糖基化终末产物对胰岛β细胞的损伤及作用机制研究进展

胰岛β细胞的功能障碍和凋亡是糖尿病病程中持续高糖的主要原因。糖基化终末产物（ AGEs）作为糖毒性的重要作用机制与胰岛β细胞的损伤关系密切。今年来研究指出AGEs通过氧化应激反应可引起胰岛β细胞胰岛素合成功能障碍,胰岛素释放功能障碍,并促使胰岛β细胞凋亡;除此之外, AGEs还可抑制胰岛β细胞发生自噬作用从而促胰岛β细胞凋亡。因此,明确AGEs对胰岛β细胞损伤机制对于糖尿病发病机制的研究起着重要作用,并将对糖尿病的治疗提供新的方向。     

糖基化终末产物损伤冠状动脉平滑肌细胞Kv通道

目的 研究糖基化终末产物（advanced glycation end products,AGEs）对大鼠冠状动脉平滑肌细胞电压门控性钾离子（voltage-gated K⁺,K_v）通道电流的影响。方法 分离大鼠冠状动脉平滑肌细胞,分为空白对照组、糖基化牛血清白蛋白（AGE-bull serum albumin,AGE-BSA）组、AGE-BSA+抗AGE受体抗体（anti-receptor of AGEs immunoglobulin G,anti-RAGE IgG）组进行干预。采用膜片钳技术检测各组细胞K_v通道电流,采用Western blotting、实时荧光定量PCR方法检测各组细胞K_v1.2和K_v1.5通道蛋白及mRNA的表达。结果 AGE-BSA直接干预冠状动脉平滑肌细胞明显抑制了平滑肌细胞的K_v电流达32.7%,并使K_v1.2和K_v1.5通道蛋白及mRNA的表达明显下调。而给予anti-RAGE IgG预处理30 min后再加入AGE-BSA刺激,平滑肌细胞的Kv电流密度及Kv1.2和Kv1.5通道蛋白及mRNA的表达与空白对照组相比,差异无统计学意义。结论 AGEs通过结合RAGE损伤冠状动脉平滑肌细胞K_v通道。     

晚期糖基化终末产物受体在鳞状细胞癌中的研究进展

晚期糖基化终末产物受体（RAGE）是一种具有多配体的跨膜信号转导受体。研究表明,RAGE在许多鳞状细胞癌中异常表达,与鳞状细胞癌细胞的增殖、侵袭、迁移和预后等密切相关。本文就目前RAGE在鳞状细胞癌中的研究进展作一综述。     

高糖及糖基化终末产物对脾细胞活性影响的研究

目的观察高糖及糖基化终末产物(AGEs)对脾细胞生长和胞内钙的影响。方法MTT法测定对细胞增生活性的影响,流式细胞仪观察细胞周期及Ca2 的变化。结果高糖及AGEs均可使脾细胞增殖活性明显增加,且进入S期细胞数明显增多,AGEs组脾细胞胞内Ca2 水平升高。结论糖尿病时脾细胞内钙增加,可能使脾细胞增殖能力增强。     

晚期糖基化终末产物对骨髓内皮祖细胞功能的影响及意义

目的 观察体外培养的骨髓内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)在晚期糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGEs)作用后功能的改变,探讨AGEs影响EPCs功能的可能机制及在动脉粥样硬化发生、发展中的作用. 方法 使用密度梯度离心法从骨髓获取单个核细胞并进行体外培养.对贴壁细胞进行细胞化学分析,以激光共聚焦显微镜鉴定FITC标记荆豆凝血素Ⅰ(FITC-UEA-Ⅰ)和DiI-标记的乙酰化低密度脂蛋白(DiI-acLDL)双染色阳性细胞为正在分化的EPCs.培养细胞中加入不同浓度AGEs,测定AGEs作用后EPCs的迁移、黏附、增殖能力,同时分析细胞内活性氧浓度及细胞的凋亡情况.结果 AGEs作用后EPCs生物学功能明显减退,细胞内氧化应激增强,凋亡率增加;同时这种改变可以被AGEs蛋白交联阻断剂ALT711削弱. 结论 AGEs增加骨髓EPCs内活件氧生成,增强氧化应激,破坏细胞内环境稳定性,使细胞生物学功能受损,最终导致细胞凋亡.这种变化与AGEs浓度成剂量依赖性.     

阿托伐他汀对大鼠糖基化终末产物水平的影响

目的观察阿托伐他汀对大鼠糖基化终末产物（advallcedglyced glycation end-products,AGEs）水平的影响。方法40只雄性SD大鼠随机分为对照组、高脂组（喂予高脂饲料）、AGEs．BSA组（腹腔注射AGEs-BSA并喂予高脂饲料）和AGEs-BSA＋他汀组（腹腔注射AGEs-BSA,同时阿托伐他汀灌胃并予高脂饲料）,每组10只;分别在12、24周,测定大鼠血糖和血清AGEs、胆固醇、丙二醛（maleicdialdehyde,MDA）水平。结果12、24周时,AGEs-BSA组的血清AGEs水平较其他组显著升高,而阿托伐他汀能不依赖降脂效应地降低AGEs水平（P〈0．05）。结论阿托伐他汀能够降低血清AGEs水平。     

糖基化终末产物对人外周血单核细胞分泌单核细胞趋化蛋白-1的影响

目的 研究糖基化终末产物(AGE)修饰蛋白对人外周血单核细胞分泌单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的影响。方法 将培养的人外周血单核细胞与不同浓度AGE修饰的人血清白蛋白(AGE-HSA)共同培养,收集细胞培养液,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测MCP-1的分泌。结果 AGE-HSA以时间和剂量依赖的方式促进单核细胞分泌MCP-1。结论 AGE-HSA促进单核细胞分泌MCP-1,可能参与了糖尿病患者动脉粥样硬化(AS)的形成和发展     

晚期糖基化终末产物对人骨髓间充质干细胞体外增殖的影响

目的研究晚期糖基化终末产物（AGEs）对体外分离培养的人骨髓间质干细胞（MSCs）增殖的影响。方法采用CCK-8比色法检测在不同时间和浓度AGEs干预下所培养的MSCs的吸光度和增殖活力,同时测定细胞内的丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）活性。结果 AGEs加入细胞培养后,可显著抑制MSCs的增殖（均P〈0.01）,并呈剂量和时间依赖效应关系。随着AGEs-BSA作用浓度的增加,细胞内丙二醛含量明显增加,而细胞匀浆中超氧化物歧化酶的活性却受到了抑制（均P〈0.01）,具有剂量依赖效应。结论 AGEs通过增强MSCs内的氧化应激,破坏MSCs内环境稳定性,从而抑制MSCs的增殖。研究晚期糖基化终末产物（AGEs）对体外分离培养的人骨髓间质干细胞（MSCs）增殖的影响。     

糖基化终末产物诱导心肌细胞老化的机制

目的:研究糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGEs)诱导心肌细胞老化的机制?方法:AEGs?抗AGE受体(RAGE)抗体干预乳鼠心肌细胞48 h?通过Western blot和β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色分别检测老化相关蛋白p53?p16的表达及SA-β-Gal活性;采用JC-1?DCFH-DA分别测定线粒体膜电位?细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS);通过Western blot检测自噬相关蛋白LC3?Beclin1?结果:AGEs干预细胞48 h后与对照组相比,AGEs组SA-β-Gal活性明显增高,p53?p16的表达量明显增加(P < 0.01),同时伴随线粒体膜电位的降低(P < 0.01)及细胞内ROS水平增加(P < 0.01),LC3与Beclin1表达量明显增加(P均 < 0.01);给予抗RAGE抗体干预后与AGEs组相比,SA-β-Gal活性降低,p53?p16的表达量明显降低(P < 0.01),线粒体膜电位增高(P < 0.01),细胞内ROS减少(P < 0.01),LC3与Beclin1表达量降低(P < 0.05和P < 0.01)?结论:AGEs与其受体RAGE作用可能通过氧化应激及线粒体损伤与自噬诱导心肌细胞老化?     

川芎嗪对糖基化终末产物诱导肾小管上皮细胞外基质表达的影响

目的 观察川芎嗪对AGE-BSA诱导人近端肾小管上皮细胞(HK-2)细胞外基质(ECM)成分表达的影响,探讨其干预糖尿病肾间质纤维化的作用机制.方法 将HK-2细胞在体外与BSA、AGE-BSA、AGE-BSA+川芎嗪(不同浓度)共培养72 h后.用RT-PCR和Westem Blot分别检测FN、Col 1α mRNA及蛋白的表达.结果 R.T-PCR.和Westem Blot结果 显示.100μg/ml BSA刺激HK-2细胞后,FN、Col 1α mRNA及蛋白表达无明显增加;100μg/ml AGE-BSA刺激后,FN、Col 1α1 mRNA及蛋白表达明显增加,与空白对照组及相同浓度BSA组相比,P＜0.01:加入(40～120)μg/ml川芎嗪共同干预后,川芎嗪可在mRNA及蛋白水平呈剂量依赖性下调AGEBSA诱导的FN、Col 1α1的表达.结论 川芎嗪能抑制AGE-BSA诱导的HK-2细胞FN、Col Iα1 的合成.表明川芎嗪能通过抑制肾小管上皮细胞分泌ECM进而延缓糖尿病肾间质纤维化的进展.     

生肌象皮膏对糖尿病大鼠溃疡创面肉芽组织的终末糖基化产物及受体的影响

[目的]通过对糖尿病大鼠溃疡创面肉芽组织的终末糖基化产物及受体的含量的动态观察,探讨生肌象皮膏促进糖尿病大鼠难治性溃疡愈合的机制。[方法]制备糖尿病溃疡动物模型,按照血糖和体质量分层随机分为糖尿病空白对照组、凡士林组、生肌象皮膏组。生肌象皮膏组外用生肌象皮膏纱条外敷,凡士林组用凡士林纱条外敷,空白组、糖尿病对照组均以生理盐水纱条外敷,分别于1、7、14、21d每组处死动物10只,手术取新鲜肉芽组织160例。采用实时荧光定量PCR法检测终末糖基化产物受体的含量,免疫组化法检测终末糖基化产物的含量。[结果]终末糖基化产物的含量于糖尿病各组与空白组比较无显著性差异,均呈强阳性表达。糖尿病各组间比较无统计学意义。糖尿病各组终末糖基化产物受体（RAGE）于7d有升高的趋势,14d达到高峰,各组间无统计学意义。从均数趋势上看生肌象皮膏组明显低于凡士林组、糖尿病对照组,在均数趋势上看生肌象皮膏组可以抑制RAGE的产生,随时间的延长,更为明显。第21天糖尿病各组的RAGE呈低表达,生肌象皮膏组、凡士林组与空白组比较有统计学意义。糖尿病各组组间比较,无统计学意义。[结论]生肌象皮膏对终末糖基化产物无明显影响,可以减少终末糖基化产物受体的产生,随时间的延长,更为明显。     

糖基化终末产物对SH-SY5Y细胞氧化应激及凋亡的影响

目的研究糖基化终末产物(AGEs)对人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)凋亡的影响,探讨AGEs与阿尔茨海默病(AD)发病机制的关系。方法分别以不同浓度糖基化修饰的牛血清白蛋白(AGE-BSA)处理SH-SY5Y细胞48 h,选取AGE-BSA敏感浓度(200μg/mL)处理细胞不同时间,流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡率,确定AGE-BSA诱导SH-SY5Y凋亡最佳浓度及时间。将细胞随机分为对照组、牛血清白蛋白(BSA)对照组、AGE-BSA组、AGE-BSA+抗RAGE中和抗体组、AGE-BSA+α-硫辛酸组、AGE-BSA+DPI(NADPH氧化酶抑制剂)组。FCM检测细胞凋亡率变化,Hoechst 33258染色观察细胞形态改变,应用活性氧荧光探针DCFH-DA检测活性氧(ROS)水平,Western blot测定Caspase-12的表达。结果细胞凋亡率随AGE-BSA浓度增加及作用时间延长而升高,200μg/mL AGE-BSA作用48 h细胞凋亡率从对照组的(2.23±0.08)%增加到(16.8±1.27)%(P<0.05),同时,Hoechst染核后可见典型凋亡形态改变,细胞内ROS水平显著增高,Caspase-12蛋白表达明显上调,与对照组相比差异显著(P<0.05),而分别用抗RAGE中和抗体、α-硫辛酸、DPI预处理后再加入AGE-BSA,各组与AGE-BSA组比较,凋亡率明显下降,ROS水平、Caspase-12蛋白表达均明显降低(P<0.05)。结论糖基化终末产物可刺激SH-SY5Y细胞产生大量ROS及活化Caspase-12介导细胞凋亡,通过阻断其与特异性受体RAGE结合或减少细胞内ROS可减轻细胞凋亡的发生。     

糖基化终末产物对人牙龈成纤维细胞炎症因子分泌及P65表达的影响

目的:研究糖基化终末产物(AGEs)对人牙龈成纤维细胞炎症因子分泌的影响及其可能的机制。方法:用体外酶消化结合组织块法培养人牙龈成纤维细胞;将细胞分为对照组和实验组,对照组为正常培养液培养的人牙龈成纤维细胞;实验组为含AGEs终浓度分别为1、5、10、20μL/mL培养液培养的人牙龈成纤维细胞;Real time PCR检测炎症因子IL-6、肿瘤坏死因子TNF-α、NF-κB信号通路关键分子P65mRNA的表达情况。结果:酶消化加组织块法培养出来的牙龈成纤维细胞大多呈长梭形,胞液丰满;Real time PCR检测结果表明,与对照组相比,不同浓度AGEs刺激下的牙龈成纤维细胞IL-6表达量均升高,5、10、20μL/mL浓度AGEs刺激下TNF-α、P65的mRNA表达量升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:糖基化终末产物可以导致牙龈成纤维细胞炎症因子的表达升高,其机制可能是通过激活NF-κB信号通路,从而影响了糖尿病患者的牙龈健康。     

糖基化终末产物对人内皮细胞分泌前列环素和内皮素-1的影响

目的 了解糖基化终末产物（AGES）对人内皮细胞分泌前列环素（PGI2）和内皮素-1（ET-1）的影响,以及α-硫辛酸（α-LPA）对其的影响。方法 采用酶消化法收集人脐静脉内皮细胞,经原代培养后随机分为4组：正常对照组、AGES组、正常+AGES组和AGES + α-LPA组;放免法测定培养24、48、72h时培养基中的PGI2和ET-1含量。结果 ①AGES组较正常对照组PGI2显著下降(P＜0.05),ET-1显著升高(P＜0.05);②AGES +α -LPA组较AGES组PGI2显著升高 (P＜0.05),ET-1显著下降 (P＜0.01)。结论 AGES对血管内皮细胞有损伤作用,α-LPA可减轻这种损伤,提示抗氧化剂可用于保护血管内皮细胞。     

晚期糖基化终末产物对糖尿病结膜松弛症的影响

目的 测定晚期糖基化终末产物（AGEs）在糖尿病结膜松弛患者结膜组织及血清中的含量,探讨其在糖尿病结膜松弛症发生过程中的作用机制.方法 共收集结膜标本36份（糖尿病结膜松弛症6例9眼、单纯结膜松弛症5例9眼、糖尿病不伴结膜松弛症者9例9眼和正常人9例9眼）,血清标本29份（每人静脉采血）,采用竞争性酶联免疫吸附试验法（ELISA）定量测定其AGEs含量.结果 在糖尿病结膜松弛组、糖尿病组两组血清AGEs含量（ng/nl）分别为17.5525±4.1593和15.7092±3.1896,明显高于结膜松弛组和正常结膜组的12.0809±3.2551和9.0161±2.4255,差异有统计学意义（P＜0.05）;在糖尿病结膜松弛组与糖尿病组、结膜松弛组与正常结膜组病组,血清AGEs含量差异无统计学意义（P=0.089）.结膜组织中AGEs含量在糖尿病结膜松弛组（0.4240±0.0903）、糖尿病组（0.3436±0.0780）、结膜松弛组（0.2682±0.0410）、正常结膜组（0.1895±0.0176）依次降低,各个组间差异均有统计学意义（P＜0.05）.结论 血清及结膜中AGEs水平升高与糖尿病结膜松弛症密切相关,高糖环境和AGEs蓄积可能在糖尿病结膜松弛的发生和发展中起到重要作用.     

晚期糖基化终末产物对巨噬细胞Nampt表达的影响

目的探讨晚期糖基化终末产物(AGEs)对巨噬细胞尼克酰胺磷酸核糖转移酶(Nampt)表达的影响。方法以人单核细胞株THP-1为体外细胞干预模型,经佛波酯诱导分化为巨噬细胞后,以0(阴性对照组)、50、100、250、500、1 000μg/mL的AGEs干预12 h,采用Western blotting方法检测细胞Nampt蛋白表达。以Western blotting检测结果选择合适浓度的AGEs处理巨噬细胞,分别于干预后0(阴性对照组)、3、6、12、24 h时点收集细胞,采用实时定量聚合酶链式反应(Real-Time PCR)技术和Westernblotting方法检测巨噬细胞Nampt mRNA和蛋白表达。结果在50～500μg/mL的浓度范围内,AGEs处理组巨噬细胞Nampt蛋白表达量均显著高于阴性对照组(P<0.01),且随干预浓度的升高呈现逐渐上升趋势,250μg/mL和500μg/mL AGEs处理组的干预效应最显著,设定后续实验中以250μg/mL AGEs对巨噬细胞进行干预。250μg/mL AGEs处理组巨噬细胞干预后各时点的Nampt mRNA和蛋白表达量均显著高于阴性对照组(P<0....     

晚期糖基化终末产物对巨噬细胞Nampt表达的影响

目的 探讨晚期糖基化终末产物(AGEs)对巨噬细胞尼克酰胺磷酸核糖转移酶(Nampt)表达的影响.方法 以人单核细胞株THP-1为体外细胞干预模型,经佛波酯诱导分化为巨噬细胞后,以0(阴性对照组)、50、100、250、500、1 000μg/mL的AGEs干预12 h,采用Western blotting方法检测细胞Nampt蛋白表达.以Western blotting检测结果选择合适浓度的AGEs处理巨噬细胞,分别于干预后0(阴性对照组)、3、6、12、24 h时点收集细胞,采用实时定量聚合酶链式反应(Real-Time PCR)技术和Western blotting方法检测巨噬细胞Nampt mRNA和蛋白表达.结果 在50～500μg/mL的浓度范围内,AGEs处理组巨噬细胞Nampt蛋白表达量均显著高于阴性对照组(P＜0.01),且随干预浓度的升高呈现逐渐上升趋势,250μg/mL和500μg/mL AGEs处理组的干预效应最显著,设定后续实验中以250μg/mL AGEs对巨噬细胞进行干预.250μg/mL AGEs处理组巨噬细胞干预后各时点的Nampt mRNA和蛋白表达量均显著高于阴性对照组(P＜0.01),且随干预时间的延长呈现逐渐上升趋势.结论 AGEs干预能促进巨噬细胞Nampt表达上调;提示AGEs 可能部分通过Nampt途径激活巨噬细胞而参与糖尿病动脉粥样硬化的发生过程.     

晚期糖基化终末产物在纤维化中的作用机制

晚期糖基化终末产物AGEs是指体内的糖类通过非酶促糖化途径与蛋白质、核酸或脂质等大分子氨基之间形成的不可逆聚合物。目前的研究表明，晚期糖基化终末产物与肾脏、肝脏、肺脏、血管、腹膜等纤维化发生密切相关，其促纤维化作用机制涉及到纤维化发生的多个环节，包括细胞外基质、纤维性细胞以及纤维性细胞因子等。本文将从上述三个方面对近几年来的相关研究结果进行综述。     

关于晚期糖基化终末产物的研究进展

1984年Vlassara等人首次提出晚期糖基化终末产物(AGE)这一概念,近年来对于AGE的研究备受关注.研究发现AGE参与了氧化应激、炎症反应等病理变化,同时,AGE还参与了慢性肾脏病、糖尿病肾病、动脉粥样硬化等疾病的发生及进展过程.本文就AGE的结构、与疾病的关系、药物干预等方面作一综述.