miR-126在人结肠癌细胞中的表达及其对结肠癌细胞生物学行为的影响

目的探讨microRNA(miR)-126在人结肠癌细胞中的表达以及对结肠癌细胞生物学行为的影响。方法通过实时定量RT-PCR检测结肠癌患者的结肠癌组织以及癌旁组织中miR-126的表达情况。通过慢病毒转染构建miR-126稳定过表达细胞系,并进一步通过体外实验研究miR-126对结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。结果与癌旁组织比较,miR-126在结肠癌细胞中表达率(55%)显著低于癌旁组织的87.5%(P0.05);miR-126的表达与患者是否发生转移及结肠癌临床Dukes分期显著相关(P0.05)。利用慢病毒转染构建的miR-126过表达SW480细胞系进行体外实验显示miR-126可以抑制SW480细胞的增殖,转染组与空白对照组12 h、24 h、48 h吸光度值差异均有统计学意义(P0.05);miR-126可以抑制结肠癌细胞迁移和侵袭的能力。Transwell实验中,转染组与空白对照组细胞迁移数差异均有统计学意义(P0.05)。结论 miR-126可明显抑制结肠癌细胞的发生发展,影响结肠癌细胞的生物学行为。     

微小RNA-206促进神经细胞凋亡参与阿尔茨海默病的机制研究

目的探究微小RNA-206(miR-206)通过调节脑源性神经营养因子(BDNF)及磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)通路,促进神经元凋亡参与阿尔茨海默病(AD)的机制。方法将大鼠海马神经细胞分为对照组、AD组、miR-206抑制剂组(抑制剂组)、抑制剂+siBDNF组和siBDNF组(n=3),除对照组外,其他4组建立AD模型,抑制剂组和抑制剂+siBDNF组通过转染miR-206抑制剂质粒以抑制miR-206,抑制剂+siBDNF组和siBDNF组转染BDNF质粒沉默BDNF。在转染48 h后,检测miR-206、BDNF mRNA和蛋白表达水平。结果 AD组miR-206、细胞凋亡率、Thr231/tau-5及Ser404/tau-5水平明显高于对照组和抑制剂组,BDNF mRNA和蛋白表达、细胞活力、磷酸化PI3K/PI3K及磷酸化Akt/Akt表达明显明显低于对照组和抑制剂组(P0.05)。siBDNF组细胞活力、BDNF mRNA和蛋白表达、磷酸化PI3K/PI3K、磷酸化Akt/Akt表达明显低于AD组,miR-206、细胞凋亡率、Thr231/tau-5、Ser404/tau-5蛋白表达明显高于AD组(P0.05)。抑制剂+siBDNF组miR-206、细胞凋亡率、Thr231/tau-5和Ser404/tau-5蛋白水平明显高于抑制剂组[(1.79±0.18)vs(1.20±0.14),(14.37±1.72)%vs(6.84±0.48)%,(1.40±0.15)vs(0.89±0.09),(2.45±0.26)vs(1.12±0.12),P0.05],细胞活力、BDNF mRNA和蛋白表达、磷酸化PI3K/PI3K和磷酸化Akt/Akt表达明显明显低于抑制剂组(P0.05)。结论下调miR-206表达,会通过促进BNDF的水平激活PI3K/Akt通路,并提高AD模型细胞活力,抑制凋亡,这可能是治疗AD的新思路。     

微小RNA对内皮细胞炎性反应过程中血管内皮细胞黏附分子1表达的影响

目的研究微小RNA(miRNA,miR-126)及血管细胞黏附分子1(VCAM-1)在脂多糖刺激的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中的表达,探讨miR-126对内皮细胞炎性反应过程中VCAM-1表达的影响。方法 HUVEC培养后分6组,空白对照组,模型组,miR-126mimic组,miR-126inhibitor组,A组和B组,后4组用Lipofectamine 2000脂质体分别转染miR-126mimic、miR-126inhibitor及miRNA mimics control、miRNA inhibitor control 24h后,加脂多糖1μg/ml刺激,在8h时,用实时荧光定量PCR检测miR-126、VCAM-1 mRNA表达;Western blot法测VCAM-1蛋白表达,并进行比较。结果模型组miR-126mRNA较空白对照组降低,为(0.056±0.004)倍(P0.01),而VCAM-1mRNA较空白对照组升高(12.50±2.55)倍(P0.01),VCAM-1蛋白表达明显升高(P0.01)。miR-126mimic组miR-126mRNA相对表达较A组升高(51.18±2.30)倍(P0.01),VCAM-1mRNA相对表达为A组(0.81±0.04)倍(P0.01),VCAM-1蛋白表达较A组明显降低(P0.01);miR-126inhibitor组miR-126mRNA表达较B组降低(0.032±0.011)倍(P0.01),VCAM-1mRNA水平较B组高(1.42±0.10)倍(P0.05),VCAM-1蛋白表达较B组明显升高(P0.05)。结论过表达miR-126在8h时下调VCAM-1的表达,提示miR-126可能通过抑制VCAM-1的表达,参与抑制脂多糖诱导的HUVEC的炎性反应。     

miRNA-126靶向抑制A549细胞迁移和侵袭能力的研究

目的研究microRNA-126（miR-126）对非小细胞肺癌（NSCLC）细胞迁移和侵袭能力的影响。方法利用脂质体介导法将十勾建的miR126过表达质粒转染至NSCI．C细胞株A549细胞（A549／miR-126组）,并设空质粒转染组（A549／MOCK组）和空白对照组（A549组）。利用RT-PCR技术检测3组细胞中EGFI。7（miR126的靶标）的表达水平,采川细胞划痕实验观察细胞迁移能力差异,采用Transwell小室法分析3组细胞侵袭能力的差异。结果RT—PCR检测A549／miR-126组、A549／MOCK组和A549组细胞中EGFI。7mRNA分别为2．32±0．088、1．43±0．026和1．00±0．000,差异有统计学意义（P〈0．01）;细胞划痕实验显示A549／miR—126组、A549jM（）CK组和A549组细胞平均迁移距离分别为3．0μm、2．65μm和0．5μm,平均抑制率分别为0、11．25％和83．75％,差异有统计学意义（P〈O．05）;Transwell小室实验显示,A549／miR126组24hr侵袭细胞数为（28．6±2．322）个,36h侵袭细胞数为（29．2±3．7683）个,A549／M（）CK组24h为（49．8±3．7014）个,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论miR-126可上调EGFL7mRNA的表达,并可能通过表达产物EGFI。7蛋白抑制A549细胞的迁移和侵袭能力。     

MicroRNA-129通过靶向调控HMGA2抑制胃癌细胞增殖、侵袭

背景:越来越多的研究表明microRNA在胃癌发生、发展中起重要作用。有研究表明miR-129在胃癌组织中表达异常,但其对胃癌细胞增殖、侵袭的作用仍不明确。目的:探讨miR-129在胃癌组织和胃癌细胞株中的表达及其影响胃癌细胞增殖和侵袭的机制。方法:收集82例胃癌组织及其相应癌旁组织,培养人胃黏膜上皮细胞株和不同的胃癌细胞株,以q PCR法检测miR-129表达。将miR-129 mimic或miR-NC转染胃癌SGC-7901细胞后,转染HMGA2过表达质粒。以克隆形成实验观察细胞增殖情况,Transwell小室法检测细胞侵袭情况,Pearson相关分析评估miR-129表达与HMGA2表达的相关性,荧光素酶实验检测荧光素酶活性,q PCR和蛋白质印迹法分别检测miR-129、HMGA2 mRNA和蛋白表达。结果:与癌旁组织相比,胃癌组织中miR-129表达明显下降(P0.05);与人胃黏膜上皮细胞株GES-1相比,各胃癌细胞株中miR-129表达明显下降(P0.05)。与miR-NC组相比,miR-129 mimic组SGC-7901细胞增殖、侵袭能力均明显下降(P0.05)。胃癌组织中HMGA2 mRNA表达明显增加(P0.05),并与miR-129表达呈负相关(r=-0.543 9,P0.01)。野生型miR-129 mimic组荧光素酶活性显著低于miR-NC组(P0.05);转染miR-129 mimic后HMGA2 mRNA和蛋白表达显著降低(P0.05)。与miR-129+阴性对照组相比,miR-129 mimic+HMGA2组细胞增殖、侵袭能力明显升高(P0.05)。结论:miR-129在胃癌组织和细胞中低表达,其可通过下调HMGA2抑制SGC-7901细胞的增殖和侵袭。     

miR-126抑制非小细胞肺癌细胞系A549细胞的增殖、转移和侵袭

目的探讨miR-126在非小细胞肺癌(NSCLC)株A549细胞中的表达和生物学作用。方法通过qRT-PCR检测正常人肺上皮细胞16-HBE和A549细胞中miR-126的表达。将A549细胞分为空白组、对照组和miR-126过表达组,空白组不作任何处理,对照组和miR-126过表达组分别转染control-mimics和miR-126 mimic。并将A549细胞分为空白组、对照组和miR-126抑制剂组,空白组不作任何处理,对照组和miR-126抑制剂组分别转染control-inhibitors和miR-126 inhibitor。通过噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖能力,通过细胞划痕实验检测细胞迁徙能力,通过Transwell实验检测细胞侵袭能力。结果 A549细胞株中miR-126水平明显低于16-HBE细胞(P0.01)。与空白组和对照组相比,miR-126 mimic可明显降低A549细胞的增殖率,而miR-126 inhibitor可明显增加A549细胞的增殖率(P0.01)。miR-126 mimic转染后24 h的A549细胞的迁移和侵袭能力下降,转染miR-126 inhibitor后,A549细胞的迁移和侵袭能力提高(均P0.01)。结论 miR-126在肺癌细胞中表达下调,体外过表达可明显抑制A549细胞体外增殖、迁移和侵袭能力。     

过表达miR-150通过PI3K/AKT信号通路调控结直肠癌细胞凋亡的机制研究

目的探讨过表达miR-150通过磷脂酰肌醇-3-羟激酶/丝苏氨酸蛋白激酶(phosphatidylinositol 3-hydroxykinase/seronine kinase,PI3K/AKT)信号通路调控结直肠癌细胞凋亡的机制。方法将体外培养HT-29细胞分为空白对照组(转染空脂质体) NC组(转染mimic)和miR-150(转染miR-150 mimic);采用RT-PCR检测转染后细胞中miR-150 mRNA水平; CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡; WB法检测Cleaved caspase3、PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT蛋白表达。将对数生长期HT-29分为阴性对照组、miR-150组、LY294002组和LY294002+miR-150组,采用PI3K抑制剂验证LY294002在HT-29细胞凋亡中的作用。结果与空白对照组和NC组相比,miR-150组细胞中miR-150 mRNA水平明显升高(P 0. 05),24 h、48 h、72 h和96h的细胞抑制率明显升高(P 0. 05),细胞凋亡率明显升高(P 0. 05),Bcl-2/Bax、p-PI3K/PI3K和p-Akt/Akt蛋白的表达明显降低(P 0. 05),cleaved Caspase-3蛋白的表达明显升高(P 0. 05);与阴性对照组相比,miR-150组和LY294002组p-Akt/Akt和Bcl-2/Bax蛋白表达均明显降低(P 0. 05),cleaved Caspase-3蛋白表达明显升高(P 0. 05);与miR-150组相比,LY294002+miR-150组p-Akt/Akt和Bcl-2/Bax蛋白表达均明显升高(P 0. 05),cleaved Caspase-3蛋白表达明显降低(P 0. 05)。结论 miR-150过表达可能通过负调控PI3K/AKT信号通路抑制人结直肠癌细胞的增殖,促进其凋亡。     

miR-132在动脉粥样硬化中的表达及对缺氧诱导的血管内皮细胞增殖凋亡的影响

目的探讨miR-132在动脉粥样硬化表达及对缺氧诱导的血管内皮细胞增殖凋亡的影响。方法 RT-PCR检测动脉粥样硬化中miR-132的表达;空转染组、阴性对照组和miR-132抑制剂组转染人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs),转染48 h后RT-PCR检测各组细胞中miR-132 mRNA表达;后续实验分为正常培养组、缺氧组、缺氧+miR-132抑制剂组,各组细胞培养48 h后,CCK8及流式细胞仪分别检测细胞的增殖及凋亡情况;Western印迹检测活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Cleaved Caspase)3、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)蛋白表达。结果 miR-132在动脉硬化组中的表达显著高于对照组(P0.05);转染组miR-132 mRNA表达显著低于空转染组(P0.05);缺氧组和缺氧+miR-132抑制剂组OD_(490)值及PI3K、p-AKT蛋白表达均显著低于正常培养组(P0.05),细胞凋亡率及Cleaved Caspase3蛋白表达显著高于正常培养组(P0.05),缺氧+miR-132抑制剂组OD_(490)值及PI3K、p-AKT蛋白表达显著高于缺氧组,细胞凋亡率及Cleaved Caspase3蛋白表达显著低于缺氧组(P0.05)。结论 miR-132在动脉粥样硬化中高表达,抑制其表达可促进血管内皮细胞增殖及降低细胞的凋亡,其机制与激活PI3K/AKT信号通路有关。     

miR-451对胶质瘤LN229细胞YWHAE表达的影响

目的观察micro RNA-451(miR-451)对胶质瘤LN229细胞YWHAE表达的影响,旨在验证YWHAE基因为miR-451的直接作用靶点。方法将细胞分为miR-451转染组、无义序列组、对照组,分别加入5 pmol miR-451mimics、无义序列、PBS与5μL Lipofectamine 2000混匀20 min,继续培养48 h。将细胞分6组,A组只转染突变型pEZX-MT01-YWHAE-3’-UTR质粒,B组共转染突变型pEZX-MT01-YWHAE-3’-UTR质粒与无义序列,C组共转染突变型pEZX-MT01-YWHAE-3’-UTR质粒与miR-451 mimics,D组只转染野生型pEZX-MT01-YWHAE-3’-UTR,E组共转染野生型pEZX-MT01-YWHAE-3’-UTR与无义序列,F组共转染野生型pEZX-MT01-YWHAE-3’-UTR与miR-451mimics,均与5μL Lipofectamine 2000混匀20 min,继续培养48 h。实时定量PCR法检测细胞miR-451、YWHAE基因表达,Western blot法检测YWHAE蛋白表达。结果对照组、无义序列组、miR-451转染组LN229细胞miR-451基因相对表达量分别为1、1.045、98.534。A～F组荧光素酶相对活性分别为5.042±0.177、5.588±0.684、4.980±0.268、5.265±0.692、5.370±0.443、3.272±0.351,F组与其他各组两两比较,P均<0.01。miR-451转染组细胞YWHAE蛋白相对表达量为0.283±0.081,较对照组(1.612±0.113)、无义序列组(1.833±0.195)明显降低(P均<0.01)。对照组、无义序列组、miR-451转染组LN229细胞YWHAE基因相对表达量分别为1、0.941、0.618。结论miR-451可以明显抑制YWHAE基因的表达,YWHAE是miR-451的直接作用靶点。     

miR-16通过靶向调控YAP1基因表达影响肺癌细胞的增殖

目的探讨miR-16通过靶向调控Yes相关蛋白(YAP) 1基因表达影响肺癌细胞的增殖。方法采用RT-PCR法检测miR-16在不同肺癌细胞株及人正常胚肺细胞中的表达。脂质体LipofectamineTM3000将miR-16 mimics和miR-16NC转入肺癌细胞中,RT-PCR检测miR-16表达,MTT法检测细胞活力,软琼脂糖克隆形成实验检测细胞克隆数目,Ho-echst33258检测细胞凋亡,流式细胞术检测细胞周期,RT-PCR法及Western印迹检测细胞中YAP1蛋白及mRNA表达,并进行荧光素酶报告基因分析。结果 miR-16在A549、H1050、H1299、NCI-H520、NCI H596及MIRC-5中的表达分别为(0. 38±0. 03)、(1. 35±0. 01)、(1. 10±0. 11)、(1. 43±0. 14)、(1. 56±0. 15)、(2. 38±0. 25);与MIRC-5比较,肺癌细胞中miR-16表达量下调(P<0. 01),且在A549细胞中表达量最低,因此选为后续实验研究对象。与miR-16 NC组比较,miR-16 mimics组miR-16表达量显著提高(P<0. 01);且转染24、48、72 h后,细胞活力均下降(P<0. 01);转染48 h后,细胞克隆形成数目减少(P<0. 01),细胞凋亡率提高(P<0. 01),细胞周期阻滞于G1期(P<0. 01);同时,miR-16 mimics能够靶向调控YAP1,下调YAP1蛋白及mRNA表达(P<0. 01)。结论 miR-16 mimics通过靶向下调YAP1表达进而抑制A549细胞增殖。     

微小RNA-221对HepG2细胞增殖及其凋亡的影响

目的 探讨微小RNA-221(miR-221)对肝癌细胞株HepG2细胞增殖与凋亡的影响.方法 将miR-221阻遏物及模拟物转染至HepG2后,用实时荧光定量RT-PCR检测miR-221的表达水平;用细胞增殖试剂盒、Hoechst 33342及碘化丙啶(PI)双重染色、流式细胞仪及caspase3/7活性试剂盒检测HepG2细胞增殖与凋亡情况.对数据进行多样本的单因素方差分析,两两比较采用LSD法;相关性比较用Pearson检验.结果 RT-PCR结果显示,转染miR-221阻遏物后其表达受到抑制,而转染miR-221模拟物可促进其表达.细胞增殖试剂盒及Hoechst 33342/PI染色结果显示,48 h后miR-221阻遏物明显抑制HepG2细胞增殖(P＜0.05),而miR-221模拟物促进HepG2细胞增殖(P＜0.05),两种方法结果呈正相关(r=0.993,P＜0.01).流式细胞仪检测细胞周期显示,miR-221模拟物组G1期细胞比例(47.6%±1.53%)明显低于空白对照组(59.00%±1.00%)及阴性对照组(58.00%±1.00%,F=81.77,P＜0.01); S期细胞比例(20.33%±1.15%)明显高于空白对照组(11.00%±1.00%)及阴性对照组(12.00%±1.00%,F=70.90,P＜0.01).Hoechst 33342/PI染色、流式细胞仪膜联蛋白V凋亡试剂盒检测均显示,转染miR-221阻遏物48 h后,细胞凋亡和坏死增加(P＜0.05),差异有统计学意义.Caspase-3/7试剂盒检测caspase-3/7活性变化结果显示,转染miR-221阻遏物24 h后,细胞caspase3/7活性明显增高(P＜0.05),差异有统计学意义.结论 miR-221可促进肝癌细胞生长增殖,抑制miR-221表达可诱导细胞凋亡.miR-221有望成为治疗肝癌新的分子靶点之一.     

微小RNA-124-3p对自发性高血压大鼠心肌线粒体功能和PI3K/AKT信号通路的调控作用

目的 探究微小RNA(miR)-124-3p对自发性高血压(SHR)大鼠心肌线粒体功能和PI3K/AKT信号通路的调控作用。方法 45只SHR大鼠分为SHR组、SHR+miR-124-3p 激动剂(agomir)和SHR+miR-124-3p 拮抗剂(antagomir)组,每组各15只,另选15只健康大鼠为对照组。通过尾静脉注射miR-124-3p agomir和miR-124-3p antagomir(300 μg)以提高和抑制心肌细胞中miR-124-5p的水平。4周后检测各组大鼠心肌酶指标、心肌组织中miR-124-3p、细胞凋亡水平、线粒体凋亡标志蛋白[细胞色素C(Cyt C)、caspase9、cleaved caspase3]、PI3K/AKT通路水平。双荧光素酶报告实验验证miR-124-3p和PI3K的靶向关系。将心肌细胞分为miR-124-3p NC组和miR-124-3p mimic组,细胞分别转染miR-124-3p NC和miR-124-3p mimic,检测各组细胞中miR-124-3p和PI3K蛋白水平。结果 对照组、SHR组、SHR+miR-124-3p agomir和SHR+miR-124-3p antagomir组大鼠心肌组织中的miR-124-3p水平分别为(0.87±0.12)、(2.56±0.38)、(4.51±0.86)和(1.13±0.16)。四组大鼠各项指标比较差异有统计学意义(P0.05)。SHR组的乳酸脱氢酶[(LDH,1982.35±207.44)IU/L]、肌酸激酶同工酶[(CK-MB,942.55±107.62)IU/L]、凋亡细胞数目[(27.18±2.10)个]、Cyt C、caspase9和cleaved-caspase3蛋白表达量显著高于对照组,PI3K和AKT mRNA和蛋白表达量显著低于对照组(P0.05)。SHR+miR-124-3p agomir组的LDH[(2371.92±244.26)IU/L]、CK-MB[(1301.42±135.49)IU/L]、凋亡细胞数目[(52.76±3.56)]个、Cyt C、caspase9和cleaved-caspase3蛋白表达量显著高于SHR组,PI3K和AKT mRNA和蛋白表达量显著低于SHR组(P0.05)。SHR+miR-124-3p antagomir组的LDH[(1624.43±176.31)IU/L]、CK-MB[(722.41±78.43)IU/L]、凋亡细胞数目[(11.85±0.97)个]、Cyt C、caspase9和cleaved-caspase3蛋白表达量显著低于SHR组,PI3K和AKT mRNA和蛋白表达量显著高于SHR组(P0.05)。双荧光素酶报告结果表明miR-124-3p与PI3K靶向结合。MiR-124-3p mimic组的miR-124-3p水平显著高于miR-124-3p NC组,PI3K mRNA和蛋白的表达水平显著低于miR-124-3p NC组(P0.05)。结论 SHR大鼠心肌组织中miR-124-3p升高,其水平会抑制PI3K/AKT加剧线粒体凋亡途径,导致心肌细胞凋亡。     

miR-202通过靶向EGFR抑制A549细胞的增殖和侵袭

目的探索miR-202对非小细胞肺癌A549细胞增殖和侵袭的影响及其分子机制。方法实验分为5组,包括miR-NC组,shNC组,miR-202组,shEGFR组和miR-202+EGFR组。五组细胞分别转染miR-NC,sh-NC,miR-202 mimics,shEGFR和miR202+pcDNA3.1-EGFR。采用双荧光酶报告基因法验证miR-202对EGFR的靶向性。实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹法用于检测A549细胞中mRNA和蛋白的表达。采用流式细胞术检测细胞周期。细胞克隆形成和Transwell法用于检测细胞的增殖和侵袭能力。结果双荧光素酶报告基因实验证实miR-202与EGFR的3’-UTR片段结合。miR-202组的miR-202的表达显著高于miR-NC组(P0.05)。转染miR-202 mimics或shEGFR可以显著下调EGFR的mRNA和蛋白表达水平(P0.05),而转染pcDNA3.1-EGFR可以上调因转染miR-202 mimics而下调的EGFR mRNA和蛋白表达水平(P0.05)。过表达miR-202或者敲低EGFR可以使A549的细胞周期停滞在G0/G1期(P0.05),同时抑制A549细胞的增殖和侵袭能力(P0.05)。通过转染pcDNA3.1-EGFR可以逆转过表达miR-202对A549细胞增殖和侵袭的抑制(P0.05)。过表达miR-202通过靶向EGFR显著下调p-PI3K/PI3K,p-AKT/AKT和p-ERK1/2/ERK1/2等蛋白表达的比值(P0.05)。结论 miR-202靶向EGFR抑制PI3K/AKT和MAPK/ERK信号通路,影响A549细胞的增殖和侵袭,可能成为非小细胞肺癌临床治疗的新靶点。     

miR-200通过靶向PD-L1抑制非小细胞肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的研究

目的探讨miR-200对非小细胞肺癌A549细胞的增殖、迁移和侵袭的影响及其与程序性死亡受体配体-1(Programmed death-ligand 1,PD-L1)的靶向关系。方法选取非小细胞肺癌细胞株A549,正常肺成纤维细胞HLF-1为研究对象,根据A549细胞转染物质的不同,分为NC组(未进行任何处理的A549细胞)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-200组(转染miR-200-mimic)、si-NC组(转染si-NC)、si-PD-L1组(转染si-PD-L1)、miR-200+pEGFP组(转染miR-200-mimic+pEGFP)及miR-200+pEGFP-PD-L1组(转染miR-200-mimic+pEGFP-PD-L1)。采用实时荧光定量PCR法检测细胞中miR-200表达水平;MTT检测细胞增殖能力;Transwell小室实验检测细胞迁移、侵袭能力;Western blot检测细胞PD-L1表达水平;荧光素酶实验验证miR-200与PD-L1的靶向关系。结果与HLF-1相比,A549细胞胞miR-200表达水平降低,PD-L1基因、蛋白表达升高(P0.05)。48和72 h时,miR-200组细胞活力、迁移和侵袭数量明显低于NC组、miR-NC组(P0.05)。48和72 h时,si-PD-L1组细胞活力、迁移和侵袭数量明显低于NC组、si-NC组(P0.05)。miR-200+pcDNA-PD-L1组细胞48、72 h时细胞活力、细胞迁移和侵袭数量高于miR-200+pcDNA组、miR-200组(P0.05)。与对照组相比,A549细胞PD-L1野生型质粒组荧光素酶活性明显降低(P0.05),PD-L1突变型质粒组荧光素酶活性无明显变化(P0.05)。结论 miR-200可负性调控PD-L1抑制非小细胞肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭。     

miR-214对多发性骨髓瘤细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响及其机制

目的 探讨多发性骨髓瘤(MM)细胞中微小RNA-214(miR-214)的表达对瘤细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响及其机制。方法 采用RT-qPCR法检测MM细胞株IM-9、U266、Lp-1、H929及人正常浆细胞中miR-214的表达。取U266细胞，随机分为miR-214 mimics组和mimics-NC组，分别转染miR-214 mimics和mimics-NC至两组U266细胞，RT-qPCR法检测转染后两组细胞miR-214的表达差异采用平板克隆形成实验、CCK-8实验、流式细胞术分别检测转染后两组细胞集落形成数目，24、48、72、96 h时OD值以及凋亡率和细胞周期占比的差异，Western blotting法检测转染后两组细胞中FOXM1蛋白表达差异。结果 miR-214在IM-9、U266、Lp-1、H929细胞中的表达低于正常浆细胞(P均<0.05)。转染后，与mimics-NC组相比，miR-214 mimics组U266中miR-214表达升高(P<0.05)，集落形成数目下降(P<0.05),24、48、72、96 h时OD值降低(P均&l...     

miR-34a逆转非小细胞肺癌A549/DDP细胞对顺铂的耐药性及其机制

目的探讨过表达miR-34a对非小细胞肺癌A549/DDP细胞顺铂(DDP)耐药性的影响及可能机制。方法成功构建过表达miR-34a的真核载体p CDNA3.1+miR-34a后,将A549/DDP细胞分为对照组(无转染)、空转染组(转染空质粒)和过表达组(转染p CDNA3.1+miR-34a),采用实时荧光定量PCR(q PCR)法检测转染24、48、72及96 h后各组miR-34a水平;给予不同浓度DDP(2、4、8、16、32和64μg/ml)处理48 h后采用CCK-8法比较各组对DDP的敏感性,流式细胞仪PI/Annexin V双染法检测各组转染48、96 h后的凋亡率,分别采用Western印迹检测各组转染48、96 h后常见耐药基因的表达情况。结果 A549/DDP细胞的miR-34a水平均低于其亲本细胞A549和正常支气管上皮细胞系HBE(P0.05);与其余两组相比,过表达组转染后的miR-34a水平升高,且对A549/DDP细胞的增殖抑制率升高(P0.05);过表达组的半数抑制浓度均低于其余两组,过表达组转染48、96 h后的凋亡率高于其余两组,而转染48 h后的P-糖蛋白、多药耐药相关蛋白1及肺耐药相关蛋白的水平低于其余两组(P0.05);对照组和空转染组以上指标的差异均无统计学意义(P0.05)。结论 A549/DDP细胞中miR-34a水平较低,通过真核载体将其过表达后可抑制增殖率并提高其对DDP的敏感性,可能与其诱导凋亡及降低耐药基因的表达有关。     

心房颤动相关微小RNA4279靶向调控钙通道蛋白

目的采用双荧光素酶报告基因等手段,探讨心房颤动(房颤)相关微小RNA4279(miR-4279)与房颤相关离子通道蛋白的靶向调控关系。方法利用在线数据库Targetscan,miRanda,miRDB预测可能的靶基因后,分别将靶基因的重组荧光素酶报告质粒与miR-4279及阴性对照质粒共转染于人胚胎肾HEK293细胞,实验分为转染组,阴性组和空白组检测各组相对荧光素酶的活性。并将miR-4279模拟体导入大鼠胚胎心肌H9c2细胞,观察其对靶基因的表达调控。结果 CACNA1C基因转染中,与阴性组比较,转染组相对荧光素酶活性降低18%(0.300±0.012 vs 0.366±0.011,P<0.01),转染组CACNA1C基因mRNA表达水平下调31%(0.820±0.058 vs 1.193±0.060,P<0.01),miR-4279模拟体转入H9c2细胞可抑制CACNA1C基因的表达。结论电压门控L型钙通道α亚基CACNA1C基因可能是miR-4279的直接靶基因,miR-4279可能通过抑制CACNA1C表达参与房颤电重构,有可能成为未来房颤干预治疗的靶点。     

microRNA-21靶向调控Wnt2基因对肝癌细胞HepG2增殖与迁移的影响

目的探讨分析microRNA-21(miR-21)靶向调控Wnt2基因对肝癌细胞HepG2增殖与迁移的影响。方法采用实时荧光定量PCR法检测肝癌细胞HepG2及正常肝细胞株LO2 miR-21的表达情况。对HepG2细胞转染miR-21抑制剂,分析转染后抑制剂组与对照组miR-21的表达情况、细胞增殖、迁移及凋亡情况,检测两组细胞Wnt2蛋白表达水平,并采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-21与Wnt2基因的关系。计量资料两组间比较采用t检验。结果 HepG2细胞miR-21相对表达水平明显高于LO2细胞(1. 978±0. 035 vs 1. 586±0. 022,t=16. 424,P 0. 05)。转染miR-21抑制剂后,抑制剂组miR-21相对表达水平较对照组显著降低(0. 857±0. 017 vs 1. 684±0. 039,t=33. 669,P 0. 05)。转染miR-21抑制剂24、48、72 h后,抑制剂组HepG2细胞增殖能力均较对照组显著降低(P值均0. 05);抑制剂组穿过Tranwell小室的细胞数显著低于对照组(83. 72±15. 06 vs 147. 85±20. 64,t=4. 347,P 0. 05);抑制剂组细胞凋亡率明显高于对照组(25. 67%±3. 95%vs 10. 27%±2. 14%,t=5. 937,P 0. 05)。抑制剂组HepG2细胞的Wnt2相对表达水平明显低于对照组(0. 862±0. 127 vs 1. 306±0. 218,t=3. 048,P 0. 05)。TargetScan软件显示,miR-21抑制剂可显著抑制野生型Wnt2-3'UTR质粒转染细胞的荧光素酶活性(0. 972±0. 102 vs 0. 612±0. 092,t=4. 219,P 0. 05),而对突变型Wnt2-3'UTR质粒转染细胞的荧光素酶活性并无明显影响(0. 982±0. 093 vs 0. 911±0. 128,t=0. 972,P 0. 05)。结论抑制miR-21表达可有效抑制HepG2细胞增殖和迁移,促进HepG2细胞凋亡,并抑制Wnt信号通路的过度激活,可能成为肝癌治疗的潜在靶基因之一。     

PCa组织Mfn2 mRNA表达及转染Mfn2过表达质粒的人PCa细胞株增殖、迁移、侵袭、凋亡观察

目的 观察前列腺癌（PCa）组织Mfn2 mRNA表达及转染Mfn2过表达质粒的人PCa细胞株增殖、迁移、侵袭、凋亡情况。方法 体外培养人PCa细胞株（PC3细胞和DU145细胞），分别转染Mfn2过表达质粒、空白载体质粒及不转染质粒，PC3细胞分别记为A、B、C组，DU145细胞分别记为D、E、F组。CCK-8实验检测各组细胞OD值，细胞集落形成实验测算各组细胞集落数目，以OD值和细胞集落数目表示细胞增殖能力。细胞划痕实验测算各组细胞迁移率，以细胞迁移率表示细胞迁移能力。Transwell实验测算各组细胞侵袭数目，以细胞侵袭数目数表示细胞侵袭能力。流式细胞术测算各组细胞凋亡率，Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Cleaved caspase-3、caspase-3及PI3K/AKT通路相关蛋白（p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT）。结果 PCa、癌旁组织Mfn2 mRNA相对表达量分别为0.36±0.32、0.72±0.35，两者比较，P<0.05。与同组24 h比较，A、B、C组48和72 h的OD值增加（P均<0.05）；与同组48 ...     

微小RNA-126模拟物对肿瘤坏死因子α诱导的血管内皮细胞损伤的保护作用

目的探究微小RNA(miR)-126模拟物在肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的血管内皮细胞损伤中的作用及可能机制。方法体外培养人脐静脉内皮细胞株ECV304,随机进行如下处理:无特殊处理(对照组);加100μg/L TNF-α(TNF-α组);转染Lipofectamine 2000+100μg/L TNF-α(miR-126阴性组);转染miR-126模拟物+100μg/L TNF-α(miR-126模拟物组),每组设置6个重复样品。实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测细胞中miR-126表达情况;MTT法检测细胞增殖活性;酶联免疫吸附试验法检测细胞中白细胞介素(IL)6、IL-1β水平;流式细胞术检测细胞凋亡情况;免疫印迹法检测细胞中内皮细胞黏附分子1(VCAM-1)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)表达;双荧光霉素活性实验检测miR-126、HMGB1间的靶向关系。结果与对照组相比,TNF-α组、miR-126阴性组miR-126表达降低,细胞增殖率降低,IL-6、IL-1β水平升高,细胞凋亡率升高,VCAM-1、ICAM-1、HMGB1蛋白表达升高(均P0.05);与TNF-α组、miR-126阴性组相比,miR-126模拟组miR-126表达升高,细胞增殖率升高,IL-6、IL-1β水平降低,细胞凋亡率降低,VCAM-1、ICAM-1、HMGB1蛋白表达降低(均P0.05)。与miR-126阴性组+HMGB1 3’非编码区(UTR)-携带野生型(Wt)组相比,miR-126模拟物+HMGB1 3’UTR-Wt组荧光素酶活性降低(0.43±0.05比1.06±0.15,P0.05)。结论 miR-126模拟物可能通过降低炎症反应缓解TNF-α诱导的细胞损伤,实现对血管内皮细胞损伤的保护。