非酶糖基化终末产物介导的ERK1/2信号转导通路在大鼠睾丸间质细胞睾酮分泌中的作用

目的：探讨非酶糖基化终末产物(AGEs)对大鼠睾丸间质细胞睾酮分泌的影响及其潜在机制。方法首先,原代培养大鼠睾丸间质细胞,采用3β-HSD免疫细胞化学方法对间质细胞进行鉴定;其次,MTT法测定不同浓度的AGEs (25μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL)及200μg/mL BSA作用Leydig细胞后的细胞活力;最后,用不同浓度的AGEs及200μg/mL BSA预处理Leydig细胞12 h,之后更换含相应浓度AGEs或BSA的培养基并加入终浓度为4 U/mL的hCG,其中对照组不含AGEs和BSA,ELISA法和Western blot分别检测睾酮分泌量和p-ERK1/2的表达量。结果 MTT法表明AGEs (≤200μg/mL)对Leydig细胞的活力在本实验所研究的时间内没有影响;ELISA法和Western blot结果显示,不同浓度AGEs处理后,hCG诱导的Leydig细胞睾酮合成量和ERK1/2蛋白的磷酸化都呈现浓度依赖性下降,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 AGEs通过抑制ERK1/2的磷酸化降低大鼠Leydig cells睾酮的分泌。     

二甲双胍对糖基化终末产物诱导的成纤维细胞凋亡及相关蛋白caspase-3、Bax及Bcl-2表达的影响

目的探讨晚期糖基化终末产物（AGEs）对原代人皮肤成纤维细胞凋亡的影响,以及二甲双胍（Metformin）对原代皮肤成
纤维细胞凋亡是否存在保护作用。方法取对数生长期的皮肤成纤维细胞,分为空白组,BSA对照组（300 μg/mL）,AGEs刺激组
（100、200、300 μg/mL）,药物组（AGEs 300 μg/mL+Metformin 1 mmol/L）,采用CCK-8检测24、48、72 h细胞凋亡情况;Western
Blot检测细胞培养72 h后凋亡相关蛋白caspase-3、Bax、Bcl-2表达情况。结果CCK-8结果显示AGEs诱导皮肤成纤维细胞凋
亡呈浓度及时间依赖性,AGEs 300 μg/mL诱导72 h后可见细胞凋亡明显增多（0.72±0.02 vs 1±0.04,P<0.05）,加入二甲双胍后可
对成纤维细胞起一定保护作用（0.98±0.02 vs 0.72±0.02,P<0.05）。Western Blot显示AGEs 300 μg/mL刺激成纤维细胞72 h后,
caspase-3、Bax 蛋白表达增加（P<0.05）,而Bcl-2 蛋白表达下降（P<0.05）,Bcl-2/Bax 比值下降（P<0.05）,二甲双胍作用后
caspase-3、Bax蛋白表达水平较刺激组明显下降（P<0.05）,而Bcl-2及Bcl-2/Bax比值则明显上升（P<0.05）。结论AGEs可诱导
人皮肤成纤维细胞凋亡增加,二甲双胍可以通过调控caspase-3、Bax及Bcl-2表达,从而起到抗凋亡作用。
     

阿魏酸乙酯对胃癌 SGC －7901细胞增殖及凋亡的影响

目的：探讨阿魏酸乙酯（EF）对胃癌 SGC －7901细胞增殖及凋亡的影响。方法体外培养人胃癌SGC －7901细胞,采用不同浓度的 EF 作用 SGC －7901细胞,设置5个复孔,作用24、36、48 h,MTT 法检测细胞的增殖情况;用0和40μg／mL EF 分别作用 SGC －7901细胞24 h,DAPI 染色法观察 SGC －7901细胞形态学变化;另外,采用不同浓度的 EF 作用 SGC －7901细胞24、36和48 h,Annexin V －FITC／PI 法和流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果40、80、120、160和200μg／mL 浓度的 EF 分别作用 SGC －7901细胞24、36及48 h,其对 SGC －7901细胞的 IC50分别为158.86、142.48和128.07μg／mL;40μg／mL 的 EF 作用 SGC －7901细胞12 h,经 DAPI 染色,SGC －7901细胞的细胞核固缩,出现凋亡小体;经 Annexin V －FITC／PI 法检测,EF 对 SGC －7901细胞的凋亡有明显的诱导作用,并且随着 EF 作用浓度和时间的增加,凋亡率增加。结论EF 能有效抑制 SGC －7901细胞增殖,并能诱导 SGC －7901细胞凋亡,两种作用均呈浓度和时间依赖性。     

晚期糖基化终产物对心肌细胞细胞周期和凋亡的影响

目的：探讨晚期糖基化终产物（advanced glycation end products,AGEs)对体外培养乳鼠心肌细胞细胞周期及凋亡的影响。方法：体外培养3－5d的乳鼠心肌细胞，用含1％和10％胎牛血清的DMEM培养基中继续培养24h，应用流式细胞仪和在位末端标记技术观察不同浓度AGEs(50、100μg/ml）对心肌细胞刺激12、24、48h后细胞周期分布、凋亡率及凋亡小体／凋亡细胞核分布的影响。结果：AGEs对心肌细胞细胞周期分布无明显影响；在正常培养液培养时，心肌细胞的凋亡随着培养时间延长而增加，24、48h与12h相比，凋亡小体／凋亡细胞核分别增加了0．55、1．23倍、AGEs可以明显增加心肌细胞的凋亡程度，并随着刺激时间、刺激浓度的增加而增加，50、100μg/ml AGEs组与对照组相比，凋亡小体／凋亡细胞核12、24、48h分别增加了0．74和1．21、1．15和1．78、0．83和1．19倍。结论：AGEs对心肌细胞细胞周期分布无影响，但可以通过增加心肌细胞凋亡率对心肌细胞造成损伤。     

奥沙利铂联合地塞米松对肺腺癌 A549细胞增殖的影响

目的：研究奥沙利铂联合地塞米松对肺腺癌A549／DDP 细胞及肺腺癌患者外周纯化Th17细胞的影响。方法：使用不同浓度的奥沙利铂（0．3125μg／mL、0．625μg／mL、1．25μg／mL、2．5μg／mL、5μg／mL、10μg／mL ）及地塞米松（1nmoL／L、10nmoL／L、100nmoL／L、200nmoL／L、500nmoL／L、1000nmoL／L）在不同时间点（24h、48h、72h）干预人肺腺癌A49／DDP 细胞及Th17细胞,通过细胞增殖抑制实验、细胞凋亡实验检测肺腺癌细胞生长抑制率及细胞凋亡情况,结果：在1nmoL／L～200nmoL／L时地塞米松对肺腺癌A549细胞增殖无抑制作用,500～1000 nmoL／L的浓度范围内,地塞米松以剂量依赖性方式抑制肺腺癌A549细胞增殖,并表现出明显的量效关系（ r＝0．282, P＜0．05）;且随着作用时间的延长,抑制率逐渐增加,呈现出浓度和时间依赖性。在0．3125～1．25μg／mL奥沙利铂肺腺癌A549细胞增殖无抑制作用,2．5～10μg／mL奥沙利铂以时间及剂量依赖性对肺腺癌A549细胞的增殖产生抑制作用,当5μg／mL及10μg／mL奥沙利铂作用于肺腺癌A549细胞细胞72h后,抑制率分别为61．12±0．98％、63．67±0．18％,抑制作用相当（ P＞0．05）。连续给药24h、48h、72h后发现干预24h后即对肺腺癌A549细胞增殖产生抑制作用,联合用药组OD值明显低于单用组,即联合用药其抑制率显著高于其他单用组,且趋势随着用药时间的延长而逐渐明显。结论：地塞米松联合奥沙利铂联合用药能产生协同作用,抑制A549细胞增殖。     

AGEs诱导软骨细胞凋亡和影响细胞外基质变化的研究

目的 :明确晚期糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGEs)诱导小鼠关节软骨细胞凋亡情况和影响细胞外基质变化。方法:体外分离培养小鼠软骨关节细胞,给予不同浓度AGEs共培养后,分别于24 h和48 h时间点观察细胞凋亡情况;通过Western blot方法检测Ⅰ型胶原、MMP-3、MMP-9以及p53蛋白的表达情况。结果:不同浓度AGEs处理软骨细胞24 h后,与对照组比较,细胞凋亡率出现升高(P<0.05,n=3);与BSA组比较,200 mg/L浓度的AGEs组细胞凋亡率明显升高(P<0.05,n=3),并且随着AGEs浓度和培养时间增加,软骨细胞的凋亡率也增加。200 mg/L的浓度AGEs处理软骨细胞48 h后,Ⅰ型胶原蛋白的表达显著下降(P<0.05,n=3);另外,50、100、200 mg/L的浓度AGEs处理软骨细胞48 h后,p53、MMP-3、MMP-9的表达显著高于对照组和BSA组(P<0.05,n=3)。结论 :AGEs能诱导小鼠软骨细胞凋亡,并刺激软骨细胞p53、MMP-3、MMP-9表达增多,降低Ⅰ型胶原蛋白表达。     

糖基化终末产物对大鼠肾系膜细胞基质金属蛋白酶2活性和表达的影响

目的：观察糖基化终末产物（AGEs）对大鼠肾小球系膜细胞基质金属蛋白酶2（MMP-2）活性和表达的影响。 方法：体外培养正常大鼠肾小球系膜细胞,糖化牛血清白蛋白作为刺激物,未经糖化的牛血清白蛋白及常规培养作为对照,分别用含100 mg•L^-1 AGEs（AGEs组）、100 mg•L^-1牛血清白蛋白（BSA组）和不含刺激物（DMEM组）的无血清DMEM培养基,作用于系膜细胞48 h后,酶谱法检测各组系膜细胞上清MMP-2活性,逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测系膜细胞MMP-2 mRNA的表达。 结果：与BSA组及DMEM组比较,AGEs组系膜细胞MMP-2 mRNA的表达明显下降(P<0.01),上清MMP-2活性明显降低(P<0.01)。 结论：AGEs能降低大鼠肾小球系膜细胞MMP-2的活性和表达。     

茶多酚对脂多糖介导下人牙周膜成纤维细胞COX －2表达的影响

目的：探讨不同浓度茶多酚对脂多糖（LPS）介导下体外培养的人牙周膜成纤维细胞（HPDLCs）环氧化酶－2（COX－2）表达的影响。方法改良组织块法培养HPDLCs,取第5代细胞随机分4组：LPS组LPS 100μg／mL＋茶多酚0μg／mL,茶多酚100组LPS 100μg／mL＋茶多酚100μg／mL,茶多酚200组LPS 100μg／mL＋茶多酚200μg／mL,对照组10％FBS的DMEM。 ELISA法检测HPDLCs分泌COX－2的量,荧光实时定量PCR检测COX－2 mRNA的表达。结果在LPS干预下,不同浓度的茶多酚在不同时间点均可抑制COX－2分泌的量,与LPS组比较差异有统计学意义（ P＜0.05）。荧光实时定量PCR结果表明茶多酚显著抑制LPS干预下COX－2的mRNA表达水平,与LPS组比较差异有统计学意义（ P＜0.05）。结论茶多酚可抑制LPS干预下HPDLCs分泌COX－2的量及其mRNA表达水平,提示茶多酚的抗炎机制可能与COX－2存在密切联系。     

培美曲塞联合β-榄香烯对宫颈癌 HeLa 细胞增殖和凋亡的影响

目的：培美曲塞和β-榄香烯均可抑制肿瘤细胞的生长。文中探讨培美曲塞联合β-榄香烯对宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响。方法体外培养宫颈癌HeLa细胞,将培美曲塞（浓度为38、76、152、228、304μg／mL）单独作用于HeLa细胞后24、48 h用MTT比色法检测细胞的增殖情况,实验分β-榄香烯组（125μg／mL ）、培美曲塞组（76μg／mL ）、联合用药组（培美曲塞76μg／mL,β-榄香烯125μg／mL）及空白对照组（0μg／mL）,24 h后用MTT法检测细胞的增殖情况,用流式细胞术检测24 h细胞的凋亡率。结果 MTT法显示,培美曲塞浓度在38、76、152、228、304μg／mL梯度范围内对HeLa细胞有抑制作用,随浓度增加,抑制率增强。38、76、152、228、304μg／mL的培美曲塞作用24后,增殖抑制率分别为（7．24±3．78）％、（7．94±4．37）％、（11．10±2．86）％、（15．88±3．38）％、（16．52±2．54）％;其中38、76、152、228μg／mL培美曲塞抑制率两两比较的差异有统计学意义（P＜0．05）。联合用药组24 h抑制率[（49．95±5．76）％]高于β-榄香烯组[（24．36±5．59）％]和培美曲塞组[（10．69±1．37）％],差异有统计学意义（P＜0．01）。结论培美曲塞与β-榄香烯联合应用可抑制HeLa细胞的增殖,协同促进HeLa细胞的凋亡。     

糖基化终末产物对SH-SY5Y细胞氧化应激及凋亡的影响

目的研究糖基化终末产物(AGEs)对人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)凋亡的影响,探讨AGEs与阿尔茨海默病(AD)发病机制的关系。方法分别以不同浓度糖基化修饰的牛血清白蛋白(AGE-BSA)处理SH-SY5Y细胞48 h,选取AGE-BSA敏感浓度(200μg/mL)处理细胞不同时间,流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡率,确定AGE-BSA诱导SH-SY5Y凋亡最佳浓度及时间。将细胞随机分为对照组、牛血清白蛋白(BSA)对照组、AGE-BSA组、AGE-BSA+抗RAGE中和抗体组、AGE-BSA+α-硫辛酸组、AGE-BSA+DPI(NADPH氧化酶抑制剂)组。FCM检测细胞凋亡率变化,Hoechst 33258染色观察细胞形态改变,应用活性氧荧光探针DCFH-DA检测活性氧(ROS)水平,Western blot测定Caspase-12的表达。结果细胞凋亡率随AGE-BSA浓度增加及作用时间延长而升高,200μg/mL AGE-BSA作用48 h细胞凋亡率从对照组的(2.23±0.08)%增加到(16.8±1.27)%(P<0.05),同时,Hoechst染核后可见典型凋亡形态改变,细胞内ROS水平显著增高,Caspase-12蛋白表达明显上调,与对照组相比差异显著(P<0.05),而分别用抗RAGE中和抗体、α-硫辛酸、DPI预处理后再加入AGE-BSA,各组与AGE-BSA组比较,凋亡率明显下降,ROS水平、Caspase-12蛋白表达均明显降低(P<0.05)。结论糖基化终末产物可刺激SH-SY5Y细胞产生大量ROS及活化Caspase-12介导细胞凋亡,通过阻断其与特异性受体RAGE结合或减少细胞内ROS可减轻细胞凋亡的发生。     

黄芩素对宫颈癌细胞凋亡的影响

目的：观察不同浓度的黄芩素干预宫颈癌HeLa细胞后细胞迁移及细胞周期的变化,观察细胞培养基中具有活性的金属基质蛋白酶－2（MMP －2）、金属基质蛋白酶9（MMP －9）的变化,及 MMP －2、MMP －9、金属蛋白酶组织抑制剂2（TIMP2）、细胞周期蛋白 D1（CyclinD1）、B 细胞淋巴瘤／白血病－2（Bcl －2）相关 X 蛋白（Bax）、Bcl －2 mRNA 及蛋白水平表达的变化。方法体外黄芩素干预 Hela 细胞株24 h,分不含黄芩素的无血清DMEM 高糖培养基培养的细胞为空白对照组,无血清 DMEM 高糖细胞培养基中加入终浓度为100μmol／L 的黄芩素为100μmol／L 组,无血清 DMEM 高糖细胞培养基中加入终浓度为200μmol／L 的黄芩素为200μmol／L 组,共3组。镜下观察各组细胞形态及数量的变化、细胞迁移实验检测细胞迁移的改变、流式细胞技术法检测细胞周期发生的变化、RT －PCR 法及 Western blot 法检测 MMP －2、MMP －9、TIMP2、CyclinD1、Bax、Bcl －2 mRNA 及蛋白水平的表达变化。结果黄芩素干预24 h 后,与空白对照组比较,两干预组细胞周期 G1期受阻滞,阻滞程度与黄芩素干预浓度一致（P ＜0．05）,细胞迁移受抑制,随着黄芩素浓度逐渐增加,迁移距离逐渐减少（P ＜0．05）,MMP －2、MMP －9活性受到抑制,抑制程度与黄芩素浓度呈正相关（P ＜0．05）,MMP －2、MMP －9、CyclinD1、 Bcl －2的mRNA 及蛋白表达随黄芩素干预浓度增加,呈逐渐降低的趋势（P ＜0．05）,TIMP2、Bax 的 mRNA 及蛋白表达趋势随黄芩素浓度增加而逐渐增强（P ＜0．05）。结论黄芩素干预宫颈癌 HeLa 细胞,通过阻滞细胞周期 G1期,抑制 MMP －2、MMP －9活性,上调 TIMP2、Bax 的表达,下调 MMP －2、MMP －9、CyclinD1、Bcl －2的表达,促进 HeLa细胞的凋亡。     

胰高血糖素样肽-1对高糖诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的影响及相关机制

目的：探讨胰高血糖素样肽-1（glucagon—like peptide-1,GLP—1）对高糖诱导人脐静脉内皮细胞huma numbilica lvein endothelial cells,HUVECs）凋亡的影响及相关机制。方法：HUVECs加入不同处理因素后分组,分别培养48h后,MTT检测细胞活力;流式细胞仪检测细胞早期凋亡率;Westernl印迹测定细胞P-Akt,p-eNOS水平;NO试剂盒检测NO浓度。结果：高糖（33mmol／L）培养48h后HUVECs细胞活力下降p〈0．05）,细胞凋亡率增加（p〈0．01）,细胞p-Akt,p-eNOS,NO水平均下降（P〈0．05）;高糖条件下加人GLP．1（3nmol／L）培养48h,与高糖组相比较,HUVECs细胞活力增加（P〈0．01）,细胞凋亡率减少（p〈O．05）,细胞p-Akt,p-eNOS,NO水平均增／JH（V〈0．05）;P13K抑制剂wortmannine（100nmol／L）可以阻断GLP-1的抗凋亡作用及其对P—Akt蛋白、p-eNOS蛋白及NO水平的影响;eNOS抑制剂L—NAME（100umol／L）仅能阻断GLP-1的抗凋亡作用及对NO水平的影响,不影响p-Akt蛋白的表达。结论：GLP．1可改善高糖诱导的HUVECs凋亡,该抗凋亡作用可能与P13K／Akt／eNOS通路的上调相关。     

中药单体成分大黄素对胰岛β细胞NIT-1的影响

目的研究中药提取的单体成分大黄素对胰岛β细胞NIT-1增殖、凋亡及胰岛素分泌作用的影响。方法不同浓度的大黄素分别作用于NIT-1细胞不同时间。以MTT法检测细胞的增殖活性；收集细胞，以Annexin V／PI染色，经流式细胞术检测细胞凋亡发生率；收集细胞培养上清液测定基础和高糖刺激后胰岛素分泌量。结果2．5μg／mL大黄素作用于NIT-1细胞时对其增殖无明显影响，5．0μg／mL以上对NIT-1细胞增殖的影响呈时间和剂量依赖性降低（P〈0．01）；0～25．0μg／mL大黄素分别作用于NIT-1细胞24h后，细胞凋亡率呈浓度依赖性增加（P〈0．05）；0～5．0μg／mL大黄素分别作用于NIT-1细胞24h后，基础胰岛素分泌量呈浓度依赖性降低（P〈0．05）；高糖刺激后胰岛素分泌量在大黄素0和2.5μg／mL组间无差别，而在5．0μg／mL组则明显降低（P〈0．05）。结论大黄素可诱导胰岛细胞凋亡，并抑制胰岛素分泌。     

苦瓜蛋白对卵巢癌COC1细胞增殖与凋亡的影响

目的研究苦瓜蛋白对卵巢癌COC1细胞增殖与凋亡的影响。方法以梯度浓度苦瓜蛋白（0、10、15、20μg／mL）处理COC1细胞24h,以10μg／mL苦瓜蛋白处理COC1细胞不同时间（0、12、24、48h）,行台盼蓝染色、流式细胞术、MTT法分别检测细胞存活率、细胞凋亡率、细胞增殖抑制率;10μg／mL苦瓜蛋白处理COC1细胞作用不同时间后提取细胞总蛋白,Western blot检测多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶（PARP）蛋白的表达。结果苦瓜蛋白可以明显诱导COC1细胞凋亡,以20μg／mL苦瓜蛋白处理组细胞凋亡率最高;苦瓜蛋白对COC1细胞增殖有明显的抑制作用。苦瓜蛋白处理COC1细胞24h后,PARP表达明显上调。结论苦瓜蛋白可以诱导COC12细胞发生凋亡,抑制细胞增殖,其作用机制与PARP有关。     

内毒素预处理对单个核细胞分泌肿瘤坏死因子α和诱生型一氧化氮合酶及NO的影响

目的：探讨内毒素预处理对单个核细胞分泌肿瘤坏死因子α（TNF-α）、诱生型一氧化氮合酶（iNOS）和NO的影响。方法：体外培养大鼠单个核细胞，内毒素预处理采用脂多糖（LPS）0．1μg／ml孵育24h，然后用2μg／ml的LPS刺激24h，设空白对照组（DMEM）和内毒素对照组（LPS2μg／ml）.酶联免疫法测定培养液上清TNF-α浓度，分光光度法测定iNOS活性和NO含量。结果：内毒素预处理组单个核细胞培养液上清iNOS活性、TNF-α和NO含量显著低于内毒素刺激组（P〈0．01）。结论：内毒素预处理可明显降低单个核细胞分泌炎性递质水平，减轻内毒素对机体的损伤。     

抑制HO－1表达对GLU和AGEs刺激下THP－1细胞氧化应激的影响研究

目的：探讨抑制血红素加氧酶1（HO－1）表达对高糖（GLU）和糖基化终产物（AGEs）刺激下人单核细胞株（THP－1）氧化应激的影响。方法将THP－1细胞分为三组培养,包括对照组、GLU ＋AGEs 组（含15 mmol／L的GLU和100 g／mL的AGEs的培养液）、 ZnPP（锌原卟啉）＋GLU＋AGEs组（先予20 mol／L ZnPP预处理30 min后再以15 mmol／L的GLU和100 g／mL的AGEs刺激）,检测各组肿瘤坏死因子α（ TNF－α）、丙二醛（MDA）和细胞活性氧（ ROS）水平以及HO－1 mRNA和蛋白表达。结果 GLU＋AGEs组ROS、MDA和TNF－α水平分别为（101．28±8．67） MFI、（3．17±0．58） nmol／mL和（40．28±10．67） pg／mL,明显高于对照组（P＜0．05）;ZnPP＋GLU＋AGEs组ROS、MDA和TNF－α水平分别为（122．47±9．11）MFI、（3．84±0．78）nmol／mL和（132．27±11．09） pg／mL,明显高于GLU ＋AGEs 组和对照组（P ＜0．05）;GLU＋AGEs组和ZnPP＋GLU＋AGEs组HO－1 mRNA表达量明显高于对照组（P＜0．05）,其中ZnPP＋GLU＋AGEs组HO－1 mRNA表达量低于GLU＋AGEs组（P＜0．05）;GLU＋AGEs组和ZnPP＋GLU＋AGEs组HO－1蛋白表达量明显高于对照组（ P＜0．05）,其中ZnPP ＋GLU＋AGEs组 HO－1蛋白表达量低于GLU＋AGEs组（ P＜0．05）。结论高糖和AGEs可引起THP－1细胞氧化损伤和HO－1表达增高,而抑制HO－1表达可进一步加剧高糖和AGEs引起的细胞氧化损伤。     

毛蕊异黄酮对膀胱癌细胞凋亡和 PI3K/Akt 信号通路的影响

目的：探讨毛蕊异黄酮对膀胱癌细胞增殖、凋亡及 PI3K／Akt 信号通路的影响。方法采用0、30、60、120μmol／L 毛蕊异黄酮处理膀胱癌 T24、T739细胞,采用 MTT 法检测此两种细胞接受上述浓度处理0、24、48和72 h 后的细胞增殖情况,流式细胞术检测此两种细胞各浓度处理48 h 的细胞凋亡率,Hoechst 33258荧光染色法检测 T24细胞各浓度处理48 h 的细胞凋亡情况,Real －time PCR 检测 T24细胞各浓度处理48 h 的 Bax 的 mRNA 表达水平,Western blot 法检测 T24细胞各浓度处理48 h 的 Akt 及其磷酸化形式 p －Akt 的蛋白水平和 Bax 蛋白水平。结果毛蕊异黄酮抑制膀胱癌 T24、T739细胞增殖,并呈剂量和时间依赖性（P ＜0.05）,对 T24细胞的抑制增殖效应比 T739明显（P ＜0.05）;0、30、60、120μmol／L 毛蕊异黄酮作用48 h 后 T24细胞凋亡率分别为（2.89±1.11）％、（4.11±1.05）％、（16.92±2.67）％、（27.54±2.43）％,而 T739细胞凋亡率分别为（3.05±1.42）％、（3.99±1.52）％、（13.01±2.68）％、（19.99±3.31）％,与0μmol／L 浓度处理比较,60、120μmol／L 处理后明显升高,差异有统计学意义（P ＜0.05）,而且毛蕊异黄酮对 T24细胞的促凋亡效应比 T739细胞明显（P ＜0.05）;Ho－echst 33258荧光染色法显示随药物浓度增高,T24细胞凋亡明显增多;Real －time PCR 结果显示 T24细胞中 Bax的 mRNA 表达水平在60、120μmol ／L 处理后均明显高于0μmol／L 浓度时的表达水平（P ＜0.05）。 Western blot 法检测的 Bax 蛋白表达水平则在30、60、120μmol ／L 处理后高于0μmol ／L 浓度时的表达水平（P ＜0.05）,p －Akt／Akt 值则降低（P ＜0.05）。结论毛蕊异黄酮能抑制膀胱癌 T24细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能通过抑制PI3K／Akt 通路激活进而促进 Bax 表达实现。     

银杏叶提取物对大鼠高糖高胰岛素下视网膜Muller 细胞的保护作用

目的：观察银杏叶提取物（extract of ginkgo bilobaleaf ,EGB761）在高糖高胰岛素作用下对视网膜Muller细胞活性的改变及其保护作用。方法用30mmol/L葡萄糖和（或）200U/L的胰岛素处理大鼠视网膜Muller细胞48小时,分为高糖高胰岛素组：200U/L胰岛素＋30mmol/L葡萄糖;高胰岛素组：200U/L 胰岛素;对照组：普通低糖型DMEM培养（含葡萄糖5mmol/L ）。提前0.5小时加入60μg/mL、120μg/mL的EGB761,观察对各组细胞的保护作用,48小时后用MTT 法测定视网膜Muller细胞的活性。结果高糖高浓度胰岛素处理后Muller细胞活性降低,与对照组相比差异有统计学意义（ P＜0.05）。而60或120μg/mL的EGB761能上调高浓度葡萄糖和高胰岛素处理后的视网膜Muller细胞的活力,且在单纯高胰岛素组中更佳,与无EGB761处理组相比差异有统计学意义（ P＜0.05）。结论高浓度葡萄糖和高胰岛素在短期内可使视网膜Muller细胞的活性降低,一定浓度的EGB761可减轻高糖高胰岛素对视网膜Muller细胞的损伤。     

Rho／Rock 信号通路在 TGF －β1刺激大鼠颈内动脉平滑肌细胞表型转化中的作用及可能机制

目的：探讨Rho／Rock信号通路在TGF－β1刺激大鼠颈内动脉平滑肌细胞（ ISMC）表型转化中的作用及可能机制。方法 ISMC随机分为两组：空白对照组和TGF－β1刺激组,以不同浓度（1、5、10、20、50 ng／mL） TGF－β1刺激细胞24 h,用荧光实时定量PCR法检测转凝蛋白（ SM22α）和骨桥蛋白（ OPN） mRNA的表达;再以上述得出的最佳TGF－β1浓度刺激细胞,在不同时间（6、12、24、48 h）收集细胞,采用同样方法检测SM22α、OPN mRNA的表达水平;经无血清DMEM高糖培养基静止培养24 h后,随机分为以下各组：空白对照组、TGF－β1（10 ng／mL）刺激组及TGF－β1（10 ng／mL）＋法舒地尔（Fasudil）（10、30、50μmol／L）组,分别采用FQ－RT－PCR法检测SM22α、OPN、RhoA、Rock－1 mRNA的表达;Western blot法检测SM22α、OPN蛋白表达水平;根据实验结果用透射电镜观察各组细胞超微结构的相应变化。结果10 ng／mL TGF－β1刺激大鼠ISMCs 24 h达顶峰。 TGF－β1＋Fasudil组SM22αmRNA和蛋白表达水平较TGF－β1刺激组高（P＜0．01）,且在Fasudil浓度为30μmol／L时达到高峰,随后下降;TGF－β1＋Fasudil组OPN mRNA表达水平较TGF－β1刺激组低,呈浓度依赖性,至30μmol／L达最低（ P＜0．05）,后又呈上升趋势。 Western blot结果显示TGF－β1＋Fasudil组的OPN蛋白表达水平较TGF－β1刺激组低,至Fasudil浓度为30μmol／L达最低（ P＜0．05）。同时FQ－RT－PCR结果显示TGF－β1刺激组的RhoA和Rock－1 mRNA表达水平较空白对照组高（P＜0．01）,在Fasudil浓度为30μmol／L时TGF－β1＋Fasudil组的RhoA和Rock－1mRNA表达水平较TGF－β1刺激组低（ P＜0．05）。电镜下观察各组细胞显示,空白对照组（×20000） ISMC高尔基体肥大,线粒体及粗面内质网正常,10 ng／mL TGF－β1刺激后细胞内线粒体增多,在上述基础上加入30μmol／L Fasudil后电镜下观察细胞又回到正常成熟结构状态。结论10 ng／mL TGF－β1刺激大鼠ISMC 24 h可成功刺激其表型转化,且该过程可能通过Rho／Rock信号通路实现;Rho／Rock信号通路抑制剂Fasudil可增加TGF－β1刺激的SM22α的表达,下调OPN的表达水平,抑制大鼠ISMCs表型转化。     

去甲斑蝥素对人未分化甲状腺癌FRO细胞增殖和凋亡的影响及机制

目的探讨去甲斑蝥素(NCTD)对人未分化甲状腺癌FRO细胞增殖及凋亡的影响及其可能机制。方法取对数生长期的FRO细胞,分别加入终浓度为0μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL、40μg/mL、80μg/mL的NCTD,分别干预12 h、24 h、48 h后,检测细胞增殖情况,计算增殖抑制率。取对数生长期的FRO细胞,分为0μg/mL组、10μg/mL组、20μg/mL组、40μg/mL组,加入相应浓度的NCTD,干预24 h后检测细胞凋亡情况、B淋巴细胞肿瘤-2 (Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)凋亡相关因子mRNA表达情况、线粒体膜电位;干预2周后克隆形成实验检测细胞克隆率。结果随着NCTD浓度增大、干预时间延长,FRO细胞增殖抑制率增加(P<0.05)。10μg/mL组、20μg/mL组、 40μg/mL组均出现细胞凋亡,且浓度越高凋亡现象越明显。0μg/mL组、10μg/mL组、20μg/mL组、 40μg/mL组细胞克隆形成率、细胞线粒体膜电位、Bcl-2 mRNA表达水平依次降低,Bax mRNA表达水平依次升高(均P<0.05)。结...