酶斑点杂交法与双抗体夹心法检测汉坦病毒感染的比较

目的将酶标抗汉坦病毒NP抗原单链抗体应用于酶斑点杂交法和双抗体夹心法,检测汉坦病毒感染,探索价格低廉早期HFRS诊断试剂。方法以戊二醛偶联辣根过氧化物酶和抗汉坦病毒NP抗原单链抗体,制备酶标单链抗体,并应用于酶斑点杂交法和双抗体夹心法中,检测56份早期HFRS患者血清及66份阴性对照血清。结果56份HFRS患者血清中,双抗体夹心法检测出29例阳性,阳性率为51.79%,酶斑点杂交法检测出28例阳性,阳性率为50.00%,两方法检测66例阴性对照血清,结果均为阴性。统计学处理,两方法差异不显著。结论以酶标抗汉坦病毒NP抗原单链抗体制备的酶斑点杂交和双抗体夹心诊断试剂,均为稳定性好、假阳性率低、造价低廉、诊断可靠的诊断试剂。     

应用快速免疫层析法检测恙虫病特异性IgM、IgG及总抗体

目的　建立快速免疫层析法检测恙虫病特异性IgM、IgG及总抗体 ,并对其敏感性和特异性进行评价。 方法　以胶体金标记纯化的基因工程重组抗原 ,在玻璃纤维上预包被金标记的纯化抗原 (Au -Ag)和鼠IgG ,在硝酸纤维素膜上检测线处包被羊抗人 μ链、羊抗人IgG或重组抗原 ;在对照线处包被羊抗鼠IgG ,组装成检测试纸。在试纸条的玻璃纤维上加待检血清 ,再滴加 2滴反应液。观察金标抗原释放后NC膜上检测线和对照线的反应情况 ,检测线和对照线同时出现红色条带判为阳性 ,仅对照线出现红色条带判为阴性 ,对照线未出现条带为无效试验。结果　间接免疫荧光法IFA检测IgG和金标免疫层析法检测IgM、IgG、总抗体的敏感性分别为 88 1% ,92 3% ,90 9%和 98 6 % ;特异性分别为 96 0 % ,94 7% ,94 7%和93 3%。结论　金标免疫层析法可替代传统方法用于检测恙虫病东方体特异性抗体。     

滴金免疫法快速检测流行性乙型脑炎血清特异性IgM

目的建立滴金免疫法检测流行性乙型脑炎患者血清特异性IgM的方法。方法将乙脑病毒的特异性抗原点于硝酸纤维素薄膜上，用来捕获血清和脑普液标本中的特异性IgM抗体，通过胶体金标记的抗人μ链单克隆抗体结合物来直接显色，阳性者出现红色斑点。结果用本方法与2一流基乙醇耐性试验对比检测血清标本50份和脑脊液标本45份，两法的总符合率分别为98.0％和95.6％。结论本方法简便、快速，适于向基层推广，对乙脑的早期诊断有重要的临床意义。     

免疫-PCR检测肾综合征出血热患者血清中抗核衣壳蛋白抗体方法的建立

目的　建立高灵敏性和高特异性的免疫 -PCR方法检测肾综合征出血热 (HFRS)患者血清中抗核衣壳蛋白抗体。方法　用汉坦病毒 ( 76 - 118株 )重组核衣壳蛋白为抗原包被聚苯乙烯微滴度板 ,与经ELISA法和临床均已确诊为HFRS患者的血清进行抗原抗体特异性反应 ,以链霉亲和素为桥梁将生物素标记的抗体与生物素标记的DNA指示分子相连 ,PCR扩增DNA指示分子 ,通过检测指示分子DNA来反映肾综合征出血热患者血清中抗核衣壳蛋白抗体的水平 ,并与传统的ELISA法进行比较。结果　免疫 -PCR检测肾综合征出血热患者血清中抗核衣壳蛋白抗体的敏感性是ELISA法的 2 5 0 0 0倍 ;30例HFRS阳性患者血清免疫 -PCR检测均为阳性 ,2 0例甲型肝炎阳性血清和 2 0例正常人血清免疫 -PCR检测均为阴性。结论　免疫 -PCR方法敏感性高 ,特异性强 ,有可能作为一种高敏感性的检测方法用于HFRS的临床辅助诊断     

两种抗原检测弓形虫病IgM的效果

目的观察弓形虫P30重组抗原及可溶性抗原检测弓形虫病IgM的效果。方法建立斑点免疫金渗滤法（DIGFA）。采用2种抗原分别包被在两条硝酸纤维素膜（NC）上,与待检血清中的相应IgM抗体结合,通过金标记兔抗人IgM直接显色,以检测弓形虫病IgM。2种抗原的DIGFA分别检测弓形虫IgM抗体阳性、类风湿、支原体肺炎、血吸虫病人和正常人血清。结果两种抗原建立的DIGFA检测试剂共检测5种血清样本166份,其中弓形虫感染IgM抗体阳性病人血清38份,弓形虫P30DIGFA敏感性为92.1%（35/38）,可溶性抗原DIGFA敏感性为81.6%（31/38）,差异无统计学意义（P〉0.05）。正常人群对照血清63份,检测全部阴性,特异性为100%。检测类风湿病人血清30份、血吸虫病人血清25份及支原体肺炎病人血清10份,仅类风湿病人血清出现阳性交叉反应,其中弓形虫P30DIGFA阳性2例,可溶性抗原DIGFA阳性3例。结论弓形虫P30重组抗原检测弓形虫病人血清IgM的DIGFA试剂可用于临床早期或急性期弓形虫病的诊断。     

应用捕获ELISA检测肾综合征出血热患者尿液中特异性IgM抗体

目的检测肾综合征出血热患者尿液中特异性IgM抗体,研究早期诊断方法.方法用MacELISA法检测不同病日HFRS病人尿液中特异性IgM抗体.结果HFRS病人尿夜中特异性IgM抗体总阳性率为76.47%,第3病日即可出现阳性,7-9病日阳性率可达83.87%,与同期HFRS病人血清抗体检测对比无显著性差异(P＞0.05).结论用MacELISA检测HFRS尿液中特异性IgM抗体敏感性高,特异性强,适合早期诊断.     

应用捕获ELISA检测肾综合征出血热患者尿液中特异性IgM抗体

目的 检测紧综合征出血热患者尿液中特异性IgM抗体,研究早期诊断方法。方法：用MacELISA法检测不同病日HFRS病人尿液中特异性IgM抗体。结果：HFRS病人尿夜中特异性IgM抗体总阳性率为76.47%,第3病日即可出现阳性,7－9病日阳性率可达83.87%,与同期HFRS病人血清抗体检测对比无显著性差异（P＞0.05）。结论：用MacELISA检测HFRS尿液中特异性IgM抗体敏感性高,特异性强,适合早期诊断。     

应用斑点免疫金渗滤法检测旋毛虫病患者血清IgG

目的　研究应用斑点免疫金渗滤法(DIGFA)快速检测旋毛虫病患者血清抗旋毛虫IgG抗体。　方法　采用旋毛虫肌肉期幼虫膜抗原,以胶体金颗粒结合的羊抗人IgG为标记抗体,以颜色深浅为判断阳性标准。　结果　纯化的旋毛虫肌肉期幼虫膜抗原与患者血清中特异性抗旋毛虫IgG抗体通过渗滤在硝酸纤维素膜上反应,10min内即可直接观察结果。在76份患者血清的检测中,阳性率为94.74%,与ELISA法的检出阳性率86.84%相比差异无显著性(χ2=2.83,P>0.05)。交叉试验与重复试验结果显示DIGFA具有较好的特异性及稳定性。　结论　DIGFA法可快速检测旋毛虫病患者血清特异性旋毛虫IgG抗体     

福建省鼠间肾综合征出血热流行病学调查

目的掌握福建省鼠间肾综合征出血热(HFRS)流行情况和疫源地分布,为控制HFRS的流行提供参考。方法根据福建省啮齿动物地理区划以及肾综合征出血热病例分布状况,选择18个县、市作为调查地区,用笼夜法捕鼠采集血清标本,用双抗原夹心ELISA法检测血清中抗汉坦病毒(Hantan virus,HV)抗体,分析鼠间HFRS流行情况。结果各个地区HV宿主动物种类分布不均衡,但以褐家鼠为主要宿主动物,其次为黄胸鼠,野外鼠密度较低。褐家鼠抗体阳性率最高,达到9.89%。各个地理区划中II区即闽东山地抗体阳性率最高,为9.32%,而III区即闽中、闽西南山地抗体阳性率最低,为2.74%。调查点中泰宁、周宁、福鼎、厦门、福清、莆田、平潭等地鼠血清HV抗体阳性率均超过10%。而上杭、漳平、漳浦、安溪等地鼠血清均未检出HV抗体。结论福建省HFRS的疫源地以家鼠型疫区为主,降低家鼠尤其是褐家鼠密度,可控制本病在福建的扩大流行。     

检测鼠疫抗体胶体金免疫层析试纸条的研制

目的建立快速、简易的检测鼠疫F1抗体的胶体金免疫层析法(G ICA)。方法(1)采用胶体金颗粒标记纯化F1抗原,并将标记物喷于玻璃纤维;同时将纯化F1抗原喷线固定于硝酸纤维素膜上,用于F1抗体的捕捉;按常规组装成检测鼠疫抗体免疫层析试纸条。(2)采用该试纸条与血凝法对同一份兔抗F1抗体进行检测,以评价该试纸条的敏感性。(3)采用该试纸条对44株非鼠疫菌的免疫鼠血清进行检测,以评价该试纸条的特异性。(4)采用该试纸条、血凝法及ELISA对607份血清标本进行检测,以评价该试纸条对现场材料的检测效果。结果(1)该试纸条可在15 m in之内完成检测;(2)在敏感性上,该试纸条对同一份免疫兔血清的检测较血凝法高一个滴度;(3)对被试的44株所选菌株的免疫鼠血清的检测均为阴性;(4)在对607份血清标本的检测中,免疫层析试纸条、血凝及ELISA三种方法的符合率中度,而免疫层析试纸条的敏感性分别比血凝与ELISA高111%和90%。结论以纯化的鼠疫F1抗原为基础建立的G ICA检测鼠疫F1抗体的方法特异性强、灵敏度高、简便快速,无需特殊仪器设备,有较大的推广应用价值。     

狂犬病毒胶体金检测试纸的制备及初步应用

目的利用胶体金免疫层析技术建立一种快速、简便、特异的狂犬病毒检测方法。方法采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金标记鼠抗狂犬病毒单克隆抗体,包被于结合释放垫处,分别利用纯化的兔抗狂犬病毒多克隆抗体和羊抗鼠IgG包被检测线及质控线,组装胶体金检测试纸。结果制备的狂犬病毒胶体金试纸对15个接种狂犬病毒乳鼠脑组织的检测均为阳性,与FAT结果一致;对犬瘟热病毒、犬细小病毒及犬冠状病毒细胞培养液及9个狂犬病毒阴性乳鼠脑处理液的检测均为阴性。结论用制备的狂犬病毒胶体金试纸检测狂犬病毒快速、简便、特异,具有良好的临床应用前景。     

斑点金免疫渗滤试验快速检测抗Hp细胞毒素相关蛋白A抗体

目的建立快速检测抗幽门螺杆菌（Ｈｐ）细胞毒素相关蛋白Ａ（ＣａｇＡ）的斑点金免疫渗滤试验（ＤＩＧＦＡ）．方法将ＣａｇＡ抗原点于硝酸纤维素膜上，然后依次加入患者血清及用抗人ＩｇＧ抗体标记的胶体金颗粒，如血清中存在抗ＣａｇＡ的ＩｇＧ，在膜上便出现一个红色斑点．结果ＤＩＧＦＡ仅需几分种便可完成．当用ＤＩＧＦＡ及ＥＩＡ对１０８份血清进行检测时，两种方法之特异性及敏感性相当．当以聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测胃粘膜组织中ＨｐＣａｇＡ的结果作为参照时，ＤＩＧＦＡ的特异性及敏感性分别为９８％（５７／５８）和９４％（４５／４８）．结论ＤＩＧＦＡ特异性强，敏感度高，操作快速且简便，在ＣａｇＡ阳性Ｈｐ感染的检测方面有广泛应用前景     

血清旋毛虫P49抗原IgG抗体的斑点金免疫渗滤法检测

目的 建立一种快速诊断人体旋毛虫感染的新途径。方法 以基因工程表达的猪旋毛虫融合蛋白p49/GST为抗原,将其结合于硝酸纤维素膜上,以胶体金颗粒结合的羊抗人IgG作为标记抗体,建立斑点金免疫渗滤法(Dot-immunogoldfiltration assay,DIGFA),检测人血清抗旋毛虫p49抗原IgG抗体。共检测76份旋毛虫患者血清并与酶联免疫吸附试验(ELISA)作对比研究。结果 抗原抗体通过渗滤在膜上反应,10min肉眼即可观察到结果,在76份患者血清的检测中,阳性率为98.68％,显著高于ELISA法的检出阳性率86.84％,(X2=7.94,P<0.01)。交叉试验与重复试验结果显示DIGFA具有较好的特异性及稳定性。结论 以纯化的融合蛋白p49/GST为抗原建立的DIGFA可快速准确检测旋毛虫病人血清特异性旋毛虫IgG抗体,具有推广应用的价值。     

布氏菌胶体金免疫层析快速检测板使用效果评价

目的对布氏菌胶体金免疫层析快速检测板(CG IRST)的使用效果进行评价,为布氏菌病防治提供一种新的、快速、简易、准确的好方法。方法我们用布氏菌纯蛋白衍化物做为该检测板的包被抗原,用金标记prote in A,利用间接法检测人和不同动物血液样品中的抗布氏菌抗体。待测样品中的抗布氏菌抗体与检测板上的金标记prote in A结合后沿着特殊纤维素膜移动,与膜上的固相抗原结合形成肉眼可见的红色线条。结果本检测板只与有抗布氏菌抗体的样品有特异性反应,与正常人、兔和小鼠的样品以及有抗结核抗体的样品无交叉反应。布氏菌CG IRST与布氏菌SAT比较,从被检测的部份已知样品看,两法的阳性符合率为100%。结论用布氏菌CG IRST检测血样中的布氏菌抗体,灵敏、快速、简便、特异性好,无需仪器设备,对基层单位开展布病监测,不失为一种有效的好方法,应有良好的应用前景。     

快速免疫诊断牛布鲁氏菌病新方法的研究

目的建立一种牛布鲁氏菌病快速免疫诊断方法。方法斑点金免疫渗滤法(DIGFA)以硝酸纤维素膜为载体,胶体金标记蛋白为显示剂,抗原、抗体及胶体金标记蛋白通过渗滤发生反应,阳性结果在膜上显示红色斑点。结果DIGFA快速检测牛布鲁氏菌病具有很好的重现性和稳定性;敏感性、特异性分别达到97%和100%。结论DIGFA快速检测牛布鲁氏菌病,方法快速简便,测试过程1~2 min内完成,试剂敏感、特异、稳定,非常适合于布鲁氏菌病的诊断及流行病学调查。     

柏氏禽刺螨传播家鼠型汉坦病毒的研究

目的：研究柏氏禽刺螨在传播家鼠型肾综合征出血热病毒中的作用。方法：每罐放柏氏禽刺螨100只，于室温为23±1℃环境下饥饿4d，分别叮刺感染汉坦病毒（Hantaanvirus）或浙45株（Z45）大鼠乳小鼠2只或感染汉城病毒（Seoulvirus）UR株大鼠乳小鼠2只各12h，为感染螨，用感染后d15的螨叮刺正常大鼠乳小鼠9只，d30取感染鼠的肺和血清，用间接免疫荧光测试。于d15和d23取感染螨用聚合酶链反应测试其体内病毒RNA。结果：柏氏禽刺螨分别叮刺感染汉坦病毒Z45株和感染汉城病毒UR株大鼠乳小鼠后, 再分别叮刺正常大鼠乳小鼠5 只和4 只。IFAT 检测结果汉坦病毒Z45 株组的鼠全部阳性, 汉城病毒UR 株组的4 只鼠中3 只阳性, 其抗体滴度, 前者为10- 40, 后者为20- 40, 病毒在螨体内可保存22 d 以上。阻断试验显示, 病毒免疫血清1∶20 作用肺切片标本后, 部分阻断荧光抗体反应, 与未经稀释的血清作用后全部阻断特异性荧光反应。对照组正常鼠肺片和血清经IFA T 检测均阴性。结论: 柏氏禽刺螨可作为家鼠型肾综合征出血热的传播媒介和贮存宿主。     

金标渗滤法快速检测曼氏裂头蚴病患者血清IgG

目的探索简易、快速的人曼氏裂头蚴病血清学免疫诊断方法。方法将曼氏裂头蚴可溶性抗原点样于硝酸纤维素膜上,以胶体金-SPA为检测标记物,采用垂直流渗滤装置检测病人血清中曼氏裂头蚴特异性IgG抗体。结果曼氏裂头蚴病病人血清阳性检出率为92.0%(23/25),健康人群血清假阳性率为2.0%(2/100);与囊虫病、肺吸虫病、血吸虫病、华支睾吸虫病、旋毛虫病病人血清的交叉反应率分别为40.0%(16/40)、52.0%(13/25)、13.3%(4/30)、8.0%(2/25)、6.7%(2/30),未发现与广州管圆线虫病、结核病病人血清有交叉反应;与ELISA平行检测74人份血清,两种方法检测结果的一致性有极显著性意义(К=0.871,P<0.001)。结论金标渗滤法检测曼氏裂头蚴病病人血清中特异性IgG,不仅简易、快速而且检出率高,但与肺吸虫病、囊虫病病人血清存在较高的交叉反应,需根据病人饮食史等流行病学资料进行鉴别诊断。     

胶体金免疫层析法快速检测鼠疫耶尔森菌F1抗体

目的建立检测鼠疫耶尔森菌F1抗体的胶体金标记免疫层析方法。方法胶体金标记纯化鼠疫F1抗原,双抗原夹心法原理制成免疫层析检测试纸条,并对兔、羊、人和黄鼠血清进行检测评价。结果用80份不同动物种属的阴性血清进行检测,未出现非特异性反应,对5份恢复期病人血清、13份免疫兔血清和2份免疫羊血清检测也取得阳性结果,对于8份I HA临界阳性(滴度1∶20)的达乌尔黄鼠血清检出阳性6份。结论建立了可以用于现场快速检测鼠疫F1抗体的胶体金免疫层析方法。