细胞毒性T淋巴细胞生物杀伤效应的检测方法

细胞介导的免疫效应在机体抗感染免疫、抗肿瘤免疫、移植排斥效应和自身免疫性疾病发生机制中发挥重要作用,主要效应细胞之一为细胞毒性T淋巴细胞(Cytotoxic T lymphoclyte,CTL)。近年来,基于CTL特异性表位的多肽疫苗已经成为研究热点之一,CTL的活化及对靶细胞的杀伤效应成为衡     

EB病毒特异性细胞毒性T淋巴细胞与肿瘤免疫治疗研究进展

EB病毒（EBV）与多种人类肿瘤的密切关系已引起人们的高度重视,它在不同的肿瘤细胞上有不同的病毒基因表达谱。近来,EBV特异性CTL开始被用于EBV相关肿瘤的免疫治疗并已取得初步疗效,但仍存在诸多问题,如病毒抗原免疫原性很弱及肿瘤细胞本身分泌的某些细胞因子均减弱了EBV特异性CTL对肿瘤细胞的杀伤作用。本文就上述内容作一综述。     

检测Epstein-Barr病毒特异性细胞毒性T淋巴细胞方法的建立及其初步研究

目的建立一种非放射性、简便易行的可检测特异性细胞毒性Ｔ淋巴细胞的方法，并且初步应用于Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒ病毒的细胞免疫应答。方法用重组的ＥＢＶ－ＬＭＰ１痘苗病毒、ＴＫ＋痘苗病毒和杆状病毒系统表达的ＥＢＶ－ＬＭＰ１蛋白分别免疫Ｂａｌｂ／Ｃ小鼠，用Ｐ８１５细胞和乳酸脱氢酶法检测ＥＢ病毒特异性细胞毒性Ｔ细胞的杀伤效应。结果重组ＥＢＶ－ＬＭＰＩ痘苗病毒免疫组原发ＣＴＬ水平和体外诱生的二次ＣＴＬ水平均高于ＴＫ＋痘苗病毒免疫组和正常组；杆状病毒系统表达的ＥＢＶ－ＬＭＰ１蛋白免疫组的ＣＴＬ水平也明显高于正常鼠。结论本法可以较好的反映ＥＢ病毒特异性细胞毒性Ｔ细胞的水平，而且再一次说明ＬＭＰ１基因能够诱发特异性的细胞免疫。     

检测Epstein—Barr病毒特异性细胞毒性T淋巴细胞方？…

目的 建立一种非放射性、简便易行的可检测特异性细胞毒性Ｔ淋巴细胞的方法，并且初步应用于Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒ病毒的细胞免疫应答。方法 用重组的ＥＢＶ－ＬＭＰ１痘苗病毒、ＴＫ＾＋痘苗病毒和杆状病毒系统表达的ＥＢＶ－ＬＭＰ！蛋白分别免疫Ｂａｌｂ／Ｃ小鼠，用Ｐ８１５细胞和乳酸脱氢酶法检测ＥＢ病毒特异性细胞毒性Ｔ细胞的杀伤效应。结果 重组ＥＢＶ－ＬＭＰ１痘苗病毒免疫组原发ＣＴＬ水平和体外诱生的二次ＣＴＬ     

细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4的研究进展

细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4（CTLA-4）属于B7／CD28家族成员，具有下调免疫应答为主的多种免疫学效应。CTLA-4有多个位点基因多态性，其基因多态性可影响CTLA-4分子的表达和功能，同某些免疫因素相关性疾病有关。CTLA-4可表达于免疫细胞为主的多种细胞，有膜结合和可溶性等两种形式。CTLA-4Ig和抗单抗是CTLA-4用于防治自身免疫性疾病、移植排斥及肿瘤的两种分子，其效能在动物试验及临床应用中已得到证实.     

抗原特异性细胞毒性T细胞体外扩增方法的研究近展

抗原特异性细胞毒性T细胞(cytoxicTlymphocytes,CTLs)在细胞免疫应答中起着重要的效应功能,从而在抗肿瘤和抗感染免疫中发挥着重要作用。由于受到各种因素的限制和影响,抗原特异性CTLs无法在体内有效地诱导和扩增,因此,通过体外诱导和扩增CTLs后再将此CTLs回输到体内是一个比较理想的方法,且具有重要的应用价值,如何高效激活和扩增抗原特异性CTLs是此法能否成功应用的关键。     

细胞毒性T细胞在白血病中的研究进展

T细胞免疫在急性白血病的抗肿瘤免疫中起重要作用,细胞毒性T细胞(CTL)被活化至少需要两个信号,T辅助细胞的活化必须由抗原提呈细胞提呈MHCII类抗原,而后者还必须有表面的B7分子与T辅助细胞上的CD28分子相结合才能完成;急性白血病人体内可能存在可被IL-2诱导的CTL的前体细胞;CTL对白血病细胞的作用途径以MHC限制性途径为主。     

转基因表达HBV抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞受体

目的 通过逆转录病毒介导HBV抗原特异性细胞毒性T细胞(CTL)的T细胞受体(TCR)转基因表达,初步观察其结合活性.方法 从HLA-A2阳性急性乙肝患者外周血中诱导、分选、克隆和扩增HBV抗原特异性CTL;提取细胞RNA,用RT-PCR、5'-RACE和OVER-LAP PCR等方法获取TCR的α和β链编码基因;构建TCR重组逆转录病毒,介导特异性TCR分别在人Jurkat T细胞和HLA-A2阳性健康人CD8 T淋巴细胞上表达.结果 从1例HLA-A2阳性急性乙肝患者样本中分别获得了2组TCR Vα、Vβ配对,分别命名为α21β13、α15β13,包装的重组逆转录病毒滴度为(1.5 ～5.0)×105 IU/mL,用针对目标TCR的特异性Vβ链抗体(抗Vβ13 TCR-PE)和HLA-A2限制性表位特异性五聚体(pentamer)进行免疫荧光染色,重组TCR在T细胞表面获得表达:其中在Jurkat细胞上转入的Vβ13链表达细胞占1.06％ ～2.25％,在HLA-A2阳性健康人T细胞上Vβ13阳性细胞和pentamer阳性细胞分别占到1.03％ ～2.06％和1.05％ ～1.12％,在HLA-A2阴性健康人T细胞上Vβ13阳性细胞和pentamer 阳性细胞均低于0.05％.结论 通过逆转录病毒介导可以使HBV特异性CTL TCR获得转基因表达,具有结合HLA-A2限制性表位的活性.     

EB病毒特异性细胞毒性T淋巴细胞与肿瘤免疫治疗研究进展

EB病毒 (EBV)与多种人类肿瘤的密切关系已引起人们的高度重视 ,它在不同的肿瘤细胞上有不同的病毒基因表达谱。近来 ,EBV特异性CTL开始被用于EBV相关肿瘤的免疫治疗并已取得初步疗效 ,但仍存在诸多问题 ,如病毒抗原免疫原性很弱及肿瘤细胞本身分泌的某些细胞因子均减弱了EBV特异性CTL对肿瘤细胞的杀伤作用。本文就上述内容做一综述     

HIV/AIDS患者特异性细胞毒性T细胞功能的研究

目的 了解中国HIV／AIDS患者HIV特异性细胞毒性T细胞(CTL)功能。方法 将覆盖HIV-1 P15、P17和P24 Gag全长的94个重叠多肽作为抗原，用IFN-γ ELISPOT方法检测HIV／AIDS患者HIV-1特异性CTL功能。结果 HIV-1抗原多肽P17-15、P17-16、P24-7、P17-8，P24-28最易被HIV／AIDS患者特异性CTL识别。HIV感染者识别HIV-1多肽的数量和强度均高于AIDS患者。结论 我国HTV／AIDS患者体内存在识别不同HIV-1 Gag多肽的特异性CTL，且HIV特异性CTL功能与疾病进展相关。     

HIV-1感染疾病缓慢进展者CD8+T淋巴细胞非细胞毒性免疫应答作用的研究

目的 探讨HIV-1感染疾病缓慢进展者CD8+T淋巴细胞非细胞毒性抗病毒应答功能(CNAR)的变化.方法 应用密度梯度离心法、免疫磁珠法纯化健康人CD4+T淋巴细胞和HIV感染者CD8+T淋巴细胞,用HIV毒株SF-33感染健康人CD4+T淋巴细胞,并加入不同疾病进程HIV感染者CD8+T淋巴细胞共培养,收集培养上清,应用ELISA方法测定上清中HIV-1 p24含量.结果 我们研究发现缓慢进展组(slow progressors,SP)、HIV典型进展组(typical progressors,TP)、健康对照组及AIDS组中CNAR功能依次下降(89%>77%>73%>61%),各组间的下降差异均有统计学意义(P<0.05);在HIV感染者中,CNAR功能与CD4+T细胞绝对计数呈显著正相关;与病毒载量无显著相关性.结论 CNAR功能对HIV感染疾病不进展可能具有保护作用.     

097 EB病毒特异性细胞毒性T淋巴细胞与肿瘤免疫治疗研究进展

EB病毒(EBV)与多种人类肿瘤的密切关系已引起人们的高度重视,它在不同的肿瘤细胞上有不同的病毒基因表达谱.近来,EBV特异性CTL开始被用于EBV相关肿瘤的免疫治疗并已取得初步疗效,但仍存在诸多问题,如病毒抗原免疫原性很弱及肿瘤细胞本身分泌的某些细胞因子均减弱了EBV特异性CTL对肿瘤细胞的杀伤作用.本文就上述内容做一综述.     

自体肿瘤疫苗主动特异性免疫治疗进展期肿瘤的初步研究

目的探讨自体肿瘤疫苗的作用机制及临床意义.方法30例进展期肿瘤病人术后,以自体肿瘤疫苗辅助主动免疫治疗.术后第4周开始接种(共4次,每次间隔7～10 d);接种前3天及4次接种后1 w,采集外周血,分离单个核细胞,测定CD8+-IFN-γ+,CD8+-IL-10+细胞比例及CD4+-IFN-γ+、CD4+-IL-10+细胞比例;同时采集血清检测血清IFN-γ、IL-10水平;用PPD及自体抗瘤抗原做皮肤迟发型过敏反应试验,48h后测量红斑、硬结大小(mm).临床随访.结果自体免疫苗治疗后①血清IFN-γ水平升高,高(5.98±2.40)pg/ml升至(11.20±4.76)pg/ml;而IL-10水平由(26.04±12.85)pg/ml降至(8.12±3.69)pg/ml,差异有非常显著性(P＜0.05).②CD8+-IFN-γ+双阳性细胞比例由(3.72±1.56)%升至(8.01±2.54)%;CD4+-IFN-γ+双阳性细胞比例由(4.52±1.08)%升至(7.94±2.06)%.差异有非常显著性(P＜0.05).③治疗前后病人对自体肿瘤抗原的特异性DTH反应明显增强(P＜0.01).④病人耐受性良好,无溃疡等严重副作用发生.⑤随访结果显示22例病人无瘤生存时间超3年,其中部分病人无瘤生存时间超过5年.结论①自体肿瘤疫苗可激发病人特异性细胞介导的免疫反应;②自体疫苗可改善病人的抗瘤免疫反应;③自体肿瘤疫苗主动特异性免疫治疗,对于杀灭残留癌细胞、抗转移及复发有重要作用.     

多功能T细胞的检测及其意义

近年来,在对小鼠实验和人体免疫的研究中发现,疫苗的保护效果和病人的预后及转归与多功能性T细胞的数量和质量密切相关.以往仅仅检测某种或少数几种效应T细胞的功能,远远不能代表机体的特异性免疫状态.在单个细胞水平上,同时产生两种或以上效应功能,包括细胞因子、趋化因子及杀伤功能的细胞被称为多功能性T细胞.多功能性T 细胞与疾病的保护效果密切相关.为此,功能性T细胞的检测,能更准确、完整地反映机体特异性细胞免疫应答,尤其对于疫苗的设计和保护效果评价具有十分重要的意义.     

CFSE和AnnexinV双标记技术检测细胞毒性T淋巴细胞的杀伤效应

目的 利用CFSE和AnnexinV对靶细胞进行染色,建立一种通过流式细胞仪技术检测细胞毒性T淋巴细胞(CTL)杀伤效应的新方法.方法 应用磁珠分 OT-Ⅰ T细胞受体(TCR)转基因小鼠CD8+CTL细胞和脾脏树突状细胞(sDC),将2种细胞和鸡卵蛋白(OVA)抗原肽共培养65 h后分析其细胞分裂增殖、IFN-γ和IL-4细胞内因子及穿孔素、颗粒酶等效应分子的表达特性,收获具备杀伤效应的CD8+CTL细胞.利用预先激活的小鼠CD8+CTL细胞作为效应细胞,CFSE标记的同系小鼠脾细胞作为靶细胞,体内体外2种条件下利用AnnexinV染色靶细胞检测特异性CTL杀伤效应,并与CFSEhigh和CFSElow标记靶细胞检测体内CTL杀伤效应的经典方法进行比较.结果 OT-Ⅰ初始CD8+CTL细胞体外活化培养后有4个分裂峰,54.1%的CTL细胞表达IFN-γ,0.78%的细胞表达IL-4,穿孔素、颗粒酶2种CTL效应分子均为阳性表达,CD8+CTL细胞已经具备CTL杀伤活性.体外实验结果显示OVA+靶细胞在共培养条件下,AnnexinV阳性细胞比例明显高于分离培养条件下[(62.4±3.5)%比(28.3±2.2)%,P＜0.01],OVA-的AnnexinV阳性靶细胞比例在不同培养条件下差异无统计学意义[(20.3±4.8)%比(17.3±2.9)%,P＞0.05].共培养条件下OVA+靶细胞其AnnexinV阳性细胞比例也明显高于OVA-靶细胞(P＜0.01),在分离培养条件下差异则无统计学意义(P＞0.05).活化的CD8+CTL细胞所介导的杀伤效应具有抗原依赖性和部分的细胞接触依赖性.体内CTL实验中,利用CFSE和AnnexinV双标记的方法检测出靶细胞的杀伤率高于未孵育OVA抗原肽的对照组靶细胞[(52.63±8.12)%比(13.84±4.37)%,P＜0.01].而同等条件下利用CFSEhigh和CFSElow双标记的方法检出靶细胞杀伤率为41%.结论 CFSE和AnnexinV双标记靶细胞的方法检测CTL杀伤效应与单纯的使用CFSEhigh和CFSElow标记靶细胞方法有很好的可比性,该策略为利用流式细胞仪技术检测细胞杀伤功能的方法学提供了新的选择.     

丙肝核酸疫苗免疫的CTL活性检测

目的 :探讨丙肝核酸疫苗的细胞免疫应答效果。方法 :用丙肝核酸疫苗pSVL HCV C E1 通过皮下注射途径免疫BALB C小鼠 ,以绿色荧光载体重组体pEGFP N1 HCV C E1 转染的小鼠骨髓瘤细胞SP2 0作为靶细胞 ,采用51 Cr释放法 ,以(Na) 2 51 CrO4 标记靶细胞进行标准的 4h杀伤试验检测其CTL活性。结果 :CTL杀伤率达 4 0 7%。结论 :丙肝核酸疫苗能激发强烈的细胞免疫     

MTS和MTT法检测小鼠NK及特异性细胞毒性T细胞活性的比较

ＭＴＳ和ＭＴＴ法检测小鼠ＮＫ及特异性细胞毒性Ｔ细胞活性的比较叶萍李燕谷淑燕本文受国家８６３高科技生物技术领域基金资助作者单位：１０００５２北京中国预防医学科学院病毒学研究所１９９７年９月７日收稿１１月１２日修回四唑类化合物由于其使用方便，无放射性等优...     

致敏树突状细胞活化细胞毒性T细胞抗肿瘤作用的研究

目的：研究树突状细胞（DCs）激活的细胞毒性T细胞的抗肿瘤及预防肿瘤发生的作用。 方法： 细胞因子诱生人PBMC未成熟DCs，加入肿瘤细胞抗原提取物致敏DCs产生成熟DCs；通过细胞形态、表面标记鉴定成熟DCs，MTT法测成熟DCs活化的细胞毒性T细胞(CTL)的体外杀伤活性；裸鼠体内注射活化CTL观察其抑制移植瘤生长及发生的作用。 结果： 经过7 d培养，获得大量形态典型、具有强烈刺激增殖能力、高表达CD80(63.5%)、CD83（67.6%）和CD3/ HLA-DR(83.2%)的DCs。其活化的CTL在20∶1效靶比时对抗原来源细胞株自身的杀伤率达75%以上，对同系细胞株的杀伤活性为35%-45%，对其它种系肿瘤细胞仅有微弱杀伤力（P<0.01）。CTL对裸鼠结肠癌HT-29移植瘤有特异性的生长抑制和预防生成作用（P<0.05）。CTL治疗组肿瘤组织中PCNA表达水平显著低于对照组（P<0.05）。 结论： 肿瘤细胞抗原活化的DC诱导CTL对肿瘤有特异性的杀伤作用，体内应用可特异性抑制移植结肠癌的生长或预防小鼠结肠癌移植瘤的发生。     

CD8+T淋巴细胞非细胞毒性抗HIV作用研究进展

细胞免疫在抗病毒感染中发挥着至关重要的作用。人类免疫缺陷病毒(HIV)感染所引起的细胞免疫反应是由CD8 T淋巴细胞的亚群细胞毒性T细胞(CTL)介导的先天免疫。CTLs一方面通过细胞毒性作用杀伤感染的细胞,另一方面分泌可溶性抗病毒因子(CAF)发挥直接的抗病毒作用,因此成为HIV感染中细胞免疫的重要组成部分。本文就HIV感染这一疾病过程中CD8 T淋巴细胞所发挥的非细胞毒性抗病毒效应作一概述。