二甲双胍对结肠癌HCT116细胞增殖、凋亡的影响

目的研究二甲双胍对结肠癌HCT116细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响,并初步探讨其可能的机制。方法用不同浓度的二甲双胍处理人结肠癌HCT116细胞48 h后,采用细胞增殖检测试剂(CCK-8)实验检测其对细胞增殖能力的影响;流式细胞术检测其对细胞凋亡及周期的影响;Western blotting法检测二甲双胍对HCT116细胞中bcl-2、Casepase-3及p53蛋白的影响。结果分别采用2.5、5、10、20和40 mmol/L二甲双胍处理HCT116细胞48 h后,CCK-8实验表明,各浓度组均可引起结肠癌细胞的增殖抑制作用,呈浓度依赖性;流式细胞仪术结果显示,经药物处理后,与对照组相比,细胞凋亡细胞比例逐渐增加。另外,肿瘤细胞G0/G1期细胞比例无明显改变,S期细胞的比例减少,但G_2/M期细胞的比例逐渐升高;Western blotting检测显示,二甲双胍可抑制抗凋亡蛋白bcl-2的表达,激活Casepase-3、p53蛋白表达。结论二甲双胍可抑制结肠癌细胞增殖,G_2/M期细胞周期阻滞,促进细胞凋亡,其作用机制可能与抑制bcl-2的表达,活化Casepase-3、p53蛋白表达有关。     

白藜芦醇通过上调结肠癌HCT116细胞内凋亡相关分子表达促进细胞凋亡

目的探讨白藜芦醇影响结肠癌生物行为的机制。方法采用结肠癌HCT116细胞,采用体外CCK8实验观察白藜芦醇对结肠癌HCT116细胞增殖的影响;采用TUNEL凋亡实验观察白藜芦醇对结肠癌HCT116细胞凋亡的影响;采用实时定量PCR及Western印迹检测与凋亡相关分子的表达。结果 CCK8实验结果显示,相比于未经白藜芦醇处理的结肠癌HCT116细胞,体外处理结肠癌HCT116 24 h后,随着白藜芦醇剂量(25、50、100μmol/L)的逐渐上调,结肠癌HCT116细胞的活力逐渐下调。TUNEL凋亡实验显示,相比于未经白藜芦醇处理的结肠癌HCT116细胞,白藜芦醇50μmol/L生理剂量可明显上调结肠癌HCT116细胞的凋亡染色率。实时定量PCR与Western印迹实验显示,在白藜芦醇生理剂量(50μmol/L)的处理下,相比于未经白藜芦醇处理的结肠癌HCT116细胞,凋亡相关基因Bax和Bad的表达均上调。结论白藜芦醇通过上调结肠癌HCT116细胞内凋亡相关分子表达促进细胞凋亡。     

褪黑素抑制大鼠肝脏星状细胞增殖机制

目的 观察褪黑素抑制大鼠肝脏星状细胞增殖的机制。方法 MTT法测定活细胞数量,流式细胞仪检测凋亡率和细胞周期, western blotting 检测NF-κB表达水平,放射免疫法检测细胞内cAMP浓度,免疫荧光法测定细胞内钙离子浓度。结果 Mel作用后HSCs增殖能力下降,亚G1凋亡峰增高,细胞内钙离子浓度、cAMP浓度和NF-κB表达水平下降。结论 Mel可能下调细胞内钙离子浓度、cAMP浓度及NF-κB表达水平而促进HSCs凋亡和G1期阻滞,从而抑制增殖。     

奥沙利铂下调survivin表达抑制人结肠癌细胞株HCT116增殖并诱导其凋亡

目的:观察抗肿瘤药物奥沙利铂对人结肠癌细胞株HCT116增殖及凋亡的影响,探讨其作用机制.方法:试验分空白对照组、不同浓度奥沙利铂(15、30、60或90 μM)处理组;向培养基中加入不同浓度奥沙利铂,分别在24、48、72 h取培养的HCT 116细胞;MTT法检测奥沙利铂对细胞增殖的作用;流式细胞术分析细胞周期的分布及凋亡率;Western blot和Real-time PCR检测survivin表达水平.结果:60或90 μM奥沙利铂作用48 h后引起HCT 116细胞G0/G1期阻滞,G0/G1期细胞由51.5%增加到65%,细胞增殖减少;90 μM奥沙利铂作用72 h时,正常对照相比凋亡率增加了近8倍;有明显的survivin表达下调伴随细胞凋亡.结论:奥沙利铂抑制HCT 116细胞增殖、诱导其凋亡并且呈剂量依赖性,其机制可能与下调survivin表达有关.     

核转录因子-κB对β-淀粉样肽25-35诱导下PC12细胞周期的影响

目的 探讨核转录因子κB(NF-κB)在β-淀粉样蛋白(Aβ25-35)肽段诱导的PC12细胞周期异常中的机制.方法 应用流式细胞仪检测技术及Western印迹方法,在Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡过程中检测NF-κB的活性和细胞周期相关蛋白周期蛋白A(cyclin A)、周期蛋白D1(cyclin D1)、周期蛋白E(cyclin E)、周期蛋白依赖性激酶2(CKD2)、周期蛋白依赖性激酶4(CKD4)、周期蛋白依赖性激酶6(CKD6)表达量的变化.分别将PC12同步化于G0期和S期,再检测Aβ25-35诱导对上述指标的影响.抑制NF-κB活性后,进一步检测上述细胞周期相关蛋白在Aβ25-35诱导下的变化.结果 Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡过程中NF-κB活性增加(P＜0.05),同时细胞周期相关蛋白量升高;细胞同步化于G0期,Aβ25-35处理PC12细胞,细胞凋亡率下降,NF-κB活性的增加和细胞周期相关蛋白量升高均受抑制;而同步化于S期,则细胞凋亡率、NF-κB活性的增加和细胞周期相关蛋白量升高均无显著性变化;Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡过程中,抑制NF-κB活性则会引起细胞周期相关蛋白表达受抑制.结论 NF-κB主导了Aβ25-35诱导PC12细胞周期的异常变化,异常发生在G0期到G1期的过渡以及G1期到S期过渡,而不是S期到G2期以及G2期到M期的过渡.     

硼替佐米对HCT8细胞增殖、凋亡及黏附能力的影响

目的: 观察硼替佐米对HCT8细胞增殖、凋亡及黏附能力的影响.方法: 不同浓度梯度(12.5-200 nmol/L)的硼替佐米作用于HCT8细胞后, 用MTT检测细胞增殖抑制作用; 25 nmol/L的硼替佐米作用48 h后, 流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率; Western blot检测E-cadherin、β-catenin、cyclinD1和NF-κB表达.结果: 硼替佐米对HCT8细胞的增殖抑制作用有时间和浓度的依赖性. 25 nmol/L的硼替佐米作用48 h诱导细胞的凋亡, 凋亡率为12.3%,显著高于对照组( P<0.05), 上调了E-cadherin和β-catenin蛋白的表达, 下降了NF-κB和cyclinD1蛋白的表达.结论: 硼替佐米可以抑制HCT8细胞的增殖,诱导细胞凋亡. 抑制NF-κB通路的激活有可能为其作用机制之一; 并有可能增加细胞之间的黏附, 降低肿瘤的远处转移.     

川芎嗪对人骨肉瘤MG-63细胞生长的抑制作用观察及机制探讨

目的 探讨川芎嗪对人骨肉瘤MG-63细胞生长的抑制作用及可能机制.方法 取对数生长期的人骨肉瘤MG-63细胞,随机分为川芎嗪低浓度组、高浓度组和对照组,川芎嗪低浓度组、高浓度组分别予3、30 mg/mL的川芎嗪,对照组加入完全培养液;48 h后采用四氮唑盐比色法检测MG-63细胞增殖抑制率;流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期分布;Westemblot法检测Bcl-2、CyclinD1及NF-κB p65蛋白表达水平.结果 与对照组比较,川芎嗪低浓度组、高浓度组MG-63细胞增殖抑制率、凋亡率及G0/G1期细胞比例均明显升高,NF-κB p65及其靶基因Bcl-2、CyclinD1蛋白表达水平均明显降低,且川芎嗪高浓度组作用更明显;P均＜0.05.结论 川芎嗪对体外培养的MG-63细胞有增殖抑制作用,其机制可能与其促进MG-63细胞凋亡、诱导G0/G1期阻滞、抑制NF-κB及其靶基因的蛋白表达有关.     

氨茶碱对人气道平滑肌细胞增殖抑制及NF-κB表达的影响

目的探讨氨茶碱对人气道平滑肌细胞（HASMC）生长及核因子-κB（NF-κB）表达的影响。方法原代培养HASMC,第4～10代细胞用于实验,细胞用不同浓度氨茶碱（0、50、100、200、400mg/L）诱导培养24h;流式细胞术检测HASMC凋亡和细胞周期动力学变化;免疫细胞化学染色法检测HASMC中NF-κB蛋白表达;运用实时荧光定量聚合酶链反应检测HASMC的NF-κBmRNA水平的变化。结果氨茶碱可以促进气道平滑肌细胞凋亡,而且随着氨茶碱浓度的提高,NF-κBmR-NA和蛋白的表达量均逐渐减少。结论氨茶碱可以通过降低NF-κB的表达进而抑制HASMC的增殖并促进凋亡发生。     

马鞭草总黄酮对肝癌HepG-2细胞凋亡的影响

目的探讨马鞭草总黄酮(TFV)对肝癌Hep G-2细胞增殖和凋亡的影响。方法 MTT法检测TFV对肝癌Hep G-2细胞增殖的影响,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡水平,Western印迹法检测核因子(NF)-κB p65和IκB-α蛋白表达情况。结果与阴性对照组比较,不同浓度TFV能明显抑制Hep G-2细胞的生长(P0.01),呈浓度和时间依赖性。TFV作用于Hep G-2细胞24 h后,Hep G-2 G0/G1期细胞比例下降,S期和G2/M期细胞百分率增加(P0.05),诱导细胞凋亡效果明显(P0.01),能明显的降低NF-κBp65表达,升高IκB-α蛋白表达(P0.05)。结论 TFV能抑制Hep G-2细胞的增殖,诱导细胞凋亡,机制可能与促进IκB-α蛋白表达,下调NF-κBp65蛋白表达有关。     

花青素协同奥沙利铂对人结肠癌HCT116细胞增殖及凋亡的影响

目的 探究花青素协同奥沙利铂对人结肠癌HCT116细胞增殖及凋亡的机制。方法 体外培养人结肠癌HCT116细胞,并分为:对照组、花青素组、奥沙利铂组、联合组;采用MTT法检测花青素、奥沙利铂单药及联合使用对人结肠癌HCT116细胞的增殖情况;采用克隆形成实验检测细胞生长情况;采用流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况;采用Western blot检测TGF-βsmad信号通路相关蛋白及增殖凋亡蛋白表达情况。结果 由MTT实验发现,花青素对人结肠癌HCT116细胞48 h的半数致死浓度(IC50)为100 g/L,奥沙利铂人结肠癌HCT116细胞48 h的IC50为0. 01 g/L,两者联合使用其半数致死浓度显著下降为60 g/L和0. 6 g/L。相比对照组,花青素组和奥沙利铂组克隆形成率、Ki67蛋白相对表达、Bcl-2蛋白相对表达水平显著降低(P 0. 01),人结肠癌HCT116细胞凋亡率、Bax蛋白相对表达、Smad2和p-Smad2蛋白相对表达、Smad3和p-Smad3蛋白相对表达、TGF蛋白相对表达均显著升高(P 0. 01);相比花青素组和奥沙利铂组,联合组克隆形成率、Ki67蛋白相对表达、Bcl-2蛋白相对表达水平显著降低(P 0. 01),人结肠癌HCT116细胞凋亡率、Bax蛋白相对表达、Smad2和p-Smad2蛋白相对表达、Smad3和p-Smad3蛋白相对表达、TGF蛋白相对表达均显著升高(P 0. 01)。结论 花青素协同奥沙利铂可以促进人结肠癌HCT116细胞的凋亡并抑制其增殖,且作用效果显著优于使用单一药物,其作用机制可能是通过调节TGF-β/Smad信号通路实现。     

缺氧对大鼠主动脉平滑肌细胞增殖的实验研究

目的探讨缺氧对培养的大鼠主动脉平滑肌细胞(VSMCs)增殖的影响及其可能机制.方法分别在常氧和缺氧12、24、48 h条件下体外培养大鼠VSMCs,应用3H-TdR掺入实验和MTT比色法检测细胞增殖情况,流式细胞术测定细胞周期,同时用免疫细胞化学法检测缺氧对增殖细胞核抗原(PCNA)和核转录因子NF-κB蛋白表达的影响.结果 VSMCs在缺氧时对3H-TdR摄取量、MTT比色吸光度A值、细胞周期中S期和G2/M期细胞百分比、PCNA和NF-κB蛋白表达明显高于常氧组(P<0.05或P<0.01).结论缺氧可诱导VSMCs增殖,促使细胞进入有丝分裂期,增强PCNA和NF-κB蛋白表达可能是其重要机制之一.     

核转录因子-κB圈套寡核苷酸对环格列酮诱导肺癌细胞分化作用的影响

目的 探讨核转录因子-κB(NF-κB)圈套寡核苷酸在环格列酮对肺癌细胞A549增殖抑制和分化调控过程中的影响。方法 运用基因转染技术将NF-κB圈套寡核苷酸转入人肺癌细胞A549中,凝胶阻滞分析实验(EMSA)检测转染前后NF-κB活性的变化,免疫印迹观察转染前后多药耐药蛋白(mdrl)的变化。进而以。100μmol/L环格列酮处理转染和未转染的细胞1-4d,生长曲线观察A549细胞生长,流式细胞仪进行细胞周期分析,免疫印迹观察处理前后细胞周期素D1的变化。结果 (1)EMSA显示转染后NF-κB活性明显下降,mdrl蛋白表达水平降低。(2)环格列酮能抑制A549细胞增殖。(3)转染NF-κB圈套寡核苷酸增强环格列酮对A549细胞增殖的抑制作用,更多的细胞被阻滞于G1／G0期,细胞中细胞周期素D1的水平更低。结论NF-κB圈套寡核苷酸能增加肺癌细胞A549对环格列酮的敏感性,即NF-κB圈套寡核苷酸能协同环格列酮抑制肺癌细胞A549的恶性增殖及诱导其分化。     

miR-613靶向KLF4对结肠癌增殖及迁移的影响及其分子机制

[目的]确定miR-613在结肠癌组织和结肠癌细胞系中的表达以及miR-613靶向KrüPPel样因子4(KLF4)对人结肠癌细胞增殖、迁移的影响。[方法]采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测35例结肠癌组织及其癌旁组织中miR-613和KLF4的表达水平,并进行相关性分析。并采用qRT-PCR检测miR-613在结肠癌细胞系(SW480,SW620,HCT116,DLD1,LOVO,NCM460,RKO)中的表达。在HCT116和SW480中分别转染miR-613模拟物和抑制剂。CCK8及EDU实验用于检测转染前后细胞增殖能力的改变。Transwell实验检测细胞迁移能力的改变。使用双荧光素酶报告基因测量miR-613与KLF4的相互作用关系。功能回复实验用于确定miR-613靶向KLF4对结肠癌细胞增殖、迁移的影响。[结果]miR-613 mRNA在结肠癌组织中表达明显高于其癌旁组织(P0.05);KLF4在结肠癌组织中表达明显低于其癌旁组织(P0.05);miR-613与KLF4表达呈负相关(R~2=0.74,P0.001)。在结肠癌细胞系中,HCT116中miR-613的表达水平最低,SW480中miR-613的表达水平最高。在HCT116中,miR-613的表达上调后,细胞增殖活性显著于阴性对照组(P0.05);细胞迁移能力明显升高(P0.05);KLF4蛋白表达水平明显降低(P0.05)。SW480细胞中,抑制miR-613表达后,增殖活性明显低于阴性对照组(P0.05);细胞迁移能力明显降低(P0.05);KLF4蛋白表达水平明显降低(P0.05)。在HCT116细胞中,miR-613模拟物与KLF4 3'UTR野生型质粒共转染,与阴性对照组比较,荧光素酶活性显著增加,差异有统计学意义(P0.05)。miR-613抑制剂和si-KLF4共转染至结肠癌细胞后,si-KLF4可挽救由于miR-613低表达导致的细胞增殖、迁移能力的降低。[结论]miR-613在结肠癌组织中高表达;miR-613通过靶向KLF4基因调控结肠癌细胞的增殖和迁移。     

miR-204靶向GPRC5A对结肠癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的 探讨微小RNA-204(miR-204)对结肠癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响。方法 体外培养人正常结肠上皮细胞(FHC)和人结肠癌肿瘤细胞(HCT116);将HCT116细胞随机分为对照组、miR-204 mimic组和miR-204 NC组;利用实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-qPCR)检测各组HCT116细胞miR-204及G蛋白耦联受体C型家族(GPRC)5A表达情况;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测各组HCT116细胞的增殖情况;划痕实验检测各组HCT116细胞的迁移能力;Transwell法检测各组HCT116细胞的侵袭能力;Western检测各组HCT116细胞GPRC5A蛋白的表达情况;采用双荧光素酶报告实验验证miR-204与GPRC5A的靶向关系。结果 与正常组相比,各组HCT116细胞miR-204表达水平显著降低(P<0.05)。与对照组和miR-204 NC组相比,miR-204 mimic组HCT116细胞miR-204表达水平显著升高(P<0.05),细胞存活率、划痕愈合率、侵袭数量、GPRC5A mRNA及GPRC5A蛋白表达水平显...     

白藜芦醇对肺癌A549细胞增殖及NF-κB表达的影响

目的研究白藜芦醇对肺癌细胞A549增殖与NF-κB表达的影响。方法采用MTT法检测白藜芦醇对A549细胞增殖的影响;采用RT-PCR法检测白藜芦醇对A549细胞NF-κB mRNA表达的作用;用Western印迹法检测白藜芦醇作用后NF-κB在A549中的表达。结果白藜芦醇对A549细胞增殖抑制作用具有时间与剂量依赖性;白藜芦醇作用48 h后可以明显抑制NF-κB mRNA和蛋白的表达。结论白藜芦醇可以抑制A549细胞增殖及NF-κB在其中的表达。     

丁酸钠对人结肠癌细胞株SW480增殖及凋亡的影响及其机制

将2.85 mmol/L丁酸钠(NaB)体外作用于人结肠癌SW480细胞12、24、48 h分别用半定量RT-PCR法与Western-blot法检测p21基因mRNA及蛋白表达变化;并用FCM检测细胞周期变化.结果 p21基因mRNA 及p21蛋白表达随时间延长逐渐增加;结肠癌SW480细胞周期阻滞于G0/G1期,S期比例明显减少,细胞增殖指数下降.认为NaB可诱导结肠癌细胞凋亡,其机制可能为细胞周期阻滞及p21蛋白高表达.     

NF-κB对肺癌细胞生长、细胞周期及肿瘤坏死因子-α分泌的影响

目的探讨核因子(NF)-κB对肺癌细胞生长、细胞周期及分泌肿瘤坏死因子(TNF)-α的影响。方法用NF-κB抑制剂SN50处理肺癌细胞,MTT测定细胞增殖,流式细胞术测定细胞周期和细胞凋亡,酶联免疫吸附试验(ELISA)测定培养液上清中TNF-α含量,Western印迹测定细胞中细胞周期蛋白(Cyclin)B1、Cyclin D1、剪切的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(酶切Caspase)-3、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、NF-κBp65蛋白水平。结果 SN50能够抑制肺癌细胞的增殖,且随着SN50作用浓度和作用时间的增加抑制增殖作用越强。SN50组凋亡率明显高于对照组(P0.05)。SN50组肺癌细胞G2/M比例明显高于对照组(P0.05)。SN50组TNF-α水平明显高于对照组(P0.05),Cyclin B1、Cyclin D1、NF-κBp65蛋白水平明显低于对照组,而酶切Caspase-3、Bax水平明显高于对照组(P0.05)。结论抑制NF-κB信号通路可以阻碍肺癌细胞增殖,将细胞周期阻滞在G2/M期,诱导细胞凋亡,促进细胞中酶切Caspase-3、Bax表达,下调细胞中Cyclin B1、Cyclin D1蛋白水平。     

siRNA沉默ERCC1基因表达对结肠癌细胞奥沙利铂耐药的影响和机制

目的 采用小干扰RNA(siRNA)技术作用于人结肠癌细胞HCT116中的ERCC1,探讨其对结肠癌铂类耐药细胞株增殖、凋亡的影响。方法 体外培养结肠癌奥沙利铂耐药细胞株HCT116/L-OHP并验证其耐药性;qRT-PCR和蛋白印迹技术检测细胞和组织中ERCC1表达量的变化;采用siRNA-NC和siRNA-ERCC1转染细胞,CCK-8法检测耐药细胞的增殖能力,流式细胞术检测耐药细胞的凋亡变化。结果 结肠癌耐药组织和人结肠癌耐药细胞HCT116/L-OHP ERCC1的表达水平明显升高(P<0.05);转染siRNA ERCC1后,HCT116/L-OHP细胞中的ERCC1 mRNA和蛋白水平明显降低(P<0.05);奥沙利铂联合处理后,siRNA ERCC1转染使HCT116/L-OHP细胞的增殖活性下降、凋亡率升高。结论 siRNA能有效下调ERCC1基因表达,抑制细胞增殖,增加细胞凋亡,增强奥沙利铂对耐药细胞株HCT116/L-OHP的杀伤作用。     

RNA干扰沉默STAT3基因表达对人大肠癌细胞生物学行为的影响

目的探讨RNA干扰(RNAi)技术沉默STAT3基因表达对人大肠癌细胞生物学行为的影响。方法采用真核细胞转染技术将pSi-lencer3.0-H1-siRNA-STAT3重组质粒转染人结肠癌HCT116细胞,MTT法检测细胞增殖,RT-PCR、Western blot及免疫组化法分别观察STAT3基因和蛋白的变化,流式细胞仪及AO/EB染色观察细胞凋亡。结果 pSilencer3.0-H1-siRNA-STAT3重组质粒对大肠癌细胞的增殖有明显抑制作用,与空白组及阴性组相比差异有统计学意义(P0.05);在重组质粒组,STAT3基因mRNA及蛋白的表达与空白组及阴性组相比明显减低(P0.05);重组质粒可诱导HCT116细胞凋亡,细胞周期分期示细胞阻滞于G2期。结论 pSilencer3.0-H1-siRNA-STAT3重组质粒可抑制STAT3基因在人大肠癌细胞中的表达。     

白藜芦醇对白血病K562细胞增殖、凋亡的影响及机制探讨

目的 探讨白藜芦醇对白血病K562细胞生长的影响及相关作用机制.方法 用不同浓度白藜芦醇作用于K562细胞,CCK-8法观察白藜芦醇对K562细胞生长增殖的影响,AnnexinV-FITC/PI双染法观察白藜芦醇对K562细胞凋亡的影响,PI染色法观察白藜芦醇对K562细胞周期的影响,Western blot法检测K562细胞中的Bcl-2、Bcl-xl、Bax、Cyclin D1蛋白.结果 白藜芦醇作用后的K562细胞的增殖被抑制并且凋亡增加,呈时间-剂量依赖性;同时,凋亡相关分子Bcl-2、Bcl-xl表达下调,Bax表达上调;白藜芦醇作用K562细胞后,G1期细胞增多,S期细胞减少,细胞周期调节蛋白Cyclin D1表达下降.结论 白藜芦醇可抑制K562细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与下调细胞内Bcl-2、Bcl-xl、Cyclin D1表达并上调Bax的表达有关.