PD小鼠模型的多巴胺转运蛋白mRNA转录

目的分析帕金森病(PD)小鼠模型中脑黑质多巴胺转运蛋白(DAT)基因转录状况.方法用1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)腹腔注射C57BL小鼠,制作PD鼠模型,分10、18d两组;用相同体积生理盐水腹腔注射作为正常对照.以Dot-Blot方法检测小鼠中脑黑质部位DAT基因转录.结果与正常对照相比,MPTP组小鼠行为异常,中脑黑质部位TH(+)细胞减少,DATmRNA转录降低(P＜0.05).正常对照组中小脑部位DAT mRNA转录低于黑质部位(P＜0.05).结论多巴胺能神经元及其DAT mRNA转录量随PD的发生而减少或降低.DAT mRNA转录量可反映残存多巴胺神经元量或功能状况,反映PD的状况,高DAT mRNA转录的细胞对MPTP毒物敏感性增强.     

钙结合蛋白-D28K对脑内多巴胺能神经细胞的保护作用

目的研究钙结合蛋白-D28K(CaBP)对脑内多巴胺(DA)能神经细胞的保护作用。方法测定CalbindinD-28k转基因小鼠黑质致密部、腹侧被盖区、海马的CaBP和黑质致密部CaBP阳性细胞数,注射1-甲基-4苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP),建立帕金森病(PD)模型,通过模型鼠游泳、悬挂、移动能力等行为学指标以及黑质致密部酪氨酸羟化酶(TH)阳性细胞数来测定过表达CaBP抗MPTP对DA能神经细胞的损伤能力。结果转基因鼠黑质致密部、腹侧被盖区CaBP量显著高于正常鼠,海马、大脑皮层中CaBP量与正常组相比无明显差异。黑质致密部CaBP阳性细胞数显著高于正常小鼠[(140±9.89)个vs(101±7.82)个]。MPTP造模后,转基因鼠黑质致密部TH阳性细胞数和4项行为学变化差异不显著,而正常鼠造模后鼠黑质致密部TH阳性细胞数和4项行为学变化差异显著。结论过表达的CaBP对脑内DA神经细胞具有保护作用。     

JNK通路对亚急性帕金森病MPTP模型小鼠黑质COX-2表达的影响

目的:研究JNK在1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)所致小鼠帕金森病(PD)模型中对环氧合酶-2(COX-2)的表达调控作用,以探讨可能导致PD黑质多巴胺(DA)能神经元变性失活的机制. 方法:采用MPTP制备亚急性PD小鼠模型,观察模型小鼠行为学变化,观察PD模型小鼠黑质区酪氨酸羟化酶(TH),COX-2,磷酸化c-Jun的表达变化;观察给予JNK通路特异性抑制剂SP600125对上述变化的影响. 结果:与对照组小鼠相比,模型组小鼠出现典型PD症状,在MPTP第3次注射后6 h,黑质区COX-2阳性细胞显著增加,p-c-Jun特异性表达于黑质区细胞核内,在MPTP第5次注射后7 d,黑质区TH阳性神经元显著丢失65% (P＜0.01);经SP600125处理后,模型小鼠PD症状减轻,与对照组比较,在MPTP第5次注射后7 d,TH阳性细胞数仅下降约15%,与模型组比较,在MPTP第3次注射后6 h,黑质区COX-2阳性细胞明显减少(P＜0.01),黑质区p-c-Jun表达于细胞质内. 结论:JNK通路在亚急性PD MPTP模型早期对黑质COX-2表达中可能起重要调控作用;抑制JNK通路对PD小鼠具有神经保护作用.     

P38MAPK通路参与调控iNOS活化及其介导的帕金森病小鼠多巴胺能神经元丢失

目的研究1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶（MPTP）所致帕金森病（Parkinson＇s disease,PD）小鼠模型黑质内P38丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase,MAPK）信号转导通路对诱导型一氧化氯舍酶（inducible nitric oxide,iNOS）的表达调控作用,以探讨PD中脑黑质多巴胺能神经元变性丢失的可能机制。方法采用神经毒素MPTP制备PD小鼠模型,免疫组织化学法观察各组小鼠黑质酪氨酸羟化酶（TH）、磷酸化P38（p—P38）和诱导型一氧化氮合酶（iNOS）阳性神经元数量的改变。结果与对照组相比,模型组小鼠黑质致密带TH阳性神经元显著减少约60％（P〈0．01）,黑质区p—P38、iNOS阳性细胞均显著增高（P〈0．01）;与模型组比较,P38MAPK特异性抑制剂SB203580处理组黑质致密带TH阳性神经元细胞丢失明显减轻（28％vs．60％）（P〈0．01）;黑质区p-P38、iNOS阳性细胞均显著减少（P〈0．01）。结论iNOS表迭可能在中脑黑质DA能神经元变性岳失过程中起重要作用;P38信号通路可对中脑黑质细胞iNOS表达有重要的调控作用;P38通路抑制剂对MPTP所致帕金森病小鼠具有一定的神经保护作用。     

PD小鼠模型的多巴胺转运蛋白mRNA转录

目的 分析帕金森病（PD）小鼠模型中脑黑质多巴胺转运蛋白（DAT）基因转录状况。方法 用1－甲基－4－苯基－1,2,3,6－四氯吡啶（MPTP）腹腔注射C57BL小鼠,制作PD鼠模型,分10、18d两种;用相同体积生理盐水腹腔注射作为正常对照。以Dot-Blot方法检测小鼠中脑黑质部位DAT基因转录。结果 与正常对照相比,MPTP组小鼠行为异常,中脑黑质部位TH（＋）细胞减少,DATmRNA转录降低（P＜0．05）。正常对照组中小脑部位DATmRNA转录低于黑质部位（P＜0．05）。结论 多巴胺能神经元及其DAT mRNA转录量随PD的发生而减少或降低。DATmRNA转录量可反映残存多巴胺神经元量或功能状况,反映PD的状况,高DATmRNA转录的细胞对MPTP毒物敏感性增强。     

人参皂苷Rg1对帕金森病小鼠黑质中酪氨酸羟化酶及ephrinB2和磷酸化c-Jun表达的影响

目的观察人参皂苷Rg1对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)所致帕金森病(PD)模型小鼠黑质中酪氨酸羟化酶(TH)mRNA、ephrinB2和磷酸化c-Jun(p-c-Jun)蛋白表达的影响,探讨人参皂苷Rg1对PD的治疗作用及其可能机制。方法将27只C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组和人参皂苷Rg1组,每组9只。模型组和人参皂苷Rg1组小鼠腹腔注射MPTP构建PD模型。注射MPTP前,对照组和模型组小鼠腹腔注射生理盐水(1 mL·kg-1·d-1),人参皂苷Rg1组小鼠腹腔注射人参皂苷Rg1(10 mg·kg-1·d-1),连续3 d。通过爬杆实验观察小鼠行为学变化,2周后采用反转录聚合酶链反应检测小鼠黑质中TH mRNA的表达,免疫组织化学法检测小鼠黑质中ephrinB2及p-c-Jun蛋白的表达。结果不同时间点模型组小鼠的爬杆时间均显著长于对照组和人参皂苷Rg1组,差异均有统计学意义(P<0.05);模型组小鼠脑黑质中TH mRNA表达水平显著低于对照组和人参皂苷Rg1组,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01);模型组小鼠脑黑质中ephrinB2、p-c-Jun阳性表达细胞数显著高于对照组和人参皂苷Rg1组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 MPTP可能通过促进小鼠中脑黑质中ephrinB2、p-c-Jun的表达及诱导多巴胺能神经元细胞凋亡导致PD;人参皂苷Rg1可能通过降低小鼠中脑黑质中ephrinB2、p-c-Jun的表达并缓解多巴胺能神经元凋亡而改善PD症状。     

ERK1／2信号通路对亚急性帕金森病MPTP模型小鼠黑质COX-2，PGE2表达的影响

目的：研究ERK1/2信号通路对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶（MPTP）所致帕金森病（PD）小鼠模型中脑黑质环氧合酶-2（COX-2）和前列腺素E2（PGE2）的表达调控作用,探讨多巴胺（DA）能神经元变性失活的可能机制.方法：采用MPTP制备亚急性PD小鼠模型,应用免疫组织化学和免疫蛋白印记法观察小鼠黑质酪氨酸羟化酶（TH）,COX-2,PGE2以及磷酸化ERK1/2（p-ERK1/2）的表达变化;并观察给予ERK特异性抑制剂U0126对上述因子变化的影响.结果：模型组小鼠出现典型PD样症状,在MPTP第3次注射后1h,黑质区p-ERK1/2阳性细胞数明显增加,在MPTP第5次注射后24h,黑质区出现大量COX-2,PGE2阳性细胞,伴有约50%的TH阳性神经元丢失;给予ERK特异性抑制剂U0126后小鼠PD样症状减轻,p-ERK1/2,COX-2,PGE2阳性细胞数明显减少,MPTP第5次注射后24h,TH阳性细胞数较对照组仅下降25%.结论：ERK1/2通路可能参与调控COX-2及PGE2的表达而在PD发病过程中发挥重要作用,抑制ERK信号通路对帕金森病小鼠具有一定的神经保护作用.     

人参皂甙Rg1通过P38信号通路影响帕金森病MPTP模型小鼠黑质COX-2的表达

目的 研究P38信号通路在1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)所致小鼠帕金森病(PD)模型中对环氧合酶-2(COX-2)的表达调控作用,以探讨导致多巴胺(DA)能神经元变性失活的可能机制,以及人参皂甙Rg1对P38信号通路的影响和对多巴胺神经元的保护作用.方法 采用MPTP制备亚急性PD小鼠模型.用免疫组织化学和免疫蛋白印记法,观察小鼠黑质酪氨酸羟化酶(TH),COX-2,前列腺素E2(PGE2)以及磷酸化P38(p-P38)的表达变化;并观察给予人参皂甙Rg1对上述变化的影响.结果 与对照组小鼠相比,模型组小鼠出现典型PD症状,在MPTP第3次注射后6 h,黑质区p-P38,COX-2,PGE2阳性细胞显著增加(P＜0.01).在MPTP第5次注射后24 h,黑质区TH阳性神经元显著丢失60%(P＜0.01);经人参皂甙Rg1处理后,模型小鼠PD症状减轻,与模型组比较,在MPTP第3次注射后6 h,黑质区p-P38,COX-2,PGE2阳性细胞明显减少(P＜0.01),在MPTP第5次注射后24 h,TH阳性细胞数较对照组仅下降30%.结论 P38通路在亚急性PD模型早期对黑质COX-2表达可能起重要调控作用:人参皂甙Rg1可影响P38信号通路及COX-2的表达而对小鼠多巴胺神经元起到一定保护作用.     

丹参酮ⅡA对帕金森病模型小鼠多巴胺能神经元的保护作用及其机制

目的：探讨丹参酮ⅡA对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶（MPTP）诱发的帕金森病（PD）模型小鼠中脑黑质区多巴胺能神经元损伤的影响,阐明其对多巴胺能神经元的保护作用及其可能机制。 方法：将60只C57BL/6N小鼠随机分为对照组、PD模型组和丹参酮ⅡA组,每组20只。PD模型组和丹参酮ⅡA小鼠采用MPTP制备PD小鼠模型,丹参酮ⅡA组制备PD模型后腹腔注射丹参酮ⅡA,观察各组小鼠行为学表现,采用免疫组织化学、免疫蛋白印迹和免疫荧光双标法检测各组小鼠中脑黑质区酪氨酸羟化酶（TH）、整合素超家族成员Ⅰ型跨膜蛋白（cd11b）、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADPH）氧化酶、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）阳性细胞数和蛋白表达水平。 结果：与对照组比较,PD模型组小鼠出现典型的PD样症状;PD模型组小鼠中脑黑质区TH阳性神经元数和蛋白表达水平较对照组减少约45%和50%,cd11b、p47-phox和iNOS阳性细胞数和蛋白表达水平增加（P<0.01）。与PD模型组比较,丹参酮ⅡA组小鼠PD样症状减轻,黑质区TH阳性神经元数量和蛋白表达水平明显升高（P<0.01）,cd11b、p47-phox和iNOS阳性细胞数明显减少（P<0.01）,蛋白表达水平明显降低（P<0.01）。 结论：丹参酮ⅡA可在一定程度上阻抑MPTP诱导的PD模型小鼠中脑黑质区多巴胺能神经元的丢失,其神经保护作用机制可能与抑制小胶质细胞激活、NADPH氧化酶和iNOS表达有关。     

磷酸化c-Jun表达对亚急性帕金森病MPTP模型小鼠黑质COX-2表达的影响

目的 研究磷酸化c-Jun(p-c-Jun)在1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)所致亚急性帕金森病(PD)小鼠模型中对环氧合酶-2(COX-2)的表达调控作用,以探讨PD黑质多巴胺(DA)能神经元变性失活的可能机制.方法 采用MPTP制备亚急性PD小鼠模型.通过行为学观察,免疫组织化学SP法,免疫荧光双标记法和免疫蛋白印记法,观察模型小鼠行为学变化,观察PD模型小鼠黑质区酪氨酸羟化酶(TH)、COX-2和p-c-Jun免疫组织化学变化以及中脑黑质TH、COX-2和p-c-Jun表达水平的变化;观察给予JNK通路特异性剂SP-600125对上述变化的影响.结果 与对照组小鼠相比,模型组小鼠出现典型PD症状.黑质区TH阳性神经元下降约65%(P＜0.001),中脑黑质TH表达水平显著降低约75%;黑质区COX-2阳性细胞显著增加,中脑黑质COX-2表达水平明显升高;p-c-Jun特异性表达于黑质区细胞核内,p-c-Jun表达水平显著升高.免疫荧光双标记染色可见,COX-2和p-c-Jun共同表达于TH阳性细胞.抑制剂组,经SP600125处理后,模型小鼠PD症状减轻,与对照组比较,在MPTP第5次注射后七天,TH阳性细胞数和TH表达水平仅下降约15%和20%,与模型组比较,黑质区COX-2阳性细胞明显减少,中脑黑质COX-2表达水平明显降低,p-c-Jun仅表达于黑质区细胞的胞浆内,中脑黑质p-c-Jun表达水平明显下降.结论 p-c-Jun表达对亚急性帕金森病MPTP模型中脑黑质COX-2表达中可能起重要调控作用;抑制p-c-Jun表达对帕金森病小鼠可能具有一定的神经保护作用.     

帕金森病小鼠相关脑区内钙结合蛋白D28k mRNA的表达

目的　研究钙结合蛋白D28k(CaBP)在帕金森病（PD）发病机制中的作用.方法　将1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氢吡啶（MPTP）按30mg     

肌苷对帕金森病小鼠模型的神经保护作用

目的: 观察肌苷对MPTP致帕金森病(PD)小鼠模型的神经保护作用.方法: 用MPTP建立C57BL小鼠PD模型,在MPTP前给予肌苷,通过行为学检测(自主活动计数、Rotarod检测、游泳实验)、免疫组织化学和荧光分光光度法,观察肌苷对PD小鼠模型的行为学表现、黑质多巴胺(DA)神经元和纹状体酪氨酸羟化酶免疫反应阳性(TH-ir)神经纤维以及纹状体DA水平的影响.结果: 给予MPTP后,小鼠行为学计数降低,自主活动计数、Rotarod检测、游泳实验分别降低约45%、43%和22%,黑质DA神经元数目减少约58%,纹状体TH-ir神经纤维密度减低,纹状体DA水平明显降低约88%,提前给予肌苷后降低程度减轻,自主活动计数、Rotarod检测、游泳实验降低程度分别约为5%、11%和12%,黑质DA神经元数目减少约43%,纹状体DA水平降低约71%,两组相比有显著性差异(P＜0.01).结论: 肌苷对MPTP所致的C57BL小鼠的神经损伤具有保护作用.     

Experimental research on 1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine-induced parkinsonian animal models in the rhesus monkey and C57 black mouse

Parkinson's disease (PD) is a common neurodegenerative disease of old age characterized by triad of akinesia, rigidity and tremor, reduction of dopamine (DA) content in the nigrostriatum, and severe degeneration of neuron in the substantia nigra. The significant changes after the use of 1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine (MPTP) to rhesus monkeys and C57 black mice are (a) serotonin-like reactions and Parkinsonian symptoms in monkeys and "stickclimbing" disturbance in mice; (b) marked DA reduction in substantia nigra (72.5%), putamen (93.3%), caudate nucleus (91.2%) of monkeys and striatum (94%) of mice; (c) reduction of Met-enkephalin (75%) and Leu-enkephalin (66%) in mouse striatum; and (d) severe degeneration of neurons in the substantia nigra of monkeys and mice. The results suggest that MPTP-treated monkey and C57 black mouse provides useful Parkinsonian animal models and produces behavioral, biochemical and histopathological changes similar to those of human PD.     

α-Synuclein与帕金森病临床前期动物模型研究

用 1 甲基 4 苯基 1 ,2 ,3 ,6 四氢吡啶 (MPTP)小剂量慢性给药建立帕金森病临床前期动物模型 ,观察小鼠脑组织形态学、生物化学及行为学方面的变化 ,同时对实验组小鼠黑质内α 突触核蛋白 (α synuclein ,NACP)阳性细胞数与纹状体内的突触数量进行动态变化的研究 ,探讨NACP与突触损伤之间的关系。C5 7BL/ 6j小鼠 60只 ,根据给药时间长短分为 5、1 0、1 5、2 0d 4组 ,腹腔注射MPTP〔4mg/ (kg·d)〕 ,正常对照组注射生理盐水。最后一次给药后 7d进行脑组织取材 ,分别进行NACP免疫组化染色、黑质纹状体形态学观察及纹状体内多巴胺含量的检测。发现 :1 )黑质内NACP免疫组化阳性细胞数在 5d组为最高峰 ,随后各组逐渐减少。 2 )电镜下黑质内除见固缩的神经细胞外 ,其他的神经元也有超微病理改变如线粒体肿胀、粗面内质网减少等。 3 )各给药组小鼠纹状体内的多巴胺含量与正常对照组相比均有明显下降 (P <0 .0 1 ) ,各给药组之间无明显差异 (P >0 .0 5 )。实验结果证实 :1 )低剂量MPTP慢性给药小鼠虽不能诱导出帕金森病的症状 ,但免疫组化、多巴胺含量测定及超微病理出现的改变可以作为帕金森病临床前期动物模型的参考指标。 2 )在MPTP慢性给药小鼠的早期阶段 ,黑质内神经细胞损伤时NACP表达水平增高可能是神?     

Study of apoptosis pattern of dopaminergic neurons and neuroprotective effect of nicotine in MPTP mouse model

Objective：To investigate the apoptosis of dopaminergic neurons and the protective effect of nicotine in 1-methyl-4-phenyl- 1, 2,3,6-tetrahydropyridine （MPTP）-induced mouse model of Parkinson＇s disease. Methods：The mouse model of Parkinson＇s disease were formed by MPTP （30 mg/kg/d×7, i.p. ）; and the loss and apoptosis of dopaminergic neurons was observed by Tyrosine Hydroxylase（TH） and TUNEL stains.In ＂Nicotime plus MPTP＂ group, mice were pretreated with nicotine before MPTP injection. The putative protective effect of nicotine was analyzed. Results：The number of TH-positive cells decreased during MPTP treatment. Apoptotic neurons began to appear after three injections of MPTP and peaked on the 8th day. In the MPTP-intoxicated mice treated with nicotine, the loss of TH-positive cells was significantly less than that of MPTP- treated group （30 mg/kg/d×7）（P 〈 0.05）. Conclusion：The chronic treatment of MPTP can induce the apoptosis of dopaminergic neurons in substantia nigra, and nicotine might have a neuroprotecitve effect on dopaminergic neurons against MPTP toxicity.     

JNK通路可能介导MPTP诱导的黑质神经元凋亡

目的 探讨氧化应激激活的c-jun NH2-terminal kinase(JNK)细胞凋亡通路在1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氢吡啶(MPTP)诱导帕金森病(PD)小鼠黑质神经元凋亡中的可能作用。方法 采用MPTP制备PD小鼠模型，应用生化技术检测黑质区域谷胱甘肽(GSH)浓度及超氧化物歧化酶(SOD)活力，尼氏体染色和酪氨酸羟化酶(TH)免疫组织化学染色观察黑质神经元的损害情况，原位缺口末端标记(TUNEL)染色和活化型Caspase 3免疫组织化学染色观察黑质神经元的凋亡情况，同时采用蛋白兔疫印迹法检测磷酸化JNK及磷酸化c-jun蛋白表达水平。结果 MPTP诱导的PD小鼠黑质区域GSH浓度明显降低，SOD活力明显升高，黑质致密带尼氏体阳性神经元和TH阳性神经元显著脱失，磷酸化JNK及磷酸化c-jun蛋白表达水平上升，同时活化型Caspase 3表达阳性细胞增多，黑质神经元TUNEL染色的阳性率增高。结论 MPTP可诱导小鼠黑质神经元凋亡，机制与增强氧化应激并激活JNK细胞凋亡通路有关。