三七根腐病病原菌尖孢镰刀菌的生物学特性分析

目的:旨在分离鉴定三七苗期根腐病病原菌,并对其生物学特性进行研究,从而了解该病原菌的发病条件,为该病原菌引起的三七病害的监测和防治提供理论参考。方法:采集三七根腐病幼苗,用PDA培养基对病原菌进行分离纯化,得到了2株真菌。通过对菌落、菌丝和孢子形态观察及ITS序列的比对,对其中1株病原菌进行了鉴定。并研究了温度、pH、光照、碳源及氮源等对菌丝生长和孢子萌发的影响。结果:该病原菌鉴定为尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)。将病原菌回接一年生三七植株,发现其有很强的致病性。该病原菌在30℃、pH 5的培养条件下生长最快,可有效利用多种碳和氮源,其中以淀粉、乳糖为最佳碳源,硝酸铵为最适氮源。孢子在30℃、pH 6～7的条件下萌发率最高,孢子的致死温度为50℃。结论:明确了三七苗期根腐病病原菌(尖孢镰刀菌)的生物学特性,确定了该病原菌生长和孢子萌发的最适培养条件。     

环境温度和湿度对尖孢镰刀菌侵染丹参幼苗的影响

枯萎病是栽培丹参的主要病害，其病原菌为尖孢镰刀菌，尖孢镰刀菌对栽培植物的侵染受到环境因素的影响。基于此，该文采用盆栽实验的方式研究尖孢镰刀菌对丹参幼苗侵染过程，揭示病害发生程度与植物体内病原菌浓度的关系，在此基础上研究环境温度和湿度对尖孢镰刀菌侵染丹参幼苗的影响。研究结果表明，丹参幼苗接种尖孢镰刀菌后，最先在栽种基质中检出，随着病原菌的不断繁殖，逐渐侵染至幼苗根和茎中(4～5 d),此时植株出现叶片黄化、萎蔫症状。7～8 d后在各部位中数量达到最大值，发病后期其在体内数量逐渐减少。随着丹参发病程度的加重，栽培基质、幼苗根和茎中病原菌的浓度呈现增加后下降的趋势，在中度发病的样本中尖孢镰刀菌浓度达到最大值，重度发病的样本中降低。另外，环境温度和湿度影响尖孢镰刀菌对丹参幼苗的侵染。尖孢镰刀菌对丹参幼苗侵染最适宜的环境温度为25～30℃,适宜的环境湿度为80%～90%。该研究对于今后开展丹参枯萎病病原菌的致病性实验、生防菌的筛选以及栽培丹参枯萎病的防治具有一定的指导意义。     

黄连根腐病镰刀菌属病原真菌鉴定

根腐病是黄连的主要病害之一,近几年大面积爆发,给生产造成了严重损失,也大大打击了连农的积极性。为了明确其病原真菌,采用组织分离法分离出病根镰刀菌属真菌,通过离体回接初步筛选出疑似病原真菌,再进行活体回接明确病原菌,结合分子鉴定和形态鉴定将病原菌鉴定到种。结果共计分离到镰刀菌属真菌20株,其中的5株离体回接和活体回接均显示强致病性。根据以上结果推断,尖孢镰刀菌Fusarium oxysporum、腐皮镰刀菌F.solani、三线镰刀菌F.tricinctum是黄连根腐病的病原真菌,且可能是复合侵染的前期入侵菌,其中尖孢镰刀菌在分离出的镰刀菌中占据优势,其他镰刀菌分离频率相对较低,因此在大田生产中应针对该菌进行重点防护。高温和高湿度会增强镰刀菌的致病性,据此推测,全球气候变暖使原本冷凉的黄连产区气温升高,适合病原菌生长繁殖入侵,可能是导致近年黄连根腐病大爆发的主要原因之一。因此,解决黄连根腐病的方法除了研发和施用农药,还可以将种植基地向高海拔地区转移。     

黄花蒿叶甲醇粗提物对尖孢镰刀菌的抑制作用

目的:探讨黄花蒿叶甲醇粗提物对尖孢镰刀菌Fusarium oxysporum的抑菌活性。方法:通过体外抑菌实验,利用牛津杯法、琼脂平板表面萌发法、吖啶橙和碘化丙啶染色法,测定不同质量浓度黄花蒿叶甲醇提取物对三七根腐病主要致病菌尖孢镰刀菌的孢子萌发率、孢子活力、菌丝生长以及产孢量的影响。结果:黄花蒿叶甲醇提取物能降低尖孢镰刀菌的孢子萌发率和孢子活力,抑制菌丝的生长和产孢量的增加,且随着黄花蒿叶甲醇提取物浓度的增大,其对尖孢镰刀菌的抑制作用变强。当质量浓度为25.65 mg·mL~(-1)时,与对照组相比,孢子萌发率、孢子活力分别降低了13.25%和12.50%;产孢量也显著降低,较对照组降低了90.61%。结论:黄花蒿叶甲醇提取物对尖孢镰刀菌的生长有抑制作用,该研究将为三七根腐病的生态防控以及新农药的开发利用提供重要科学依据。     

丹参枯萎病及其病原菌的研究

丹参是世界公认的治疗心脑血管病的首选药物,栽培丹参枯萎病发生严重,严重影响栽培丹参产量和质量。针对上述问题,采用形态学和病原学实验手段对从发生枯萎病丹参植株茎和根中分离得到的病原菌进行鉴定,同时根据ITS序列采用PCR的方法进行进一步确定。结果表明丹参枯萎病多发生7—8月高温、多雨季节,栽培一年丹参枯萎病的发生率为10%左右,而栽培三年或者三茬丹参枯萎病的发生率达到了60%~70%。枯萎病会引起丹参根腐,因此生产上易误认为根腐病。形态学鉴定结果表明该病原菌为尖孢镰刀菌,ITS序列也表明其与黄瓜枯萎病菌的ITS序列同源性为99%。因此,作者认为引起丹参枯萎病的病原菌为尖孢镰刀菌。     

农田栽参模式中人参根腐病原菌鉴定与防治

根腐病是东北农田栽培人参的主要病害之一。该研究为明确引起该病害的病原菌类型,验证苏子粗提物对病原菌的抑制作用,为人参根腐病的防治提供依据。采用组织分离法从人参根腐病株中分离得到单菌株;形态学结果表明,该病原菌的分生孢子有2种形态,小型分生孢子呈镰刀形或长柱形,大型分生孢子呈卵圆形,且有明显分隔;分子生物学鉴定结果表明,通过Blast比对,该菌株18s r DNA扩增产物与Fusarium oxysporum已知序列(JF807402.1)的同源性为100%,确定该病原菌为尖孢镰刀菌F.oxysporum。利用牛津杯法评价苏子粗提物对尖孢镰刀菌的抑制作用,结果表明,当提取物质量浓度为0.50 g·L-1时抑菌效果较好,抑菌直径为11.75 mm。该研究确定农田栽参中根腐病的病原菌类型,为根腐病植物源农药的开发提供材料,保障农田栽参的顺利开展。     

东北地区5种蒲公英叶绿体超微结构及光合特性研究

该文采用JEM-100CX II型透射电子显微镜对东北地区5种蒲公英叶片叶绿体超微结构进行观察,并利用LI-6400便携式光合仪对其进行叶绿素荧光参数和光合特性进行比较。叶绿体超微结构,5种蒲公英中叶绿体较大,基粒片层较多、类囊体规则、无淀粉粒等叶绿体特征决定植株光合作用较强。5种蒲公英Pn日变化为"双峰型"曲线,气孔限制是光合"午休"的主要调节因素。其中蒙古蒲公英Taraxacum mongolicum Pn,Gs,Ci含量均最高,亚洲蒲公英T.asiaticum均最低。5种蒲公英Pn与Gs,Ci间呈正比例关系,Pn与Tr间呈反比例关系。另外Pn与其Chla,Chlb呈正相关,且与Chlb的关系较大。论证了蒙古蒲公英光合效率最高,是高光合速率蒲公英种,为蒲公英属资源评价与利用提供理论基础。     

白术内生细菌AM14的分离鉴定及其对宿主根腐病的防效研究

目的筛选得到能够防治白术Atractylodesmacrocephala根腐病的内生细菌。方法采用传统分离法从白术健康组织中分离内生细菌,以白术根腐病菌尖孢镰刀菌Fusariumoxysporum,茄病镰刀菌F.solani和半裸镰刀菌F.incarnatum为指示菌,采用平板划线法和滤纸片法筛选拮抗细菌;制备拮抗菌菌悬液,采用灌根法进行盆栽白术根腐病防效试验;通过细菌形态特征、生理生化检测及16SrRNA技术对拮抗细菌进行菌种鉴定。结果从白术组织中共分离得到246株内生细菌,平板对峙筛选得到抗根腐内生细菌18株,其中AM14对3种病原菌生长均具有显著抑制作用(P<0.05),平均抑菌率达80.68%;盆栽试验进一步表明AM14对白术根腐病具有较好的防治效果,防治效果达70.49%;经鉴定AM14为芽孢杆菌属细菌Bacillus sp.。结论内生细菌AM14具有良好的白术根腐病生防潜力。     

铁皮石斛根腐病病原菌鉴定及生物学特性研究

目的:分离和鉴定铁皮石斛根腐病病原菌,测定碳、氮源、温度、pH及光照等条件对根腐病病菌菌丝生长和产孢的影响,以期掌握其生物学特性,为该病害的田间防治提供理论依据。方法:将采回的典型病株进行分离鉴定,同时对其生物学特性进行测定。结果:引起铁皮石斛根腐病的病原菌为镰刀菌属真菌;该菌最适生长温度为30℃;最适pH为7;最适碳源是葡萄糖和蔗糖;菌落生长最适氮源为硝酸钠和硝酸钾,产孢最适氮源为硝酸钠;全黑暗条件能促进菌丝生长和孢子的产生;孢子致死温度为58℃、10 min。结论:引起铁皮石斛根腐病的病原菌为接骨木镰刀菌Fusarium sambucium。     

三七多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白基因的克隆及表达分析

目的克隆三七Panax notoginseng(Burk)F.H.Chen多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白(polygalacturonase-inhibiting protein,PGIP)基因(Pn PGIP)的全长c DNA序列,分析该基因的表达特性。方法根据三七中编码PGIP的EST(expressed sequence tag)序列设计引物,采用c DNA末端快速扩增技术克隆Pn PGIP基因的全长c DNA序列;用q RT-PCR分析Pn PGIP基因的表达水平。结果 PnPGIP基因的cDNA全长为1 171 bp,含有981 bp的开放阅读框,13 bp的5’-非翻译区以及177 bp的3’-非翻译区,编码含326个氨基酸的蛋白质,PnPGIP蛋白的相对分子质量约为36 770,等电点约为5.83;q RT-PCR分析结果显示,Pn PGIP基因的表达量分别在三七接种茄腐镰刀菌和人参链格孢后4 h和2 h内迅速上升;此外,信号分子茉莉酸甲酯(methyl jasmonate,Me JA)、乙烯利(ethylene,ETH)、H2O2、水杨酸(salicylic acid,SA)处理均能不同程度地诱导Pn PGIP基因的表达水平。结论 PnPGIP基因在转录水平响应茄腐镰刀菌和人参链格孢的侵染,并受几种逆境胁迫相关信号分子的诱导,Pn PGIP基因可能参与三七对茄腐镰刀菌和人参链格孢的防卫反应。     

姜黄中氮磷钾的吸收、分布与转运规律

姜黄植株各器官中氮、磷、钾的含量分布以幼嫩器官较高,全株以苗期含量最高,三要素含量顺序为钾>氮>磷。整个生育期间,氮、磷、钾的吸收主要发生在生育中期和后期。氮、磷、钾的转运主要是从叶和叶柄向子姜和母姜转运,其中磷的转运率最高。     

白前与白薇的部分药理作用比较研究

芫花叶白前水提物和柳叶白前醇提物灌胃给药均有明显的镇咳、祛痰作用，两种白前水提物腹腔注射给药均有明显的平喘和抗炎作用。直立白薇水提物有一定的祛痰作用，但无镇咳和平喘作用；而蔓生白薇水提物有一定的平喘作用，但无镇咳和祛痰作用；两种白薇的醇提物均无镇咳和祛痰作用。结果表明两种白薇均不能当作白前入药。     

盐锁阳与锁阳对小鼠睾丸、附睾和包皮腺组织学的比较研究

盐锁阳可使正常和阳虚模型小鼠睾丸曲细精管初级精母细胞分裂活跃，间质细胞及其胞核体积明显增大；附睾管扩张，管腔增大；包皮腺成熟细胞数量增多。锁阳的作用则相反。揭示盐销阳对睾丸、附睾及包皮腺的功能有显著促进作用，而锁阳则有一定抑制作用。     

叠鞘石斛中联苄类成分的定性定量分析

 目的建立叠鞘石斛中联苄类成分的定性、定量分析方法。方法运用薄层色谱法对叠鞘石斛中联苄类成分石斛酚(gigantol)和杓唇石斛素(moscatilin)进行定性分析,采用高效液相色谱法测定石斛酚的含量,以Shim-pack CLC-ODS柱为固定相,流动相乙腈-0.2%甲酸(35∶65),检测波长280 nm,柱温25℃。结果石斛酚在0.196～12.54μg内峰面积与进样量呈良好的线性,r=0.999 9;平均回收率100.6%;RSD3.01%。结论通过10批不同来源的叠鞘石斛的鉴别和含量测定,证明方法灵敏,准确可靠,重复性好。在不同采收期的叠鞘石斛中,石斛酚的含量在春季4,5月份和秋季10,11月份相对高于其他月份。     

痫复康对癫痫大鼠脑电图,自由基及血液流变学的影响

本课题以潜伏期、大发作持续时间、脑组织过氧化脂质、超氧歧化酶、血液流变学诸指标作为观测指标，对痫复康进行了深入的研究。结果显示；痫复康各剂量组与西药组、模型组比较，潜伏期、大发作持续时间在明显差异，痫复康各治疗组对血液流变学诸指标的改善优于西药组；昨康各治疗组大鼠脑组织过氧化脂质含量与西药组比较，圾显差异     

基于DNA条形码和高效液相色谱法鉴定及质量评价三七和越南三七

目的：三七（Panaxnotoginseng（Burk.）F. H. Chen）以其块根及根茎的治疗效果而闻名,越南三七(P. vietnamensis var.fuscidicus)被当地居民称为“野三七”或“越南三七”,已在市场上流通。由于其形态相似,可能会引起临床用药的安全问题,因而迫切需要一种快速而有效的方法进行鉴别。 方法：本研究采用DNA条形码技术对三七与越南三七进行鉴定,利用高效液相法评价二者不同组织三七皂苷R1和人参皂苷（即Rb1、Rg1、Re、Rd、Rc和Rb2）的差异。 结果：条形码结果表明三七与越南三七被聚成不同分支,越南三七与越南人参（Panaxvietnamensis）聚为一支,相似度为98%。三七与越南三七的化学成分组成在根中相似,而在须根、茎、叶和花中种类及含量均有差异。 结论：利用ITS2能快速、有效鉴别三七和越南三七;HPLC结果表明三七和越南三七的药理活性可能存在差异。     

雷公藤属3种植物不同群体和个体中雷公藤甲素的研究

目的测定雷公藤属3种植物(雷公藤、昆明山海棠和黑蔓)不同群体和个体中雷公藤甲素(tripto lide),为评价雷公藤药材质量和寻找雷公藤的优质种质奠定基础。方法建立雷公藤甲素HPLC测定方法,并测定了全国主要分布区25个群体91个个体的木质部和韧皮部中的雷公藤甲素。结果黑蔓的雷公藤甲素质量分数很低;雷公藤和昆明山海棠种间的雷公藤甲素差异不明显,个体质量分数木质部为1.0×10-6~5.83×10-5;韧皮部为2.3×10-6~1.030×1-0 4。结论雷公藤和昆明山海棠不同个体雷公藤甲素质量分数最高值与最低值相差约50倍,不同居群雷公藤甲素质量分数最高值与最低值相差10多倍,不同来源的药材质量差异极大,严重影响用药的安全性;雷公藤甲素质量分数高的居群位于浙江西南部和中部、湖南新宁、贵州雷山和安徽黄山;湖南新宁、贵州雷山和浙江江山居群中有雷公藤甲素质量分数极高的个体,值得进一步研究,以寻找质量分数高的优良单株。     

叠鞘石斛与药典收载石斛品种鞣质含量对比

目的:对叠鞘石斛与药典收载品种金钗、鼓槌和流苏石斛的鞣质含量进行对比研究。方法:以没食子酸为对照,对不同品种石斛药材中鞣质含量进行测定。结果:对叠鞘石斛及药典收载品种的鞣质含量进行了测定,金钗石斛含量最高,叠鞘石斛与流苏石斛含量较为接近。结论:建立的方法稳定、可靠、重复性好,可作为石斛药材中鞣质的含量测定方法。     

Antiparasitic,nematicidal and antifouling constituents from Juniperus berries

A bioassay‐guided fractionation of Juniperus procera berries yielded antiparasitic, nematicidal and antifouling constituents, including a wide range of known abietane, pimarane and labdane diterpenes. Among these, abieta‐7,13‐diene (1) demonstrated in vitro antimalarial activity against Plasmodium falciparum D6 and W2 strains (IC₅₀ = 1.9 and 2.0 µg/mL, respectively), while totarol (6), ferruginol (7) and 7β‐hydroxyabieta‐8,13‐diene‐11,12‐dione (8) inhibited Leishmania donovani promastigotes with IC₅₀ values of 3.5–4.6 µg/mL. In addition, totarol demonstrated nematicidal and antifouling activities against Caenorhabditis elegans and Artemia salina at a concentration of 80 µg/mL and 1 µg/mL, respectively. The resinous exudate of J. virginiana afforded known antibacterial E‐communic acid (4) and 4‐epi‐abietic acid (5), while the volatile oil from its trunk wood revealed large quantities of cedrol (9). Using GC/MS, the two known abietanes totarol (6) and ferruginol (7) were identified from the berries of J. procera, J. excelsa and J. phoenicea. Copyright © 2008 John Wiley & Sons, Ltd.     

草果叶绿体基因组特征及系统发育分析

目的明确草果Amomumtsao-ko叶绿体基因组结构特征及其在姜科的进化地位。方法利用IlluminaHiseq4000测序平台对草果叶绿体基因组进行测序,通过生物信息学分析方法进行序列组装、注释和特征分析,并以绿苞闭鞘姜为外类群,通过MEGA6软件构建ML系统发育树,分析姜科物种间系统发育关系。结果草果叶绿体基因组全长163 648 bp,鸟嘌呤和胞嘧啶含量(guanine-cytosine content,GC)为36.0%,包括一对29 776 bp的反向重复区(IRs)、一个大单拷贝区(LSC,88 741 bp)和一个小单拷贝区(SSC,15 355 bp);共注释得到113个基因,包括4个rRNA基因、30个t RNA基因和79个蛋白编码基因;在草果叶绿体基因组中共检测到123个SSR位点,大部分SSR均由A和T组成;豆蔻属物种叶绿体基因组大小和结构相似,IR边界高度保守;聚类分析显示草果与豆蔻属的海南砂A.longiligulare、阳春砂A.villosum、绿壳砂A.villosum var. xanthioides、爪哇白豆蔻A. compactum和白豆蔻A. kravanh亲缘关系最近;适应性进化分析发现rpl20、rps11、ccsA、clpP、ycf1和ycf2 6个基因在进化过程中被正向选择。结论获得了完整的草果叶绿体基因组序列,明确了姜科物种间的亲缘关系,为研究豆蔻属植物的系统进化及物种鉴定提供科学依据。