低声压级次声对神经病理性疼痛大鼠脊髓趋化因子介导炎症反应的影响

目的探讨低声压级次声对神经病理性疼痛大鼠脊髓趋化因子介导炎症反应的影响。方法 72只健康雄性SD大鼠采用随机数字表分为三组,假手术组(Sham组)、神经病理性疼痛组(NP组)和低声压级次声干预组(LNP组),每组24只。制备大鼠坐骨神经慢性压迫性损伤模型。Sham组大鼠仅暴露坐骨神经而不结扎,其余操作均与NP组和LNP组相同。LNP组大鼠于造模后第4天开始接受低声压级次声治疗,每天4h,连续进行21d。所有大鼠均于术前1d(T_0)和术后3d(T_1)检测机械缩足阈值(MWT),分别于术后10d(治疗7d,T_2)、17d(治疗14d,T_3)和24d(治疗21d,T_4),每组各随机取8只大鼠检测MWT,实时荧光定量PCR技术检测脊髓组织中单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、趋化因子受体2(CCR2)、TNF-α、IL-1β和IL-6基因表达,Western blot法检测脊髓组织中MCP-1和CCR2蛋白含量。结果 T_1~T_4时NP组和LNP组大鼠MWT明显低于T_0时和Sham组,且LNP组大鼠MWT明显高于NP组(P0.05)。T_2~T_4时NP组和LNP组大鼠脊髓组织中MCP-1、CCR2、TNF-α、IL-1β和IL-6mRNA相对表达量明显高于Sham组(P0.05);T_3、T_4时LNP组大鼠脊髓组织中MCP-1、CCR2、TNF-α、IL-1β和IL-6mRNA相对表达量明显低于NP组(P0.05)。T_2~T_4时NP组和LNP组脊髓组织中MCP-1和CCR2蛋白含量明显高于Sham组,T_3、T_4时LNP组脊髓组织中MCP-1和CCR2蛋白含量均明显低于NP组(P0.05)。结论低声压级次声可有效缓解神经病理性疼痛大鼠疼痛症状,机制可能与抑制趋化因子介导的级联炎症反应有关。     

p38MAPK信号通路在右美托咪定抗布比卡因神经毒性损伤中的作用

目的评价p38MAPK信号通路在右美托咪定抗布比卡因神经毒性损伤中的作用。方法取鞘内置管成功的SD大鼠72只,采用随机数字表法将其分为六组,每组12只:二甲基亚砜对照组(C组)、p38MAPK抑制剂组(SB组)、右美托咪定组(D组)、布比卡因组(B组)、右美托咪定+布比卡因组(DB组)及p38MAPK抑制剂+布比卡因组(SBB组)。C组鞘内注射二甲基亚砜20μl,SB组和B组分别鞘内注射p38MAPK抑制剂30μg和5%布比卡因20μl,DB组和SBB组在鞘内注射5%布比卡因20min前分别腹腔注射右美托咪定75μg/kg和鞘内注射p38MAPK抑制剂30μg;D组腹腔注射右美托咪定75μg/kg。于鞘内置管前(T_0)、鞘内给药前(T_1)、鞘内给药后4、8、12h和1、2、3、4、5、6d(T_2~T_(10))时测定大鼠后肢机械缩足阈值(MWT)和热缩足反射潜伏期(TWL);于给药24h后每组随机取6只大鼠,取L4~5脊髓组织,TUNEL法检测凋亡细胞;Western blot法检测pp38MAPK蛋白表达水平。结果与T_0时比较,T_2~T_9时B组、T_2~T_7时DB组和T_2~T_5时SBB组MWT明显升高,T_2~T_9时B组、T_2~T_6时DB组和T2~T5时SBB组TWL明显延长(P0.05);与C组比较,T_2~T_9时B组MWT明显升高、TWL明显延长,B组细胞凋亡指数及pp38MAPK蛋白表达明显升高(P0.05);与B组比较,T_2~T_9时DB、SBB组MWT明显下降,TWL明显缩短,B组细胞凋亡指数及p-p38MAPK蛋白表达明显下降(P0.05)。结论右美托咪定可通过抑制神经细胞凋亡来减轻布比卡因诱发的大鼠脊髓神经毒性,其机制与抑制p38MAPK信号通路活化有关。     

神经病理性疼痛大鼠FcγRⅠ mRNA表达量的变化

目的研究大鼠坐骨神经慢性压迫性损伤(chronic constriction injury of the sciatic nerve,CCI)发生后不同时期FcγRⅠmRNA表达量的变化。方法雄性Wistar大鼠72只随机分为三组:空白对照组(C组,n=8),假手术组(S组,n=32),CCI模型组(NP组,n=32)。C组不进行任何处理,S组只分离暴露坐骨神经后不结扎,NP组建立CCI模型。观察并记录术前和术后3、7、14和21d三组大鼠术侧后爪机械缩足阈值(mechanical withdrawal threshold,MWT)和右后爪热缩足潜伏期(thermal withdrawal latency,TWL)。RT-PCR检测术后3、7、14、21d时S组和NP组RTPCR脊髓、背根神经节的FcγRⅠmRNA表达。结果与术前比较,术后3、7、14和21dNP组MWT明显减少、TWL明显缩短(P0.05)。与NP组比较,术后3、7、14和21dC组、S组MWT明显增加、TWL明显延长(P0.05),术后3d的C组、术后3、7、14和21dS组脊髓和背根神经节的FcγRⅠmRNA表达明显减少(P0.05或P0.01)。结论坐骨神经慢性压迫性损伤大鼠脊髓海马和背根神经节FcγRⅠmRNA表达上调,可能与神经病理性疼痛的发生有关。     

电针对神经病理性疼痛大鼠脊髓P2X3受体表达的影响

目的 探讨电针对神经病理性疼痛大鼠脊髓P2X3受体表达的影响.方法 清洁级雄性SD大鼠60只,体重180 g～220 g,采用随机数字表法分为6组,每组10只:假手术组(Sham组)仅分离坐骨神经,不结扎;神经病理性疼痛组(CCI组)采用坐骨神经慢性压迫性损伤法制备神经病理性疼痛模型;2 Hz穴位电针组(LEA组)于坐骨神经结扎(chronic constrictive injury,CCI)后第4天开始电针治疗,刺激大鼠术侧足三里-阳陵泉穴,频率2 Hz连续波,强度≤1.5 mA,每天1次,30 min/次,连续6d;15 Hz穴位电针组(HEA组)电针频率为15 Hz,余同LEA组;2 Hz非穴位电针组(NA-LEA组)电针刺激大鼠术侧足三里-阳陵泉旁5mm非穴位点,余同LEA组;15 Hz非穴位电针组(NA-HEA组)电针刺激大鼠术侧足三里-阳陵泉旁5mm非穴位点,余同HEA组.各组术前1 d(T0)和术后3、5、7、9 d(T1-4)测定大鼠后肢机械缩足反射阈值(mechanical withdrawal threshold,MWT)和热缩足反射潜伏期(thermal withdrawal latency,TWL);于术后第10天处死大鼠,取右侧L4-6脊髓节段,Western-blot和反转录酶-聚合酶链锁反应法分别检测大鼠脊髓P2X3受体蛋白和mRNA表达.结果 与Sham组比较,其余各组MWT和TWL降低(P＜0.05),脊髓P2X3受体蛋白和mRNA表达升高(P＜0.05);与CCI组比较,LEA组和HEA组T2-4时MWT和TWL升高(P＜0.05),脊髓P2X3受体蛋白和mRNA表达降低(P＜0.05);与LEA组比较,T4时HEA组MWT和TWL升高,脊髓P2X3受体蛋白和mRNA表达增多(P＜0.05).结论 电针足三里-阳陵穴可明显增加神经病理性疼痛大鼠的机械痛和热痛阈值,其机制可能与降低脊髓背角P2X3受体表达有关.     

姜黄素对2型糖尿病大鼠神经病理性痛及脊髓背角和背根神经节IRE1α表达的影响

目的 评价姜黄素对2型糖尿病大鼠神经病理性痛及脊髓背角和背根神经节肌醇需求激酶1α(IRE1α)表达的影响.方法 高脂高糖喂养雄性SD大鼠8周诱导胰岛素抵抗,以35 mg/kg链脲佐菌素(STZ)单次腹腔注射,3d后血糖≥16.7 mmol/L大鼠为2型糖尿病大鼠.注射STZ 14 d后机械缩足阈值(MWT)和热缩足潜伏期(TWL)低于基础值80％的大鼠为2型糖尿病神经病理性痛大鼠,采用随机数字表法,将其随机分为3组(n=27):2型糖尿病神经病理性痛组(DNP组)、姜黄素组(Cur组)和溶剂对照组(SC组).Cur组和SC组于注射STZ 14 d后腹腔注射姜黄素或玉米油100 mg/kg(25mg/ml),1次/d,连续14d,DNP组不做任何处理.另取27只正常大鼠为对照组(C组),给予普通饲料喂养.给予姜黄素后第3、7和14天时测定MWT和TWL,痛阈测定后用Western blot法检测大鼠脊髓背角和背根神经节IREIα的表达.结果 与C组比较、DNP组、Cur组和SC组MWT降低,TWL缩短,脊髓背角和背根神经节IRE1α表达上H调(P＜0.05);与DNP组比较,Cur组MWT升高,TWL延长,脊髓背角和背根神经节IREIα表达下调(p＜0.05).SC组和DNP组上述指标比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 姜黄素可减轻2型糖尿病大鼠神经病理性痛,其机制与抑制脊髓背角和背根神经节IRE1α表达有关.     

姜黄素对大鼠糖尿病神经病理性痛的效应

目的 评价姜黄素对大鼠糖尿病神经病理性痛(DNP)的效应.方法 雄性SD大鼠48只,随机分为6组(n=8):正常对照组(C组)、DNP组(D组)、DNP+二甲基亚砜组(DD组)和DNP+姜黄素50、100、200 mg/kg组(DC50组、DC100组和DC200组).D组、DD组、DC50组、DC100组和DC200组采用腹腔注射链唑霉素75 mg/kg的方法 制备糖尿病神经病理性痛模型,注射链唑霉素后14 d开始腹腔注射二甲基亚砜(姜黄素的溶媒)或相应剂量姜黄素,1次/d,连续2周.分别造模前2 d、注射链唑霉素后14 d、姜黄素给药1、3、7、14 d时测定机械缩足痛阚(MWT)和热缩足潜伏期(TWL),最后一次测定痛阈后处死大鼠,测定脊髓背角和背根神经节细胞核磷酸化JNK(p-JNK)和NF-кB p65的表达水平.结果 与C组相比,D组各时点MWT降低,TWL缩短,脊髓背角和背根神经节细胞核p-JNK和NF-кB p65表达上调(P<0.05).与D组相比,DC50组、DC100组和DC200组姜黄素给药期间MWT升高,TWL延长,且与剂量有关,脊髓背角和背根神经节细胞核p-JNK和NF-кB p65表达下调(P<0.05).结论 姜黄素可减轻大鼠糖尿病神经病理性痛,其机制可能与抑制脊髓背角和背根神经节JNK和NF-кB的激活有关.     

钙调神经磷酸酶在弗氏佐剂致大鼠炎性痛中的作用

目的探讨钙调神经磷酸酶(calcineurin,CaN)在弗氏佐剂致大鼠炎性痛痛觉过敏中的作用。方法选择雄性SD大鼠75只,体重200~300g,将其随机均分为对照组(C组)、完全弗氏佐剂(CFA)组(F组)和CaN+CFA组(NF组)。C组大鼠右侧后爪趾底注射生理盐水100μl,F组和NF组大鼠右侧后爪趾底注射CFA 100μl制备炎性痛模型,NF组大鼠于右侧后爪趾底注射CFA前1d鞘内注射CaN 10 U。三组大鼠于右侧后爪趾底注射前30 min(T0)、注射后0.5h(T_1)、1h(T_2)、2h(T_3)及4h(T_4)测定大鼠热刺激缩足潜伏期(PWTL);同时各取5只大鼠脊髓组织,Western blot法测定各组大鼠脊髓中CaN、核因子κB(NF-κB)p65蛋白含量;RT-PCR法测定大鼠脊髓中CaN及NF-κB基因的表达。ELISA法测定大鼠脊髓组织中IL-1β、TNF-α和IL-10浓度。结果T_2~T_4时F组,T_3、T_4时NF组PWTL明显短于T0时和C组(P0.05);T_2~T_4时NF组PWTL明显长于F组(P0.05)。T_1~T_4时F组,T_2~T_4时NF组脊髓组织CaN蛋白含量明显低于,NF-κB p65蛋白明显高于T0时和C组(P0.05);T_2~T_4时F组、NF组脊髓组织CaN基因表达、IL-10浓度明显低于,NF-κB基因表达及IL-1β、TNF-α浓度明显高于T0时和C组(P0.05);T_1~T_4时NF组脊髓组织CaN蛋白含量和基因表达明显高于,NF-κB p65蛋白含量和基因表达及IL-1β、TNF-α明显低于,IL-10浓度明显高于F组(P0.05)。结论 CaN通过抑制NF-κB,调节抗炎细胞因子和促炎细胞因子的平衡,抑制大鼠炎性痛的发生发展。     

姜黄素对大鼠神经病理性痛的影响

目的 探讨姜黄素对大鼠神经病理性痛的影响.方法 健康雄性SD大鼠108只,体重220～250 g,随机分为6组(n=18):对照组(C组)、假手术组(S组)、慢性压迫性损伤组(CCI组)和不同剂量姜黄素组(Cur1组、Cur2组和Cur3组).C组腹腔注射二甲基亚砜4 ml·kg-1·d-1,持续14 d;S组只分离坐骨神经,然后腹腔注射二甲基亚砜4 ml·kg-1·d-1,持续至术后14 d;CCI组术后腹腔注射二甲基亚砜4 ml·kg-1·d-1,持续至术后14 d;Cur1组、Cur2组或Cur3组术后分别腹腔注射姜黄素30、100、300 mg·kg-1·d-1,持续至术后14 d,姜黄素以二甲基亚砜溶解.于术前2 d和术后1、3、5、7、10、14d时测定热缩足反应潜伏期(TWL)和机械缩足反应阚值(MWT).各组于术后3、7、14 d时各处死6只大鼠,免疫组化法测定脊髓背角和背根神经节中磷酸化c-jun氨基末端蛋白激酶(p-JNK)和c-jun的表达.结果 与CCI组比较,Cur1组和Cur2组术后MWT升高,背根神经节和脊髓背角p-JNK和c-jun表达下调,Cur2组术后TWL升高(P<0.05);与Cur1组比较,Cur2组术后TWL升高,背根神经节和脊髓背角p-JNK和c-jun表达均下调(P<0.05),MWT差异无统计学意义(P0.05).结论 姜黄素30、100mg/kg可减轻大鼠神经病理性痛,100 mg/kg效果更明显,其机制可能与抑制脊髓背角和背根神经节p-JNK和c-jun表达上调有关.     

CREB结合蛋白质在神经病理性痛大鼠脊髓COX-2表达中的作用

目的 评价CREB结合蛋白质(CBP)在神经病理性痛大鼠脊髓COX-2表达中的作用.方法 雄性SD大鼠40只,体重220 ～ 250 g,鞘内置管成功后5d时采用坐骨神经慢性缩窄性损伤的方法制备大鼠神经病理性痛模型,采用随机数字表法,将其随机分为4组(n=10):假手术组(Sham组)、神经病理性痛组(NP组)、阴性对照病毒载体组(NC组)和CBP组.NC组和CBP组制备模型后7d时分别鞘内注射阴性对照病毒载体(RNAi-NC-LV)、CBPshRNA病毒载体(CBP RNAi-LV)20μl.于术前1d、术后3、5、7、10、12、14 d时测定大鼠术侧机械缩足反应阈值(MWT)和热缩足潜伏期(TWL).于术后14 d时取腰段脊髓,免疫组化法检测CBP、乙酰化组蛋白H3/H4(Ac-H3,Ac-H4)、COX-2蛋白的表达,RT-PCR法检测CBP、COX-2 mRNA的表达.结果 与Sham组比较,NP组、NC组和CBP组大鼠术后各时点术侧MWT和TWL降低,NP组和NC组大鼠术后14 d时脊髓CBP、Ac-H3、Ac-H4、COX-2蛋白表达和CBP、COX-2 mRNA表达上调(P＜0.05),CBP组上述各指标差异无统计学意义(P＞0.05);与NP组比较,CBP组术后10、12和14 d时MWT和TWL升高,术后14 d时脊髓CBP、Ac-H3、Ac-H4、COX-2蛋白表达和CBP、COX-2 mRNA表达下调(P＜0.05).结论 CBP表达上调导致组蛋白H3、H4乙酰化水平升高,脊髓神经元COX-2表达上调,参与了神经病理性痛的形成.     

重组人促红细胞生成素对L5脊神经切断大鼠痛阈及脊髓TNF-α和IL-1β表达的影响

目的 观察重组人促红细胞生成素(rhEPO)对L5脊神经切断大鼠机械和热痛阈及脊髓TNF-α和IL-1β表达的影响.方法 SD雄性大鼠50只随机分为五组:脊神经损伤rhEPO1 000、3 000、5 000 U/kg组(R1、R2、R3组)和生理盐水组(N组)及假手术组(C组),每组10只.术前1 d给药,连续7 d.测定术前当天及术后3、7、14 d大鼠的机械性缩足反射阈值(MWT)和热缩足潜伏期(TWL)及术后14 d各组大鼠L5脊髓肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)的水平.结果 L5脊神经损伤术后大鼠术侧MWT降低、TWL缩短、脊髓TNF-α和IL-1β的表达增高(P<0.01).与N组比较,R1组术后各时间点的MWT和TWL无明显改变;R2和R3组MWT增高、TWL延长(P<0.05);脊髓TNF-α、IL-1β水平降低(P<0.01).结论 腹腔注射rhEPO 3 000或5 000U/kg能缓解L5脊神经切断大鼠的机械和热痛敏,抑制脊髓TNF-α和IL-1β的表达.     

姜黄素对糖尿病神经病理性痛大鼠脊髓和背根神经节神经细胞凋亡的影响

目的 探讨姜黄素对糖尿病神经病理性痛(DNP)大鼠脊髓和背根神经节(DRG)神经细胞凋亡的影响.方法雄性SD大鼠108只,体重200～230 g,采用腹腔注射链唑霉素70 mg/kg的方法建立大鼠DNP模型.采用随机数字表法,将大鼠随机分为4组(n=27),正常对照组(C组):不制备DNP模型;DNP组;溶剂对照组(SC组)和姜黄素组(Cur组):于腹腔注射链唑霉素后14 d分别腹腔注射玉米油或姜黄素100 mg/kg(25 mg/ml),1次/d,连续2周.于链唑霉素给药前2 d、给药后14 d、姜黄素给药后3、7、14 d时测定机械缩足阈值(MWT)和热缩足潜伏期(TWL);于姜黄素给药后3、7、14 d时分别采用免疫组化法和Western blot法测定脊髓和DRG caspase-3和Bcl-2的表达水平,并测定神经细胞的凋亡率.结果 与C组比较,DNP组、SC组和Cur组MWT降低,TWL缩短,脊髓和DRG神经细胞凋亡率升高,caspase-3表达上调,Bcl-2表达下调(P＜0.05);与DNP组比较,Cur组MWT升高,TWL延长,脊髓和DBG神经细胞凋亡率降低,caspase-3表达下调,Bcl-2表达上调(P＜0.05),SC组差异无统计学意义(P＞0.05).结论 姜黄素可通过抑制脊髓和DRG神经细胞凋亡,从而减轻大鼠DNP,其机制与抑制caspase-3水平、增强Bcl-2水平有关.

Abstract：

Objective To investigate the effect of curcumin on the apoptosis in spinal cord and dorsal root ganglion neurons in a rat model of diabetic neuropathic pain (DNP) . Methods One hundred and eight male SD rats weighing 200-230 g were randomly divided into 4 groups ( n = 27 each): control group (group C), DNP group, solvent control group (group SC) and curcumin group (group Cur) . Diabetes was induced with intraperitoneal streptozocin 70 mg/kg. Successful induction of diabetes was defined as blood glucose ＞ 16.7 mmol/L. Curcumin and com oil 100 mg/kg (23 mg/ml) were given intraperitoneally once a day for 14 consecutive days starting from 14 days after administration of streptozocin in Cur and SC groups respectively. Mechanical paw withdrawal threshold (MWT) and thermal paw withdrawal latency (TWL) were measured 2 d before and 14 d after streptozocin injection and 3, 7 and 14 d after curcumin injection. The pain threshold measured at 14 d after administration of streptozocin decreased by more than 15% of the baseline in all the rats. The expression of caspase-3 and Bcl-2 in spinal cord and dorsal root ganglion was determined at 3, 7 and 14 d after curcumin injection by immuno-histochemistry and Western blot, and the neuronal apoptosis rate was determined by TUNEL. Results Compared with group C, MWT and Bcl-2 expression were significantly decreased, TWL was significantly shortened, the neurona lapoptosis rate and caspase-3 expression were significantly increased in DNP, SC and Cur groups ( P ＜ 0.05).Compared with group DNP, MWT and Bcl-2 expression were significantly increased, TWL was significantly prolonged, the neuronal apoptosis rate and caspase-3 expression were significantly decreased in Cur group ( P ＜0.05) . There was no significant difference in the parameters mentioned above between DNP and SC groups ( P ＞0.05). Conclusion Curcumin can attenuate DNP by inhibiting the apoptosis in spinal dorsal hom and dorsal root ganglion neurons in rats, and the inhibition of caspase-3 expression and increase in Bcl-2 expression are involved in the mechanism.     

鞘内注射吗啡加可乐定对切口痛大鼠脊髓背角蛋白激酶A催化亚单位表达的影响

目的 观察鞘内注射(intrathecal injection,IT)吗啡加可乐定对切口痛大鼠脊髓背角蛋白激酶A(protein kinaseA,PKA)催化亚单位表达的影响.方法 选择鞘内置管成功的雄性SD大鼠80只,随机分为5组,每组16只,分别为假手术组、对照组、吗啡2.5μg组、可乐定5 μg组和吗啡2.5 μg+可乐定5μg组.按Yaksh法鞘内置管,按Brennan法制作大鼠足底切口疼痛模型,用机械缩爪反射阈值(mechanical withdrawal threshold.MWT)和热缩爪潜伏期(thermal withdrawal latency,TWL)观察疼痛行为学变化,应用免疫组织化学法和免疫印迹法测定大鼠脊髓背角PKA催化亚单位表达的变化.结果 与假手术组比较,术后2h对照组大鼠的MWT明显降低,TWL明显缩短(P<0.01),脊髓背角PKA催化亚单位免疫反应阳性神经元数量和神经元胞浆内PKA催化亚单位表达明显增加(P<0.01);与对照组比较,吗啡2.5μg+可乐定5μg组大鼠的MWT明显增加,TWL明显延长(P<0.01),脊髓背角PKA催化亚单位免疫反应阳性神经元数量和神经元胞浆内PKA催化哑单位表达明显减少(P<0.01);而吗啡2.5μg组和可乐定5μg组大鼠的MWT、TWL、脊髓背角PKA催化亚单位免疫反应阳性神经元数量和神经元胞浆内PKA催化亚单位表达与对照组比较均无统计学意义.结论 在大鼠切口痛模型中,IT可乐定能增强吗啡的抗伤害作用,其机制可能与其抑制切口痛引起的脊髓背角PKA催化亚单位的表达增加有关.     

鞘内注射DNMT1-siRNA对CCI大鼠行为学和脊髓SOCS1、p-ERK、p-CREB表达的影响

目的探讨DNMT1在大鼠神经病理性痛中的作用及可能机制。方法清洁级健康雄性SD大鼠32只,体重200~250g,随机分为四组:假手术组(S组)、神经病理性痛组(CCI组)、CCI+DNMT1-siRNA组(CDS组)和CCI+control-siRNA组(CCS组),每组8只。CDS组在术后7、8、9d连续鞘内注射DNMT1-siRNA(2μg/10μl),CCS组注射等体积的对照序列siRNA(control-siRNA)。分别在术前1d,术后3、5、7、9、12和14d测定大鼠的机械缩足阈值(MWT)和热缩足反射潜伏期(TWL),术后14d测完行为学后处死大鼠,取L_4~L_6脊髓腰膨大节段,采用Western blot技术检测脊髓SOCS1、p-ERK、p-CREB的表达水平。结果术后3、5、7、9、12和14dCCI组和CCS组大鼠的MWT明显低于,TWL明显短于S组(P0.05);术后9、12、14dCDS组大鼠MWT明显高于,TWL明显长于CCS组(P0.05);术后14dCCI组和CCS组SOCS1表达明显低于S组和CDS组,pERK、p-CREB表达明显高于S组和CDS组(P0.05)。结论鞘内注射DNMT1-siRNA明显抑制大鼠神经病理性痛,其机制可能与促进脊髓SOCS1的表达,抑制p-ERK、p-CREB的表达有关。     

脉冲射频治疗对带状疱疹后神经痛模型大鼠脊髓背角自噬的影响

目的观察脉冲射频(PRF)治疗对带状疱疹后神经痛(PHN)模型大鼠疼痛的影响,探讨脊髓背角自噬改变的可能作用。方法雄性SD大鼠60只,体重200～240 g,随机分为五组:空白对照组(Blank组)、溶剂组(Solvent组)、PHN模型组(PHN组)、假治疗组(Sham组)和治疗组(PRF组),每组12只。PHN组、Sham组及PRF组腹腔注射树脂毒素(RTX)0.2 g/kg制备PHN模型。Blank组腹腔注射与PHN组相同体积的生理盐水。Solvent组腹腔注射相同体积的溶剂(10%吐温80、10%乙醇和80%生理盐水)。于制模前2 h、制模后1、4、7、10、14 d、PRF治疗后1、4、7、10、14、21、28、35和42 d测定大鼠机械缩足阈值(MWT)和热缩足潜伏期(TWL)。治疗后第42天处死大鼠,取L_(4-6)脊髓组织,采用Western blot法检测脊髓组织微管相关蛋白轻链Lc3Ⅱ和Lc3Ⅰ、Beclin-1和P62蛋白含量,计算Lc3Ⅱ和Lc3Ⅰ比值。RT-qPCR检测Lc3 mRNA和Beclin-l mRNA的表达量。结果与Blank组比较,PHN组、Sham组及PRF组RTX处理后大鼠MWT明显降低,TWL明显延长,脊髓组织Lc3Ⅱ/Lc3Ⅰ蛋白含量比值和Beclin-1蛋白含量明显升高,P62蛋白含量明显降低,Lc3 mRNA和Beclin-1 mRNA表达量明显增加(P均0.05)。与PHN组比较,PRF组大鼠在治疗7 d后MWT明显升高,TWL明显缩短,Lc3Ⅱ/Lc3Ⅰ蛋白含量比值明显降低,Beclin-1蛋白含量明显降低,P62蛋白含量明显增加,Lc3 mRNA和Beclin-1 mRNA表达量明显降低(P均0.05)。结论脉冲射频可能通过抑制脊髓背角组织自噬活性,改善线粒体功能,从而对PHN模型大鼠产生镇痛作用。     

炎性痛敏触发术后持久伤害性敏化模型的建立

目的通过建立改良外周炎性痛敏触发切口痛后持久伤害性敏化的动物模型,动态观察术前痛敏对切口痛后持久伤害性敏化大鼠疼痛行为学及脊髓水平蛋白激酶Mζ（PKMζ）的表达变化。 方法雄性SD大鼠28只,随机分为非触发组和触发组,各14只。非触发组大鼠脚底注射0.9%氯化钠溶液5 μl,触发组大鼠脚底注射1%角叉菜胶5 μl。两组分别于实验前、炎性痛敏后1~6 d以及切口痛后1~10 d观察大鼠对机械和伤害性热刺激的疼痛行为学变化;分别于切口痛前及后1、3、10 d观察脊髓PKMζ的表达。 结果实验前所有大鼠机械刺激缩爪阈值（MWT）和热刺激缩足反射潜伏期值（TWL）差异无统计学意义。触发组大鼠在注射1%角叉菜胶5 μl后出现了短暂的痛阈降低,并于3 d后恢复到基础值;两组大鼠切口痛后均出现活动频繁、跛行、舔咬手术切口等异常行为,与术前比较,两组大鼠的MWT、TWL均明显降低,差异有统计学意义（P<0.05）。但在切口术后5 d,非触发组大鼠的MWT、TWL逐渐升高,于术后10 d恢复至术前水平,而触发组大鼠MWT、TWL在各时间点均低于非触发组,差异有统计学意义（P<0.05）,并且这种差异一直持续到观察结束。与非触发组及术前相比,触发组大鼠脊髓背角PKMζ含量迅速升高（P<0.05）,并一直维持较高水平至观察结束。非触发组大鼠脊髓背角中PKMζ含量与术前比较差异无统计学意义。术前大鼠脊髓背角中PKMζ免疫阳性细胞均有少量表达,主要分布于脊髓背角浅层。与非触发组及术前相比,术后10 d触发组大鼠脊髓背角浅层PKMζ的免疫阳性细胞数明显增加（P<0.05）,非触发组脊髓背角浅层PKMζ的免疫阳性细胞数虽有所增加,但数量明显低于触发组（P<0.05）。 结论术前外周炎性痛敏可以触发切口痛后大鼠持久伤害性的敏化状态;脊髓背角PKMζ特异性抑制剂ZIP可以抑制这一敏化状态,这一作用与其特异性抑制脊髓水平PKMζ的表达有关。     

神经干细胞移植数量对大鼠神经病理性痛的影响

目的 探讨神经干细胞(NSGs)移植数量对大鼠神经病理性痛的影响.方法 取出生1～3 d的SD大鼠,制备NSCs悬液.清洁级雄性SD大鼠84只,体重150～180 g,采用右侧坐骨神经半切断法制备大鼠神经病理性痛模型.采用随机数字表法,将大鼠随机分为7组(n=12),假手术组(S组):仅暴露坐骨神经,不切断,鞘内注射细胞培养液30 μl;神经病理性痛组(NP组):于模型制备后3d鞘内注射细胞培养液30 μl;NP+NSCs 103组(N1组)、NP+NSCs 104组(N2组)、NP+NSCs 105组(N3组)、NP+NSCs 106组(N4组)和NP+NSCs 107组(N5组):于模型制备后3 d,鞘内注射相应浓度的NSCs悬液.模型制备前1 d和制备后1、3.7、14和21 d时测右足机械缩足阈值(MWT)和热缩足潜伏期(TWL);于模型制备后7和21 d,痛阈测定结束后,取右侧腰膨大脊髓背角及L5背根神经节,测定脑源性神经营养因子(BDNF)mRNA及其蛋白的表达水平.结果 与S组比较,NP组和N1～5组MWT降低,TWL缩短,脊髓背角和DRG BDNF mRNA表达上调(P<0.05),BDNF阳性细胞数增多,染色加深;与NP组比较,N2～5组MWT升高,TWL延长,脊髓背角和DRG BDNF mRNA表达上调(P<0.05),BDNF 阳性细胞数增多,染色加深;模型制备后7 d N1～5组MWT依次升高,TWL依次延长,脊髓背角和DRG BDNF mRNA表达依次上调(P<0.05),BDNF阳性细胞数依次增多,染色逐渐加深;模型制备后14、21d,N1～3组MWT依次升高,TWL依次延长(P<0.05),模型制备后21 d,N1～3组脊髓背角和DRG BDNF mRNA表达依次上调,BDNF阳性细胞数依次增多,染色逐渐加深;N3～5组上述指标比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 NSCs移植减轻大鼠神经病理性痛的适宜移植数量为105个.

Abstract：

Objective To investigate the effect of intrathecal (IT) transplantation of different quantities of neural stem cells (NSCs) on neuropathic pain (NP) in rats.Methods Eighty-four adult pathogen-free male SD rats weighing 150-180 g were randomly divided into 7 groups ( n = 12 each) : group sham operation (S group) , NP group, NP+ NSCs 103 , 104 , 105 , 106 , 107 groups (N1-5 groups) . NP was induced by partial transection of right sciatic nerve. NSCs were transplanted into subarachnoid space in N1-5 groups. Paw withdrawal threshold to mechanical stimulation (MWT) and paw withdrawal latency to nociceptive thermal stimuli (TWL) were measured at 1 day before (baseline) and 1, 3, 7, 14 and 21 days after operation. Brain derived neurotrophic factor ( BDNF) expression in spinal dorsal horn and dorsal root ganglia (DRG) was detected by immuno-histochemistry and RT-PCR on the 7th and 21st day after operation. Results Partial transection of the sciatic nerve gradually reduced MWT and TWL after operation starting from day 1 until day 7 and 14 as compared with the baseline in group NP. IT NSC transplantation significantly increased MWT and TWL and expression of BDNF in spinal dorsal horn and DRG in a dese-dependent manner at day 7 after operation in N1-5 groups as compared with group NP. There were no significant differences in MWT and TWL and BDNF expression among N3, N4 and N5 groups at day 21 after operation.Conclusion The proper quantity of transplanted NSCs which are able to ameliorate NP induced by partial transection of sciatic nerve in rats is 105 .     

神经干细胞移植数量对大鼠神经病理性痛的影响

目的 探讨神经干细胞(NSGs)移植数量对大鼠神经病理性痛的影响.方法 取出生1～3 d的SD大鼠,制备NSCs悬液.清洁级雄性SD大鼠84只,体重150～180 g,采用右侧坐骨神经半切断法制备大鼠神经病理性痛模型.采用随机数字表法,将大鼠随机分为7组(n=12),假手术组(S组):仅暴露坐骨神经,不切断,鞘内注射细胞培养液30 μl;神经病理性痛组(NP组):于模型制备后3d鞘内注射细胞培养液30 μl;NP+NSCs 103组(N1组)、NP+NSCs 104组(N2组)、NP+NSCs 105组(N3组)、NP+NSCs 106组(N4组)和NP+NSCs 107组(N5组):于模型制备后3 d,鞘内注射相应浓度的NSCs悬液.模型制备前1 d和制备后1、3.7、14和21 d时测右足机械缩足阈值(MWT)和热缩足潜伏期(TWL);于模型制备后7和21 d,痛阈测定结束后,取右侧腰膨大脊髓背角及L5背根神经节,测定脑源性神经营养因子(BDNF)mRNA及其蛋白的表达水平.结果 与S组比较,NP组和N1～5组MWT降低,TWL缩短,脊髓背角和DRG BDNF mRNA表达上调(P<0.05),BDNF阳性细胞数增多,染色加深;与NP组比较,N2～5组MWT升高,TWL延长,脊髓背角和DRG BDNF mRNA表达上调(P<0.05),BDNF 阳性细胞数增多,染色加深;模型制备后7 d N1～5组MWT依次升高,TWL依次延长,脊髓背角和DRG BDNF mRNA表达依次上调(P<0.05),BDNF阳性细胞数依次增多,染色逐渐加深;模型制备后14、21d,N1～3组MWT依次升高,TWL依次延长(P<0.05),模型制备后21 d,N1～3组脊髓背角和DRG BDNF mRNA表达依次上调,BDNF阳性细胞数依次增多,染色逐渐加深;N3～5组上述指标比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 NSCs移植减轻大鼠神经病理性痛的适宜移植数量为105个.     

神经干细胞移植数量对大鼠神经病理性痛的影响

目的 探讨神经干细胞(NSGs)移植数量对大鼠神经病理性痛的影响.方法 取出生1～3 d的SD大鼠,制备NSCs悬液.清洁级雄性SD大鼠84只,体重150～180 g,采用右侧坐骨神经半切断法制备大鼠神经病理性痛模型.采用随机数字表法,将大鼠随机分为7组(n=12),假手术组(S组):仅暴露坐骨神经,不切断,鞘内注射细胞培养液30 μl;神经病理性痛组(NP组):于模型制备后3d鞘内注射细胞培养液30 μl;NP+NSCs 103组(N1组)、NP+NSCs 104组(N2组)、NP+NSCs 105组(N3组)、NP+NSCs 106组(N4组)和NP+NSCs 107组(N5组):于模型制备后3 d,鞘内注射相应浓度的NSCs悬液.模型制备前1 d和制备后1、3.7、14和21 d时测右足机械缩足阈值(MWT)和热缩足潜伏期(TWL);于模型制备后7和21 d,痛阈测定结束后,取右侧腰膨大脊髓背角及L5背根神经节,测定脑源性神经营养因子(BDNF)mRNA及其蛋白的表达水平.结果 与S组比较,NP组和N1～5组MWT降低,TWL缩短,脊髓背角和DRG BDNF mRNA表达上调(P<0.05),BDNF阳性细胞数增多,染色加深;与NP组比较,N2～5组MWT升高,TWL延长,脊髓背角和DRG BDNF mRNA表达上调(P<0.05),BDNF 阳性细胞数增多,染色加深;模型制备后7 d N1～5组MWT依次升高,TWL依次延长,脊髓背角和DRG BDNF mRNA表达依次上调(P<0.05),BDNF阳性细胞数依次增多,染色逐渐加深;模型制备后14、21d,N1～3组MWT依次升高,TWL依次延长(P<0.05),模型制备后21 d,N1～3组脊髓背角和DRG BDNF mRNA表达依次上调,BDNF阳性细胞数依次增多,染色逐渐加深;N3～5组上述指标比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 NSCs移植减轻大鼠神经病理性痛的适宜移植数量为105个.     

Wnt/β-catenin信号通路在高压氧治疗大鼠神经病理性痛中的作用

目的观察高压氧后处理对大鼠神经病理性痛的治疗作用,探讨Wnt/β-catenin信号通路在其中的作用。方法成年雄性SD大鼠30只,采用随机数字表法,将其分为三组:假手术组(S组)、坐骨神经慢性缩窄手术组(CCI组)和高压氧治疗组(HBO组),每组10只。HBO组于术后第1天开始高压氧治疗,连续7d,1次/天。S组和CCI组单纯放入氧舱100min而不接受治疗。于术前1d、术后1、3、5、7d测定机械缩足反射阈值(MWT)和热缩足反射潜伏期(TWL)。术后7d取材,应用Western blot法测定各组大鼠脊髓Wnt3a、β-catenin分子表达,应用免疫组化法测定各组大鼠脊髓Wnt3a蛋白的表达。结果术后1、3、5、7dCCI、HBO组MWT明显低于,TWL明显短于S组(P0.05)。术后1、3、5、7dHBO组MWT明显高于,TWL明显长于CCI组(P0.05)。术后7dCCI组大鼠脊髓Wnt3a、β-catenin蛋白表达明显高于S组和HBO组(P0.05)。术后7dCCI组大鼠脊髓背角Wnt3a、β-catenin蛋白表达明显高于S组和HBO组(P0.05)。应用免疫组化法检测Wnt3a蛋白的表达情况,与Western blot所检测蛋白表达情况相同。结论高压氧后处理能减轻大鼠神经病理性痛,其作用机制可能通过抑制脊髓Wnt/β-catenin信号通路来实现。