大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌质粒AmpC酶基因型及流行病学分析

目的研究大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中产质粒型AmpC酶株的比率、酶的基因型及其流行病学状况。方法收集本院、福建省立医院两家医院2004年9月至2005年3月的67株耐头孢西丁不重复大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌，用酶提取物三维试验检测高产AmpC酶；抽提高产AmpC酶株质粒，用PCR及产物序列分析确定质粒AmpC酶和13内酰胺酶的基因型；质粒转化试验定位耐药基因；ERIC-PCR指纹图确定产酶株间的同源关系。结果福州两家医院耐头孢西丁菌中产质粒型AmpC酶的发生率，大肠埃希菌分别为16．7％和10．5％，肺炎克雷伯菌则分别为8．0％和0。2株肺炎克雷伯菌产DHA-1型、4株大肠埃希菌产CMY-2型、1株大肠埃希菌产CMY-22型质粒AmpC酶；5株产CMY型AmpC酶的大肠埃希菌还分别同时产CTX—M-14、CTX—M-27、TEM-144和TEM-1型13内酰胺酶。7株菌中，1株肺炎克雷伯菌和3株大肠埃希菌可将头孢西丁耐药性转移给受体菌。7株产酶菌ERIC—PCR指纹图显示，2株肺炎克雷伯菌来自相同克隆，其余菌株来自不同克隆。结论福州地区发现产DHA-1型AmpC酶肺炎克雷伯菌和产CMY-2型及CMY-22型AmpC酶大肠埃希菌。CMY-22型AmpC酶和TEM-144型13内酰胺酶是国内外首次报道，GenBank登录号为DQ256079和DQ2560S0。     

产AmpC酶铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药机制的研究

目的研究产AmpC酶的铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药的分子机制。方法2003-2007年从临床标本中分离到铜绿假单胞菌220株，采用三维试验筛选产8内酰胺酶（包括AmpC酶）的铜绿假单胞菌，应用多重PCR检测产AmpC酶的铜绿假单胞菌质粒携带的AmpC耐药基因，应用荧光定量RT—PCR的方法检测染色体AmpC酶基因和oprD2基因的表达情况。结果共检出40株产口内酰胺酶的菌株，其中产AmpC酶、ESBLs、金属酶（MBL）和未知酶型铜绿假单胞菌的构成比分别是62．5％（25／40）、20％（8／40）、7．5％（3／40）和10％（4／40）。25株产AmpC酶菌株均有不同程度AmpC酶基因表达量升高，其中，仅1株细菌携带DHA质粒型AmpC酶基因，12株菌oprD2基因表达量减低，这些菌株均对亚胺培南耐药，13株菌oprD2基因表达量正常，其中仅5株菌对亚胺培南耐药；7株菌（占产AmpC酶菌株的28％，不产金属酶）的酶粗提物能微弱水解IPM，这7株菌AmpC酶基因的表达量均有明显升高，其中5株菌同时伴有oprD2基因表达量降低。结论铜绿假单胞菌产生的AmpC酶可做弱水解亚胺培南，且其水解亚胺培南可能与AmpC酶产生量有一定关系；产AmpC酶铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药的原因可能是细菌AmpC酶表达量增加和oprD2表达量减低两者共同作用的结果。     

单产超广谱β-内酰胺酶和同时产超广谱β-内酰胺酶、头孢菌素酶肺炎克雷伯菌的临床分布与耐药性分析

目的：了解武汉大学人民医院2003年3月至2005年3月间单产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）、同时产超广谱ESBLs＋头孢菌素酶（AmpC酶）肺炎克雷伯菌的临床分布及耐药性。方法：采用VITEK—AMS细菌鉴定系统进行细菌鉴定，药敏试验采用KB法，AmpC酶用三维试验法检测．结果分析采用WHONET5软件。结果：检出产ESBLs肺炎克雷伯菌131株，检出率为38-3％，检出产ESBLs＋AmpC酶肺炎克雷伯菌76株，检出率为22．2％，尿液与脓液中产ESBLs＋AmpC酶菌株、产ESBLs菌株检出率最高；在分科调查中，ICU病房产ESBLs菌株、产ESBLs＋AmpC酶菌株检出率最高；在年龄调查中，71—80岁组产ESBLs、ESBLs＋AmpC酶菌株检出率最高，检出率与年龄大致呈正相关。耐药性方面，单产ESBLs＋AmpC酶菌株较产ESBLs菌株呈现更复杂的多重耐药。结论：产ESBLs＋AmpC酶肺炎克雷伯菌的感染在临床上已广泛存在，多重耐药明显，临床应及时了解其耐药特点及变化趋势，以便合理使用抗生素。     

肺炎克雷伯菌超广谱β内酰胺酶及AmpC酶分析研究

目的：研究目前我国肺炎克雷伯菌中超广谱β内酰胺酶(ESBLs)及质粒介导AmpC酶产生情况。方法：以美国国家临床实验室标准委员会(NCCLS)推荐纸片扩散法确证试验检测肺炎克雷伯菌产ESBLs情况。以三维试验检测其产质粒介导AmpC酶情况。等电聚焦电泳测定所产粗酶的等电点。聚合酶链反应(PCR)检测β内酰胺酶亚型。DNA序列测定判断质粒介导AmpC酶的种类。结果：检出产ESBLs肺炎克雷伯菌37株，检出率17．5％(37／212)。三维试验检测出产质粒介导AmpC酶肺炎克雷伯菌2株，检出率0．9％(2／212)，此2株菌均同时产ESBLs。在所产ESBLs中，CTX—M型占83．8％(31／37)，其中CTX-M-1组占54．1％(20／37)，Toho-2组占29．7％(11／37)，CTX-M-1组：Toho-2组为1．8：1；SHV型占24．3％(9／37)。DNA测序结果，1株肺炎克雷伯菌所产质粒介导AmpC酶为DHA-1。结论：①肺炎克雷伯菌中ESBLs以CTX-M型为主。②在肺炎克雷伯菌中发现1株质粒介导AmpC酶为DHA-1。     

铜绿假单胞菌质粒介导的AmpC β-内酰胺酶耐药性检测

目的 研究铜绿假单胞菌质粒介导的AmpC β-内酰胺酶的耐药性，检测产AmpC酶株的耐药表型，为临床抗生素的合理使用提供实验室依据。方法 收集108株临床分离鉴定的铜绿假单胞菌，采用Kirby-Bauer药敏纸片法和头孢西丁三维试验（cefoxitin three dimensional test）方法检测出产AmpC酶阳性菌株，检测AmpC酶阳性菌株对12种抗生素的耐药表型。结果 在所收集临床分离的108株铜绿假单胞菌中，产AmpC酶铜绿假单胞菌28株，产AmpC酶菌株对多种抗生素耐药。结论 铜绿假单胞菌对多种抗生素耐药，产AmpC酶是铜绿假单胞菌对多种抗生素产生耐药的重要机制。     

胆道感染大肠埃希菌AmpC酶和超广谱β-内酰胺酶的检测及耐药分析

目的：探讨胆道感染患者中大肠埃希菌产AmpC酶和超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的情况及耐药分析。 方法：采用改良的酶提取物三维试验法检测ESBLs和AmpC酶，采用纸片扩散(K-B)法检测大肠埃希菌对18种抗生素的耐药率。结果： 110株大肠埃希菌中检出单产ESBLs 42株，AmpC酶12株，同时产AmpC酶和ESBLs共6株，检出率分别为38.2％、10.9％和5.5％；产酶菌株对抗生素的耐药率大部分均高于不产酶菌株。结论：胆道感染大肠埃希菌对β-内酰胺类抗生素耐药的主要原因是产生AmpC酶和ESBLs，对产酶菌株临床经验用药首选碳青霉烯类抗生素。     

产质粒介导AmpC酶肺炎克雷伯菌流行基因型及传播机制的研究

目的调查临床分离肺炎克雷伯菌产质粒AmpC酶的流行基因型和传播机制,以及时发现并监控这些高危菌群。方法收集临床分离的肺炎克雷伯菌,对头孢西丁耐药株采用酶提取物改良三维试验筛选高产AmpC酶株,采用聚合酶链反应(PCR)和DNA测序分析质粒介导AmpC酶的流行基因型,并通过质粒接合实验、肠杆菌科基因组内重复一致序列-PCR(ERIC-PCR)探讨流行基因型的传播机制。结果16株高产AmpC酶肺炎克雷伯菌中,DHA组10株,EBC组6株,未发现MOX组、CIT组、ACC组和FOX组质粒AmpC基因。对部分PCR产物进行序列分析,证实为DHA-1型和ACT-1样质粒AmpC基因。16株产AmpC酶菌株中10株质粒接合实验成功,DNA同源性分析显示16株质粒介导AmpC酶肺炎克雷伯菌分属于14种基因型。结论在临床分离肺炎克雷伯菌中发现DHA和EBC组质粒AmpC酶,其传播途径以水平传播为主导,产酶菌克隆垂直传播居次要地位,未发生同一克隆株的流行。     

尿培养分离的大肠埃希菌AmpC酶和超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）的检测及耐药分析

目的对尿培养分离的大肠埃希菌进行AmpC酶和ESBLs检测并分析其耐药机理，以指导临床合理用药。方法采用双纸片抑制协同法分别进行AmpC酶和ESBLs检测。结果110株大肠埃希菌AmpC酶和ESBLs检测率分别为2．7％（3／110）、35．5％（39／110），同时产AmpC酶和ESBLs检测率为1．8％（2／110），产酶菌株对抗生素的耐药率高于不产酶菌株。结论大肠埃希菌对β-内酰胺类抗生素耐药的主要原因是产生AmpC酶和ESBLs，临床经验用药可选碳青酶烯类抗生素。     

下呼吸道标本铜绿假单胞菌产AmpC酶和ESBLs的研究

目的了解临床下呼吸道标本分离铜绿假单胞菌耐药性、耐药表型、产AmpC酶和ESBLs情况，指导临床合理使用抗菌药物。方法收集2003年7月至2004年7月520株下呼吸道标本分离铜绿假单胞菌，VITEK全自动微生物鉴定仪（MIC法）进行铜绿假单胞菌的鉴定及对12种抗菌药物的药敏试验；通过药敏试验筛选出20株多重耐药菌行三维试验，分析这些菌株产AmpC酶、ESBLs的情况；PCR扩增及序列分析检测AmpC酶的基因型。结果①铜绿假单胞菌对12种抗菌药物的敏感率结果显示：对妥布霉素、哌拉西林-三唑巴坦、亚胺培南显示较好的敏感性。②三维试验表明：20株实验菌中2株产AmpC酶，其余18株未产ESBLs及AmpC酶。③PCR及序列分析表明：1株产AmpC酶的DHA1型，1株本实验中所用ampC引物不能扩增出ampC片段。结论必须重视铜绿假单胞菌AmpC酶和ESBLs检测；对于该菌引起的呼吸道感染采用碳青霉烯类、哌拉西林一三唑巴坦、头孢他啶、联合氨基苷类或环丙沙星是一个较好的选择。     

大肠埃希菌产质粒介导AmpC酶的基因型检测

目的 了解大肠埃希菌产质粒介导AmpC酶的现状及其基因型。方法 收集任一第三代头孢菌素和头孢两丁耐药的大肠埃希菌临床分离株42株．以改良三维试验检测超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）和AmpC酶。用碱裂解法提取质粒，应用多重聚合酶链反应（multiplex polymerase chain reaction，MPCR）对AmpC酶的基因进行检测。对PCR扩增阳性的样本进行基因测序以确定基因型。结果 42株大肠埃希菌中，经三维试验检测，单纯产ESBLs者18株（42．8％），单纯产质粒AmpC酶者4株（9．5％）．同时产质粒AmpC酶与ESBLs者1株（2．3％），5株AmpC酶三维试验阳性菌株，经PCR扩增其中4株扩增到了清晰的条带，1株扩增为阴性，PCR产物经测序分析其基因型均为DHA-1型。结论 大肠埃希菌临床分离株产ESBLs率较高，并己经出现了质粒介导的AmpC酶，其基因型为DHA-1型。     

大肠埃希菌超广谱β-内酰胺酶与AmpC酶耐药性分析

目的研究本地区大肠埃希菌产超广谱β-内酰胺酶与AmpC酶耐药性。方法收集临床分离无重复大肠埃希菌共116株,利用双纸片协同法检测超广谱β-内酰胺酶(ESBLs);利用3-氨基苯酚硼酸对AmpCβ-内酰胺酶的抑制作用检测表型AmpC酶。K-B法测定细菌对抗生素的耐药性。结果116株大肠埃希菌ESBLs阳性43株(37.1%),ESBLs与AmpC酶同时阳性10株(8.6%),表型未检出AmpC酶单独阳性株。大肠埃希菌的产酶株及非产酶株对碳青霉烯类100%敏感,但产酶株(尤其是同时产ESBLs与AmpC酶)比非产酶株耐药率高,多重耐药性更常见。结论从本院患者送检标本分离的大肠埃希菌中发现AmpC酶,应引起临床重视。碳青霉烯类药物可作为治疗产酶细菌感染的首选药物。     

阴沟肠杆菌β-内酰胺酶的检测与分型

目的：了解该地区临床细菌感染分离的标本中阴沟肠杆菌对抗菌药物的耐药性以及细菌产β-内酰胺酶的类型。方法在该地区医院通过细菌培养分离阴沟肠杆菌88例，用纸片扩散法进行药敏测定；通过改良三维实验检测临床耐药菌高产β-内酰胺酶及其分型。结果在研究菌株中，有17例菌株单产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs），占19．32％。有20例菌株单产AmpC酶，占22．73％。有5例菌株同时产AmpC酶和ESBLs ，占5．68％。有47例菌株AmpC酶和ESBLs均不产生，占52．27％。结论该地区临床分离的阴沟肠杆菌存在普遍耐药，将近一半的耐药菌产AmpC酶或/和ESBLs ，尚有52．27％的菌产生其他β-内酰胺酶。     

产新型广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌的筛选和耐药性研究

目的研究我院产新型肛内酰胺酶肺炎克雷伯菌（KP）的耐药现状，为临床用药提供合理依据。方法614株临床分离的无重复肺炎克雷伯菌，采用NCCLS表型筛选和确证试验检测ESBLs，酶提取物改良三维试验检测AmpC酶株，纸片协同试验检测金属p内酰胺酶；KB纸片法检测产酶株对11种抗菌药的体外抗菌活性；琼脂二倍稀释法测定9种抗生素对同时产AmpC酶和ESBLs菌株的最低抑菌浓度（MIC）。结果单产ESBLs的检出率为31．8％，单产AmpC酶的检出率为2．6％，同时产ESBLs和AmpC酶的检出率为1．1％，未检出产金属肛内酰胺酶的肺炎克雷伯菌。产ESBLs菌对多种抗生素的耐药性较非产酶株显著升高；产AmpC酶菌对含酶抑制剂抗生素耐药率比产ESBLs菌高；同时产ESBLs和AmpC酶株对多种抗生素耐药；三种酶型均未见亚胺培南耐药株。结论亚胺培南可作为治疗产ESBLs和AmpC酶肺炎克雷伯菌引起重症感染的首选药物；但产新型肛内酰胺酶菌株的多重耐药和交叉耐药现象十分严重，应高度重视产酶株的监测与控制。     

耐头孢西丁肺炎克雷伯菌ESBLs和AmpC酶的检测及耐药基因分析

目的 了解浙江省台州地区肺炎克雷伯菌ESBLs和AmpC -内酰胺酶产生情况及AmpC酶的耐药基因型别特征。 方法 采用VITEK-AMS60全自动细菌鉴定仪鉴定细菌,按CLSI推荐的确证试验检测ESBLs,采用头孢西丁纸片扩散法筛选疑产AmpC酶阳性菌株,通过酶粗提物三维试验确证产AmpC酶,并经PCR测序等实验分析该菌株的基因型。 结果 在对头孢西丁不敏感的86株肺炎克雷伯菌中,ESBLs和AmpC酶检出率分别为88.37%和77.91%;以同产ESBLs和AmpC酶为主要形式,占47.67%,单产ESBLs和单产AmpC酶分别占40.70%和30.23%;AmpC酶阳性菌株的耐药基因型:62株为DHA-1型、5株为ACT-1型。 结论 台州地区肺炎克雷伯菌产ESBLs和AmpC酶检出率较高,AmpC酶以DHA-1型为主。     

重症监护病房患者医院感染产-内酰胺酶和头孢菌素酶的肺炎克雷伯菌耐药性及基因型研究

目的 探讨重症监护病房(ICU)患者医院感染产-内酰胺酶(ESBLs)和头孢菌素酶(AmpC酶)的肺炎克雷伯菌耐药基因型及对常用抗菌药物的耐药特性,为临床合理用药提供参考依据。 方法 细菌鉴定采用VITEK-60型全自动微生物鉴定仪鉴定;ESBLs和药敏试验K-B纸片法按CLSI推荐的方法;产AmpC酶菌株筛选采用头孢西丁纸片扩散法;产AmpC酶菌株确证试验采用三维试验;通过酶粗提物头孢西丁三维试验、PCR测序等实验分析该菌株的基因型。 结果 97株肺炎克雷伯菌ESBLs和AmpC酶总检出率分别为31.96%和13.40%,其中,单产AmpC酶、同产AmpC酶+ESBLs及单产ESBLs菌株检出率分别为7.22%、6.19%和25.77%;13株产AmpC酶阳性菌株的耐药基因型均为DHA-1;产酶菌株对抗菌药物耐药率明显高于非产酶株。同产AmpC酶+ESBLs菌株耐药现象更为严重。 结论 ICU患者肺炎克雷伯菌产AmpC酶和ESBLs菌株检出率较高,AmpC酶基因型均为DHA-1型,产AmpC酶和ESBLs菌株对多种抗菌药物呈耐药状态。     

不同部位感染肺炎克雷伯菌产β-内酰胺酶检测及耐药性比较

目的了解引起儿童下呼吸道和肠道感染的肺炎克雷伯菌的耐药性及产β-内酰胺酶的差异性,指导临床合理使用抗菌药物。方法收集2008年1～12月儿科病房住院患儿痰标本和大便标本,分离、培养肺炎克雷伯菌作为受试菌,采用纸片扩散法检测产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs),采用三维试验检测AmpC酶,稀释法作药物敏感试验。结果 512株肺炎克雷伯菌中肺炎组386株,腹泻组126株,产ESBLs和AmpC酶216株,总检出率为42.2%,其中肺炎组183株,检出率为47.4%,腹泻组33株,检出率26.2%,肺炎组对选用抗菌药的总耐药率高于腹泻组。结论肺炎克雷伯菌耐药严重,肺炎组的耐药率明显高于腹泻组,且产ESBLs和AmpC酶。     

肠杆菌科细菌ESBLs和Amp C酶检测及耐药性分析

目的:探讨分析肠杆菌科细菌ESBLs和AmpC酶检测结果以及耐药性。方法:以2014年1月-2015年7月我院收治的患者标本培养的184株大肠杆菌为例,分别采用双纸片确诊试验和双纸片氯唑西林增效试验对细菌ESBLs和AmpC酶进行测定,并展开相应的药敏试验。结果:ESBLs菌检出率51.1%(94/184),AmpC酶菌检出率42.4%(78/184)。其中检出单产ESBLs菌86株(46.7%),单产AmpC酶菌71株(38.6%),产ESBLs菌+AmpC酶菌11株(6.0%),ESBLs菌和AmpC酶均不产16株(8.7%);单产ESBLs菌、单产AmpC酶菌、产ESBLs菌+AmpC酶菌对氨曲南、氨苄西林、阿米卡星、头孢噻肟的耐药性明显高于不产菌(P0.05)请认真核对!,另外所有肠杆菌对青霉素的耐药性明显较高(P0.05)。结论:肠杆菌产生耐药性主要与ESBLs菌、AmpC酶菌相关,临床实践中要加强关注,结合患者的具体情况合理选择药物,降低其耐药性以保证治疗效果。     

儿童感染肺炎克雷伯菌质粒型AmpC酶基因分型及随机扩增DNA多态性分析

目的了解儿童感染肺炎克雷伯菌的耐药情况、产质粒介导的AmpC酶的基因型别及产酶株的分子流行病学特征。方法采用K—B纸片法检测广州市儿童医院患儿感染的肺炎克雷伯菌的耐药情况；头孢西丁三维试验检测AmpC酶；多重PCR技术检测ampC基因并经DNA测序确定其基因型别；RAPD技术对产酶株进行DNA多态性分析。结果在分离到的110株肺炎克雷伯菌中，产质粒型AmpC酶肺炎克雷伯菌的分离率达17．3％，产酶株对头孢菌素类、头霉素类及复方β-内酰胺类抗生素高度耐药，但对亚胺培南仍全部敏感。多重PCR及DNA测序显示AmpC酶的基因型均为DHA型。多态性分析结果显示19株产AmpC酶菌株可分为15个谱型，其中A型有3株菌，B型、C型各两株，另12株菌谱型各不相同；C型两株产酶株分布于同一病区，而A型、B型产酶株则分布于不同病区。结论本地区儿童感染的肺炎克雷伯菌多重耐药情况严重；质粒介导的AmpC酶的检出率较高，其基因型为DHA型；产酶株主要为散发感染。     

肺炎克雷伯菌中DHA-1型质粒AmpC酶的流行分布

目的了解我院肺炎克雷伯菌中质粒头孢菌素β-内酰胺酶（AmpC酶）的流行分布及其基因型和耐药特征。方法用纸片扩散法对2003至2005年连续不重复的487株肺炎克雷伯菌进行产11pCp AmpC酶的筛选，对筛选阳性的细菌分别进行三维试验、多重聚合酶链反应（PCR）、型特异引物PCR及测序，以确定质粒AmpC酶的基因型，并对产质粒AmpC酶细菌进行药物敏感性实验和美国临床实验室标准化研究所（CLSI）推荐的超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）确认检测。结果487株肺炎克雷伯菌中，70株（14.4％）AmpC酶纸片筛选试验阳性（头孢西丁抑菌圈直径≤18mm）；22株（4.5％）三维试验阳性；21株（4．3％）细菌多重PCR阳性，经测序均为DHA-1型质粒AmpC酶，其中12株确认产ESBLs。2003年的质粒AmpC酶阳性率仅为1．3％，而2005年为6．7％，两者差异有统计学意义（P〈0．05）。结论我院肺炎克雷伯菌中质粒AmpC酶为DHA-1型，发生率为4．3％，且有逐年上升趋势。     

产酸克雷伯菌超广谱β内酰胺酶与AmpC酶耐药表型及基因型分析

目的了解呼吸道感染患儿产酸克雷伯菌超广谱β内酰胺酶（ESBLs）与AmpC酶的耐药表型和基因型。方法采用API及VITEK32鉴定菌株；琼脂稀释法检测MIC值；CLSI纸片确认实验检测ESBLs，3-氨基苯酚硼酸（APB）纸片增强法检测AmpC酶；基因芯片技术检测ESBLs与AmpC酶的基因型；并进行肠杆菌基因间共有重复序列（Enterobacterial repetitive intergenic consensus，ERIC）分型。结果165株产酸克雷伯菌ESBLs阳性129株（78．2％），ESBLs与AmpC酶同时阳性16株（9．7％），表型及基因型均未检出AmpC单独阳性株；CTX-M型是其主要基因型（89／109），产AmpC酶株的基因型仅见DHA型；ERIC分型显示多数耐药产酸克雷伯菌具有相同的分子型。产酸克雷伯菌的产酶株及非产酶株对碳青霉烯类100％敏感，但产酶株（尤其是同时产ESBLs与AmpC酶）比非产酶株耐药率高，多重耐药性更常见。结论儿童患者中产酸克雷伯菌产ESBLs分离率较高；ESBLs与AmpC酶的耐药基因型分别主要是CTX-M型和DHA型。