TNF-α影响鼠根尖乳头干细胞成骨/成牙本质能力的实验研究

目的研究肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)对鼠根尖乳头干细胞(stem cells from apical papilla,SCAP)增殖及成骨/成牙本质能力的影响。方法分离大鼠根尖乳头组织,采用酶消化法结合组织块法获得SCAP并通过免疫荧光法进行细胞鉴定;将细胞分为实验组(TNF-α浓度5、10、15、20、30、40、50μg/L)和对照组(TNF-α浓度0μg/L),CCK-8法检测细胞增殖能力;采用碱性磷酸酶活性、茜素红染色及实时定量PCR检测TNF-α对SCAP成骨/成牙本质能力的影响。结果体外培养SCAP符合间充质干细胞来源的特征且具有多向分化能力;细胞增殖能力结果显示:各浓度组均能促进SCAP增殖(P<0.05);ALP活性结果显示:各浓度TNF-α均能明显降低ALP活性(P<0.05);茜素红染色结果显示:随着TNF-α的浓度的增加,染色逐渐变浅,红色结节逐渐变小,形成数量逐渐减少;qRT-PCR结果显示:3 d时,实验组OC、DMP-1表达量明显降低(P<0.05),牙本质涎磷蛋白(DSPP)表达量降低(P>0.05),骨涎蛋白(BSP)表达量稍有增加(P<0.05)。7 d时,OC、DSPP表达量明显降低(P>0.05),DMP-1表达量明显降低(P<0.05),BSP表达量与对照组相比仍稍有增加(P>0.05);14 d时,BSP、OC、DMP-1表达量均明显降低(P<0.05),DSPP表达量稍有增加(P>0.05)。结论炎性因子TNF-α对SCAP的增殖有促进作用同时不同程度抑制SCAP成骨/成牙本质向分化能力。     

TNF-α对根尖乳头干细胞体外增殖及成牙成骨向分化能力的影响

目的:探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对根尖乳头干细胞(SCAP)外增殖及成牙成骨向分化能力的影响。方法:采用酶消化法结合组织块法获得根尖乳头干细胞,免疫荧光免疫组化法鉴定细胞来源,通过不同浓度的TNF-α进行干预后检测对SCAP增殖,矿化成牙成骨能力的影响。结果:MTT检测显示各浓度组TNF-α均能刺激SCAP的体外增殖,10、50 mg/L的TNF-α实验组可明显促进SCAP增殖(P<0.05),差异具有统计学意义;茜素红染色显示与对照组(0 mg/L TNF-α)相比,实验组(5、10、50 mg/L TNF-α)染色明显变浅,矿化结节形成的较小,对照组形成红色结节范围大且呈深橘色;免疫组化染色显示SCAP胞浆中DSP、BSP均有表达,实验组部分细胞胞浆染色且染色较浅,呈褐色为阳性表达,对照组(0 mg/L TNF-α)细胞胞浆完全着色呈深褐色,为强阳性表达。结论:不同浓度TNF-α对SCAP的生长增殖均有促进作用,TNF-α在不同程度上对SCAP矿化及成牙成骨向分化有抑制作用。     

牙髓-牙本质复合体

牙髓-牙本质复合体的各结构组分相互依赖、相互影响、相互作用,构成一个功能性的有机整体.本文就牙髓-牙本质复合体的概念、动力学特性、体外培养及临床应用等方面作一综述.     

牙髓干细胞修复再生同质异体大鼠牙髓牙本质复合体的研究

目的:观察第3代同质异体牙髓干细胞(dental pulp stem cell,DPSCs) 定植于冠髓被摘除的大鼠髓腔后,再生修复牙髓牙本质复合体的能力。方法:18只SD大鼠随机分为实验组和对照组,两组均全麻下摘除大鼠上颌双侧第一磨牙冠髓,实验组同期髓腔定植体外培养的同质异体大鼠牙髓干细胞,对照组冠髓摘除后不进行任何处理,术后均使用光固化树脂充填封闭髓腔。两组动物均于术后2、4、6周处死,取其上颌骨进行大体观察,X线观察,组织学观察,牙本质的厚度测量。结果:实验组4周时,肉眼可见牙髓充血减少;6周时,X线显示牙本质厚度增加,根尖孔闭合;6周时,光镜下显示明显新生牙本质形成,成牙本质细胞栅栏状排列;牙本质厚度测量结果显示,实验组牙本质厚度2周时增厚,4周增厚更明显,持续至6周,优于对照组(P<0.05)。结论:牙髓干细胞髓腔内定植,可以促进牙髓牙本质复合体修复再生,具有潜在的临床应用价值。     

成体干细胞在组织工程化牙本质牙髓复合体中的应用研究与展望

牙髓干细胞(dental pucp stem cells，DPSCs)是一种成体干细胞。有关成体十细胞的研究进展，尤其是骨髓基质干细胞(bone marrow stromal stem cells，BMSSCs)的研究，为牙髓干细胞的研究提供了可以借鉴的思路和方法。DPSCs也有相对特异的识别途径和特点，其中重要的特征之一是一定条件下能形成牙本质牙髓复合体。这将为其应用于组织工程中重建牙本质牙髓复合体，展示了巨大的优越性和可行性，也为其在牙髓生理、病理、牙髓病的生物治疗方面的研究提供了重要的应用价值。     

牙本质龋损下牙本质-牙髓复合体的反应

目的 探讨牙本质龋损进展过程中,牙本质-牙髓复合体的变化特点及规律.方法 选择即刻拔除的第三磨牙65颗,其中牙本质浅龋27颗(急性龋15颗,慢性龋12颗);牙本质深龋28颗(急性龋16颗,慢性龋12颗);无龋损的正常牙10颗.常规固定、脱钙、切片(厚4 μm),光学显微镜下观察牙本质龋病损下方牙髓的组织病理学改变,并用多功能图象分析仪对相应部位的成牙本质细胞的数目、浆核比、前期牙本质面积等进行测量分析.结果 随龋损深度的增加,成牙本质细胞数目显著减少,细胞形态由高柱状变为立方状直至扁平状,前期牙本质变薄甚至消失,第三期牙本质变厚且发生率增加,血管扩张充血,炎症细胞增多,主要为淋巴细胞与浆细胞;牙本质浅龋阶段,成牙本质细胞浆核比显著下降,慢性龋成牙本质细胞样细胞分化、迁移活跃,胶原纤维增多.牙本质深龋阶段出现修复性牙本质,急性龋炎症细胞聚集明显.结论 牙本质-牙髓复合体对龋损的反应与龋损深度及活动性有关;龋损深度增加,损伤反应加重;龋损活动性降低时修复与防御反应加强.     

牙本质牙髓复合体的形成研究(三)牙本质牙髓复合体的离体形成研究

细胞培养、器官培养、干细胞及组织工程等生物工程新技术的迅猛发展为牙本质牙髓复合体的形成研究提供了新的平台，使体外构建生物活性组织或器官成为可能。本文主要阐述了采用这些新技术进行牙本质牙髓复合体离体形成研究的进展。     

基质金属蛋白酶和基质金属蛋白酶组织抑制剂在牙本质-牙髓复合体中的研究进展

基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinases，MMPs）和基质金属蛋白酶组织抑制剂（tissue in—hibitors of metalloproteinases，TIMPs）在医学的多个领域都得到了广泛的研究。随着近年来对MMPs与TIMPs在牙本质一牙髓复合体中研究的开展，发现它们与牙齿的多种生理、病理反应都有着密切的联系。本文仅就MMPs、TIMPs的研究现状和它们在牙本质-牙髓复合体中的研究进展作一综述     

牙髓牙本质复合体植物神经的研究进展

植物神经包括交感神经和副交感神经,是调节牙齿组织微循环的重要神经,而且与感觉神经的兴奋性、胶原的形成等密切相关。其功能状态在维持牙的健康与牙病的发生发展中发挥着重要作用,本文拟从供应牙的植物神经的组成、来源、分布、功能等方面作一简要综述。1　牙髓牙本质复合体交感神经纤维1.1　牙髓牙本质复合体交感神经纤维的组成牙髓牙本质复合体的交感神经纤维均为无髓鞘的Ｃ类纤维,直径在0.1～1.5μｍ之间,传导速度较慢。按目前已知其释放的物质又可分为肾上腺素能神经纤维和神经肽Ｙ(ｎｅｕｒｏｐｅｐｔｉｄｅＹ,ＮＰＹ)阳性神经纤维。…     

人前磨牙牙髓牙本质复合体层粘连蛋白受体的免疫组织化学研究

目的研究层粘连蛋白受体在牙髓牙本质复合体内的表达,探讨其分布与功能的关系.方法收集新鲜健康人前磨牙60个,固定,脱钙,石蜡包埋,层粘连蛋白受体SABC免疫组织化学染色.结果层粘连蛋白受体免疫反应物(LNR-IR)普遍存在于牙髓牙本质复合体的神经纤维膜、血管内皮细胞、成牙本质细胞及成纤维细胞上,以牙髓的神经纤维膜、血管内皮细胞最为丰富.结论层粘连蛋白受体一般见于牙髓牙本质复合体的各种细胞膜上,它与层粘连蛋白一起在支持、固定牙髓牙本质复合体各结构的正常位置、形态和功能的发挥上可能起了重要作用.     

Biocompatibility assessment of resin-based cements on vascularized dentin/pulp tissue-engineered analogues

ObjectivesA three-dimensional (3D) dentin/pulp tissue analogue, resembling the human natural tissue has been engineered in an in vitro setup, aiming to assess the cytocompatibility of resin-based dental restorative cements.MethodsStem Cells from Apical Papilla (SCAP) and Human Umbilical Vein Endothelial Cells (HUVEC) were embedded in Collagen-I/Fibrin hydrogels at 1:3 ratio within 24-well plates. Hanging culture inserts were placed over the hydrogels, housing an odontoblast-like cell layer and a human treated-dentin barrier. Shear modulus of the hydrogels at 3.5 and 5 mg/ml was evaluated by dynamic mechanical analysis. Eluates of two resin-based cements, a dual-cure- (Breeze?, Pentron: Cement-1/C1), and a self-adhesive cement (SpeedCEMplus?, Ivoclar-Vivadent: Cement-2/C2) were applied into the dentin/pulp tissue analogue after pre-stimulation with LPS. Cytocompatibility was assessed by MTT assay, live/dead staining and real-time PCR analysis.ResultsBoth hydrogel concentrations showed similar shear moduli to the natural pulp until day (D) 7, while the 5 mg/ml-hydrogel substantially increased stiffness by D14. Both cements caused no significant toxicity to the dentin/pulp tissue analogue. C1 induced stimulation (p < 0.01) of cell viability (158 ± 3%, 72 h), while pre-stimulation with LPS attenuated this effect. C2 (±LPS) caused minor reduction of viability (15–20%, 24 h) that recovered at 72 h for the LPS+ group. Both cements caused upregulation of VEGF, ANGP-1, and downregulation of the respective receptors VEGFR-2 and Tie-1.SignificanceBoth resin-based cements showed good cytocompatibility and triggered angiogenic response within the dentin/pulp tissue analogue, indicating initiation of pulp repair responses to the released xenobiotics.     

牙本质牙髓复合体的形成研究(一)牙本质牙髓复合体的新概念及其在牙齿发育中的形成研究

牙本质及牙本质牙髓复合体的形成研究一直是口腔医学研究的重大课题。近年来,生命前沿科学领域的飞速发展和重大进展,也掀起了牙本质牙髓形成研究的热潮。本文阐述了对牙本质牙髓复合体概念的新认识,系统回顾了牙齿发育过程中、牙齿发育完成后,牙本质牙髓复合体体内形成研究、体外形成研究的新进展,及这些研究对临床治疗的指导意义和应对策略,分析了面临的挑战。这对我们把握该领域的研究现状和进一步深入研究奠定了必要的基础。     

骨形成蛋白复合牙本质陶瓷修复髓室底穿孔的实验研究

目的：用骨形成蛋白复合牙本质陶瓷修复髓室底穿孔，以氢氧化钙作为对照组。方法：术后６个月观察骨形成蛋白复合牙本质陶瓷修复髓室底穿孔的生物学作用。结果：骨形成蛋白复合牙本质陶瓷具有诱导骨样组织形成。结论：骨形成蛋白复合牙本质陶瓷可以用于修复髓室底穿孔。     

壳聚糖聚电解质复合物再生纤维软骨的实验研究

目的:探讨壳聚糖电介质复合物与髁突软骨细胞体内形成纤维软骨情况,以期为工程化软骨再生修复颞下颌关节软骨缺损奠定基础。方法:合成磷酸化壳聚糖电解质复合物(chitosan-polyelectrolyte complex,CS-PEC)制备三维凝胶支架,并与髁突软骨细胞复合培养后植入裸鼠体内,分别于4、8周取出新生物,通过组织学和免疫组化观察新生物的生物学特性。结果:软骨细胞在CS-PEC支架中形态铺展良好。植入体内4周后,支架保持原有结构,可见肥大样软骨细胞出现,免疫组化染色显示中央新软骨形成区Ⅱ胶原为阳性。8周后,支架降解,见新生软骨形成,阿新兰染色显示软骨基质形成,免疫组化染色显示软骨形成区Ⅱ胶原为阳性,周围纤维样细胞中Ⅰ胶原阳性;对照组无新生软骨形成,软骨特异性标志Ⅱ胶原及软骨基质特染均为阴性。结论:CS-PEC复合材料有望成为软骨再生的支架载体。     

早期牙髓损伤修复中牙本质涎磷蛋白表达的免疫组化研究

目的：衬步探讨牙本质涎磷蛋白（dentin sialophosphoprotein,DSPP)在早期早贿损伤修复中的作用。方法：制备大鼠牙髓损伤模型,分别对损伤后6h,12h,1d,2d,3d,7d及正常大鼠牙髓标本进行HE和免疫组织化学染色,检测各实验组标本中DSPP的表达。结果：正常大鼠牙髓中仅在成牙本质细胞层有DSPP的阳性着色;牙髓损伤后6h,12h,DSPP在成牙本质细胞层的染色明显减弱;损伤后1-3d,梁色较正常牙增强。此时,牙尖及富细胞区的牙髓细胞也有了性着色;损伤后7d,染色与正常对照无明显差异。结论：DSPP在牙髓损伤的早期阶段表达下调;随后在成牙本质细胞及富细胞区牙髓细胞中表达增强;7d时表达趋于正常。提示：它可能在牙髓损伤早期的自身修复中起作用。     

低氧环境下Notch信号通路对人牙髓干细胞成牙本质向分化的影响

目的探讨低氧环境下通过低氧诱导因子-1α（HIF-1α）调控Notch信号通路对人牙髓干细胞（HDPSC）成牙本质向分化能力的影响。 方法组织块酶消化法培养HDPSC,给予氯化钴（CoCl₂）诱导的化学性低氧环境,Western blot检测HIF-1α蛋白表达,茜素红染色检测细胞矿化结节形成能力,反转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测Notch下游靶基因Hes1与成牙本质相关基因的表达;进一步加入Notch信号通路特异性阻断剂γ分泌酶抑制剂（GSI）,观察以上指标的变化。报告基因方法检测HIF-1α对Notch信号通路的调控作用。采用R version 3.5.3软件进行统计分析,计量资料进行正态检验,多组间比较采用单因素方差分析（方差齐）或Kruskal-Wallis H检验（方差不齐）,两两比较采用LSD-t检验（方差齐）或Mann-Whitney U检验（方差不齐）。 结果（1）CoCl₂诱导的低氧条件下HDPSC中的HIF-1α蛋白水平上调,Notch下游靶基因Hes1 mRNA相对表达量为1.46 ± 0.12,相比常氧组（1.06 ± 0.09）显著增高（t = -4.64,P = 0.012）;GSI处理阻断Notch信号通路后,低氧条件下HDPSC中HIF-1α蛋白水平下调,Hes1 mRNA相对表达量降低至0.82 ± 0.14,与处理前相比差异有统计学意义（t = 5.98,P = 0.004）;常氧条件下GSI处理后的HDPSC中HIF-1α蛋白水平也明显下调,Hes1 mRNA相对表达量（0.30 ± 0.09）相比处理前也显著降低（t = 10.08,P = 0.001）;（2）矿化诱导后的茜素红染色结果显示：低氧处理后,HDPSC细胞成牙本质分化能力下降;GSI处理后,成牙本质向分化能力增强。成骨/牙本质相关基因mRNA表达水平检测结果显示：低氧处理后,BSP、OCN和DSPP的mRNA相对表达量分别为0.53 ± 0.14、0.43 ± 0.20、0.48 ± 0.11,相比常氧组（1.21 ± 0.12、1.08 ± 0.19、1.03 ± 0.13）显著降低（t_BSP = 6.30,P_BSP = 0.003;t_OCN = 4.07,P_OCN = 0.015;t_DSPP = 5.67,P_DSPP = 0.005）;GSI处理后,低氧条件下BSP、OCN和DSPP mRNA相对表达量分别为0.99 ± 0.13、1.09 ± 0.13、0.95 ± 0.16,与处理前相比显著增高（t_BSP = -4.17,P_BSP = 0.014;t_OCN = -4.83,P_OCN = 0.012;t_DSPP = -4.30,P_DSPP = 0.017）,常氧条件下BSP、OCN和DSPP mRNA相对表达量分别为1.73 ± 0.20、1.55 ± 0.08、1.52 ± 0.14,与处理前相比显著增高（t_BSP = -3.84,P_BSP = 0.027;t_OCN = -3.99,P_OCN = 0.035;t_DSPP = -4.43,P_DSPP = 0.011）。（3）荧光素酶报告基因结果显示,HIF-1α可调控NICD启动子,使双荧光素酶相对表达活性为5.37 ± 0.12,与对照组（2.09 ± 0.15）相比显著增强（t = -28.92,P<0.001）,提示HIF-1α可能使Notch信号通路激活。 结论低氧引起HDPSC中HIF-1α升高并可能通过激活Notch信号通路抑制其成牙本质向分化能力。