外周血胸苷酸合成酶mRNA和二氢嘧啶脱氢酶mRNA临床价值探讨

目的探讨外周血胸苷酸合成酶（TS）mRNA和二氢嘧啶脱氢酶（DPD）mRNA检测的临床价值。方法用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测47例肿瘤患者和32例对照患者TS mRNA和DPD mRNA的表达,并作统计学分析。结果肿瘤组TS mRNA和DPD mRNA的表达率分别为27．7％和23．4％,对照组为9．38％和0．00％,肿瘤组高于对照组（P〈0．05）。TS mRNA和DPD mRNA的表达水平与肿瘤的大小、有无淋巴结转移、组织学分级和临床分期均无相关性。结论用RT—PCR检测外周血TS mRNA和DPD mRNA,操作简便,可反复采样检测,便于临床追踪。     

外周血胸苷酸合成酶mRNA和二氢嘧啶脱氢酶mRNA临床价值探讨

目的探讨外周血胸苷酸合成酶(TS)mRNA和二氢嘧啶脱氢酶(DPD)mRNA检测的临床价值。方法用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测47例肿瘤患者和32例对照患者TS mRNA和DPD mRNA的表达,并作统计学分析。结果肿瘤组TS mRNA和DPD mRNA的表达率分别为27.7%和23.4%,对照组为9.38%和0.00%,肿瘤组高于对照组(P<0.05)。TS mRNA和DPD mRNA的表达水平与肿瘤的大小、有无淋巴结转移、组织学分级和临床分期均无相关性。结论用RT-PCR检测外周血TS mRNA和DPD mRNA,操作简便,可反复采样检测,便于临床追踪。     

胸苷酸合成酶在大肠癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨结直肠癌患者胸苷磷酸化酶(TS)表达水平与5-FU疗效及临床病理的相关性。方法对58例结直肠癌患者,采用免疫组织化学方法检测癌组织和正常结直肠粘膜组织中的TS表达。评价患者TS表达情况与5-FU化疗疗效、临床病理因素之间的相关性。结果 TS免疫组化结果为癌组织中TS表达明显高于正常结直肠粘膜组织,分别为55%(32/58)和14%(8/58).肿瘤进展时间(TTP)TS(-)者明显优于TS(+)者,分别为(6.5±1.9个月)和(3.8±1.2个月),具有统计学意义(P0.05)。结论 TS检测对预测5-FU化疗疗效、判断预后有一定的指导意义,为结直肠癌的个体化治疗提供了理论依据。     

252例结直肠癌患者胸苷酸合成酶基因多态性分析

目的：分析结直肠癌患者脑苷酸合成酶（TS）基因多态性,以期能为结直肠癌的个体化治疗提供指导。方法采用PCR 测序的方法分析252例结直肠癌患者 TS 基因多态性。结果共检测了252例结直肠癌患者,其中男137例、女115例。男性患者 TS 基因型主要为3RG／3RC（36．50％）,其次是2RC／3RC 和3RG／3RG（各占18．25％）。女性患者基因型也主要是3RG／3RC（36．52％）,其 次 是3RG／3RG （26．09％）。28例年轻患者中,基 因 型 主 要 为3RG／3RC （42．86％）,其 次 是2RC／3RG （21．43％）;84例中年患者中,基因型主要为3RG／3RC（45．24％）,其次是2RC／3RC（16．67％）;115例老年患者中,基因型主要为3RG／3RC（36．52％）,其次是2RC／3RG（16．52％）。结论结直肠癌患者 TS 基因多态性检测中发现的主要基因型为3RG／3RC。     

胃癌中胸苷磷酸化酶和二氢嘧啶脱氢酶含量及其比值的测定

目的 测定胃癌肿瘤组织及癌旁正常组织中胸苷磷酸化酶（TP）和二氢嘧啶脱氢酶（DPD）的含量,并计算两者的比值,为希罗达在胃癌的应用提供理论依据并探讨其临床意义。方法 收集2001年经手术切除的胃癌手术标本45例,分别取肿瘤组织及距肿瘤3cm正常组织各300mg,应用ELISA方法测定两者TP和DPD的含量,并计算TP／DPD比值。结果 肿瘤组织中TP含量（中位值1419．60ng／ml）明显高于癌旁正常组织（265．00ng／ml）,两者含量差异有统计学意义（Z=5．819,P=0．000）;肿瘤组织DPD含量（148,86ng／ml）与癌旁正常组织（142．06ng／m1）比较差异无统计学意义（Z=0．491,P=0．623）;肿瘤组织与癌旁正常组织TP／DPD比值分别为5,89和2．09,差异有统计学意义（Z=3．403,P=0.001）。结论 胃癌组织较正常组织存在更高水平的TP和TP／DPD比值,联合检测TP和DPD可能较单一TP检测更具临床意义。     

胸苷磷酸化酶在大肠癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨结直肠癌患者胸苷磷酸化酶（TP）表达水平与5-FU疗效及临床病理因素的相关性。方法．对58例结直肠癌患者,采用免疫组织化学方法检测癌组织和正常结直肠粘膜组织中的TP表达。评价患者TP表达情况与5-FU化疗疗效、临床病理因素之间的相关性。结果结直肠癌组织的什表达水平明显高于正常粘膜组织,分别为67％（39／58）和16％（9／58）．TP（＋）者与TP（-）者肿瘤进展时间（TP）分别为（8．9±1．42个月）和（6．1±1．1个月）[P〈0．05];结论TP表达对预测5-FU化疗疗效、判断结直肠癌预后有一定的指导意义。     

胃癌组织胸苷酸合成酶与5-Fu药敏关系

目的探讨胃癌组织胸苷酸合成酶（TS）表达水平与5-氟尿嘧啶（5-Fu）耐药性的关系。方法用ATP—TCA法对35例胃癌患者新鲜标本进行5-Fu体外药敏检测；免疫组化法检测其TS表达水平，比较分析不同TS表达水平与体外药敏有效率的关系。结果TS高表达组有效率18．8％（3／16）；TS低表达组有效率52．9％（9／17）。TS高、低表达组对5-Fu敏感性差异有统计学意义（P〈O．05）。结论胃癌组织TS表达水平与5-Fu敏感性可能有关，TS的表达水平检测可能有助于预测胃癌组织对5-Fu的敏感性。     

实时RT-PCR检测二氢嘧啶脱氢酶mRNA的表达

目的　建立实时逆转录聚合酶链反应(RT PCR)检测二氢嘧啶脱氢酶mRNA的定量方法,并分别从 RNA水平与蛋白质水平检测二氢嘧啶脱氢酶在人体部分组织中的表达。方法　采用基于TaqMan探针技术的 实时RT PCR方法检测二氢嘧啶脱氢酶mRNA的表达,用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测其蛋白质表达水 平。结果　实时RT PCR检测二氢嘧啶脱氢酶的线性范围可达102～109拷贝数/μl,批内误差<5%。结论　这 一实时RT PCR的方法可以从纳克级的总RNA中检出二氢嘧啶脱氢酶的表达,并且ELISA结果与实时RT PCR 结果有较好的相关性。     

实时RT-PCR检测二氢嘧啶脱氢酶mRNA的表达

目的建立实时逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测二氢嘧啶脱氢酶mRNA的定量方法,并分别从RNA水平与蛋白质水平检测二氢嘧啶脱氢酶在人体部分组织中的表达.方法采用基于TaqMan探针技术的实时RT-PCR方法检测二氢嘧啶脱氢酶mRNA的表达,用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测其蛋白质表达水平.结果实时RT-PCR检测二氢嘧啶脱氢酶的线性范围可达102～109拷贝数/μl,批内误差＜5%.结论这一实时RT-PCR的方法可以从纳克级的总RNA中检出二氢嘧啶脱氢酶的表达,并且ELISA结果与实时RT-PCR 结果有较好的相关性.     

胸苷酸合成酶在膀胱尿路上皮癌中的表达及预后价值

目的 探讨胸苷酸合成酶(TS)在膀胱尿路上皮癌(BUC)的表达情况及临床意义,评价TS预后价值,为肿瘤预后判断及治疗方案的选择提供帮助.方法 采用免疫组织化学染色(SP法)的方法检测54例BUC组织及15例正常膀胱组织的TS表达,通过回顾性随访,了解患者术后情况.以TS表达水平、临床病理变量及两个预后变量[无复发生存率(RFS)和总生存率(OS)]作为研究对象,探讨它们之间的关系,绘制生存曲线,进行Cox回归分析.结果 54例肿瘤标本中TS高表达率为46.30%(25/54),其中G1级为29.41%(5/17),G2级为46.43%(13/28),G3级为77.78%(7/9);Ta期为21.43%(3/14),T1期为26.32%(5/19),T2期为86.67%(13/15),T3期为66.67%(2/3),T4期为66.67%(2/3);TS表达水平与肿瘤分级、分期呈正相关(Kruskal-Wallis H,P=0.03,P＜0.001).TS高表达患者术后复发率、病死率分别为60.00%(15/25)和44.00%(11/25),经生存分析和Cox回归分析,肿瘤的TS表达水平是术后复发(RR为2.65,95%CI 0.80～8.81,P＜0.05)、死亡(RR为1.42,95%CI0.36～5.58,P＜0.05)的独立预后因素.结论 随着TS表达水平升高,BUC发生恶性进展和复发的概率增加,测定其表达水平有助于选择恰当的治疗和随访方案.

Abstract：

Objective To investigate the expression of thymidylate synthase (TS) in bladder urothelial carcinoma(BUC) and its clinical significance, and to evaluate its prognostic value, thus to help predict the prognosis and choose therapy protocal. Methods The expression of TS was assessed by immunohistochemistry in 54 BUC and 15 normal bladder specimens, and all these clinical data were retrospectively analyzed after surgery. Expression of TS,clinicopathologic findings and two prognostic variances (relapse-free survival (RFS) and overall survival (OS)) were determined. The prognostic value of TS was estimated by survival curve and Cox proportional hazards model. Results Immunohistochemistry showed that 25 of 54 BUC cases (46. 30%) had high TS expression. In these cases,there was 29. 41%o (5/17) for G1 ,46. 43% (13/28) for G2,77. 78% (7/9) for G3 ;21.43% (3/14) for Ta, 26. 32% (5/19) for T1, 86. 67% ( 13/15 ) for T2,66.67% (2/3) for T3,66.67% (2/3) for T4. Expression of TS was positively associated with the grade and stage of carcinorma ( Kruskal - Wallis H, P = 0. 0 3 and P ＜ 0. 0 0 1 ). The recurrence and case - fatality of patients with high TS expression was 60. 00% (15/25) and 44. 00% (11/25) ,respectively. The survival analysis and Cox regression analysis showed that expression of TS were independent predictor for recurrence ( RR = 2. 65,95% CI was 0.80～8.81,P＜0.05) anddeath (RR=1.42,95%CIwas0. 36～5.58,P＜0. 05). Conclusions The probability of BUC progress and recurrence increases with the increasing of TS expression. Detection of TS expressing level can contribute to select appropriate treatment and follow-up schema.     

TS在直肠癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨胸苷酸合成酶（TS）在直肠癌组织中的表达及其临床意义。方法用免疫组化SP法检测48例结肠直肠癌组织中TS的表达,用Kap lan-Meier法分析鸭的表达与临床病理特征和预后的相关性。用多因素COX模型分析影响患者预后的相关因素。结果TS在癌组织中阳性表达率高于正常组织和癌旁组织;中晚期阳性表达率高于早期病例;低分中阳性表达率高于高分化组织;2年复发组中阳性表达率高于非复发组（P〈0．05）。多因素分析显示TS是影响预后的重要因素。结论TS可以作为判断直肠癌恶性程度、对5-Fu耐药情况以及预测预后的重要参考指标。     

抑癌基因PTEN在结直肠癌组织中的表达及临床意义

目的　探讨抑癌基因PTEN在结直肠癌发生、发展中的作用及其与临床病理特征的相关性。方法　采用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白 过氧化酶法 (S P法 ) ,检测 6 0例结直肠癌组织中PTEN蛋白表达。结果　结直肠癌组织中 ,PTEN蛋白表达阳性率为 2 5 0 0 % (15 /6 0 ) ,与肿瘤分化程度呈正相关 (r =0 86 9,P <0 0 5 ) ,与TNM分期、淋巴结转移和肝转移呈负相关 (r=- 0 791,r=- 0 74 1,r=- 0 6 34,P <0 0 5 )。结论　抑癌基因PTEN参与结直肠癌的发生发展过程 ;PTEN基因与结直肠癌临床病理特征具有明显相关性 ,有望成为结直肠癌的诊断和预后判断的标记物。     

癌基因C-myc在结直肠癌组织中的表达及临床意义

目的探讨结直肠癌组织中癌基因C-myc在结直肠癌发生、发展中的作用及其与临床病理特征的相关性。方法采用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶法(S-P法),检测60例结直肠癌组织、10例癌旁组织及8例正常结直肠黏膜中C-myc蛋白表达。结果结肠癌组织中,C-myc蛋白表达阳性率为76.7%(46/60),显著高于正常及邻近结直肠组织(P<0.01);C-myc的过度表达与结直肠癌肝转移呈正相关关系(r=5.540,P<0.05),与TNM分期无相关性(r=0.013,P>0.05)。结论癌基因C-myc在结直肠癌的发生、发展过程中起重要作用,C-myc蛋白过度表达不能代表结直肠癌的肿瘤状态,不能作为判断病人预后的单独指标。     

凋亡相关基因PDCD5在结肠癌组织中表达的意义

研究凋亡相关基因——程序化死亡基因5（PDCD5）在结肠癌组织的表达情况及其与临床病理特征之间的关系,探讨PDCD5在结肠癌发生、发展过程中的作用和意义。方法应用免疫组织化学S-P法检测50例手术切除结肠癌组织、癌旁组织及20例正常肠黏膜中的PDCD5蛋白的表达情况。结果结肠癌组织中PDCD5蛋白表达率为24．O％,癌旁组织中表达率为52．0％,正常肠黏膜组织表达率90．0％。结肠癌组织中PDCD5蛋白表达与结肠癌的分化程度及是否伴有淋巴结转移密切相关,与患者的年龄、性别、浸润程度、临床分期无关（P〉0．05）。随分化程度的降低,PDCD5蛋白表达率降低;高分化组表达率高于低／未分化组（P〈0．01）,中分化组高于低／未分化组（P〈0．05）,但高分化与中分化组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。有淋巴结转移者PDCD5蛋白表达率（19．4％）低于无淋巴结转移者（64．3％）,二者差异有统计学意义（P〈0．01）。结论与正常肠组织相比。PD-CD5蛋白在结肠癌组织中表达率降低。结肠癌组织中PDCD5蛋白表达与结肠癌的分化程度及是否伴有淋巴结转移密切相关。     

A new quantitative RT-PCR assay for thymidylate synthase mRNA in blood leukocytes applied to cancer patients and healthy controls

Thymidylate synthase (TS) is the target enzyme for 5-fluorouracil (5-FU). TS mRNA and protein levels in colorectal tumours are among the most important determinants for tumour response to 5-FU. TS mRNA levels in blood leukocytes may give information on pharmacokinetic and pharmacodynamic actions of 5-FU on TS as it has previously been shown that inhibition of TS levels by 5-FU in bone marrow leukocytes resembles the degree of TS inhibition in colorectal tumours. The aim of this study was to develop a quantitative high-throughput RT–PCR assay for TS mRNA expression in blood leukocytes (CURT–PCR). Furthermore the TS mRNA levels in blood of patients with colorectal cancer and healthy controls was compared. TS mRNA levels in 17 patients with colorectal cancer did not differ from 20 matched controls whereas a group of 14 younger controls had significantly lower TS mRNA expression than patients and matched controls. In order to investigate the sensitivity of the assay towards cellular reactions such as proliferative stimuli, isolated blood leukocytes were stimulated with phytohemagglutinin both in mitogenic and non-mitogenic concentrations and an induction of TS mRNA expression was measured in both cases. TS activity and cellular proliferation also increased but only at mitogenic concentrations, suggesting that TS mRNA expression is an early leukocyte activation marker. This new CURT–PCR assay may allow improved studies of functional kinetics of drugs with impact upon TS. Further studies are required to establish the possible clinical benefit of TS mRNA measurements in blood leukocytes.     

Pyrimidine nucleoside phosphorylase and dihydropyrimidine dehydrogenase indicate chemosensitivity of human colon cancer specimens to doxifluridine and 5-fluorouracil, respectively

We have assessed pyrimidine nucleoside phosphorylase (PyNPase) and dihydropyrimidine dehydrogenase (DPD) activity to compare the chemosensitivity of 5-fluorouracil (5-FU) and doxifluridine (5′-DFUR). Tumor samples were prepared from fresh surgical specimens of 28 patients with advanced colon carcinoma. The activity levels of the two enzymes were assessed as indicators of chemosensitivity to 5′-DFUR and 5-FU. PyNPase activity was analyzed using the HPLC method, and DPD activity was assessed according to the methods of Naguib et al. (1985). A histoculture drug response assay (HDRA) was conducted according to the methods described by Furukawa et al. (1992). The mean and standard deviation of PyNPase activity in the tumor tissue was 110 ± 48.6 μg 5-FU/mg protein/h, which was statistically higher than the corresponding value obtained in normal tissue (60 ± 43.1 μg 5-FU/mg protein/h) (P < 0.005). When chemosensitivity to the two drug forms was compared in 16 samples obtained from 16 cases with colon cancer, 1 specimen was sensitive to both drug forms, 3 specimens were exclusively sensitive to 5′-DFUR, 5 specimens were exclusively sensitive to 5-FU, and the other 7 specimens were insensitive to both drugs, without significance. High PyNPase activity was associated with a high chemosensitivity to 5′-DFUR, and high DPD activity correlated with a low chemosensitivity to 5-FU. However, the converse relationship was not found. We suggest that the activity of PyNPase and DPD represents a reliable indicator for the chemosensitivity of colon cancer to 5′-DFUR and 5-FU, respectively. Received: March 5, 1999 / Accepted: June 3, 1999     

外周血TSmRNA和DPDmRNA临床应用价值探讨

目的探讨胸苷酸合成酶（thymidylate synthase，TS）mRNA和二氢嘧啶脱氢酶（dihydropvimidine dehydrogenase，DPD）mRNA在癌组织和外周血中的表达及其相互关系。方法采用RT-PCR检测36例消化道肿瘤及外周血中TSrnRNA和DPDmRNA的表达水平，同时检测32例对照组的外周血表达水平。各指标之间相关因素的差异性比较采用χ^2检验，相关性研究采用Bivariate相关分析。结果在癌组织中TSmRNA检出52．8％（19／36），DPDmRNA检出44．4％（16／36），高于外周血的检出率30．5％和25．0％，但差异无统计学意义（P〉0．05）。肿瘤组织TSmRNA、DPDmRNA和外周血的表达结果呈正相关，r值分别为0．627和0．645，在外周血中肿瘤组的表达高于对照组（P〈0．01）。肿瘤组织中TSmRNA、DPDmRNA表达水平与细胞分化类型无关，P〉0．05。而与TNM分期有关，Ⅲ-Ⅳ期表达水平高于Ⅰ-Ⅱ期表达水平，P〈0．05。结论外周血和肿瘤组织中的TSmRNA和DPDmRNA呈正相关，用RT-PCR方法检测外周血TSmRNA和DPDmRNA，有助于临床对肿瘤的分期判断和用药的选择。     

大肠癌发生发展中cyclinD_1和P_(16)的表达及意义

目的 探讨cyclinD1和P16在大肠癌癌变过程中的表达和意义。方法 应用免疫组化染色法检测大肠癌手术切缘粘膜上皮、癌旁组织、大肠腺瘤及大肠癌中cyclinD1和P16的表达。结果 cyclinD1表达在大肠癌发生发展中呈增高趋势,P16表达呈下降趋势,二者在癌旁、腺瘤和癌组织中的表达与手术切缘粘膜上皮相比均有显著性差异(P<0.01或0.05),cyclinD1和P16的表达与癌的淋巴结转移密切相关(P<0.05),cyclnD1还与癌浸润深度有关(P<0.05)。结论cyclinD1和P16在大肠癌癌变过程中起重要作用,并有促进肿瘤转移的效应,可作为大肠癌早期诊断和判断预后的重要分子指标。