霍乱弧菌毒力基因检测与16S rRNA基因分型研究

目的：了解浙江省霍乱弧菌毒力基因携带情况和16SrRNA基因型状况，为霍乱防治提供科学依据。方法：利用16SrRNA基因探针分析了浙江省不同时期分离的88株霍乱弧菌经BglI消化的16SrRNA基因限制性酶谱，以多重PCR法对140株霍乱弧菌进行6种毒力相关基因（ctxA、rtxA、Ace、TcpA、Cri、Zot）检测分析。结果：发现各菌株的杂交片断范围为2～12Kb，每个菌株有6～9条杂交带不等。88株霍乱菌株可分为9个16SrRNA基因型（ribotype，RT），其中埃尔托型霍乱弧菌（el tor vibrio cholerae，EVC）可分为6个RT，0139群霍乱弧菌（vibrio cholerae 0139，VC 0139）分为3个RT；所有VC0139菌株均携带3种以上毒力基因，86．3％的菌株携带全部6种毒力基因，所有EVC流行株均携带2种以上毒力基因，79．1％的菌株携带全部6种毒力基因。结论：认为霍乱流行菌株基因型的变迁可能是引起新一次流行的原因。结合毒素基因检测结果，我们认为VC0139与EVC在遗传特征上有相近的特点，但又有所区别。     

云南战区部队首次检出携带耶尔森菌HPI毒力岛基因irp-2的大肠杆菌

目的：了解携带小肠结肠炎耶尔森菌HPI毒力岛基因irp^-2的大肠杆菌在云南战区部队腹泻患者粪便标本中的存在情况，并对其菌株做毒力试验。方法：用PCR扩增法检测毒力岛基因irp^-2，小白鼠腹腔注射检测毒力。结果：从268份腹泻病人粪便中分离的大肠杆菌菌株中，检测出携带小肠结肠炎耶尔森菌HPI毒力岛基因卸12的18株，检出率为6．72％（18／268）。毒力试验使小白鼠发病并死亡。结论：云南战区存在携带小肠结肠炎耶尔森菌HPI毒力岛基因卸12的大肠杆菌，该菌对部队指战员的健康具有潜在性的威胁。     

淋病奈瑟球菌毒力岛基因与耐药性的相关性分析

目的探讨淋病奈瑟球菌毒力岛基因与耐药性的相关性。方法应用琼脂稀释法检测淋病奈瑟球菌的耐药性,碘量法检测产β-内酰胺酶淋病奈瑟球菌(PPNG);分别提取其染色体DNA和质粒DNA,采用PCR方法 ,检测淋病奈瑟球菌毒力岛中的atl A、traG和traH基因。结果淋病奈瑟球菌的耐药现状非常严重;毒力岛基因广泛存在,染色体DNA上atl A、traG和traH阳性检出率分别为74.60%、34.92%和68.25%;质粒DNA上atl A、traG和traH阳性检出率分别为74.60%、63.49%和63.49%。结论淋病奈瑟球菌的毒力岛基因与耐药性之间存在一定相关性;染色体traH和质粒atl A多见于β-内酰胺酶阴性菌株,而染色体traG则更多见于高水平耐四环素菌株(TRNG)。     

耶尔森菌强毒力岛的水平转移机制

耶尔森菌强毒力岛为小鼠毒力表型所必需,可能是通过噬菌体介导的水平转移所获得。强毒力岛在肠道菌群不同种属间的广泛分布,是毒力岛通过基因水平转移获得的一个强有力的证据。本文就此对强毒力岛删除和获得机制的研究进展作了综述。     

三亚地区副溶血性弧菌血清分型、毒力基因及药敏分析

目的 了解三亚地区副溶血性弧菌食物中毒分离株和海产品分离株的血清分型、毒力基因及药敏情况。 方法 依照 GB47897-2008方法进行血清分型、采用荧光定量PCR法检测毒力基因、K-B琼脂纸片扩散法进行药敏实验。 结果 100菌株分属10个群14个血清型,以O4群为主,占32%,其次O2群(19%)。40株中毒患者分离株以O4 群(62.5%)为主,主要血清型是O4:K8;60株海产品分离株以 O2群(31.7%)为主。100株VP均携带tlh,未携带trh。40株食物中毒患者分离株中,38株携带tdh,携带率为95.0%,海产品VP株均未携带tdh。均对青霉素G、苯唑西林、氨苄青霉素耐药。 结论 三亚地区食物中毒的主要优势血清型为O4:K8,病人和海产品的分离株携带毒力基因不一致;药敏试验均对喹诺酮类和大部份氨基糖苷类抗生素高度敏感。     

湖北省部分霍乱弧菌毒力基因和基因分型结果分析

目的检测霍乱弧菌毒力基因和基因分型,为科学防治提供依据。方法用PCR方法检测从湖北省部分地区的猪肉、基围虾、湖水、病人、病人厕所等处采集标本培养分离血清学分型确认的霍乱弧菌毒力基因,采用脉冲场电泳技术（PPGE）检测霍乱弧菌基因分型。结果同一地区的猪肉、基围虾、湖水中01群小川型霍乱弧菌基因分型结果一致,毒力基因阴性;病人及病人厕所0139群霍乱弧菌基因分型结果一致,毒力基因为阳性。结论检测猪肉、基围虾、湖水中霍乱弧菌毒力基因阴性的结果,可以为现场提供避免采取应急防治措施的依据,节约大量的社会和人力资源。     

毒力岛对德国小蠊杀灭效果观察

目的：在实验室内和现场观察毒力岛胶饵对德国小蠊的杀灭效果;方法：实验室采用《农药登记用杀虫剂室内药效试验方法》,现场试验选海军某基地一条3000t的辅助船,按5m^2／g-8m^2／g的药量施放于缝隙、橱柜、抽屉、机器发动机背后等蟑螂出没、隐藏处;结果：实验室86h的蟑螂杀灭率为100％;现场第1周的杀灭率为57．2％,4周的杀灭率为82．5％,12周为97．2％;结论：毒力岛胶饵对德国小蠊有较强的毒力,现场有效防治时间达8周以上。     

舟山市不同来源副溶血性弧菌毒力基因监测及RAPD分析

目的:分析本市贝类中副溶血性弧菌分离株和部分散发腹泻病例及食物中毒分离株的分子生物学特性,了解本市副溶血弧菌的流行规律.方法:对50株贝源分离株和18株临床分离株进行部分血清分型及协、tdh、trh、orf8和toxRS/new 四种毒力基因检测,并对所有菌株进行RAPD分子分型研究.结果:50株贝源株分属于7个血清群...     

耶尔森菌强毒力岛的研究现状

毒力岛 ( pathogenicityisland ,PAIs) ,是携有毒力基因 ,而且极有可能是通过噬菌体介导的水平转移而来的染色体上的DNA大片段。象这样的毒力岛已经在许多菌群中发现 ,这些菌包括 :大肠杆菌、沙门菌、幽门螺旋杆菌和霍乱弧菌〔1〕以及克雷伯菌和枸橼酸菌〔2〕。毒力岛在肠道菌群中的广泛分布及其特殊的结构与功能 ,对于研究新型病原微生物出现的机理和进一步了解微生物世界具有重要的意义。本文就目前耶尔森菌强毒力岛 (highpathogenicityisland ,HPI)的研究现状及意义作一综述。1　耶尔森菌毒力岛的基本特点耶尔森菌是近年来研究的一个…     

淋病奈瑟菌对化学消毒剂的抗力研究

目的了解淋病奈瑟菌对化学消毒剂的抗力。方法采用悬液定量杀菌试验，观察不同菌株对化学消毒剂的抗力。选择抗力较高的菌株，观察在不同浓度有机干扰物存在时对消毒效果的影响。结果含有效氯100mg／L消毒剂对淋病奈瑟菌标准菌株29105及临床分离株分别作用4min，其杀灭对数均值分别为5．50和7．11；含有效碘50mg/L消毒剂对上述两菌分别作用4min，其杀灭对数均值分别为5．01和5．32。达到消毒要求所需的消毒剂浓度，在3．0％牛血清蛋白存在时，是含PBS菌悬液的5-6倍。结论淋病奈瑟菌标准菌株29105对化学消毒剂的抗力略强于临床分离淋病奈瑟菌株。淋病奈瑟菌对化学消毒剂的抗力随有机干扰物浓度增高而增强。     

深圳市淋球菌分离株抗生素耐药性分析

目的 了解广东省深圳市淋病双球菌对抗生素的耐药性及产β内酰胺酶淋病双球菌(PPNG)和高水平耐四环素淋病双球菌(TRNG)的流行状况.方法 采用琼脂稀释法测定5种抗生素对240株淋病双球菌的最低抑菌浓度(MIC);用改良碘定量法检测PPNG菌株.结果 淋病双球菌对青霉素、四环素、环丙沙星及头孢三嗪的耐药率分别为71.67%,78.33%,37.50%及6.67%;检出32株PPNG菌株,占13.33%;检出30株TRNG菌株占12.5%;同时对青霉素、四环素、环丙沙星耐药的菌株占31.67%.结论 壮观霉素、头孢三嗪仍可作为深圳市治疗淋病的首选用药,但淋球菌对四环素及青霉素的耐药率较高.     

随机扩增多态性DNA在淋球菌基因分型中的应用

目的 建立随机扩增多态性DNA(RAPD)对淋球菌进行基因分型的方法。方法 用4种不同的预处理方法提取淋球菌基因组DNA,对其优劣进行比较;并运用RAPD对淋球菌菌株进行区分及对经性伴传播的淋病病例进行RAPD指纹图谱比较。结果 运用经典的十六烷基三乙基溴化铵法可以抽提较完整的基因组DNA,获得良好的RAPD指纹图谱;各菌株的RAPD指纹图谱间有明显不同DNA多态性;性伴传播的病例中获得了非常相似的RAPD指纹。结论 选择最佳的DNA抽提技术,运用RAPD可以对淋球菌进行有效基因分型,并可用于分子流行病学对传染源的追踪。     

80株淋球菌分离株青霉素耐药性与penA及ponA基因的关系

目的探讨淋球菌青霉素耐药性与青霉素结合蛋白1基因和2基因（ponA、penA）突变的关系。方法采用琼脂稀释法对淋球菌临床分离株进行青霉素敏感性测定，分别运用聚合酶链反应-单链构象多态性（PCR-SSCP）和PCR-限制性片段长度多态性（RFLP）对淋球菌penA及ponA基因进行分析。结果在检测出的80株淋球菌临床分离株中，所有菌株的penA基因均发生了（Asp345A）的插入突变，而菌株表现出对青霉素不同程度的耐药性；通过RFLP分析检测出有近93．7％的菌株发生了ponA基因第421位氨基酸由亮氨酸变成脯氨酸（Leu421→Pro）的突变。同时研究还表明所有的PPNG菌株也可同时发生penA基因的突变，除2例ponA基因未突变外，94．4％（34／36）的PPNG可发生ponA基因的突变。结论在淋球菌流行株中染色体介导和质粒介导两种方式协同作用造成了淋球菌对抗生素的高度耐药性。     

产青霉素酶淋病奈瑟菌重复序列PCR分型研究

目的研究某地区产青霉素酶淋病奈瑟菌（penicillinase-producing Neisseria gonorrhoeae，PPNG）的基因型特征。方法利用重复序列引物建立重复序列聚合酶链反应（PCR）分型方法，并用此方法对12株PPNG进行基因分型。结果重复序列PCR是一种简便、快速、可靠和分辨率高的基因分型方法，12株PPNG共分为6种基因型，其中A型6株（占50％），F型2株，B、C、D、E型各1株。结论该地区PPNG主要流行株基因型为A型。通过重复序列PCR分型研究，可了解PPNG的基因型流行特征，为调查和控制其传播途径及传染源提供分子流行病学依据。     

尖锐湿疣患者合并淋菌及解脲脲支原体感染的相关性研究

目的 探讨尖锐湿疣(CA)患者合并性传播疾病淋菌(NG)、解脲脲支原体(Uu)感染与CA复发的相关性,为临床提供治疗依据.方法 回顾性分析2008年2月-2012年5月门诊就诊的140例经临床诊断为CA患者的临床资料,将其作为观察组,选择同期接受体检的120例无CA的患者作为对照组,对其体内的NG、Uu进行检测,并对CA患者随访半年,统计NG、Uu或NG+Uu合并感染的复发率.结果 观察组140例CA患者中,有56例患者检出NG或Uu,检出率为40.0％;120例无CA患者中,有14例患者检出NG或Uu,检出率为11.7％,两组差异有统计学意义(P＜0.05);观察组NG与Uu的检出率分别为10.0％、33.6％,对照组NG与Uu的检出率分别为1.7％、9.2％,两组之间差异有统计学意义(P＜0.01);15例CA合并NG感染患者中,有5例复发(33.3％),49例CA合并Uu感染患者中,有18例患者复发(36.7％),56例单纯性CA患者中9例患者复发(16.1％),上述3组复发率差异有统计学意义.结论 CA合并NG或Uu感染患者较单纯性CA患者的复发率均要高,应注意对NG与Uu进行同时检测,并采取相应的治疗.     

广州市和大连市淋病奈瑟球菌的耐药性及耐药质粒分型比较

目的 了解广州和大连市两地临床分离的淋病奈瑟球菌(淋球菌)对抗生素的耐药性,以及产β-内酰胺酶淋球菌(PPNG)和四环素高水平耐药淋球菌(TRNG)耐药质粒TEM-1和tetM基因分型差异.方法 临床菌株来自2012年广东省皮肤性病防治中心和大连市皮肤病医院性病门诊患者的泌尿生殖道分泌物.采用琼脂稀释法测定淋球菌菌株对环丙沙星、头孢曲松和大观霉素的耐药性.多重PCR方法鉴定PPNG TEM-1和TRNG tetM基因分型.结果 2012年广州市皮肤性病防治中心和大连市皮肤病医院性病门诊分别分离获得淋球菌127株和102株.大连市淋球菌头孢曲松中介率达到88.2％(90/102),高于广州市的46.5％ (59/127,x2=43.44,P＜0.01),且出现5株大观霉素耐药株(4.9％),而广州市淋球菌对大观霉素100％敏感.广州市PPNG和TRNG流行率分别为46.5％(59/127)和50.4％ (64/127),均明显高于大连市的33.3％(34/102)和24.5％ (25/102),差异均有统计学意义(x2=5.24、15.95,P均＜0.05).广州和大连市TEM-1基因分型以亚洲型为主,分别为84.7％ (50/59)和79.4％(27/34);tetM基因分型以荷兰型占优势,分别为100.0％ (64/64)和92.0％(23/25).结论 广州和大连两地流行淋球菌耐药性存在差异,大连市出现了大观霉素耐药株,且头孢曲松的中介率显著高于广州市.广州市PPNG和TRNG流行率明显高于大连市.两地TEM-1基因质粒分型以亚洲型占优势,tetM基因以荷兰型为主.     

珠海地区淋球菌耐药性监测及耐药质粒分型

目的 监测珠海地区2015-2016年淋球菌临床分离株对常用抗菌药物的敏感性,了解质粒介导的TEM-1和tetM基因分子流行情况.方法 用琼脂稀释法测定淋球菌对7种抗菌药物(青霉素、四环素、环丙沙星、头孢克肟、大观霉素和阿奇霉素)的最低抑菌浓度(MIC).采用纸片酸度法测定产青霉素酶淋球菌(PPNG),PCR方法分别扩增TIEM-1和tetM耐药质粒基因片段,电泳分析其耐药质粒型别.结果 93株淋球菌中检出PPNG共26株(27.96％)、耐四环素淋球菌(TRNG)24株(25.81％).93株淋球菌对青霉素、四环素、环丙沙星、阿奇霉素的耐药率分别40.86％、75.27％、100.00％、7.53％,青霉素低敏率为51.61％;未发现对大观霉素、头孢曲松、头孢克肟耐药菌株,但对头孢克肟的低敏率达到30.11％.耐药质粒分型结果PPNG亚洲型15株(57.69％),非洲型11株(42.31％),未检出多伦多/里约型;TRNG荷兰型23株(95.83％),美国型1株(4.17％).结论 珠海地区淋球菌对四环素、环丙沙星、青霉素耐药率较高,但对头孢曲松和大观霉素敏感率高,可作为治疗淋病的首选药物;PPNG以亚洲型和非洲型为主,TRNG以荷兰型为主,偶见美国型.     

医院淋病奈瑟菌耐药性与质粒图谱研究

目的了解某院淋病奈瑟菌对抗菌药的耐药性及质粒谱型.方法采用纸片扩散法检测80株淋病奈瑟菌对7种抗菌药的敏感性：碱裂解法分析其质粒图谱.结果在测定的7种抗菌药中,对环丙沙星耐药率最高,为86.25%;对壮观霉素敏感率最高,为100%.质粒介导的产青霉素酶淋病奈瑟菌和耐四环素淋病奈瑟菌的检出率分别为50%和27.50%.72株（90%）淋病奈瑟菌检出质粒带,质粒谱型以4.2kb＋7.4kb＋39.5 kb和4.2 kb＋7.4 kb多见,分别占20%和15%.结论淋病奈瑟菌的耐药性和质粒图谱分析有助于为该地区淋病奈瑟菌的分子流行病学和淋病的监控提供依据.