胸腺细胞对胸腺上皮细胞分泌IL—6的促进作用

为分析胸腺细胞对胸腺基质细胞功能的调节作用，将胸腺细胞与小鼠胸腺上皮细胞系（ＭＴＥＣ１）共育，分析胸腺细胞对ＭＴＥＣ１分泌ＩＬ－６的影响。结果表明，胸腺细胞能明显促进ＭＴＥＣ１分泌ＩＬ－６，其促进程度与两种细胞的数量及共育时间有关。胸腺细胞（４×１０＾６／孔）与ＭＴＥＣ１（１×１０＾５／孔）共育４８小时，ＭＴＥＣ１分泌ＩＬ－６达高峰。去除胸腺细胞后９６小时，ＭＴＥＣ１分泌ＩＬ－６的量仍比单独培养的     

166胸腺细胞与胸腺基质细胞的相互作用

胸腺内Ｔ细胞细胞依赖胸腺微环境提供的多种信号完成正常发育过程，然而研究发现无论在自然或实验条件下胸腺细胞的减少均可导致胸腺上皮细胞减少，从而提示胸腺微环境和胸腺细胞之间存在相互依赖关系。即Ｔ细胞的发育依赖于胸腺微环境同时Ｔ细胞的存在对形成和维持正常的胸腺微环境也是必需的。     

胸腺细胞对胸腺止皮细胞分泌IL-6的促进作用

为分析胸腺细胞对胸腺基质细胞功能的调节作用，将胸腺细胞与小鼠胸腺上皮细胞系（ＭＴＥＣ１）共育，分析胸腺细胞对ＭＴＥＣ１分泌ＩＬ－６的影响。结果表明，胸腺细胞能明显促进ＭＴＥＣ１分泌ＩＬ－６，其促进程度与两种细胞的数量及共育时间有关。胸腺细胞（４×１０~６／孔）与ＭＴＥＣ１（１×１０~５／孔）共育４８小时，ＭＴＥＣ１分泌ＩＬ－６达高峰。去除胸腺细胞后９６小时，ＭＴＥＣ１分泌ＩＬ－６的量仍比单独培养的ＭＴＥＣＩ多１．７倍。经丝裂霉素Ｃ处理的胞腺细胞仍能促进ＭＴＥＣ１分泌ＩＬ－６，其作用程度与末经处理的胸腺细胞相似。而胸腺细胞培养上清及裂解液则不影响ＭＴＥＣ１分泌ＩＬ－６，从而证实胸腺细胞能促进ＭＴＥＣＩ分泌ＩＬ－６，其作用机制可能与细胞-细胞直接相互作用有关。     

胸腺细胞对胸腺上皮细胞分泌干扰素的促进作用

目的分析胸腺细胞对胸腺上皮细胞分泌干扰素的影响。方法用胸腺细胞和胸腺基质细胞混合培养模型，测定ＩＦＮ活性并进行类型鉴别。结果胸腺细胞可以促进小鼠胸腺上皮细胞系（ＭＴＥＣ１）产生Ⅰ型ＩＦＮ，胸腺细胞和胸腺基质细胞以４０１的比例培养时，促进作用最强。ＭＴＥＣ１细胞经抗ＩＣＡＭ－１抗体作用后，分泌Ⅰ型ＩＦＮ增多。用放线菌酮预处理ＭＴＥＣ１细胞后，胸腺细胞和抗ＩＣＡＭ－１抗体则不再影响ＭＴＥＣ１细胞产生ＩＦＮ。结论胸腺细胞与基质细胞的相互作用，可由粘附分子ＩＣＡＭ－１／ＬＦＡ－１介导。胸腺细胞能促进ＭＴＥＣ１细胞合成ＩＦＮ。     

识别胸腺髓质上皮细胞和胸腺树突状细胞的单链 …

目的 利用噬菌体展示技术寻找胸腺基质细胞表面的新抗原。方法 用培养的胸腺基质细胞系ＭＴＤＣ作为靶抗原富集初级噬菌体抗体库。从经过富集后的次组抗体库中挑选克隆，制备单链抗体，并在冰冻切片及培养的细胞系上检测抗体的特异性。结果 从经４轮富集的次级抗体库中挑选到一个新的克隆。用此克隆制备的单链抗体可同时辨认胸腺髓质上皮细胞亚群和胸腺树突状细胞亚群。结论 胸腺髓质上皮细胞和胸腺树突状细胞均具有异质性，同时     

胸腺上皮细胞上清液促进85细胞增殖的研究

胸腺是T细胞分化发育的场所。源于骨髓的前T细胞迁入胸腺后,在胸腺微环境作用下,经阳性和阴性选择过程,发育分化成功能性T细胞迁至外周[1]。目前对胸腺基质细胞如何影响成熟T细胞株的研究较少。为此,本文利用体外原代培养人胸腺上皮细胞,比较不同培养条件下细胞生长情况。...     

胸腺上皮细胞的起源与分化

胸腺提供复杂的微环境来调节T细胞的存活、分化、选择和迁移,是T细胞发育、分化和成熟的场所也是自身免疫耐受的中心。胸腺上皮细胞包括胸腺皮质上皮细胞和髓质上皮细胞,其来源于内胚层,并由胸腺上皮祖细胞分化而来。胸腺上皮细胞的分化空间结构的建立有赖于转录因子和信号通路分子在胸腺上皮细胞不同时段复杂的分子调控。胸腺上皮细胞成熟过程也是胸腺上皮细胞一系列特异性表面标记分子的变化过程,对胸腺上皮细胞特异标记分子的研究是分析胸腺上皮细胞复杂分化过程的重要工具。本文重点探讨胸腺上皮细胞起源发展模型及分化过程中分子调控作用,以期更好的理解胸腺上皮细胞如何成为能够支持T细胞分化的特异哺育者。     

两种小鼠胸腺基质细胞对胸腺细胞凋亡的不同作用

采用两种体外建系的小鼠胸腺基质细胞（ＴＳＣ）系，即上皮样ＴＳＣ（ＭＴＥＣ１）和树突状ＴＳＣ（ＭＴＳＣ４），观察其对胸腺细胞凋亡的影响。小鼠胸腺细胞在体外培养过程中，可自发地出现细胞凋亡的特征，表现为ＤＮＡ呈梯度断裂片段，细胞经ＦＡＣＳ分析出现亚二倍体ＤＮＡ波峰，以及Ｆｅｕｌｇｅｎ′ｓ染色镜检所见的ＤＮＡ凝聚和断裂。胸腺细胞在与ＴＳＣ共育后，在ＭＴＥＣ１组可见其凋亡过程受到抑制和存活率的增加；在ＭＴＳＣ４组，仅在共育１２至１８小时时，见到胸腺细胞凋亡加强，而其存活率不受影响。结果提示在胸腺细胞发育过程中，其阴性选择作用的主要机制之一的ＰＣＤ过程受不同来源的胸腺基质细胞的调节。     

ICAM-1抗体诱导小鼠胸腺上皮细胞分泌IL-6

目的研究胸腺细胞和ＩＣＡＭ－１抗体对胸腺上皮细胞分泌ＩＬ－６的作用。方法用促ＩＬ－６依赖株增殖法检测ＩＬ－６活性，用原位杂交法检测ＩＬ－６ｍＲＮＡ的表达。结果不同的胸腺细胞亚群均能促进ＭＴＥＣ１分泌ＩＬ－６，而且作用无明显差异。ＩＣＡＭ－１抗体能够促进ＭＴＥＣ１分泌ＩＬ－６，其促进作用呈剂量依赖关系。放线菌酮预处理ＭＴＥＣ１以后，ＩＣＡＭ－１抗体和胸腺细胞均不再能促进ＭＴＥＣ１分泌ＩＬ－６。原位杂交证实，经胸腺细胞和ＩＣＡＭ－１抗体活化后，ＭＴＥＣ１表达ＩＬ－６ｍＲＮＡ明显增多，并且表达ＩＬ－６ｍＲＮＡ的ＭＴＥＣ１数量也增多。提示胸腺细胞和ＩＣＡＭ－１抗体能促进ＭＴＥＣ１合成新的蛋白和ｍＲ－ＮＡ。结论胸腺微环境内，胸腺细胞可以通过粘附分子与胸腺上皮细胞相互作用，并可促进胸腺上皮细胞分泌ＩＬ－６。     

基因转染法建立小鼠胸腺基质细胞系

利用基因转染方法使细胞获得不死性，快速建立小鼠胸腺基质细胞（ＭＴＳＣ）系。用含有多瘤病毒ｍＴ基因的重组质粒Ｚｉｐ－ｍＴ以脂质体介导法转染初代培养的ＭＴＳＣ，经过８００μｇ／ｍｌ的Ｇ４１８筛选，得到５个ＭＴＳＣ克隆。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交分析表明所得细胞克隆的染色体中整合有ｍＴ基因，说明ｍＴ基因的整合是导致细胞转化的原因。基因转染建系比常规建系所需时间大大缩短，仅需２个月。     

小鼠胸腺上皮细胞株 MTEC_1选择性促进 CD_4~ CD_8~-成熟胸腺细胞的增殖

小鼠胸腺上皮细胞株 MTEC_1细胞与考的松耐受胸腺细胞(CRT)共同培养,在无任何外源刺激剂条件下,MTEC_1细胞可维持 CRT 存活,促进 CRT 增殖,双荧光抗体染色 FACS 分析证明,MTEC_1细胞选择性地支持 CD_4~ CD_8~-细胞增殖。在 Con A 活化条件下,MTEC_1细胞仍以促进 CD_4~ CD_8~-细胞增殖为主.MTEC_1细胞培养上清液(MTEC_1—SN)不能直接促进 CRT 增殖,但可维持其存活;在 Con A 活化条件下,则可促进 CRT 增殖。表型分析发现,MTEC_1—SN 对 CD_4~ CD_8~-和 CD_4~-CD_8~ 细胞的存活和增殖无明显选择作用。说明 MTEC_1细胞对 CD_4~ CD_8~-细胞的选择作用是两种细胞直接作用的结果.     

MTEC 1分泌的趋化因子引起特定亚群胸腺细胞的定向迁移

分析胸腺髓质上皮样细胞系ＭＴＥＣ１分泌的化学趋化因子对胸腺细胞亚群的趋化作用。方法以抗体加补体杀伤结合免疫磁珠及ｐａｎｎｉｎｇ法，将小鼠胸腺细胞分离纯化，获得ＣＤ４＋ＣＤ８＋（ＤＰ），ＣＤ４－ＣＤ８－（ＤＮ），ＣＤ４＋ＣＤ８－（ＣＤ４ＳＰ）及ＣＤ４－ＣＤ８＋（ＣＤ８ＳＰ）四亚群细胞，用Ｂｏｙｄｅｎ小室分析ＭＴＥＣ１┐ＳＮ对四群胸腺细胞的趋化作用。结果ＭＴＥＣ１┐ＳＮ对ＤＰ及ＣＤ４ＳＰ胸腺细胞有趋化活性（ＣＩ＝６．６±１．０及６．１±１．８）；对ＣＤ８ＳＰ细胞有中度趋化活性（ＣＩ＝３．２±１．０）；对ＤＮ趋化活性微弱（ＣＩ＝１．３±０．６）。化学趋化因子ＭＣＰ┐１纯品对ＣＤ４ＳＰ胸腺细胞显示强趋化活性（ＣＩ＝５．６），对ＤＮ胸腺细胞则无可测出趋化活性。结论ＭＴＥＣ１分泌的化学趋化因子对ＤＰ，ＣＤ４ＳＰ及ＣＤ８ＳＰ胸腺细胞有显著趋化作用，对ＤＮ胸腺细胞几乎无趋化作用。提示此类化学趋化因子有趋使胸腺发育中后期阶段的细胞向胸腺髓质区迁移和定位的作用。     

小鼠胸腺基质细胞单抗对胸腺细胞及脾细胞增殖的抑制作用

试验两种大鼠抗小鼠胸腺基质细胞（ＭＴＳＣ）ＭｃＡｂｓＰｆ１８－３、Ｒｓ２１－Ｃ６的生物作用。Ｐｆ１８－３ＭｃＡｂ识别分子表达于胸腺细胞、脾脏Ｔ及Ｂ细胞；Ｒｓ２１－Ｃ６只表达于ＭＴＳＣ。加Ｐｆ１８－３或Ｒｓ２１－Ｃ６于ＭＴＥＣＩ与胸腺细胞或脾细胞的体外培养中，在ＣｏｎＡ存在及不存在下，均可抑制ＭＴＥＣ１诱导胸腺细胞及脾细胞的增殖作用。ＣｏｎＡ活化下，其对胸腺细胞增殖的抑制率Ｐｆ１８－３为９６％；Ｒｓ２１－Ｃ６为９１％。对脾细胞的抑制率Ｐｆ１８－３为７５％；Ｒｓ２１－Ｃ６为５１％。Ｐｆ１８－３对单纯ＣｏｎＡ活化的胸腺细胞增殖也有显著的抑制作用，而Ｒｓ２１－Ｃ６无此作用。包被于平皿的固相Ｐｆ１８－３ＭｃＡｂ，对胸腺细胞、脾细胞均有轻度但显著的促增殖作用。故Ｐｆ１８－３ＭｃＡｂ识别的抗原分子（及其配基）参与Ｔ细胞的活化过程。鉴于Ｐｆ１８－３＋细胞的分布有其特异性，分析此抗原分子的功能有重要的意义。     

胸腺细胞对胸腺基质细胞生长及功能的调节

目的研究胸腺细胞对不同亚群胸腺基质细胞生长及功能的调节作用。方法胸腺基质细胞增殖以３Ｈ－ＴｄＲ掺入法测定，ＩＬ－７活性以促ＩＬ－７依赖株法检测，其ｍＲＮＡ表达以ＲＴ－ＰＣＲ法检测。结果胸腺细胞与ＭＴＳＣ４细胞分别以８０∶１，４０∶１或２０∶１的比例共育时，能明显抑制ＭＴＳＣ４细胞的增殖，而培养上清中ＩＬ－７活性无明显改变；当两种细胞的比例为１０∶１或５∶１时，则对ＭＴＳＣ４细胞的增殖无任何影响，而培养上清中的ＩＬ－７活性明显升高。ＲＴ－ＰＣＲ证实，与胸腺细胞共育的ＭＴＥＣ１和ＭＴＳＣ４细胞，ＩＬ－７ｍＲＮＡ水平明显提高。结论胸腺细胞能促进ＭＴＥＣ１和ＭＴＳＣ４细胞分泌ＩＬ－７，对不同亚群基质细胞的生长和功能有不同调节作用     

Effect of reduced EPHB4 expression in thymic epithelial cells on thymocyte development and peripheral T cell function

The Eph kinase (EPH) and ephrin (EFN) families are involved in a broad range of developmental processes. Increasing evidence is demonstrating the important roles of EPHBs and EphrinBs in the immune system. In this study on epithelial cell-specific Ephb4 knockout (KO) mice, we investigated T-cell development and function after EPHB4 deletion. KO mice presented normal thymic weight and cellularity. Their thymocyte subpopulation percentages were in the normal range. KO mice had normal T-cell numbers and percentages in the spleen, and T cells were activated and proliferated normally upon TCR ligation. Furthermore, naïve spleen CD4 cells from KO and wild type mice were capable of differentiating, in a comparable manner, into Th1, Th17 and Treg cells. In vivo, KO mice mounted effective delayed type hypersensitivity responses, indicating that thymocytes develop normally in the absence of TEC EPHB4, and T cells derived from EPHB4-deleted thymic epithelian cells (TEC) have normal function. Our data suggest that heavy redundancy and promiscuous interaction between EPHs and EFNs compensate for the missing EPHB4 in TECs, and TEC EPHB4's role in T cell development might only be revealed if multiple EPHs are ablated simultaneously. We cannot exclude the possibility that (1) some immunological parameters not examined in this study are affected by the deletion; (2) the deletion is not complete due to the leaky Cre-LoxP system, and the remaining EPHB4 in TEC is sufficient for thymocyte development; or (3) EPHB4 expression in TEC is not required for T cell development and function.     

Ultrastructural analysis of thymic nurse cell epithelium

Thymic nurse cells (TNC), a paradigmatic cell type of cortical epithelium, are large lymphoid-epithelial cell complexes of thymocytes enclosed within vacuoles lined by the epithelial cell membrane. TNC express major histocompatibility complex (MHC) class I and class II molecules on their surface and vacuole-lining membranes at high density and it was suggested that TNC provide an optimal microenvironment for positive selection of T cells. In this report we present electron microscopical data demonstrating that chicken TNC display morphological structures of exocytosis previously shown for hormone-secreting cells. In TNC, however, exocytosis is restricted to the capillary cleft between the epithelial cell and engulfed thymocytes. Thus, besides physical contact between the epithelial cell and enclosed thymocytes, TNC may additionally influence the development of thymocytes through release of soluble factors in a restricted microenvironment. By employing the 3-(2,4-dinitroanilino)-3-amino-N-methyl-propylamine technique which at the ultrastructural level detects acidic organelles involved in processing of antigens presented by MHC class II molecules, we also show that TNC contain acidic compartments similar to classical antigen-presenting cells, i.e. early and late endosomes and lysosomes, albeit in a lower amount than in thymic dendritic cells. This fact provides evidence that TNC not only are capable of antigen presentation but also possess the intracellular machinery for antigen processing.     

识别胸腺髓质上皮细胞和胸腺树突状细胞的单链抗体的筛选

目的　利用噬菌体展示技术寻找胸腺基质细胞表面的新抗原。方法　用培养的胸腺基质细胞系MTDC作为靶抗原富集初级噬菌体抗体库 ,从经过富集后的次级抗体库中挑选克隆 ,制备单链抗体 ,并在冰冻切片及培养的细胞系上检测抗体的特异性。结果　从经 4轮富集的次级抗体库中挑选到一个新的克隆。用此克隆制备的单链抗体可同时辨认胸腺髓质上皮细胞亚群和胸腺树突状细胞亚群。结论　胸腺髓质上皮细胞和胸腺树突状细胞均具有异质性 ,同时噬菌体展示技术可以作为寻找细胞表面新分子的强有力工具。