内切酶技术 ,检测载脂蛋白B10 0 (ApoB10 0 )基因Q35 0 0R突变 ,以排除家族性ApoB10 0 缺陷症 (FDB)。结果　DHPLC分析发现该患儿及其父母LDLR基因第 3外显子存在一异常波峰 ,DNA测序证实该患儿第 3内含子 5′剪接位点存在G→A纯合剪接突变 ,其父母相同位点表现为野生型和突变型杂合现象 ;同时未检测出患儿及其父母ApoB10 0Q35 0 0R突变。结论　国内首次发现LDLR基因第 3内含子G→A纯合剪接突变 ;该突变可能是FH发病的分子基础并导致其严重的临床表型 ;PCR DHPLC法可用于FH可疑人群的确诊     

家族性高胆固醇血症少女LDL受体基因突变致严重冠心病及调脂治疗

正家族性高胆固醇血症(FH)是一种影响胆固醇代谢的常染色体显性遗传疾病,也是冠心病的重要危险因素。本文报道了1例FH致严重冠心病(CHD)的18岁少女,通过基因检测发现该患者及其母亲低密度脂蛋白受体(LDLR)基因第9外显子上游第1187-10位碱基G突变为A,该位点突变在中国人杂合子型家族性高胆固醇血症(He FH)患者中为首次报道。随访3年联合调脂治疗后患者低密     

家族性高胆固醇血症低密度脂蛋白受体基因突变分析

目的:检测1例家族性高胆固醇血症(FH)先证者及其4代家系成员低密度脂蛋白受体(LDL-R)基因突变,探讨该家族FH可能发病分子机制.方法:收集先证者及其家系成员临床资料和基因组DNA,以基因组DNA为模板,用PCR方法扩增LDL-R基因的启动子和全部18个外显子,PCR产物进行限制性内切酶技术结合DNA测序,核苷酸序列分析结果与Gen Bank比对寻找突变;采用PCR-DNA测序技术检测apoB100基因R3500Q、R3531C和R3500W位点以及枯草溶菌素转化酶9(PCSK9)基因,以排除家族性apoB100缺陷症和PCSK9基因突变.结果:先证者及其部分家系成员第6号外显子发生Cys276X杂合无义突变,为半胱氨酸改变为提前终止密码子,使终止密码子在第276位提前出现,为致病性突变,国内尚无报道;另外,第15号外显子发生Arg744Arg同义突变.其母未发现上述突变,未检测出患者及其家系apoB100基因R3500Q、R3531C和R3500W突变以及枯草溶菌素转化酶9基因突变.结论:此患者及家系LDL-R基因存在Cys276X无义突变,可能是FH的致病突变,该突变是我国FH患者LDLR基因的一种新突变类型.     

新突变致复合杂合子家族性高胆固醇血症家系的基因检测

目的对临床诊断为遗传性高胆固醇血症纯合子患者所在家系成员的相关基因进行突变检测和分析,探讨该病的分子诊断方法和发病的可能分子机制。方法以该家系中3代共6人的基因组DNA为模板,用PCR对低密度脂蛋白受体（LDLR）基因的全部18个外显子和启动子以及载脂蛋白B-100（Apo B-100）基因3500-3531区域进行扩增,琼脂糖凝胶电泳鉴定后对PCR产物直接测序。测序结果与Gene Bank中该基因的正常序列对比找出突变,结合该家系成员临床表型证实突变。结果在ApoB-100的3500-3531区域未发现突变,而在先证者LDLR基因的第4外显子发现新的点突变685delA杂合性腺嘌呤缺失和386A〉G杂合错义突变,其父存在685delA杂合性腺嘌呤缺失,其母存在386A〉G杂合错义突变。结论证实家系先证者是存在LDLR突变的复合杂合子,发现的新的LDLR基因突变位点386A〉G和685delA分别来源于父系和母系的遗传,可能是该家系发病的分子基础。     

家族性高胆固醇血症家系低密度脂蛋白受体活性及其基因突变分析

目的:对1例临床诊断为家族性高胆固醇血症(FH)纯合子患者家系进行低密度脂蛋白受体(LDL-R)活性研究及其基因突变分析,旨在探讨其分子病理机制。方法:对先证者及其父母进行血脂、颈动脉超声等检查;采用流式细胞仪检测先证者及其父母外周血淋巴细胞LDL-R表达量和功能;以先证者基因组DNA为模板,扩增载脂蛋白B100(ApoB100)基因3500区域片断,PCR产物进行核苷酸序列分析,排除由该突变导致家族性ApoB100缺陷症;用降落式PCR方法,在同一程序中分别扩增LDL-R基因的启动子和全部18个外显子片段,扩增产物进行核苷酸序列分析;发现突变后验证其父母是否存在相同基因突变。结果:先证者血清TC和LDL水平明显升高、颈动脉内中膜明显增厚;LDL-R的表达量和结合功能显著下降(分别为正常人的13.6%和21.1%);ApoB100基因3500区域未见突变,LDL-R基因第1864位碱基T取代了G发生纯合错义突变,导致第601位氨基酸天冬氨酸变成脯氨酸(D601Y)。其父母LDL-R基因发现了相同的杂合突变,经检索该突变在我国未见报道。结论:证实家系先证者存在LDL-R基因突变,分别来源于父系和母系的遗传,该突变可能是家系发病的分子基础;D601Y也可能是我国FH患者LDL-R基因一种新的突变类型。     

姐妹2人同患家族性高胆固醇血症家系LDL-R基因突变分析

目的:对临床确诊的家族性高胆固醇血症(FH)两姐妹及其家系成员进行低密度脂蛋白受体(LDL-R)基因突变分析,探讨其发病机制。方法:提取患者外周血基因组DNA,聚合酶链反应分别扩增启动子和18个外显子片断,采用单链构象多态性(PCR-SSCP)结合银染技术,对异常电泳条带进行核苷酸序列分析。结果:姐妹2人及其父亲,叔叔,祖母均发现LDL-R基因第13外显子存在一个错义突变,与GeneBank对照证实第1879位G→A碱基置换,氨基酸的改变为丙氨酸→苏氨酸(A606T突变),其母亲和女儿经测序并未发现此突变位点。结论:姐妹2人均为LDL-R基因存在A606T杂合错义突变,并均来自其父系亲属;可能是该家系发病的分子基础。     

姐妹2人同患家族性高胆固醇血症家系LDL-R基因突变分析

目的：对临床确诊的家族性高胆固醇血症（FH）两姐妹及其家系成员进行低密度脂蛋白受体（LDL-R）基因突变分析,探讨其发病机制。方法：提取患者外周血基因组DNA,聚合酶链反应分别扩增启动子和18个外显子片断,采用单链构象多态性（PCR-SSCP）结合银染技术,对异常电泳条带进行核苷酸序列分析。结果：姐妹2人及其父亲,叔叔,祖母均发现LDL-R基因第13外显子存在一个错义突变,与GeneBank对照证实第1879位G→A碱基置换,氨基酸的改变为丙氨酸→苏氨酸（A606T突变）,其母亲和女儿经测序并未发现此突变位点。结论：姐妹2人均为LDL-R基因存在A606T杂合错义突变,并均来自其父系亲属；可能是该家系发病的分子基础。     

家族性高胆固醇血症三个家系的基因测序研究

目的 检测3个家族性高胆固醇血症（fmilial hypercholesterolemia,FH)家系的基因突变位点，评价双脱氧链终止基因测序法诊断FH的价值。方法 应用双脱氧链终止基因测序法对各样本DNA进行低密度脂蛋白受体（low density lipoprotein receptor,LDLR)基因测序。结果 临床诊断3个家系43例中纯合子FH5例，杂合子FH者10例，正常28例；对照组30例，LDLR基因测序发现三个突变位点：Exon10TGG1448TAG(Trp-Stop),Exonll ATG1592AAG(Met-Lys),Exon4GAG683GCG(Glu-Ala)；后两者为首次发现，临床判断和基因测序结果69例一致。符合率为94.5%。对于4例不一致的结果，分析认为基因测序结果更合理。结论 双脱氧链终止基因测序法对LDLR基因进行突变的检测是确诊家族性高胆固醇血症的有效方法。     

Learning curves for TAVR: Not quite see one,do one teach one

• The learning curve for TAVR is determined based on technical (procedural) data from PARTNER‐1 Trial
• The number of cases needed to reach a learning curve for TAVR in PARTNER‐1 was 50 for original sites and fell to 25 for late entering sites
• Analyses such as this is important in developing guidelines for other emerging technologies

     

Food allergy: one only finds what one seeks

We report three observations of food allergy to Penicillium. A systematic approach has allowed the retention of the surprising diagnosis in the first observation that we met. For those following we were content with a diagnosis of strong suspicion, without making a provocation test. The indications of provocation tests are discussed. As in these observations, it is possible that certain food allergens which are considered as rare are in fact more frequent than those reported in the literature; when an allergy does not bother the patient, when exclusion of the food is easy, food allergy is "forgotten" and not reported to the physician.     

Capacitance cytometry: measuring biological cells one by one

Measuring the DNA content of eukaryotic cells is a fundamental task in biology and medicine. We have observed a linear relationship between the DNA content of eukaryotic cells and the change in capacitance that is evoked by the passage of individual cells across a 1-kHz electric field. This relationship is species-independent; consequently, we have developed a microfluidic technique-"capacitance cytometry"-that can be used to quantify the DNA content of single eukaryotic cells and to analyze the cell-cycle kinetics of populations of cells. Comparisons with standard flow cytometry demonstrate the sensitivity of this new technique.