利用可控表达Cyclin B1的单克隆细胞株寻找与Cyclin B1结合的蛋白

目的 利用已经构建好的四环素诱导细胞周期素B1 (Cyclin B1)表达的单克隆细胞株,探索可能与Cyclin B1相互作用的蛋白.方法 加入四环素的单克隆细胞株能表达带有Myc和His标签的Cyclin B1.将未诱导和用四环素诱导48 h的细胞裂解后,分别加入10μg Myc的单克隆抗体,用免疫沉淀法(immune precipitation,IP)沉淀可能和Cyclin B1相作用的蛋白,将蛋白混合物行聚丙烯酰胺凝胶电泳,用考马斯亮蓝染色法和银染法明确差异蛋白,再用质谱(mass spectrometry,MASS)行蛋白鉴定.结果 用质谱鉴定出的蛋白有细胞周期素依赖蛋白激酶1(Cyclin-dependent kinase 1,CDK1),细胞周期素依赖蛋白激酶2(Cyclin-dependent kinase 2,CDK2),有丝分裂阻滞缺失样蛋白1(Mitotic arrest deficient-like protein 1,MAD1-like 1,MAD1L1)和热休克蛋白8(heat shock 70kD protein 8 isoform 1).结论 除Cyclin B1和CDK1直接相互作用外,Cyclin B1与CDK2、MAD1L1和热休克蛋白8都可能有直接或间接的相互作用.     

Cyclin D1和Cyclin B1在鼻咽癌中表达的免疫组织化学研究

目的为探讨Cyclin D1和CyclinB1在鼻咽癌中的表达、相关性及临床意义.方法用免疫组化SP法分别检测Cyclin D1和Cyclin B1在58例鼻咽癌组织标本中的表达.结果Cyclin D1和Cyclin B1在鼻咽癌组织中的阳性表达率分别为58.6%(34/58)和60.3%(35/58);Cyclin D1和Cyclin B1 阳性和阴性病例的平均生存期、五年生存率和中位生存期存在显著性差异(P＜0.05);鼻咽癌组织中Cyclin D1和Cyclin B1的表达一致率为60.3%(35/58),无显著相关.结论Cyclin D1和Cyclin B1表达均可以反映鼻咽癌的生存情况,在鼻咽癌预后预测中有重要意义.     

Cyclin B1在细胞周期调控及肿瘤发生发展中的作用

高等真核生物在长期的进化过程中逐渐形成了多层次的细胞周期调控通路,这些调控通路最终都集中在各种细胞周期依赖性蛋白激酶(cyclin-dependent kinases,CDKs)活性的精确调节上.     

Cyclin D1调控U87胶质瘤细胞周期研究

目的探讨细胞周期蛋白D1（Cyclin D1,CCND1）在U87胶质瘤细胞周期调控中的作用。方法根据NCBI GenBank中cyclin D1序列设计双链siRNA,利用Western blotting技术验证设计的siRNA序列的有效性,并通过流式细胞术检测抑制CCND1对U87胶质瘤细胞周期进程的影响。结果经Western blotting检测,成功抑制了CCND1的表达。并且抑制CCND1后,U87细胞周期停滞在G1期,抑制了U87细胞的G1／S期转换。结论U87细胞中抑制CCND1可以显著抑制细胞周期进程,使细胞周期停滞在G0／G1期,为进一步研究胶质瘤的靶向治疗奠定了理论基础。     

鼻咽癌细胞中外源性p16表达对CDK4,Cyclin D1及pRb的影响

目的：分析外源性ｐ１６表达对ＣＤＫ４,Ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１及ｐＲｂ的影响,探讨其抑制细胞生长的机制。方法：绘制生长曲线,比较细胞倍增时间,分析ＨＮＥ１,＃４－２及＃３－２克隆中细胞增殖状况;利用流式细胞仪分析上述细胞中细胞周期分布的改变;结合Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ方法,分析外源性ｐ１６表达对ＣＤＫ４,Ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１及ｐＲｂ的影响。结果：生长曲线示,ＨＮＥ－１倍增时间为２３．４ｈ,＃３－２和＃４     

模拟IMRT对CNE-2细胞周期及Cyclin D1/Cyclin B1表达的影响

目的 探讨模拟调强放射治疗(IMRT)对人鼻咽低分化鳞癌细胞株(CNE-2)细胞周期及细胞周期素Cyclin D1、Cyclin B1转录水平的影响.方法 CNE-2分为急速照射(ART)组和模拟IMRT组,两组分别给予6MV X线2、4、6和8 Gy 四个剂量点的照射;ART组的照射时间为1～3 min,模拟IMRT组的完成时间为35 min.另设空白对照组,不接受照射,其余条件相同.照射后12 h,流式细胞术分析细胞周期分布,RT-PCR检测细胞周期素Cyclin D1和Cyclin B1的转录水平.结果 在相同剂量点,模拟IMRT组G2期细胞比例均低于ART组,两组G2期细胞比例随照射剂量的增加而逐渐增加.模拟IMRT组与ART组在相同剂量点之间比较,Cyclin D1转录水平的差异均无统计学意义(P均＞0.05);Cyclin B1转录水平的差异均有统计学意义(P均<0.05),且随照射剂量的增加而下降,模拟IMRT组Cyclin B1的表达高于ART组.结论 模拟IMRT照射时间延长对G2期阻滞作用下降,细胞周期素Cyclin B1的表达相对升高.     

模拟IMRT对CNE-2细胞周期及Cyclin D1/Cyclin B1表达的影响

目的 探讨模拟调强放射治疗（IMRT）对人鼻咽低分化鳞癌细胞株(CNE-2)细胞周期及细胞周期素Cyclin D1、Cyclin B1转录水平的影响。 方法 CNE-2分为急速照射（ART）组和模拟IMRT组,两组分别给予6MV X线2、4、6和8 Gy 四个剂量点的照射;ART组的照射时间为1～3 min,模拟IMRT组的完成时间为35 min。另设空白对照组,不接受照射,其余条件相同。照射后12 h,流式细胞术分析细胞周期分布,RT-PCR检测细胞周期素Cyclin D1和Cyclin B1的转录水平。 结果 在相同剂量点,模拟IMRT组G2期细胞比例均低于ART组,两组G2期细胞比例随照射剂量的增加而逐渐增加。模拟IMRT组与ART组在相同剂量点之间比较,Cyclin D1转录水平的差异均无统计学意义（P均＞0.05）;Cyclin B1转录水平的差异均有统计学意义（P均<0.05）,且随照射剂量的增加而下降,模拟IMRT组Cyclin B1的表达高于ART组。 结论 模拟IMRT照射时间延长对G2期阻滞作用下降,细胞周期素Cyclin B1的表达相对升高。     

Cyclin D1、Cyclin E在胃癌发生发展中的表达及其相关性

目的研究胃癌组织和癌旁中Cyclin D1、Cyclin E的表达情况,探讨它们在胃癌发生发展中的作用及其相关性。方法应用免疫组化SP法检测62例胃癌标本及22例癌旁中Cyclin D1、Cyclin E的表达情况。结果①胃癌组织Cyclin D1蛋白及Cyclin E蛋白阳性表达率高于癌旁组织,其比较差异均有统计学意义(P<0.01)。②随着胃癌浸润深度的增加、分化程度的降低、淋巴结转移的出现Cyclin D1、Cyclin E阳性表达率升高(P<0.05)。③在胃癌组织中,CyclinD1、Cyclin E的表达呈正相关(r=0.615,P<0.01),均呈升高趋势。结论 Cyclin D1、Cyclin E均参与胃癌的发生和发展,二者可成为判断胃癌恶性程度有价值的指标,也可成为预后评估的指标。     

Cyclin B1的启动子在HeLa细胞cyclin B1蛋白调控中的作用

目的 通过检测细胞周期素B1(cyelin B1)的启动子在HeLa细胞的不同细胞周期的活性变化,探讨其对cyclin B1蛋白的调味控作用.方法 采用PCR法获得HeLa细胞cyclin B1的启动子,通过基因重组插人pGL3 promoter vector 从而获得质粒pGL3/cyelin B1 promoter.采用羟基脲(hydroxyurea,HU)对HeLa细胞进行细胞周期G_1、S、G_2/M期的同步化,通过流式细胞术法确认.用短暂转染的方法,将重组的质粒转染至HeLa细胞.通过双萤光素酶活性检测分析cyelin B1的启动子在HeLa细胞周期G_1、S、G_2/M期的活性的变化.结果 双荧光素酶活性检测cyelin B1的启动子活性在G_1期最高,S期最低,G_2期中等.结论 在HeLa细胞巾cyclin B1的启动子活性和cyclin B1蛋的的表达并不同步.     

G0/G1期异时相Cyclin B1的表达对细胞凋亡的影响

目的 研究G0/G1期异时相细胞周期素B1(Cyclin B1)的大量表达对细胞凋亡的影响.方法 首先构建了四环素可诱导表达Cyclin B1的单克隆细胞株,其次,筛选出能最大程度阻滞细胞于G0/G1期的胸腺嘧啶核苷(Thymidine)浓度,最后,在阻滞的时间内加入四环素诱导Cyclin B1表达,并用免疫印迹和流式细胞仪检测证实后,用膜联蛋白/碘化丙啶(Annexin Ⅴ/PI)双染法和API法检测细胞凋亡.结果 终浓度为5 mmol/L的胸腺嘧啶核苷能阻滞单克隆细胞株在G0/G1期,并至少维持48 h;在细胞同步化期间加四环素诱导后,Cyclin B1表达增加,并且G0/G1期特异性细胞凋亡增加.结论 G0/G1期异时相Cyclin B1的表达能诱导细胞凋亡.     

Cycin D_1在鼻腔鼻窦肿瘤中的表达

目的:探讨cycin D1在鼻腔鼻窦肿瘤中的表达及其临床意义。方法:采用免疫组化SABC法检测20例鼻腔鼻窦恶性肿瘤和10例相应部位良性病变的石蜡标本中cycin D1的表达。结果:鼻腔鼻窦肿瘤中cycin D1表达均为阳性,良性病变中为阴性或弱阳性。鼻腔鼻窦恶性肿瘤中cycin D1积分与患者年龄、性别、病变部位及病理类型无关(P>0.05)。Cycin D1积分与TNM分期、病理分级相关(P<0.05),且积分随肿瘤临床分期、分级逐渐升高。初诊病例与复发病例之间cyclin D1积分差异有统计学意义(P<0.05)。结论:Cycin D1在鼻腔鼻窦肿瘤的发生、发展及复发转移等临床病理过程中起重要作用。     

CDC25B和Cyclin B1在胃腺癌中的表达及其临床意义

目的：探讨CDC25B和Cyclin B1在判断胃腺癌的病情及预后中的价值。方法：选取胃腺癌病例60例和正常胃组织15例作为本课题的研究对象。采用免疫组化法检测胃腺癌组织和正常胃组织中CDC25B和Cyclin B1的表达情况,结合临床病理和随访资料,运用统计学方法,回顾性分析CDC25B和Cyclin B1的表达和各项临床病理指标及预后之间的关系。结果：在胃腺癌中和正常胃组织中CDC25B的阳性表达率分别为46.7%和6.7%,而Cyclin B1的阳性表达率分别为70.0%和13.3%,差异有显著性。胃腺癌中CDC25B和Cyclin B1的阳性表达与浸润深度、TNM分期及淋巴结转移相关。生存率的单因素分析显示,浸润深度、TNM分期及淋巴结转移、CDC25B的表达和Cyclin B1的表达与胃腺癌的预后相关。生存率的多因素分析显示CDC25B和Cyclin B1的表达提示预后不良。未发现CDC25B和Cyclin B1在胃腺癌中的表达存在正性线性相关关系。结论：CDC25B和Cyclin B1的阳性表达提示胃腺癌预后不良。     

Cyclin B1在早期乳腺癌的蛋白表达及其意义

目的 探讨Cyclin B1在早期乳腺癌组织中蛋白表达与ER、PR及HER2的关系. 方法用免疫组化二步法检测76例有完整随访资料的早期乳腺癌患者乳腺癌组织中Cyclin B1、ER、PR及HER2的蛋白表达,并进行统计学分析.结果 Cyclin B1在乳腺癌组织中的阳性率为68.42%.Cyclin B1蛋白表达与肿瘤的病理类型、患者的年龄、PR及HER2的蛋白表达无关( P >0.05),与绝经状态、ER相关(P<0.05).单因素分析示Cyclin B1、ER、HER2与预后相关,多因素分析显示无一基因表达与预后相关. 结论本组早期乳腺癌患者的Cyclin B1蛋白表达与绝经状态、ER蛋白表达有关,与患者的预后无关.Cyclin B1在早期乳腺癌的作用尚需进一步研究.     

卵巢上皮性肿瘤中cyclin D1和Ki-67蛋白检测及其临床意义

目的 探讨卵巢上皮性肿瘤中cyclin D1和Ki-67蛋白表达及其临床意义。方法 运用免疫组化方法,检测cyclin D1和Ki-67蛋白在30例卵巢腺癌、20例卵巢交界性肿瘤和80例卵巢癌中的表达情况,结合肿瘤的临床资料,分析其临床意义。结果 cyclin D1蛋白在卵巢良性腺瘤、交界性肿瘤和卵巢中的阳性表达率分别为3％、25％、26％。Ki-67蛋白在交界性卵巢肿瘤的过度表达率为15％,在卵巢癌中为39％,而且与肿瘤Silverberg氏分级有显著的相关性（P〈0.05）,其中47％的G2／G3级的卵巢癌出现Ki-67蛋白过度表达,其过表达率明高于G1级的肿瘤（17％）。结论 cyclin D1和Ki-67蛋白可以作为临床判断卵巢上皮性肿瘤良恶性有参考价值的分子标记;卵巢癌中Ki-67蛋白过度表达可成为评估肿瘤细胞恶性程度的指标之一。     

cyclin B1 的启动子在乏氧条件下活性的变化

目的探讨细胞周期素B1(cyclin B1)的启动子在乏氧条件下活性的变化。方法采用PCR法获得对Hela细胞cy-clin B1的启动子,通过基因重组插入pGL3 promoter vector从而获得表达。荧光素酶的活性检测,了解通过双萤光素酶活性检测分析cyclin B1的启动子在乏氧条件下活性的变化。结果双萤光素酶活性检测cyclin B1的启动子活性在乏氧条件下,表达明显下降。结论在乏氧条件下,Hela细胞的cyclin B1的启动子活性下降,可能是乏氧条件下肿瘤细胞的自我保护机制。     

14-3-3σ和Cyclin B1蛋白在浸润性乳腺癌中的表达及意义

目的 探讨浸润性乳腺癌组织中14-3-3σ和Cyclin B1的表达并分析其阳性表达与预后的关系。方法 应用免疫组化PV-9000两步法检测80例浸润性乳腺癌 ,40例乳腺导管原位癌和25例乳腺增生症术后石蜡标本中14-3-3σ和Cyclin B1蛋白的表达情况。结果 80例浸润性乳腺癌组织中14-3-3σ的阳性表达率为22.5%（18/80）,明显低于乳腺导管原位癌65%（26/40）和乳腺增生症92%（23/25）（P<0.05）; 14-3-3σ的表达在组织学分级、TNM分期、腋窝淋巴结转移、术后复发、HER-2受体及ER受体等分组间差异均有显著性意义（P<0.05）,与其它临床特征之间差异均无统计学意义（P>0.05）; Cyclin B1蛋白在浸润性乳腺癌、乳腺导管原位癌、乳腺增生症组织中的表达阳性率分别为67.5%（54/80）、52.5%（21/40）和36%（9/30）,其中浸润性乳腺癌明显高于乳腺增生症（P<0.05）;Cyclin B1的表达在腋窝淋巴结转移、术后复发及ER受体等分组间差异均有显著性意义（P<0.05）,而在与其它临床特征之间差异均无统计学意义（P>0.05）;14-3-3σ和Cyclin B1蛋白的表达呈负相关（r=-0.521,P=0.000）。14-3-3σ蛋白阳性表达组患者的总生存期OS明显高于阴性表达组患者的总生存期OS,Cyclin B1蛋白的表达与之相反（P<0.05）。结论 14-3-3σ和cyclin B1蛋白与浸润性乳腺癌的发生发展可能相关,二者联合检测可能对判断患者的预后有一定作用。     

60Coγ射线对CNE-2细胞周期素B1和增殖细胞核抗原表达的影响

目的研究60Coγ射线分割照射对CNE-2周期素B1(cyclin B1)、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)表达和细胞周期分布的影响.方法采用PI单染,用流式细胞术检测细胞周期;逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)结合半定量分析方法测定cyclin B1和PCNA mRNA的表达水平.结果 4.0、6.0、8.0 Gy60Coγ射线分割照射CNE-2细胞不同时间可发生G1、S和G2期细胞比例增多.4.0、6.0、8.0 Gy照射第1天PCNA表达水平较对照组下降(P＜0.05),第3、5天PCNA表达水平较对照组无明显变化(P＞0.05).照射后cyclin B1表达水平较对照组下降(P＜0.05),但各照射组间cyclin B1表达水平无差别(P＞0.05).结论 60Coγ射线分割照射CNE-2细胞可诱发G1、S、G2期阻滞和抑制PCNA和cyclin B1的表达,但其抑制效应无剂量依赖性.     

卵巢上皮性癌组织中细胞周期素B1和CDK1的表达

目的:探讨卵巢上皮性癌组织中细胞周期素B1(CyclinB1)和细胞周期蛋白依赖性激酶1(CDK1)的表达及其意义。方法:应用免疫组化SP法检测20例正常卵巢组织、20例卵巢良性上皮性肿瘤组织、40例卵巢上皮性癌组织中CyclinB1和CDK1蛋白的表达。结果:①卵巢上皮性癌组织中CyclinB1和CDK1蛋白的阳性表达率分别为77.5%和90.0%,良性卵巢上皮肿瘤组织分别为25.0%和35.0%,正常卵巢组织分别为5.0%和10.0%,3者相比差异有统计学意义(χ2=33.036,39.568;P<0.001)。②CyclinB1蛋白的表达与卵巢上皮性癌FIGO分期、组织分化和淋巴结转移有关(P<0.05),CDK1蛋白的表达与卵巢上皮性癌临床病理特征无关。结论:CyclinB1和CDK1蛋白在卵巢上皮性癌组织中存在异常高表达,可能在卵巢上皮性癌的早期恶变过程中发挥重要作用。