夹心ELISA法快速检测肝病患者血清中金属蛋白酶组织抑制剂-1

目的：建立一种快速检测肝病患者血清基质金属蛋白酶组织抑制剂-1（TIMP-1）的双机体夹心ELISA，了解血清TIMP-1的水平与肝纤维化病程进展程度的关系：方法：以不同浓度的抗人TIMP-1申克隆抗体（mAb）为包被抗体，加入待测抗原以及辣根过氧化物酶（HRP）标记的抗TIMP-1mAb作为标记抗体进行方阵滴定，建立双抗体夹心ELISA，并用于临床检测408例肝病患者血清TIMP—1的水平。结果：方阵滴定的结果表明包被抗体浓度为1mg／L，血清稀释倍数1：100，HRP标记mAb的最佳工作浓度为1：400、以此条件建立的夹心ELISA法具有良好的可重复性，中和抑制率在85％以上，稳定性良好，与国外检测TIMP-1的ELISA试剂盒进行对比试验，具有良好的相关性（r=0．988）。用于临床快速检测肝硬化的检出阳性率为76．4％，明显高于慢性肝炎（40．2％）和急性肝炎（19．5％，P〈0．005），并随着患者肝纤维化程度的加重而升高（P〈0．001）。结论：血清TIMP-1水平的变化可作为诊断肝纤维化良好指标本法简便、快速，敏感性高、特异性强，用于肝纤维化的人血清学快速诊断。尤其适于医院及基层医疗单位应用．     

病毒性心脏病小鼠心脏胶原代谢的动态变化

目的：探讨急、慢性病毒性心肌炎和扩张型心肌病小鼠心肌组织中胶原代谢的动态变化和特征。方法：以柯萨奇病毒B3感染BALB/c小鼠分别建立病毒性心脏病动物模型，同期均设正常对照。组织病理学方法和心脏超声确认动物模型后，以酶联免疫吸附法（ELISA）检测各组小鼠胶原前肽（PINP、PICP和PIIINP）的血清浓度；以免疫印迹法（Western blotting）检测间质胶原酶（MMP-1）及其组织抑制物（TIMP-1）在心肌组织中的表达；同时检测MMP-1活性变化结果：各期感染小鼠心脏均出现明显心肌纤维化，急性期为修复性心肌纤维化，胶原合成和降解均增强；慢性期反应性纤维化和修复性纤维化并存，胶原合成增多降解减少；心肌病理主要为反应性纤维化，胶原合成增多；MMP-1表达量和活性随病程进行性减少，TIMP-1的表达无变化，MMP-1/TIMP-1进行性降低。结论：病毒性心脏病不同时期胶原代谢有其各自的特点，对病程和预后的影响不同。     

血清泌乳素与系统性红斑狼疮患者肾损害的相关性

目的: 探讨系统性红斑狼疮（SLE）患者血清PRL水平与肾损害的相关性。方法： 应用免疫放射量度分析法检测80例SLE患者血清PRL水平并分析其与肾受累的关系。 结果： 高泌乳素血症者肾受累发生率明显高于PRL水平正常者，血清PRL水平与SLEDAI评分、抗ds-DNA抗体滴度、24 h尿蛋白定量、尿微量白蛋白定量（MA）、尿转铁蛋白定量（MTF）、尿免疫球蛋白定量（Ig）及肾脏病理活动指数呈正相关，与血清白蛋白(ALB)水平呈负相关。Logistic 回归分析显示肾受累与血清PRL水平增高及C3水平降低有关。结论： 血清PRL水平升高与SLE肾脏受累有关，其检测可作为肾脏受累的监测指标之一。     

血管紧张素Ⅱ刺激高草酸尿症大鼠肾脏NADPH氧化酶的表达

目的： 观察肾素-血管紧张素系统（RAS）和NADPH氧化酶在高草酸尿症大鼠肾脏氧化应激（OS）形成中的相互作用。方法: 采用0.8%乙二醇饮水法诱导建立高草酸尿症大鼠模型。动物分6个组（n=8）,A组:空白组;B组：高草酸尿症组;C组：高草酸尿症+apocynin治疗组;D组：单纯apocynin治疗组;E组：高草酸尿症+losartan治疗组;F组：单纯losartan治疗组。后4组分别灌胃给予apocynin（0.2 g·kg-1·d-1）或losartan（30 mg·kg-1·d-1）。4周后检测大鼠尿液、肾组织中的OS指标（尿8-IP和肾组织SOD活性）,放免法检测肾组织血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）的含量,免疫组化法观察NADPH氧化酶亚单位P47phox蛋白在肾脏中的表达位置,RT-PCR法检测肾组织p47phox mRNA的表达水平。结果: p47phox在各组大鼠肾脏中都有广泛表达,表达部位包括肾皮质、内髓、外髓。与A组比较,B组尿液8-IP明显增多,肾组织SOD活性降低,肾组织AngⅡ含量增多,p47phox mRNA在肾组织中的表达水平也明显增多。使用apocynin（C组）和losartan（E组）均可抑制肾组织p47phox mRNA的表达,同时肾脏的OS程度减轻。结论: 在高草酸尿症大鼠模型中,肾脏p47phox mRNA表达增多,导致肾脏OS;同时肾脏RAS也被激活,后者可通过刺激p47phox mRNA的表达而促进肾脏OS程度增加。     

PAI-1和TIMP-1基因在肾小管间质纤维化中的表达及HGF的干预作用

目的:研究纤溶酶原激活物抑制剂1(PAI-1)和组织基质金属蛋白酶抑制剂1(TIMP-1)基因表达与梗阻性肾病小管间质纤维化(TIF)进展的关系及肝细胞生长因子(HGF)的干预作用。方法: 60只Wistar大鼠随机分为4组:正常大鼠组、假手术组、单侧输尿管梗阻组和HGF治疗组,分别于模型3 d、7 d、14 d、21 d处死大鼠。采用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测PAI-1和TIMP-1 mRNA表达水平;底物酶谱法检测肾脏MMP2、9活性的变化,测定肾组织羟脯氨酸含量判断纤维化程度。结果:梗阻肾组织PAI-1和TIMP-1 mRNA表达显著高于对照组,并伴有明显的梗阻肾MMP2,MMP9活性低于和羟脯氨酸含量高于对照组,而21 d HGF治疗组PAI-1和TIMP-1 mRNA表达明显下调,MMP2,MMP9活性高于和肾组织羟脯氨酸含量少于对照组。结论: PAI-1、TIMP-1 mRNA表达增高是小管间质ECM降解减少的主要原因之一,也是造成TIF加重的重要因素,而HGF可拮抗这一进程,减轻小管间质纤维化。     

促红细胞生成素对大鼠肾间质纤维化发动蛋白-1表达影响

目的探讨促红细胞生成素（EPO）对大鼠肾间质纤维化发动蛋白．1（Drp-1）表达的影响。方法81只sD大鼠,分为假手术组、对照组和EPO组,每组各27只。EPO组、对照组采用单侧输尿管结扎并剪断建立肾间质纤维化模型,假手术组仅游离输尿管而不结扎和剪断;EPO组予EPO皮下注射;假手术组和对照组给予等量生理盐水皮下注射。各组于术后7、14和21d取动脉血分离血清检测血肌酐和尿素氮水平。取梗阻侧肾组织行苏木精．伊红和Masson染色,观察肾脏病理学变化。用免疫组化方法检测肾组织Drp一1的表达。结果@EPO组各时点血清肌酐和尿素氮水平显著低于对照组（P〈0．01）,但高于假手术组（P〈0．05）。②EPO组各时点肾组织病理改变较对照组明显减轻,肾小管间质损伤评分和肾间质纤维化相对面积均低于对照组（P均〈0．05）,但高于假手术组（P〈0．05）。③EPO组肾组织的Drp．1表达显著低于对照组（P〈0．05）,但高于假手术组（P〈0．05）。结论Drp-1在大鼠肾间质纤维化肾组织中表达增加,参与。肾脏纤维化过程;EPO可以通过抑制Drp一1表达,从而延缓肾间质纤维化的进展。     

辛伐他汀对糖尿病大鼠肾脏氧化应激的抑制作用

目的：研究辛伐他汀对糖尿病大鼠肾脏氧化应激反应和肾脏功能的影响。 方法： 链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠，给予辛伐他汀治疗8周后，检测辛伐他汀对糖尿病大鼠肾脏氧化应激水平和肾功能的影响。 结果： 糖尿病组大鼠血清和肾皮质超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性显著低于正常对照组，丙二醛(MDA)含量明显高于正常对照组，同时血尿素氮（BUN）、血肌酐（Scr）、尿白蛋白排泄率（UAER）、尿白蛋白/肌酐、肾重及肾肥大指数（肾重/体重）均高于对照组。辛伐他汀治疗组SOD活性与糖尿病组无明显差异，其余异常均明显轻于糖尿病组。 结论： 辛伐他汀能有效抑制糖尿病大鼠肾脏氧化应激反应，改善肾脏功能。     

圣草酚通过抑制TGF-β1/Smad3信号通路改善糖尿病肾病大鼠肾纤维化

目的：探讨圣草酚对糖尿病肾病（DN）肾纤维化的影响及其作用机制。方法：采用多次小剂量注射链脲佐菌素建立DN大鼠模型，将建模成功的大鼠随机分为模型组、阳性药物组（二甲双胍，0.5 g/kg）及圣草酚低、中、高剂量组（5、10、20 mg/kg），另设置对照组，每组12只。各给药组给予相应药物灌胃干预，对照组和模型组灌胃等体积生理盐水，1次/d，连续12周。收集24 h尿液，检测24 h尿蛋白含量；腹主动脉取血，测定空腹血糖（FBG）、血肌酐（Scr）和血尿素氮（BUN）含量；HE染色观察肾脏组织病理学变化；Masson染色观察肾脏组织纤维化程度；qRT-PCR检测肾组织中TGF-β1、CollagenⅠ和CollagenⅢmRNA表达水平；Western blot检测肾脏组织中TGF-β1、p-Smad3、Smad3、α-SMA蛋白表达水平。结果：与对照组相比，模型组大鼠肾脏出现明显损伤及纤维化，FBG、BUN、Scr和24 h尿蛋白含量均显著升高（P<0.05），肾脏组织中TGF-β1、CollagenⅠ、CollagenⅢ等mRNA表达水平及TGF-β1、p-Smad3和α-S...     

银杏叶提取物对2型糖尿病大鼠肾脏结构和功能的影响

目的：研究银杏叶提取物（GBE）对2型糖尿病（T2DM）大鼠肾脏结构和功能的影响。方法：SD大鼠随机分为正常对照组、高脂组、糖尿病组（高脂饮食+STZ造模）及糖尿病GBE治疗组（GBE 8 mg·kg-1·d-1），8周后处死大鼠,检测体重、肾重、尿量、24 h尿蛋白和N-乙酰-β-氨基葡萄糖苷酶(NAG)水平；电镜观察肾脏超微结构；RT-PCR法测定基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、基质金属蛋白酶组织抑制因子-1（TIMP-1）、Ⅳ型胶原的基因表达水平。结果：糖尿病组大鼠肾皮质TIMP-1、Ⅳ型胶原mRNA表达高于正常对照组，MMP-9 mRNA表达低于正常对照组，肾重指数、尿量、24 h 尿蛋白、NAG均高于对照组。电镜下见肾小球基底膜增厚，厚薄不均匀，足细胞突起肿胀，变短，并可见足突融合，球囊壁层细胞内线粒体扩张，肾小球内胶原纤维增多。而糖尿病GBE治疗组肾小球基底膜及足细胞病变明显较轻，肾皮质MMP-9表达高于糖尿病组，Ⅳ型胶原mRNA表达低于糖尿病组，尿量、24 h尿蛋白、NAG均低于糖尿病组。TIMP-1 mRNA表达无明显差异。结论：GBE可改善2型糖尿病大鼠肾脏的结构和功能，其作用机制与降低TIMP-1、Ⅳ型胶原mRNA表达，升高MMP-9 mRNA表达，阻止ECM的堆积有关。     

血清TIMP-1测定在肝炎、肝硬化中的诊断价值

目的:了解肝炎、肝硬化患者基质金属蛋白酶抑制因子(TIMP-1)在血清中的表达以及肝纤维化的情况,探讨肝炎致肝硬化的机理.方法:用ELISA检测TIMP-1在肝炎、肝硬化患者血清中的含量,同时检测HA、PCⅢ、CⅣ、LN.结果:肝硬化患者血清中TIMP-1的含量与肝炎组相比显著增加,TIMP-1与HA、PCⅢ、CⅣ、LN呈明显正相关.结论:TIMP-1在血清中的含量可判断肝脏纤维化的程度,为肝硬化的诊断提供实验依据.     

病毒性肝炎患者血清中肝纤维化标志物的检测及分析

目的探讨病毒性肝炎患者血清中肝纤维化标志物的水平及意义。方法酶标法检测基质金属蛋白酶-1（MMP-1）、基质金属蛋白酶抑制剂-1（TIMP-1）和转化因子-β1（TGF-β1），放免法检测转化因子α（TGF-α）、透明质酸（HA）、Ⅲ型前胶原（PCⅢ）、Ⅳ型胶原（C-Ⅳ）和层粘蛋白（LN）。结果病毒性肝炎患者血清中TIMP-1、HA、PCⅢ、C-Ⅳ和LN水平与对照组比较明显升高（P〈0.01）；MMP-1、TGF-β1，水平与对照组比较差异无统计学意义（P〉0.05）。结论病毒性肝炎患者血清中肝纤维化标志物中TIMP-1、HA、PCⅢ、C-Ⅳ和LN具有较好的临床价值，MMP-1、TGF-β1价值欠佳。     

Leflunomide对实验性IgA肾病大鼠肾脏TGF-β1、MCP-1表达的影响

目的： 分别从基因和蛋白水平研究leflunomide对实验性IgA肾病（IgAN）大鼠肾组织转化生长因子（TGF-β1）、单核细胞趋化因子（MCP-1）水平的影响，了解其作用机制。 方法：建立IgAN大鼠模型，随机分成leflunomide组、强的松组、模型对照组，并同时设立正常对照组。用免疫组化、RT-PCR的方法分别检测和比较各组肾组织TGF-β1、MCP-1蛋白和基因的表达水平。 结果：Leflunomide组TGF-β1、MCP-1表达均明显低于模型对照组（P<0.05）；leflunomide组与激素组相比，TGF-β1、MCP-1表达无明显差异。 结论：Leflunomide可通过下调TGF－β1、MCP-1 在肾脏的表达，减少局部炎症反应，延缓肾脏纤维化的进程，从而保护肾脏。     

低氧刺激结缔组织生长因子表达与肾间质纤维化

目的：观察低氧对结缔组织生长因子（CTGF）表达的影响，探讨低氧致肾间质纤维化的机制。方法： 单侧输尿管结扎（UUO）9 d大鼠动物模型，用RT-PCR方法检测肾组织中低氧标记分子-低氧诱导因子（HIF-1α）的mRNA水平，免疫组化方法观察假手术组及模型组肾组织中HIF-1α和CTGF的表达及部位，Western蛋白印迹技术检测肾组织CTGF的蛋白水平。体外实验，正常大鼠肾间质成纤维细胞（NRK-49F）分别置于低氧（1%O2）和正常氧条件下培养6 h，应用RT-PCR和Western蛋白印迹检测CTGF mRNA和蛋白表达水平。结果： 对照组肾组织未能检测到HIF-1α mRNA和HIF-1α蛋白表达；模型组肾组织有高水平HIF-1α mRNA，并出现HIF-1α蛋白表达，主要分布在小管-间质细胞；CTGF蛋白与HIF-1α蛋白表达部位及程度一致；低氧（1% O2）培养刺激NRK-49F细胞表达CTGF mRNA和蛋白。结论： 低氧刺激的CTGF的表达增加与肾间质纤维化的发生有关。     

脑源性神经营养因子对细胞外蛋白水解酶激活作用的研究

 目的：研究脑源性神经营养因子 (BDNF) 对细胞外蛋白水解酶表达和激活作用的影响。 方法：体外分离并培养人脐静脉内皮细胞（HUVEC），RT-PCR法检测HUVEC基质金属蛋白酶MMP-2 、MMP-9 和基质金属蛋白酶组织抑制剂TIMP-1、TIMP-2 mRNA的表达，明胶酶谱检测MMP-2和MMP-9蛋白酶活性，纤维蛋白酶谱检测尿激酶型纤溶酶原激活剂（uPA）蛋白酶活性，Western blotting检测uPA、纤溶酶原激活剂抑制剂（PAI）、TIMP-1及TIMP-2表达。 结果：在对HUVEC增殖无明显促进作用的浓度范围内，BDNF可促进无血清培养的HUVEC MMP-2和MMP-9 mRNA表达,并可促进MMP-2和MMP-9酶原的激活产生活性明胶酶，BDNF对TIMP-1和TIMP-2的表达无明显影响。BDNF以浓度和时间依赖性方式上调HUVEC uPA和PAI-1的表达，并可促进uPA的活性。 结论：BDNF可激活MMPs和uPA/PAI相关的蛋白级联。     

依那普利对大鼠糖尿病模型肾内炎症的干预作用及可能机制

目的：探讨依那普利对大鼠糖尿病模型肾内炎症的干预作用及可能机制。 方法： 建立STZ诱导的单侧肾切除大鼠糖尿病模型，随机分：对照组、糖尿病组与依那普利给药组，每组 10只。8周末检测24 h尿白蛋白排泄率(AER)、肾组织与尿丙二醛(MDA)含量及肾组织超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)与谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性。应用PAS染色观察肾小球病理组织学指标；免疫组织化学方法检测肾组织ED-1(巨噬细胞表面标志)及单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1) 与细胞间粘附分子-1 (ICAM-1)表达。 结果： 依那普利给药组大鼠肾重、肾重/体重、AER与肾小球面积、肾小球容积及系膜区面积明显低于模型组(P<0.05, P＜0.01)；模型组肾组织和尿MDA含量明显高于对照组（P＜0.01），肾组织超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）与谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）活性明显低于对照组(P＜0.05,P＜0.01)，依那普利可明显缓解这些变化（P＜0.05）；模型组肾小球ED-1阳性细胞数及 MCP-1、ICAM-1表达明显高于对照组(P＜0.01)，依那普利给药组肾小球巨噬细胞浸润及MCP-1表达明显低于模型组(P＜0.05)， ICAM-1表达无明显差异。 结论： 依那普利对糖尿病大鼠肾脏保护作用机制部分可能与抑制肾内炎症有关。     

白豆蔻对阿霉素肾病所致大鼠肾损伤和肾纤维化的保护作用及机制

目的 探究白豆蔻对阿霉素肾病所致大鼠肾损伤和肾纤维化的保护作用及可能机制。方法30只SD大鼠随机分成对照组（Control组）、阿霉素肾病组（AN组）和白豆蔻组（AK组）,每组10只。HE染色观察肾组织形态学变化;Masson染色观察肾组织纤维化;ELISA方法检测大鼠血清血肌酐和尿素氮水平及肾组织匀浆MDA和SOD水平;Western blot检测肾组织凋亡相关蛋白和Sirt1/PGC-1α信号通路相关蛋白表达。结果 白豆蔻能改善大鼠肾组织形态,降低组织纤维化,降低血清血肌酐和尿素氮水平,抑制肾组织氧化应激反应,降低肾组织细胞凋亡,激活Sirt1/PGC-1α信号通路。结论 白豆蔻改善阿霉素肾病所致大鼠肾损伤和肾纤维化,其作用机制可能与调控Sirt1/PGC-1α信号通路有关。     

葛根素联用沙格列汀对2型糖尿病大鼠肾脏纤维化的影响

 目的：观察葛根素联用沙格列汀对2型糖尿病大鼠肾脏纤维化的影响。方法: Wistar大鼠50只,雄性,随机抽取8只作为正常对照组,其余复制2型糖尿病大鼠模型。将造模成功的大鼠随机分为糖尿病对照组、葛根素治疗组、沙格列汀治疗组、葛根素联用沙格列汀治疗组和二甲双胍联用沙格列汀治疗组。各治疗组给予相应药物治疗,2个对照组腹腔注射相应量的生理盐水。第8周后,测定各组大鼠肾重指数（肾重/体重）、血糖和糖化血红蛋白含量等;电子显微镜观察肾组织病理变化;ELISA法检测血清中炎症因子肿瘤坏死因子α（TNF-α）和巨噬细胞移动抑制因子（MIF）含量;RT-PCR法检测大鼠肾组织TNF-α、MIF和巨噬细胞标记物CD68 mRNA表达。结果: 糖尿病对照组与正常组相比,大鼠肾重指数、血糖与糖化血红蛋白上升（P<0.01或P<0.05）,血清中TNF-α及MIF含量明显上升（P<0.01）,肾脏组织中TNF-α、MIF及CD68 mRNA 表达上升（P<0.05）;与糖尿病对照组比较,葛根素联用沙格列汀治疗组的肾重指数、血糖及糖化血红蛋白下降（P<0.01或P<0.05）,血清中TNF-α及MIF含量下降（P<0.05）,肾脏组织中的TNF-α、MIF及CD68 mRNA表达下降（P<0.05）;与单用药组比较,联用组在各指标改善程度上更显著。结论：葛根素联用沙格列汀能降低血糖和血清中TNF-α、MIF含量,下调TNF-α、MIF及CD68 mRNA在大鼠肾脏组织的表达。糖尿病大鼠肾脏纤维化被抑制的机制可能与上述指标的变化有关。     

DM2患者检测肝纤维化指标的临床意义

糖尿病肾病是糖尿病三大微血管并发症之一,流行病学调查结果显示,2型糖尿病肾病的发生率为20％一60％,是终末期肾衰的主要原因之一,主要病理特征为肾纤维化,在临床上早期发现肾纤维化并早期防止纤维化的发展,是预防慢性肾功能衰竭的最好方法。目前,临床上肾纤维化诊断有赖于肾脏病理学诊断,而肾活检是一种有创性检查。近年的研究表明,肝纤维化指标四项[透明质酸（HA）、层黏连蛋白（LN）、Ⅲ型前胶原氨端肽（PIIIP）、Ⅳ型胶原（CIV）]在肾组织纤维化的发生发展中都有异常表达。为了解糖尿病患者血清中肝纤维化指标的变化,了解糖尿病患者肾纤维化的情况,本文检测了2型糖尿病（DM2）患者血清HA、LN、PⅢP和CIV水平,现报道如下。     

RGDS四肽促进大鼠肝星状细胞胶原降解机制的研究

目的：观察精-甘-天冬-丝氨酸（RGDS）四肽对纤维连接蛋白（FN）刺激的大鼠肝星状细胞（HSC）基质金属蛋白酶-13（MMP-13）及其组织抑制因子（TIMP-1）表达的影响。方法：应用体外细胞培养技术，用RT-PCR检测HSC MMP-13mRNA水平；原位杂交和Western blot技术分别检测上述细胞TIMP-1 mRNA和蛋白水平。结果：RGDS四肽干预2h组MMP-13 mRNA的表达强度明显上调，同时TIMP-1 mRNA表达受抑制；RGDS四肽干预24h组TIMP-1蛋白表达受抑制。结论：RGDS四肽诱导HSC MMP-13表达，抑制其TIMP-1表达是其抗肝纤维化的作用机制之一。     

苦参与茯苓对肝纤维化的作用及机制的研究

目的研究苦参、茯苓两种中药抗肝纤维化的作用及其机制。方法以生理盐水作为对照,将苦参和茯苓两种中药用于大鼠肝纤维化模型和大鼠肝星状细胞（HSC）。观察肝组织形态变化;检测血透明质酸酶、Ⅳ型胶原含量;MTT法检测HSC细胞增殖抑制率;免疫组化法检测基质金属蛋白酶-1（MMP-1）、基质金属蛋白酶组织抑制因子-1（TIMP-1）、转化生长因子（TGF）β1、血小板衍生生长因子（PDGF）的表达。结果与对照组比较,中药处理组的HSC细胞增殖抑制率升高（P〈0.05）;血清透明质酸、Ⅳ型胶原含量减少（P〈0.05）;肝组织TIMP-1、TGFβ1及PDGF的表达均减少（P〈0.05）。结论两种中药均能减缓大鼠肝纤维化的发生,其机制可能与这些中药能下调TGFβ1及PDGF表达、抑制HSC增殖活化、促进细胞外基质降解、减少肝纤维结缔组织沉积有关。