温胆汤对精神分裂症模型大鼠学习记忆及PI3K/Akt/mTOR信号通路的影响

目的：探讨温胆汤对精神分裂症模型大鼠学习记忆及PI3K/Akt/mTOR信号通路的影响。方法：将60只SPF级SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、氯氮平组(20 mg/kg)及温胆汤低(10 g/kg)、中(20 g/kg)、高(40 g/kg)剂量组,各给药组灌胃给药,正常对照组与模型组灌胃相应体积生理盐水,1次/d,共14 d。除正常对照组外其余各组大鼠末次给药2 h后于左侧腹腔一次性注射MK-801(0.6 mg/kg)诱发精神分裂症模型,正常对照组腹腔注射相应体积生理盐水。Morris水迷宫实验检测各组大鼠学习记忆能力;Western Blot检测海马组织PI3K、Akt、mTOR蛋白表达;qRT-PCR检测海马组织PI3K、Akt、mTOR mRNA表达。结果：与模型组比较,除温胆汤低剂量组外,各给药组大鼠造模后第4天定位航行实验逃避潜伏期显著缩短,空间探索实验穿越平台位置次数、穿越平台所在象限次数及平台所在象限停留时间显著增多,各给药组大鼠海马组织p-P13K/P13K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR水平均显著降低,温胆汤高剂量组及氯氮平组PI3K、Akt、mT...     

不同蛋白提取方法对PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白表达量的影响

目的:探讨Ripa裂解液蛋白提取法和Invent离心管柱蛋白提取法对慢性应激模型大鼠海马组织PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白表达量的影响。方法:空白组和模型组大鼠各3只,取双侧海马组织,每个样品分别采用Ripa裂解液、Invent离心管柱蛋白提取法进行蛋白提取,分为空白+Invent组、空白+Ripa组、模型+Invent组、模型+Ripa组。采用Western Blot法检测PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白表达情况,析因设计方法分析各因素的效果。结果:大鼠海马PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR表达均受组别和提取方法的影响,组别和提取方法存在交互作用,运用Invent离心管柱蛋白提取法提取蛋白,模型组的PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR表达较空白组减少,差异有统计学意义(P0.05)。结论:慢性应激抑制大鼠海马PI3K/Akt/mTOR信号通路, Invent离心管柱蛋白提取法操作便捷,蛋白提取率高,尤其对信号通路中磷酸化蛋白的提取具有明显的优势。     

针刺通过调控PI3K/Akt/mTOR通路改善血管性痴呆大鼠认知功能的机制研究

目的:探讨针刺通过调控磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路改善血管性痴呆(VD)大鼠认知功能的机制。方法:Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组、非穴组和针刺组,每组18只。采用永久性双侧颈动脉结扎法制备VD大鼠模型。针刺组针刺"百会"和双侧"足三里",非穴组针刺两个固定非穴点,均每天1次,针刺6 d,休息1 d,连续2周。Morris水迷宫实验检测各组大鼠学习和空间记忆能力;ELISA法检测各组大鼠海马组织中活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量以及乙酰胆碱脂酶(AChE)、乙酰胆碱转移酶(ChAT)活力;JC-1法检测各组大鼠海马组织线粒体膜电位(MMP)的水平;Western blot法检测各组大鼠海马组织中PI3K、p-Akt及mTOR表达水平。结果:与假手术组相比,模型组大鼠逃避潜伏期延长(P0.05),ROS和MDA含量以及AChE活力显著升高(P0.05),西南象限停留时间缩短(P0.05),SOD活性、ChAT活力、MMP以及PI3K、p-Akt和mTOR蛋白表达水平显著降低(P0.05)。与模型组和非穴组相比,针刺组大鼠逃避潜伏期缩短(P0.05),ROS和MDA含量以及AChE活力显著降低(P0.05),西南象限停留时间延长(P0.05),SOD活性、ChAT活力、MMP以及PI3K、p-Akt和mTOR蛋白表达水平显著升高(P0.05)。与模型组相比,非穴组大鼠各项指标差异无统计学意义(P0.05)。结论:针刺可能通过激活PI3K/Akt/mTOR信号通路,缓解VD大鼠海马组织的氧化应激及线粒体膜电位降低,提高VD大鼠的认知功能。     

生慧颗粒通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路改善阿尔茨海默病小鼠学习记忆能力

目的 基于磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路探讨生慧颗粒对阿尔茨海默病（AD）小鼠学习记忆能力的影响。方法 将30只6月龄雄性APP/PS1双转基因小鼠随机分为模型组、生慧颗粒组（7.02 g/kg）、多奈哌齐组（0.65 mg/kg）,每组10只;C57BL/6J小鼠10只,设为对照组,对照组和模型组均给予等体积生理盐水,每日1次,连续给药4周。采用Morris水迷宫检测学习记忆能力,HE染色观察海马CA1区病理形态变化,免疫组化检测海马CA1区Aβ1-42和P-Tau416的表达水平,Western Blot检测海马区PI3K/Akt/mTOR通路蛋白及其磷酸化蛋白和Beclin 1、p62、LC3蛋白表达水平。结果 与对照组比较,模型组小鼠平台潜伏期、游泳总路程增加（P<0.01）,穿越平台次数和目标象限停留时间减少（P<0.01）;海马CA1区细胞数量减少、排列疏松,细胞层次减少;Aβ1-42和P-Tau416蛋白表达增多（P<0.01）;PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、mTOR、p-m...     

五脏温阳化瘀汤对血管性痴呆模型大鼠海马组织PI3K/Akt-mTOR信号通路的影响

目的探讨五脏温阳化瘀汤治疗血管性痴呆的可能作用机制。方法 55只大鼠随机选择8只为假手术组,剩余大鼠采用双侧颈总动脉永久性结扎法制备血管性痴呆模型。将造模成功的39只大鼠随机分为中药高剂量组10只,中药低剂量组10只,吡拉西坦组10只,模型组9只。中药高、低剂量组分别给予五脏温阳化瘀汤5、1. 25 g/(kg·d)灌胃,吡拉西坦组给予吡拉西坦分散片0. 15 g/(kg·d)灌胃,假手术组和模型组每日给予等量生理盐水灌胃。2周后用Morris水迷宫测试大鼠的学习记忆能力;分别采用RT-PCR法和Western blot法检测大鼠海马组织中的磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B (Akt)和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR) mRNA及蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠逃避潜伏期延长,跨越平台次数减少,海马组织PI3K、Akt、mTOR蛋白及mRNA表达升高(P 0. 05或P 0. 01);与模型组比较,中药高剂量组、吡拉西坦组大鼠逃避潜伏期、跨越平台次数增加,海马组织PI3K、AKT、mTOR蛋白及mRNA表达升高(P 0. 05或P 0. 01);中药高剂量组与吡拉西坦组各指标比较差异均无统计学意义(P0. 05)。结论五脏温阳化瘀汤可以提高血管性痴呆模型大鼠的学习记忆能力,可能是通过调控海马组织PI3K/Akt-mTOR信号通路发挥作用。     

基于PI3K/Akt/mTOR信号通路探讨炙甘草汤抗大鼠MIRI致室速和室颤的作用机制

目的:通过磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路,探讨炙甘草汤干预心肌缺血再灌注损伤(MIRI)致心律失常(室速和室颤)的作用及其机制。方法:将72只SD大鼠随机分为假手术组,模型组,炙甘草汤低、中、高剂量组(11.43,22.86,45.72 g·kg~(-1)),稳心颗粒组(2.43 g·kg~(-1)),连续给药干预10 d。末次给药2 h,采用结扎冠状动脉左前降支法制备大鼠MIRI模型,记录心电图的变化。造模成功后采集血液及心脏组织,检测血清中肌酸肌酶(CK),乳酸脱氢酶(LDH)及丙氨酸氨基转移酶(AST)的含量;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测心肌肌钙蛋白(CtnI)的含量;免疫组化法检测心肌PI3K,Akt,mTOR的表达;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测心肌自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC-3),自噬标志物Beclin1和PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白表达及磷酸化p-PI3K,p-Akt,p-mTOR的水平。结果:模型组大鼠100%发生室速,91.67%发生室颤;与假手术组比较,模型组大鼠血清CK,LDH,AST以及CtnI的含量显著升高(P0.01),心肌组织中PI3K,Akt,mTOR表达显著升高(P0.01),LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ与Beclin1的相对表达量显著升高(P0.01),p-PI3K/PI3K,p-Akt/Akt,p-mTOR/mTOR显著降低(P0.01);与模型组比较,炙甘草汤高剂量组室速、室颤发生率显著降低(P0.01),较其他给药组持续时间短(P0.01);炙甘草汤高剂量组CK,LDH,AST水平及CtnI含量显著降低(P0.01);炙甘草汤给药组的PI3K,Akt,mTOR的表达随剂量的增加而显著降低(P0.01);LC-3,Beclin1的表达随炙甘草汤各剂量组的增加有不同程度地下降(P0.01),而PI3K/Akt/mTOR相关蛋白表达比值明显升高(P0.05,P0.01)。结论:炙甘草汤预处理能使异常升高的心肌酶CK,LDH,AST,CtnI降低,抑制细胞的过度自噬,上调PI3K,Akt和mTOR的表达,说明炙甘草汤抗MIRI致心律失常的作用可能与PI3K/Akt/mTOR信号通路有关。     

加味桃核承气汤对糖尿病大血管病变大鼠PI3K/Akt信号通路的影响

目的 探讨加味桃核承气汤防治糖尿病大血管病变的可能机制。方法 80只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、二甲双胍组、加味桃核承气汤1号方组（中药1组）、加味桃核承气汤2号方组（中药2组）。除正常组外,其余4组高糖高脂饮食6周后通过腹腔注射链尿佐菌素（STZ）40mg/kg建立糖尿病大血管病变模型。造模成功后,正常组和模型组每天采用等量蒸馏水灌胃,中药1组及中药2组分别采用加味桃核承气汤1号方、加味桃核承气汤2号方5.4g/kg/d灌胃,二甲双胍组采用二甲双胍研磨溶液0.156g/kg/d灌胃。灌胃8周后处死大鼠,检测血糖、血脂变化情况,并采用免疫组化观察大鼠胸主动脉PI3K、Akt的染色情况,QRT-PCR法检测大鼠胸主动脉PI3K、Akt mRNA的表达。结果 与模型组比较,加味桃核承气汤与二甲双胍均能够显著降低血糖、血脂、PI3K mRNA、Akt mRNA水平（P＜0.01）,同时减少PI3K(p85)、Akt蛋白在大鼠胸主动脉的表达。其中加味桃核承气汤2号方较1号方能够更有效降脂、降糖（P＜0.01）,较1号方、二甲双胍能更有效降低PI3K mRNA、Akt mRNA水平（P＜0.01）。结论 加味桃核承气汤能够有效防治糖尿病大血管病变,其机制可能与抑制PI3K/Akt信号通路,减少PI3K、Akt mRNA的表达、降低血糖、血脂有关。此外,加味桃核承气汤2号方较1号方、二甲双胍能更有效防治糖尿病大血管病变。     

基于BDNF/TrkB/PI3K/Akt信号通路的滋肾醒脑汤对阿尔茨海默病大鼠学习记忆能力的影响

目的基于BDNF/TrkB/PI3K/Akt信号通路观察滋肾醒脑汤对阿尔茨海默病(AD)大鼠学习记忆能力的影响,探讨其可能的作用机制。方法采用侧脑室注射β-淀粉样蛋白制备AD大鼠模型,假手术组注射等体积生理盐水,将成模大鼠随机分为模型组、中药组及阳性对照组,每组6只,中药组及阳性对照组分别予滋肾醒脑汤(16.74 g/kg)和盐酸多奈哌齐混悬液(0.45 mg/kg)灌胃,假手术组和模型组灌胃等体积蒸馏水,每日1次,连续4周。采用Morris水迷宫实验进行大鼠行为学检测,TUNEL染色检测海马组织神经细胞凋亡情况,Western blot检测海马组织脑源性神经营养因子(BDNF)、酪氨酸激酶受体B(TrkB)蛋白表达,免疫组化检测海马组织PI3K、Akt蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠逃避潜伏期明显延长,跨越平台次数减少,目标象限停留时间缩短(P<0.05,P<0.01),海马组织神经细胞凋亡率明显升高,BDNF、TrkB、PI3K、Akt蛋白表达明显降低(P<0.05);与模型组比较,中药组及阳性对照组大鼠逃避潜伏期明显缩短,跨越平台次数增加,目标象限停留时间延长(P<0.01,P<0.05),海马组织神经细胞凋亡率明显降低,BDNF、TrkB、PI3K、Akt蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01),中药组与阳性对照组差异无统计学意义(P>0.05)。结论滋肾醒脑汤可改善AD大鼠学习记忆能力,其机制可能与上调BDNF/TrkB/PI3K/Akt信号通路蛋白表达,减少神经细胞凋亡有关。     

知母-黄柏药对有效部位群改善2型糖尿病大鼠认知功能障碍的药效及机制研究

目的研究知母-黄柏药对有效部位群通过磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(PKB/Akt)通路改善2型糖尿病模型大鼠认知功能障碍的药效及作用机制。方法 50只雄性SD大鼠随机分为5组,每组10只,分别为对照组、模型组、知母-黄柏药对有效部位群高剂量(ZBH,2.0 g/kg)和低剂量(ZBL,1.0 g/kg)组、盐酸美金刚(MHT,1.0 mg/kg)组;采用ip链脲佐菌素(STZ)联合喂食高脂饲料的方法制备2型糖尿病大鼠模型;造模成功后各组大鼠开始ig给药,连续给药20周,分别在给药8、16周时测定大鼠血浆中β淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)水平,并结合Barnes迷宫、Morris水迷宫法检测大鼠的认知能力;给药20周后,取大鼠胰腺、海马组织进行形态学观察;q RT-PCR检测PI3K、Akt、Bcl-2基因在大鼠脑组织中的表达。结果给药8、16周时,与对照组相比,模型组大鼠血浆中Aβ1-42蛋白水平显著升高(P0.05、0.01),与模型组相比,MHT、ZBH组Aβ1-42蛋白水平均降低(P0.05);行为学检测结果显示,与模型组相比,各给药组均能不同程度改善大鼠记忆能力(P0.05、0.01);给药20周,大鼠海马CA1区病理结果显示,对照组大鼠海马区神经元排列整齐、形态规则、着色均匀。模型组大鼠大量神经元细胞核深染、固缩,神经元细胞排列紊乱,部分细胞被小胶质细胞代替。与模型组相比,ZBH、ZBL可有效改善大鼠海马组织神经元形态及细胞排列形态,修复神经损伤;q RT-PCR结果显示,与对照组相比,模型组大鼠脑组织PI3K、Akt mRNA表达有一定程度的降低,抗凋亡基因Bcl-2 mRNA表达减弱(P0.05),MHT、ZBH均能不同程度上调PI3K、Akt、Bcl-2 mRNA的表达(P0.05、0.01)。结论知母-黄柏药对有效部位群能明显降低Aβ1-42蛋白水平,上调PI3K、Akt mRNA的水平,对海马神经元具有修复和保护作用,说明知母-黄柏药对有效部位群可能通过调节PI3K/Akt通路而实现对2型糖尿病大鼠认知功能障碍的改善。     

百合鸡子汤通过BDNF/TrkB介导的PI3K/Akt/mTOR信号通路对CUMS大鼠抗抑郁的影响

目的探究百合鸡子汤通过BDNF/TrkB介导的PI3K/Akt/mTOR信号通路对CUMS大鼠抗抑郁的影响。方法CUMS法复制大鼠抑郁模型,观察百合鸡子汤对大鼠抑郁行为学和前额叶皮质BDNF/TrkB介导的PI3K/Akt/mTOR信号通路关键蛋白表达的影响。结果抑郁行为学的强迫游泳实验中,CUMS组大鼠不动时间延长,而百合鸡子汤组、氟西汀组大鼠抑郁行为均得到改善(P<0.01)。Western blot检测发现,CUMS降低了大鼠前额叶皮质组织的BDNF、p?TrkB、p?PI3K、p?Akt、p?mTOR的表达,而百合鸡子汤干预能够上调这些蛋白的表达(P<0.05,P<0.01)。结论百合鸡子汤具有一定的抗抑郁作用,BDNF/TrkB及其下游的PI3K/Akt/mTOR信号通路可能为其作用机制。     

大黄对内毒素性肠损伤大鼠PTEN/PI3K/Akt信号通路的影响

目的观察大黄对内毒素性肠损伤大鼠PTEN/PI3K/Akt信号通路的影响,探讨其作用机制。方法将30只雄性Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、地塞米松组和大黄低、高剂量组,每组6只。各给药组造模前给予相应药液灌胃,连续5 d,每日1次。第5日给药后2 h,除正常组外各组大鼠尾静脉注射脂多糖制备肠损伤模型。造模7h后取材,光镜下观察大鼠肠组织病理学改变,免疫组化检测PTEN、PI3K、Akt、mTOR蛋白的表达,Western blot检测PI3K、p-mTOR蛋白的表达。结果模型组大鼠肠壁黏膜层广泛变性坏死,大量肉芽组织增生;地塞米松组和大黄低、高剂量组病理学改变较模型组减轻。免疫组化结果显示,与正常组比较,模型组大鼠肠组织PTEN蛋白表达显著降低(P0.001),PI3K、Akt蛋白表达显著升高(P0.001,P0.01);与模型组比较,大黄高剂量组大鼠肠组织PTEN蛋白表达显著升高(P0.01),大黄低、高剂量组PI3K、Akt蛋白表达显著降低(P0.001)。Western blot结果显示,与模型组比较,地塞米松组和大黄低、高剂量组大鼠肠组织PI3K、p-mTOR蛋白表达显著降低(P0.05)。结论大黄对内毒素性肠损伤大鼠具有保护作用,其机制可能与上调肠组织PTEN和下调PI3K、Akt、p-mTOR的表达,抑制PI3K/Akt信号通路有关。     

益肾通淋方对良性前列腺增生大鼠PI3K/Akt/mTOR信号通路的影响

目的观察益肾通淋方对良性前列腺增生(BPH)大鼠前列腺PI3K/Akt/mTOR信号通路的影响,探讨其作用机制。方法采用去势联合丙酸睾酮注射方法建立BPH模型,对照组行假手术。将60只SD大鼠随机分为对照组、模型组、阳性药组和益肾通淋方高、低剂量组,每组12只。于去势第8日开始灌胃给药,每日1次,连续28d。末次给药后1h,大鼠麻醉取前列腺,计算前列腺指数,HE染色观察前列腺组织病理形态,Western blot和RT-PCR分别检测前列腺PI3K/Akt/mTOR信号通路蛋白和m RNA的表达。结果与对照组比较,模型组大鼠前列腺明显增生,PI3K、Akt和m TOR磷酸化蛋白及m RNA表达均显著升高,PI3K/Akt/mTOR信号通路激活;益肾通淋方干预后,模型大鼠前列腺指数下降,腺体变少,腺腔扩张,前列腺增生明显缓解,同时PI3K、Akt和m TOR蛋白磷酸化水平降低,m RNA表达显著下调。结论益肾通淋方能有效改善BPH大鼠前列腺增生,其作用机制可能与抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路有关。     

加味桃核承气汤对糖尿病大鼠血糖、血脂及大血管病变的影响

目的探讨加味桃核承气汤防治糖尿病大鼠大血管病变的可能机制。方法将80只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、二甲双胍组、加味桃核承气汤1号方组(中药1组)、加味桃核承气汤2号方组(中药2组)。除正常组外,其余4组高糖高脂饮食6周后通过腹腔注射链尿佐菌素(STZ)40 mg·kg~(-1)建立糖尿病大血管病变模型。造模成功后,正常组和模型组每天采用等量蒸馏水灌胃,中药1组、2组分别采用加味桃核承气汤1号方、2号方5.4 g·kg~(-1)灌胃,二甲双胍组采用二甲双胍研磨溶液0.156 g·kg~(-1)灌胃。8周后处死大鼠,检测血糖、血脂变化情况,并采用免疫组化观察大鼠胸主动脉PI3K、Akt的染色情况,QRT-PCR法检测大鼠胸主动脉PI3K、Akt mRNA的表达。结果与模型组比较,中药1、2组均能显著降低血糖、血脂及PI3K mRNA、Akt mRNA水平(P0.01),减少PI3K(p85)、Akt蛋白在大鼠胸主动脉的表达。其中,加味桃核承气汤2号方较1号方更能有效降脂、降糖(P0.01);与二甲双胍组比较,中药2组能更有效降低PI3K mRNA、Akt mRNA水平,差异有统计学意义(P0.01)。结论加味桃核承气汤能够有效防治糖尿病大鼠大血管病变,其机制可能与抑制PI3K/Akt信号通路,减少PI3K、Akt mRNA的表达以及降低血糖、血脂有关。此外,加味桃核承气汤2号方较1号方更能有效防治糖尿病大血管病变。     

柴胡加龙骨牡蛎汤对抑郁大鼠海马组织PI3K/Akt/GSK3β/β-catenin信号通路的影响

目的:探讨柴胡加龙骨牡蛎汤对抑郁大鼠海马组织磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/糖原合成酶激酶3β(GSK3β)/β-链环蛋白(β-catenin)信号通路的影响。方法:健康SD大鼠120只,随机取20只作为正常组,另100只大鼠用于制备慢性不可预见性温和应激(CUMS)抑郁模型。再将CUMS抑郁大鼠随机分为模型组,柴胡加龙骨牡蛎汤低、中、高剂量组,氟西汀组,每组20只。柴胡加龙骨牡蛎汤低、中、高剂量组分别灌胃3.25,6.5,13 g·kg~(-1);氟西汀组灌胃盐酸氟西汀10 mg·kg~(-1);正常组和模型组灌胃等量生理盐水;1次/d,共干预21 d。应用糖水偏好和强迫游泳实验评估抑郁行为,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组大鼠大脑海马组织中PI3K,Akt,GSK3β以及β-catenin蛋白水平及其磷酸化水平。结果:给药21 d后,与正常组比较,模型组糖水偏好显著下降(P0.01);强迫游泳不动时间显著延长(P0.01);PI3K,p-PI3K p110,p-PI3K p85蛋白水平均显著降低(P0.01);Akt,p-Akt Thr308,p-Akt Ser473,p-GSK3βSer9,β-catenin水平均显著降低(P0.01);GSK3β,p-GSK3β Tyr216水平明显升高(P0.05,P0.01)。与模型组比较,柴胡加龙骨牡蛎汤中、高组大鼠糖水偏好显著增加(P0.01);强迫游泳不动时间显著缩短(P0.01);PI3K总蛋白,PI3K p110和PI3K p85亚基蛋白磷酸化水平均显著增高(P0.01);p-Akt Thr308和p-Akt Ser473水平均显著升高(P0.01);p-GSK3β Ser9,β-catenin水平显著增高(P0.01),而GSK3β,p-GSK3β Tyr216水平却明显降低(P0.05)。结论:柴胡加龙骨牡蛎汤通过提高大鼠海马组织PI3K蛋白水平及活性,激活Akt,抑制GSK3β活性,阻止β-catenin降解,即提高大鼠海马组织PI3K/Akt信号通路活性,保护海马神经元。     

电针对D-半乳糖诱导的阿尔茨海默病大鼠认知功能及海马神经元自噬的影响

目的:观察电针对阿尔茨海默病(AD)大鼠海马区自噬相关蛋白表达的影响,从神经元自噬的角度探讨电针"百会""肾俞"穴治疗AD的机制。方法:SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、电针组和假电针组,每组12只。除空白对照组外,其余各组予D-半乳糖连续腹腔注射6周建立AD大鼠模型。电针组大鼠于每日腹腔注射后给予电针"百会""肾俞"穴,假电针组仅刺入"百会""肾俞"穴区皮肤且电针仪不通电,每次20 min,1次/d,共6周。干预结束后,采用Morris水迷宫和开放旷场实验评估各组大鼠的学习记忆和认知能力,透射电镜观察海马区突触数密度,用免疫组织化学染色法观察海马区双螺旋细丝蛋白-1(PHF-1)表达水平,用Western blot法检测海马区自噬相关蛋白磷酸肌醇-3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)、磷酸化AKT(p-AKT)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的相对表达量。结果:与空白对照组比较,模型组大鼠第2天至第5天逃避潜伏期增长,经过原平台象限时间比率减小(P0.01),旷场实验运动距离、直立次数、中心区域运动时间比率均减少(P0.01),海马区突触数密度降低(P0.01),PHF-1的阳性表达及PI3K、AKT、p-AKT、 mTOR相对表达量均增加(P0.01)。与模型组和假电针组比较,电针组大鼠第2天至第5天逃避潜伏期缩短,经过原平台象限时间比率升高(P0.01),旷场实验运动距离、直立次数、中心区域运动时间比率,以及海马区突触密度增高(P0.01),PHF-1的阳性表达及PI3K、AKT、p-AKT、mTOR相对表达量均减少(P0.01)。与模型组比较,假电针组PI3K表达降低(P0.05)。结论:电针能改善AD样大鼠的学习记忆和认知障碍,其机制可能是与调控PI3K/AKT/mTOR信号通路,诱导自噬,促进神经原纤维缠结清除有关。     

党参远志散仿生提取液对阿尔茨海默病小鼠空间定位能力和探究行为的影响

目的 基于PI3K/Akt/mTOR信号通路研究党参远志散仿生提取液对阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease, AD)小鼠空间定位能力和探究行为的影响。方法 小鼠随机分为正常组、AD模型组、吡拉西坦片组、党参远志散仿生提取液低、高剂量组,每组10只。除正常组外,其余组均腔腹注射D-gal和NaNO₂复制AD小鼠模型,分别灌胃蒸馏水、吡拉西坦片、8.58 g/kg党参远志散仿生提取液和17.16 g/kg党参远志散仿生提取液,每日1次,持续6周。采用水迷宫实验观察小鼠的空间定位能力;采用旷场实验观察小鼠的探究行为;尼氏染色判断海马CA1区神经细胞受损程度;免疫组织化学染色检测海马CA1区PI3K、Akt、mTOR的蛋白表达。结果 与AD模型组比较,党参远志散仿生提取液高剂量组小鼠空间定位能力明显提高,探究行为明显增多(P<0.05),海马CA1区神经细胞损伤减轻,PI3K、Akt、mTOR蛋白表达均明显降低(P<0.01)。结论 17.16g/kg党参远志散仿生提取液可通过调节PI3K/Akt/mTOR信号通路,减轻神经元损伤,提高AD小鼠...     

蠲痛饮对子宫内膜异位症大鼠PI3K/Akt/mTOR信号通路蛋白的影响

目的:探讨蠲痛饮对子宫内膜异位症(EMS)大鼠磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/雷帕霉素靶分子(mTOR)信号通路蛋白的影响。方法:采用自体子宫内膜移植法建立EMS大鼠模型,随机将48只大鼠分为正常组、模型组、蠲痛饮低、中、高剂量组、通路阻滞剂组(LY294002) 6组,分别给予蠲痛饮高、中、低剂量(42. 9,14. 3,4. 8 g·kg~(-1))灌胃,通路阻滞剂组予PI3K通路阻滞剂LY294002(0. 04 g·kg~(-1))腹腔注射,正常组及模型组每天按照10 mL·kg~(-1)给予生理盐水灌胃,各组持续用药28 d。应用透射电镜观察大鼠异位内膜组织超微结构,免疫组化法检测异位内膜组织PI3K,Akt,mTOR蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测核糖体蛋白S6激酶(p70S6K) mRNA相对含量。结果:与正常组比较,模型组异位内膜PI3K,Akt,mTOR蛋白和p70S6K mRNA的表达都明显升高(P 0. 05);与模型组比较,蠲痛饮中、高剂量、通路阻滞剂组干预后PI3K,Akt,mTOR蛋白和p70S6K mRNA的表达明显降低(P 0. 05)。透射电镜下可见蠲痛饮低、中、高剂量组和通路阻滞剂组均能促进腺上皮细胞萎缩或欠整齐,微绒毛减少或消失,胞核固缩,胞内线粒体肿胀或减少,间质细胞凋亡。结论:PI3K/Akt/mTOR信号通路参与子宫内膜异位症发生;蠲痛饮可能通过下调PI3K/Akt/mTOR通路蛋白的表达及p70S6K mRNA表达,从而抑制上皮间质细胞活性,促进细胞凋亡,治疗子宫内膜异位症。     

延龄草总皂苷对卒中后认知障碍大鼠学习记忆能力和神经元突触损伤的影响

目的 探讨延龄草总皂苷对卒中后认知障碍大鼠学习记忆能力和神经元突触损伤的影响及作用机制。方法 采用改良线栓法制备卒中后认知障碍大鼠模型，将成模大鼠随机分为模型组、延龄草总皂苷组（100 mg/kg）和盐酸多奈哌齐组（0.45 mg/kg），每组10只，另设假手术组10只，给药组分别予相应药物灌胃，连续4周。Morris水迷宫实验评价大鼠认知功能，HE和尼氏染色观察脑组织病理变化，TUNEL染色观察海马CA1区神经元凋亡情况，高尔基染色观察海马树突棘变化，Western blot检测海马组织Bcl-2、Bax、Caspase-3、SYN、PSD-95、PI3K、Akt、p-Akt蛋白表达。结果 与假手术组比较，模型组大鼠Morris水迷宫实验逃避潜伏期显著增加（P<0.01），穿越平台次数及目标象限停留时间比显著减少（P<0.01）；海马CA1区及皮质区神经元排列紊乱、尼氏体减少，凋亡神经元数量增加，树突棘密度减小（P<0.01）；海马组织Bcl-2、SYN、PSD-95、PI3K、p-Akt蛋白表达显著降低（P<0.01）,Bax、Caspase-3蛋白表达显著...     

化瘀祛痰方通过PI3K/Akt/mTOR信号通路调控自噬改善动脉粥样硬化家兔肝脏脂质损伤

目的:以PI3K/Akt/mTOR信号通路为切入点探讨化瘀祛痰方调控自噬改善动脉粥样硬化家兔肝脏脂质损伤的分子机制。方法:60只新西兰雄性大耳白家兔随机分为正常组、模型组、化瘀祛痰方组、辛伐他汀组,每组15只。正常组给予普通家兔饲料喂养,其他各组一次性静脉注射牛血清白蛋白(250 mg/kg)后以高脂饲料喂养以建立动脉粥样硬化模型,化瘀祛痰方组给予方药剂量为8 g·kg~(-1)·d~(-1),辛伐他汀组给药量为1.4 mg·kg~(-1)·d~(-1),正常组、模型组给予等体积生理盐水灌胃。4周后,HE染色观察各组家兔肝脏形态变化;全自动生化分析仪检测血清TC、TG、LDL-C、HDL-C含量变化;WB法检测肝脏PI3K、Akt、p-Akt、mTOR蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组家兔肝脏脂肪变性明显,血清TC、TG、LDL-C水平显著升高(P0.01),HDL-C水平显著降低(P0.01),PI3K、Akt、mTOR蛋白表达水平下调(P0.01);与模型组比较,化瘀祛痰方组和辛伐他汀组肝脏脂肪变性呈不同程度恢复,血清中TC、TG、LDL-C水平显著降低(P0.01),HDL-C水平显著升高(P0.01),PI3K、Akt、mTOR蛋白表达水平显著上调(P0.05或P0.01)。结论:化瘀祛痰方可通过PI3K/Akt/mTOR信号通路,调控动脉粥样硬化家兔肝脏自噬稳态,减缓肝脏脂质损伤,进而改善动脉粥样硬化。     

滋补脾阴方药对糖尿病脑病大鼠脑组织PDHE1α蛋白表达的影响

目的观察滋补脾阴方药对糖尿病脑病大鼠脑组织PDHE1α蛋白表达的影响,探讨其改善糖尿病脑病大鼠认知功能的作用机制。方法 SPF级雄性SD大鼠随机分为空白对照组、糖尿病脑病组和滋补脾阴方药组,每组5只。采用高脂饮食加小剂量链脲佐菌素(STZ)注射法建立2型糖尿病大鼠模型。于STZ注射后第7、12、16日分别进行空腹血清胰岛素(FSI)检测、口服葡萄糖耐量试验(OGTT)及胰岛素耐量试验(ITT)。滋补脾阴方药组给予滋补脾阴方药灌胃,其余组给予等体积生理盐水灌胃,共16d。采用Morris水迷宫实验检测大鼠空间学习记忆能力;Western blot检测大鼠海马和皮质PDHE1α蛋白表达。结果糖尿病脑病组大鼠随机血糖、FSI水平较空白对照组明显升高(P0.01)。OGTT结果显示,糖尿病脑病组大鼠从30 min开始,各时间点血糖均高于空白对照组大鼠(P0.01),且120 min血糖仍高于0 min血糖。ITT结果显示,糖尿病脑病组大鼠血糖下降速率低于空白对照组。水迷宫实验结果显示,第3日起,糖尿病脑病组大鼠逃避潜伏期较空白对照组明显延长(P0.05),出现空间记忆能力损伤;滋补脾阴方药组大鼠第3、5日逃避潜伏期较糖尿病脑病组明显缩短(P0.05,P0.01)。Western blot结果显示,糖尿病脑病组大鼠海马和皮质PDHE1α蛋白表达明显低于空白对照组(P0.01,P0.05),滋补脾阴方药组大鼠PDHE1α蛋白表达较糖尿病脑病组明显升高(P0.05)。结论糖尿病脑病认知功能损伤可能与PDHE1α蛋白表达降低有关,滋补脾阴方药可能通过提高脑组织PDHE1α蛋白表达改善糖尿病脑病大鼠的学习记忆能力。