A型肉毒毒素对兔肌腱成纤维细胞抑制作用的实验研究

目的 探讨A型肉毒毒素在体外动物实验中对兔趾伸肌腱成纤维细胞的增殖活性的抑制作用,以及对相关细胞因子TGF-β1和bFGF表达的影响。方法 体外分离兔趾伸肌腱,培养肌腱成纤维细胞,采取CCK8实验检测A型肉毒毒素在不同浓度条件下对成纤维细胞活性的影响。ELISA试剂检测肌腱成纤维细胞中TGF-β1和bFGF的表达含量。结果 与对照组相比,不同浓度的A型肉毒毒素对肌腱成纤维细胞的增殖活性有不同程度的抑制作用,在30 U/mL浓度时,抑制作用较低浓度10 U/mL和高浓度50 U/mL更为明显。采用ELISA实验检测标本中TGF-β1和bFGF的表达含量。在三种A型肉毒毒素浓度条件下(10 U/mL、30 U/mL、50 U/mL),实验组中TGF-β1的表达浓度均低于对照组。在浓度为30 U/mL时,浓度降低最为明显(P0.05)。而实验组中bFGF的浓度均高于对照组,在浓度为30 U/mL时,浓度升高最为明显(P0.05)。结论 A型肉毒毒素能够明显抑制体外培养的兔肌腱成纤维细胞的增殖活性,降低TGF-β1的表达水平,提高bFGF的表达水平,在适合的浓度下,作用强度达到高峰,改善肌腱粘连症状。     

干扰素治疗病理性瘢痕的实验研究

目的：研究体外干扰素(INF)对瘢痕组织成纤维细胞(FB)中转化生长因子β1(TGF-β1)、血小板衍生生长因子BB(PDGF-BB)、基质金属蛋白酶(MMP-1)以及糖基转移酶(ppGalNAc-T2)的mRNA表达的影响，以求阐明干扰素对病理性瘢痕的作用机理。方法：组织块法培养瘢痕组织FB，传代后分成3组①对照组：生理盐水处理；②低浓度组：100U／ml INF-α2b处理；③高浓度组：10000U／ml INF-α2b处理；RT-PCR检测TGF-β1、MMP-1、PDGF-BB及pp-GalNAc-T2表达。结果：体外培养瘢痕FB经100U／ml及10000U／ml干扰素α-2b处理后，RT-PCR检测TGF-β1、PDGF-BB及ppGalNAc-T2表达降低，MMP-1表达升高，呈显著差异，且具有浓度依赖性。结论：干扰素α-2b对瘢痕FB具有抑制作用，其机理可能与多种细胞因子有关，如TGF-β1、PDGF-BB。     

干扰素治疗增生性瘢痕机理的研究

目的 在体外研究干扰素2b（INF α-2b）对瘢痕组织成纤维细胞转化生长因子-β1（TGF-β1）、基质金属蛋白酶-1（MMP-1）、血小板衍化生长因子-BB（PDGF-BB）以及糖基转移酶（ppGalNAc-T2）基因表达的作用，以求阐明干扰素对增生性瘢痕的作用机理。方法组织块法培养瘢痕组织成纤维细胞，传代后分成3组：①空白对照组：只加生理盐水处理；②低浓度组：用100u／ml INFα-2b处理；③高浓度组：用10000u／mlINFα-2b处理。RT-PCR检测TGF-β1、MMP-1、PDGF-BB和ppGalNAc-T2表达。结果体外培养瘢痕成纤维细胞经100u／ml及10000u／mlINFa-2b处理后。RToPCR检测TGF-β1、PDGF-BB及ppGalNAc-T2mRNA表达降低，MMP-lmRNA表达升高，呈显著差异，且具有浓度依赖性。结论 干扰素对瘢痕成纤维细胞具有抑制作用，其机理可能与多种细胞因子有关，如TGF-β1、PDGF—BB。     

慢性粒细胞白血病患者血清COX-2、bFGF及TGF-β1的表达及意义

目的检测不同分期慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)患者不同发展阶段血清环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,b FGF)及转化生长因子(transforminggrowth factor-β1,TGF-β1)的变化,并探讨其在CML的诊治和预后中的临床意义。方法 50例初诊患者[慢性期(chronic phase,CP)30例,加速期(accelerated phase,AP)10例,急变期(blast crisis,BC)10例]为CML组,健康体检者40例为正常对照,采用ELISA方法检测血清COX-2、b FGF及TGF-β1水平。结果初诊时,与对照组相比,CML组患者的血清COX-2及b FGF含量升高,而TGF-β1含量减低(P0.001)。CML组急变期、加速期患者血清b FGF及COX-2水平较慢性期患者增高,而TGF-β1水平减低(P0.001)。完全缓解(complete response,CR)时,CML患者血清b FGF及COX-2含量下降,而TGF-β1含量基本恢复到正常水平,与正常对照组比较,差异无统计学意义(P0.05);未达到缓解时,血清b FGF、COX-2及TGF-β1水平与CR组比较,差异有统计学意义(P0.001)。CML初诊患者治疗前血清b FGF、VEGF水平与TGF-β1呈负相关(P0.05)。结论 CML患者初诊时COX-2及b FGF高表达,TGF-β1低表达,治疗后,达到CR时,血清相关因子水平基本恢复正常,提示其与CML的发生、发展与血管生成有密切关系。因此,动态监测CML患者血清COX-2、b FGF及TGF-β1水平,可作为CML病情评估的重要参考指标。     

心肌成纤维细胞DDR2对整合素β1调控的机制研究

目的 探究心肌成纤维细胞盘状结构域受体(discoid domain receptor 2, DDR2)对于整合素(integrin)β1表达的调控分子机制。方法 体外培养成年SD大鼠心肌成纤维细胞,使用RNA干扰和高表达载体分别下调和上调DDR2的表达,Western blot法检测血管紧张素Ⅱ(angiogensinⅡ, AngⅡ)作用细胞后其整合素β1、细胞外信号调节蛋白激酶(extracellular signal-regulated kinase, Erk1/2)和转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1, TGF-β1)的表达水平。其后使用Erk1/2的特异性抑制剂PD98059以及TGF-β1的RNA干扰阻断相应信号通路,Western blot法再次检测AngⅡ刺激细胞后整合素β1的表达变化。结果 AngⅡ可以上调心肌成纤维细胞DDR2以及整合素β1的表达水平。DDR2的RNA干扰可以阻断AngⅡ引起的心肌成纤维细胞整合素β1的升高效应,同时降低了磷酸化Erk1/2(p-Erk1/2)和TGF-β1的表达水平。使用Erk1/2的特异...     

AG对大鼠纤维化肺成纤维细胞表达CTGF的影响

目的:探讨氨基胍(AG)对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导大鼠纤维化肺成纤维细胞表达结缔组织生长因子(CTGF)的影响。方法:采用体外细胞培养,免疫细胞化学技术,流式细胞术等技术,检测AG对大鼠纤维化肺成纤维细胞表达CTGF的影响。结果:TGF-β1诱导肺成纤维细胞转分化为肌成纤维细胞(MF),表达CTGF增强(P<0.05),AG抑制了TGF-β1的诱导作用(P<0.05),单独应用AG对肺成纤维细胞表达CTGF无影响。结论:AG能够削弱TGF-β1诱导大鼠纤维化肺成纤维细胞表达CTGF的能力。     

积雪草煎剂联合曲尼司特治疗纤维生成异常性皮肤病临床研究

目的:观察积雪草煎剂联合曲尼司特治疗纤维生成异常性皮肤病的临床疗效。方法:96例纤维生成异常性皮肤病患者按随机数字表法平均分为对照组和观察组。对照组48例予以曲尼司特治疗,观察组48例在对照组治疗基础上给予积雪草煎剂。比较两组患者临床相应指标、血清学指标及基质金属蛋白水平,同时比较临床疗效及并发症状况。结果:对照组有效率72.92%低于观察组有效率91.67%,差异具有统计学意义(P0.05);与治疗前比较,两组治疗后临床相应指标、血清学指标及基质金属蛋白水平均发生变化,观察组治疗后温哥华瘢痕量表评分、瘢痕厚度、瘢痕面积、疼痛视觉模拟评分及瘙痒视觉模拟评分低于对照组,观察组治疗后转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)低于对照组,碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,b FGF)高于对照组,观察组治疗后基质金属蛋白酶-2(matrix metallo preteinases-2,MMP-2)MMP-2、MMP-9水平低于对照组,MMP-2水平高于对照组,差异具有统计学意义(P0.05);两组间不良反应轻微,可以耐受,对研究未产生影响。结论:积雪草煎剂联合曲尼司特治疗纤维生成异常性皮肤病疗效确切,能降低成纤维细胞TGF-β1,增加b FGF合成,减少IL-6表达。     

煤工尘肺患者血清转化生长因子β1、成纤维细胞生长因子含量检测

目的:探讨转化生长因子(TGF-β1)和成纤维细胞生长因子(FGF)在煤工尘肺发生发展中的意义.方法:分别采用双抗体夹心ELISA法、ABC-ELISA法测定50例煤工尘肺患者和50例健康对照人群血清TGF-β1、FGF的含量.结果:煤工尘肺患者血清TGF-β1、FGF的含量分别为(60.24±17.57)μg/L、(209.72±59.71)ng/L,高于对照组的(42.81±11.01)μg/L和(77.58±52.82)ng/L.Ⅰ期煤工尘肺患者2指标血清水平与Ⅱ、Ⅲ期患者比较,差异无统计学意义(P＞0.05).尘肺患者血清TGF-β1与FGF水平呈正相关(r=0.419,P＜0.05).结论:TGFβ1和FGF可能与煤工尘肺的发生发展有关.     

胞内高迁移率族蛋白B1对高糖诱导的小鼠心脏成纤维细胞转化生长因子-β1表达的影响

目的:探讨胞内高迁移率族蛋白B1(HMGB1)在高糖诱导的小鼠心脏成纤维细胞表达转化生长因子-β1(TGF-β1)中的作用。方法:酶消化法分离3周C57/BL6小鼠心脏成纤维细胞,培养并传代,实验使用2～4代细胞,波形蛋白(vimentin)免疫细胞化学染色鉴定细胞。高糖培养不同时间(0,6,12,24,48h)后分别检测成纤维细胞HMGB1、TGF-β1 mRNA的表达量。在转染siRNA后再高糖培养心脏成纤维细胞6 h,RT-PCR检测HMGB1、TGF-β1 mRNA的水平。结果:与0h相比,高糖培养6,12,24,48 h后成纤维细胞HMGB1、TGF-β1 mRNA的表达都上调。转染HMGB1 siRNA后高糖培养6 h的成纤维细胞TGF-β1表达下调。结论:HMGB1可能参与调节高糖诱导的心脏成纤维细胞的TGF-β1的表达。     

转化生长因子β_1及胶原酶-1在慢性胰腺炎发病过程中的表达及其意义

目的 :观察转化生长因子β1( TGF-β1)蛋白、TGF-β1m RNA及胶原酶 -1 ( MMP-1 )在慢性胰腺炎发病过程中的表达和分布 ,探讨其在慢性胰腺炎形成过程中的作用及意义。方法 :通过制作犬慢性胰腺炎模型 ,采用免疫组化 SP法对 TGF-β1、MMP-1及采用原位杂交 ( ISH)法对 TGF-β1m RNA在慢性胰腺炎形成过程不同时期组织中的表达和分布进行研究。结果 :TGF-β1及 TGF-β1m RNA主要表达于间质的纤维组织、成纤维细胞、巨噬细胞及血管内皮细胞 ,MMP-1主要表达于间质的胶原纤维及成纤维细胞。 TGF-β1及 TGF-β1m RNA在慢性胰腺炎形成过程表达较强且持续存在。结论 :TGF-β1持续性高表达是造成慢性胰腺炎形成过程成纤维细胞增殖旺盛、细胞外基质过度沉积及胰腺组织进行性纤维化的重要因素 ,并且抑制 MMP-1的产生。     

生长因子在人肌腱细胞和皮肤成纤维细胞中的表达差异

目的对几种重要的生长因子在正常人体皮肤、肌腱中的表达差异进行研究.方法体外培养人肌腱细胞和人皮肤成纤维细胞,观察细胞的形态特点;用基因芯片、免疫组化、免疫细胞化学、RT-PCR的方法对肌腱细胞和成纤维细胞的几种生长因子进行检测及比较.结果所测生长因子中除转化生长因子-βⅡ型受体(TGF-βRⅡ)、类胰岛素生长因子-结合蛋白3(IGFBP3)外,其余在肌腱细胞和成纤维细胞中的表达均无明显的差异.结论人成纤维细胞与人肌腱细胞的生长因子表达基本相似,通过对皮肤成纤维细胞的某些特性的改造,可以使其成为构建组织工程化肌腱的种子细胞.     

生长因子在人肌腱细胞和皮肤成纤维细胞中的表达差异

目的 对几种重要的生长因子在正常人体皮肤、肌腱中的表达差异进行研究。方法 体外培养人肌腱细胞和人皮肤成纤维细胞，观察细胞的形态特点；用基因芯片、免疫组化、免疫细胞化学、RT-PCR的方法对肌腱细胞和成纤维细胞的几种生长因子进行检测及比较。结果 所测生长因子中除转化生长因子-βⅡ型受体(TGF-βRⅡ)、类胰岛素生长因子-结合蛋白3(IGF-BP3)外，其余在肌腱细胞和成纤维细胞中的表达均无明显的差异。结论 人成纤维细胞与人肌腱细胞的生长因子表达基本相似，通过对皮肤成纤维细胞的某些特性的改造，可以使其成为构建组织工程化肌腱的种子细胞。     

β1转化生长因子对瘢痕疙瘩成纤维细胞分泌相关的基质金属蛋白酶的影响

目的探讨β1转化生长因子（TGF-β1）对瘢痕疙瘩成纤维细胞分泌基质金属蛋白酶-1（MMP-1）、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）和金属蛋白酶组织抑制剂-1（TIMP-1）表达的调节作用,及TGF-β1与瘢痕的关系。方法培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞经TGF-β1处理,采用酶联免疫法（ELISA）测定瘢痕疙瘩成纤维细胞上清液中MMP-1、MMP-2和TIMP-1的水平。结果瘢痕疙瘩中成纤维细胞MMP-1、MMP-2和TIMP-1的生成量显著高于正常皮肤（P〈0.01）;加TGF-β1处理后,瘢痕疙瘩中成纤维细胞MMP-1的分泌量显著降低（P〈0.01）,MMP-2的分泌量显著升高（P〈0.01）,而TIMP-1的分泌量无显著改变（P〉0.05）。结论培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞显示MMP-1、MMP-2和TIMP-1增加,TGF-β1在生成调节过程中起重要作用。     

外源性IL-10对大鼠肝星形细胞生物学活性的影响

目的　用白细胞介素 - 1 0 (IL- 1 0 )干预在体外培养激活的以及用血小板衍生生长因子 (PDGF)进一步激活的肝星形细胞 (HSC)模型 ,观察 HSC增殖、凋亡、收缩及胶原与纤维化相关细胞因子的表达等生物学活性 ,了解 IL- 1 0对大鼠HSC生物学活性的影响 ,探讨 PDGF对 HSC的作用机制。　方法　体外培养大鼠肝星形细胞系 ,分别用 IL- 1 0、PDGF干预以及二者共干预 ,显微镜下观察细胞收缩情况 ;采用四甲基偶氮唑盐 (MTT)比色法观察干预前后细胞增殖状况的改变 ,用半定量 RT- PCR方法检测各组 、 型胶原、转化生长因子 - β1 (TGF- β1 )、表皮生长因子 (EGF)、成纤维细胞生长因子 (FGF)及 Fas/ Fas L m RNA表达情况 ;用免疫细胞化学方法检测 IL- 1 0、PDGF干预 型胶原蛋白表达的影响。　结果　 PDGF显著增强 HSC收缩与增殖 ,促进 、 型胶原及 TGF-β1 、FGF的表达 ;IL - 1 0显著增强 HSC表达 Fas L ,并可在一定程度上抑制 HSC的增殖以及对 TGF-β1 、FGF的表达 ;IL - 1 0可显著抑制 PDGF的促收缩、增殖及促 、 型胶原、TGF-β1 表达等作用。　结论　 IL - 1 0对 HSC的增殖、收缩以及表达 、 型胶原、TGF-β1 、FGF等多方面生物学活性有一定的抑制作用。抗肝纤维化机制可能通过 Fas/ Fas L途径诱导 HSC凋亡     

血管生成因子在咽喉部恶性黑色素瘤的表达及与血管生成的关系

目的　研究血管内皮生长因子 (VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子 (b FGF)、转化生长因子β1 (TGF-β1 )及其受体和肿瘤源性粘附因子 (TAF)在咽喉部恶性黑色素瘤中的表达特点 ,以及它们与肿瘤内微血管密度(MVD)和病人预后的关系。　方法　应用免疫组织化学和形态计量方法检测 2 8例咽喉部恶性黑色素瘤 MVD、VEGF、b FGF、TGF- β1 及其受体和 TAF的表达 ,并应用多因素 Cox比例风险模型检测上述因素和病人预后的关系。　结果　 2 8例咽喉部恶性黑色素瘤中 ,VEGF阳性 19例 (6 7.9% ) ,b FGF阳性 2 1例 (75 .5 % ) ,TGF- β1 阳性 16例 (5 7.1% ) ,TAF阳性 18例 (6 4.3% )。血管生成因子与其受体表达具有一致性 ,并与 MVD值显著相关。Cox模型分析显示 MVD和 VEGF是影响咽喉部恶性黑色素瘤的重要因素 (P<0 .0 5 )。　结论　 VEGF、b FGF、TGF- β1 和TAF是咽喉部恶性黑色素瘤中血管生成的重要因子 ,并通过促进血管生成影响病人的预后。其中 MVD和 VEGF是评估咽喉部恶性黑色素瘤病人预后的重要指标。     

PDTC对TGF-β_1诱导的大鼠纤维化肺成纤维细胞转分化的影响

目的:通过核因子-κB(NF-κB)抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)探讨NF-κB对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的肺成纤维细胞转分化的影响。方法:采用体外细胞培养,免疫细胞化学技术,流式细胞术等技术,检测PDTC对TGF-β1诱导的成纤维细胞表达α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的影响。结果:TGF-β1诱导肺成纤维细胞转分化为肌成纤维细胞(MF),表达α-SMA增强(P<0.05),PDTC抑制了TGF-β1的诱导作用(P<0.05),单独应用PDTC对肺成纤维细胞转分化无影响。结论:NF-κB促进TGF-β1诱导肺纤维化模型中肺成纤维细胞转分化成MF。     

醛固酮对心脏成纤维细胞转化生长因子β1的影响

目的 探讨醛固酮对心脏成纤维细胞转化生长因子β1(TGF-β1)的影响.方法 采用胰酶消化法和差速贴壁分离法获取新生大鼠心脏成纤维细胞,应用ELISA、Western-Blot、RT-PCR的方法分别测定不同条件下心脏成纤维细胞培养液中TGF-β1水平和心脏成纤维细胞中的TGF-β1含量,以及TGF-β1 mRNA 的表达.结果 醛固酮(10-9、10-8和10-7 mol/L)可剂量依赖性地促进心脏成纤维细胞TGF-β1 mRNA的表达以及TGF-β1的合成和分泌,同时醛固酮(10-7 mol/L)以时间依赖的方式促进TGF-β1 mRNA的表达,在作用4h后表达开始增加,8 h达高峰.提前给予螺内酯(10-6 mol/L)能抑制醛固酮(10-7 mol/L)的上述作用.结论 醛固酮能促使心脏成纤维细胞TGF-β1 mRNA的表达以及TGF-β的合成和分泌,且此作用可能是通过盐皮质激素受体介导的.     

四君子加川牛膝方对大鼠下肢难愈性创面组织成纤维细胞及相关细胞因子的影响

目的:探讨四君子加川牛膝方促进大鼠下肢难愈性创面愈合可能的作用机制,以及引经药川牛膝的作用。方法:建立SD大鼠右下肢难愈性创面模型,随机分为生理盐水组、四君子加川牛膝方组、四君子汤组、川牛膝方组,各组分别给予生理盐水及相应中药灌胃处理。在创面愈合过程中(造模后的第7天、第14天),取创面新生肉芽组织及血液,检测血清碱性成纤维生长因子(b FGF)、转化生长因子-β1(TGF-β1)水平的变化,并应用流式细胞仪检测成纤维细胞的S期细胞比例。结果:(1)造模后第7天,四君子汤组及四君子加川牛膝方组TGF-β1、b FGF浓度明显高于生理盐水组(P0.05),而川牛膝方组与生理盐水组无明显变化(P0.05),其中四君子汤组与四君子加川牛膝方组间比较无明显差异(P0.05);造模后第14天,各组间TGF-β1、b FGF浓度比较均无明显差异(P0.05)。(2)造模后第7天,各药物组成纤维细胞G0/G1期细胞比例的表达均明显低于生理盐水组(P0.01或P0.05)、S期细胞比例的表达均明显高于生理盐水组(P0.01),而各组间G2/M期细胞比例的表达均无显著性差异(P0.05),其中四君子加川牛膝方组G0/G1期细胞比例明显低于四君子汤组(P0.05),S期细胞比例明显高于四君子汤组(P0.05);在造模后第14天,各组间G0/G1期及G2/M细胞比例的表达均无显著性差异(P0.05),而四君子加川牛膝方组S期细胞比例明显高于四君子汤组与川牛膝方组(P0.01)。结论:四君子加川牛膝方可上调TGF-β1、bFGF的合成和分泌,加速成纤维细胞由G0/G1期进入S期,促进成纤维细胞的增殖,这可能为其促进肉芽组织增生及创面愈合的作用机制,其中引经药川牛膝有提高成纤维细胞S期细胞比例的协同作用。     

bFGF反义寡核苷酸对大鼠肺成纤维细胞增殖信号通路的影响

目的:观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)反义寡核苷酸(AODN)对大鼠肺成纤维细胞增殖、转化信号通路的影响。方法:分离成年大鼠肺成纤维细胞,分为4组:对照组(未转染肺成纤维细胞);TGF-β1组(未转染肺成纤维细胞+5ng/ml TGF-β1刺激);TGF-β1+AODN组(转染AODN肺成纤维细胞+5ng/ml TGF-β1刺激);TGF-β1+RODN(正义寡核苷酸)组(转染RODN肺成纤维细胞+5ng/ml TGF-β1刺激)。每组设3复孔,并作细胞爬片,镜下计数肺成纤维细胞数量,绘制生长曲线。MTT比色法测定肺成纤维细胞增殖率。免疫细胞化学方法检测肌成纤维细胞特异性标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)。通过ELISA法检测培养液中bFGF、CTGF及Ⅰ型胶原蛋白含量。用RT-PCR法分析肺成纤维细胞Smad3 mRNA、Smad7 mRNA、Ⅰ型胶原mRNA表达水平。结果:1细胞计数显示:TGF-β1+RODN组各时段成纤维细胞的数目均较对照组、TGF-β1组、TGF-β1+AODN组明显增多(P<0.05);TGF-β1+AODN组中成纤维细胞增殖数比TGF-β1组明显减低(P<0.05)。2MTT结果显示:TGF-β1+RODN组肺成纤维细胞光密度值明显高于对照组、TGF-β1组、TGF-β1+AODN组(P<0.05);TGF-β1+AODN组中肺成纤维细胞光密度值明显比TGF-β1组减低(P<0.05)。3免疫细胞化学染色结果显示:TGF-β1+RODN组肺成纤维细胞与对照组、TGF-β1组、TGF-β1+AODN组比较,α-SMA染色的平均光密度值(IOD)明显增加(P<0.05);TGF-β1+AODN组中肺成纤维细胞α-SMA染色的平均光密度值(IOD)比TGF-β1组明显减低(P<0.05)。4 ELISA法检测结果显示:在TGF-β1+RODN组肺成纤维细胞培养液中bFGF、CTGF及Ⅰ型胶原蛋白含量明显高于对照组、TGF-β1组、TGF-β1+AODN组(P<0.05);TGF-β1+AODN组肺成纤维细胞培养液中bFGF、CTGF及Ⅰ型胶原蛋白含量比TGF-β1组明显减低(P<0.05)。5RT-PCR法检测结果显示:在TGF-β1+RODN组肺成纤维细胞Smad3mRNA及Ⅰ型胶原蛋白mRNA表达明显高于对照组、TGF-β1组、TGF-β1+AODN组(P<0.05);TGF-β1+AODN组肺成纤维细胞Smad3mRNA及Ⅰ型胶原蛋白mRNA表达明显比TGF-β1组明显减低(P<0.05);TGF-β1+RODN组肺成纤维细胞Smad7mRNA表达明显低于对照组、TGF-β1组、TGF-β1+AODN组(P<0.05);TGF-β1+AODN组肺成纤维细胞Smad7 mRNA表达比TGF-β1组明显增加(P<0.05)。结论:bFGF反义寡核苷酸可抑制肺成纤维细胞的增殖、转化及胶原合成,bFGF反义寡核苷酸可能通过下调TGF-β1-Smad信号通路来发挥作用。     

转化生长因子-β1对体外构建组织工程瓣膜的实验研究

目的研究转化生长因子-β1(TGF-β1)在组织工程心脏瓣膜(TEHV)体外构建中的作用。方法经胰酶/EDTA、去污剂Triton X-100和核酸酶处理,去除猪主动脉瓣叶的细胞成分,然后在其表面种植大鼠肌成纤维细胞,构建TEHV。实验组培养基中添加TGF-β1(10ng/ml),对照组采用普通培养基。体外培养2周后取瓣叶,行HE染色和扫描电镜观察,并检测羟脯氨酸、DNA含量及瓣叶最大负荷力,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测瓣膜细胞MMP-13和TIMP-1mRNA的表达。结果HE染色和扫描电镜显示实验组较对照组的细胞联合紧密且细胞外基质更丰富,羟脯氨酸含量和DNA含量增高,最大负荷力提高,MMP-13mRNA和TIMP-1mRNA的表达增强。结论TGF-β1在TEHV体外构建过程中具有积极作用,能为种子细胞生长提供有利因素,促进细胞增殖和细胞外基质分泌,提高瓣膜的最大负荷力。