基于有效成分含量变化探讨生杜仲及盐制品与甘草、续断的配伍比例

目的:考察生杜仲及炮制品盐杜仲与甘草、续断不同比例配伍后,杜仲中3种有效成分的变化规律。方法:制备生杜仲、盐杜仲、甘草、续断单煎液和生杜仲-甘草、盐杜仲-甘草、生杜仲-续断、盐杜仲-续断配伍的合煎液,采用HPLC法检测其京尼平苷酸、绿原酸和松脂醇二葡萄糖苷的含量,计算各组煎出率并绘制有效成分煎出量与配伍比例的关系曲线。结果:杜仲盐制后,水煎液中京尼平苷酸、绿原酸和松脂醇二葡萄糖苷的煎出量均增加。生杜仲-甘草大部分配伍组中京尼平苷酸和松脂醇二葡萄糖苷的煎出量随甘草比例的增加而升高,而绿原酸的煎出量逐渐下降。盐杜仲-甘草配伍后,松脂醇二葡萄糖苷和绿原酸的煎出量大部分随甘草占比增加而显著减小,而京尼平苷酸的煎出量逐渐增加;生杜仲-续断配伍和盐杜仲-续断配伍后,京尼平苷酸、绿原酸和松脂醇二葡萄糖苷的煎出量变化趋势相近,均随续断的占比增加而增加。结论:杜仲盐炒及配伍有利于有效成分的煎出。杜仲、盐杜仲与甘草、续断联合用药时需注意配伍比例以增强临床疗效。     

基于入血成分的杜仲药材的含量测定

建立杜仲药材中京尼平苷酸、绿原酸、松脂醇二葡萄糖苷3种原型入血成分的含量测定方法.采用LC-MS/MS检测技术确定大鼠灌胃杜仲提取物后吸收入血的药物成分,结合高效液相色谱技术检测23批杜仲样品中入血成分的含量.结果表明,大鼠口服杜仲提取液后,京尼平苷酸、绿原酸和松脂醇二葡萄糖苷均以原型入血;以杜仲药材中的京尼平苷酸、绿原酸和松脂醇二葡萄糖为对照品建立的含量测定方法线性范围良好,平均回收率分别为98.69%,100.8%,98.39%.该方法简便可行、回收率和重复性良好.     

UPLC-MS/MS同时测定大鼠血浆中杜仲的五个成分及其药代动力学研究

目的建立大鼠血浆中京尼平苷酸、原儿茶酸、绿原酸、松脂醇二葡萄糖苷、松脂醇单葡萄糖苷的UPLC-MS/MS测定方法,并进行五种成分在大鼠体内药代动力学研究。方法大鼠静脉注射杜仲提取物后,采用甲醇沉淀血浆蛋白,以葛根素为内标,采用Waters BEH C18(2.1 mm×100 mm,1.7μm)色谱柱,0.1%甲酸乙腈-0.1%甲酸水溶液梯度洗脱,采用电喷雾电离源(ESI),以多反应监测(MRM)方式进行检测。结果京尼平苷酸等五种成分在血浆中呈良好线性关系。方法学考察均符合要求,日内、日间精密度、准确度和稳定性良好,提取回收率86.06%~104.39%,无基质效应。京尼平苷酸等5个指标成分在大鼠体内消除较快。结论建立的HPLC-MS/MS测定方法能快速灵敏地检测生物样品中京尼平苷酸、原儿茶酸、绿原酸、松脂醇二葡萄糖苷和松脂醇单葡萄糖苷的血药浓度,可用于五种成分的药代动力学研究。     

UPLC-MS测定杜仲的3种成分及其药代动力学研究

目的:通过超高效液相色谱联合质谱法测定杜仲的3种成分及其药代动力学研究。方法:本研究的质谱采用电喷雾电离源(ESI),通过多反应离子监测这一扫描方式对京尼平苷酸、绿原酸和松脂醇二葡萄糖苷等3种成分及内标用于定量分析的监测离子。结果:1)杜仲中京尼平苷酸、绿原酸、松脂醇二葡萄糖苷等3个指标性成分的分离良好,无内源性物质干扰,具有较好的专属性。2) UPLC方法严谨性,其精密度、稳定性试验、重复性试验、加样回收率等均良好。3)京尼平苷酸和松脂醇二葡萄糖苷在大鼠体内的药代动力学具有非线性特征,仅绿原酸存在线性特征;而CLz、Vz参数指标的差异比较大,显示大鼠血浆中杜仲提取物中的3种成分在大鼠体内的药代动力学代谢过程不一致。结论:UPLC-MS/MS的操作简单,结果具有较好的精密度、稳定性和重复性,可作为杜仲有效成分及药代动力学研究的可靠方法。     

基于大鼠离体外翻肠囊模型考察杜仲提取物在正常和自发性高血压状态下的肠吸收特性差异

目的:研究杜仲提取物在正常大鼠和自发性高血压大鼠的肠吸收特性差异。方法:采用大鼠外翻肠囊模型,收集10.0 g·L-1杜仲提取物给药后不同时间点的肠囊液,通过UPLC-MS/MS检测肠吸收液样品中京尼平苷酸、原儿茶酸、新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、松脂醇二葡萄糖苷、松脂醇单葡萄糖苷7个成分的含量,计算累积吸收量和吸收速率常数,比较正常大鼠和自发性高血压大鼠肠吸收液中杜仲提取物各指标成分的吸收情况。结果:杜仲提取物中7种成分的肠吸收均为线性吸收(R2均0.99),主要吸收部位在小肠,正常状态下以十二指肠的吸收最好。原儿茶酸和松脂醇二葡萄糖苷在高血压状态下的空肠有更好吸收,提示病理状态可能会改变药物吸收的特定部位。7个指标成分在SHR模型的肠吸收与正常大鼠相比均表现出了不同程度的差异。京尼平苷酸在自发性高血压大鼠各肠段的吸收弱于正常大鼠,但以松脂醇二葡萄糖苷为代表的其他成分都没有表现出一致的吸收趋势。结论:自发性高血压会影响杜仲提取物的肠吸收,从肠黏膜通透性降低和吸收部位后移的角度无法完全解释这些差异,可能还与肠道中存在的酶和转运蛋白等相关,具体作用机制有待进一步的深入研究。     

HPLC法同时测定杜仲皮中京尼平苷酸、绿原酸、京尼平苷和松脂醇二葡萄糖苷

目的 HPLC法同时测定杜仲皮中京尼平苷酸、绿原酸、京尼平苷、松脂醇二葡萄糖苷4种有效成分的量,为更好控制杜仲皮质量提供依据.方法 采用Kromasil C18柱(200 mm×4.6 mm,5μm),乙腈(A)-0.1％磷酸水溶液(B)梯度洗脱,0～7 min,7％ A; 7～35 min,14％A; 35～45 min,15％A.体积流量1.0 mL/min,检测波长235 nm,柱温30℃.结果 在该色谱条件下,京尼平苷酸、绿原酸、京尼平苷、松脂醇二葡萄糖苷分别在0.1025～0.5125 (r=0.9999)、0.0925～0.4625(r=0.9999)、0.1200～0.6000(r=0.9996)、0.0900～0.4500 μg/mL (r=0.9998)内与色谱峰峰面积呈现良好的线性关系,加样回收率分别为98.97％、98.71％、98.20％、100.44％,RSD分别为1.54％、1.30％、0.76％、1.13％.结论 该分析方法快速准确、重现性好,可为杜仲药材的质量控制与标准的完善提供可靠的检测依据.     

基于物质基础研究甘草用量对吴茱萸和制吴茱萸煎出率的影响

目的:考察吴茱萸用甘草炮制前后,其有效成分含量以及水煎出率的差异,探索甘草与吴茱萸配伍比例与煎出率的关系。方法:以吴茱萸有效成分吴茱萸内酯、吴茱萸碱和吴茱萸次碱为研究对象,采用HPLC-DAD检测吴茱萸用甘草炮制前后有其效成分含量变化,以及不同比例甘草与吴茱萸同煎有效成分煎出率,并绘制有效成分煎出量与甘草比例的关系曲线。结果:甘草制吴茱萸后,有效成分吴茱萸内酯、吴茱萸碱含量均有下降,但煎出率显著升高;吴茱萸和制吴茱萸水煎液中吴茱萸内酯煎出率分别为5.317和6.451%,吴茱萸碱煎出率分别为0.166%和0.437%,吴茱萸次碱煎出率均为0;甘草与吴茱萸同煎组,甘草比例小于1∶3时,吴茱萸内酯煎出率较不加甘草组高,比例在小于1∶2时,吴茱萸碱煎出率较不加甘草组高;而制吴茱萸各组,加入甘草组吴茱萸内酯和吴茱萸碱煎出率均小于不加甘草组。结论:甘草炮制吴茱萸有利于有效成分吴茱萸内酯、吴茱萸碱的煎出;吴茱萸次碱水煎不能煎出,可能为"外用吴茱萸有降压作用,而水煎内服无此作用"的科学解释;制吴茱萸与甘草配伍会降低吴茱萸有效成分的煎出,建议临床配伍慎用。     

杜仲不同炮制品化学成分研究

根据2010年版《中国药典》制备生杜仲、盐杜仲、杜仲炭3个规格炮制品,按照2010年版《中国药典》标准对各炮制品进行各项指标检测,均符合药典要求。运用HPLC-DAD对生杜仲、盐杜仲、杜仲炭及杜仲叶中化学成分进行比较分析,结果显示:1杜仲皮主要含有木脂素类化合物松脂醇二葡萄糖及环烯醚萜类化合物京尼平、京尼平苷、京尼平苷酸,而杜仲叶主要含有黄酮类化合物槲皮素和酚酸类化合物绿原酸;2杜仲皮中松脂醇二葡萄糖含量约是杜仲叶中含量的18倍,盐炙和炒炭后松脂醇二葡萄糖质量分数约分别下降30%,85%;3杜仲皮中京尼平、京尼平苷和京尼平甘酸含量约为杜仲叶中京尼平、京尼平苷和京尼平甘酸含量的3,23,28倍,盐炙后京尼平、京尼平苷和京尼平甘酸质量分数分别降低25%,40%,40%,炒炭后京尼平、京尼平苷和京尼平甘酸质量分数分别降低98%,70%,70%;4杜仲皮中咖啡酸含量约是杜仲叶中咖啡酸含量的3倍,盐炙后咖啡酸质量分数约下降50%,炒炭后咖啡酸质量分数下降约75%;杜仲皮中绿原酸含量约为杜仲叶中绿原酸含量的1/6,盐炙和炒炭后绿原酸质量分数分别下降40%,75%;杜仲皮中槲皮素含量仅为杜仲叶中1/40,盐炙和炒炭后槲皮素质量分数分别降低60%,50%。     

不同配伍配比对麻黄甘草药对有效成分含量及抗炎活性的影响

目的:研究麻黄甘草不同比例配伍前后水煎液中有效成分含量及其抗炎作用的变化,探讨两药的配伍规律。方法:采用GC-MS测定各水煎液中盐酸去甲基伪麻黄碱、盐酸去甲基麻黄碱、盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱、盐酸甲基麻黄碱的煎出量;采用HPLC测定各水煎液中甘草苷和甘草酸的煎出量。通过对醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性增高的影响,来观察麻黄、甘草药对不同配伍配比水煎液的抗炎作用。结果:与单煎液相比,麻黄与甘草配伍后,随着配伍药材比例增大,水煎液中有效成分的含量均有不同程度的降低。与空白组比较,各给药组对醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性增高均有不同程度地抑制作用,差异有统计学意义(P<0.05);与单味麻黄或甘草组比较,麻黄甘草(12:3)组和阳性对照组对醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性增高均有抑制作用,差异有统计学意义(P<0.05),其余各配伍组均无统计学意义。结论:麻黄甘草配伍后,对彼此有效成分的溶出有一定的抑制作用。推断二药配伍后,甘草中有机酸和麻黄中生物碱之间可能发生了化学反应,生成难溶于水的生物碱有机酸复盐,导致配伍后水煎液中有效成分含量降低。麻黄甘草配伍组对醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性增高有显著的抑制作用,随着甘草配伍比例的增加,抑制作用降低,推断是水煎液中有效成分含量降低所致。     

不同配伍比例对麻黄-杏仁药对有效成分含量的影响

目的 探讨药对麻黄-杏仁不同比例配伍对水煎液中有效成分含量的影响.方法 采用HPLC分别测定麻黄与杏仁不同比例配伍的水煎液中苦杏仁苷、盐酸去甲基麻黄碱(NME)、盐酸去甲基伪麻黄碱(NMP)、盐酸麻黄碱(E)、盐酸伪麻黄碱(PE)、盐酸甲基麻黄碱(ME)的煎出量.结果 不同比例的麻黄-杏仁配伍后对水煎液中有效成分含量的影响具有显著性差异(P＜0.05).结论 药对麻黄-杏仁配伍后可以显著增加有效成分苦杏仁苷的含量,与麻黄单煎液相比,苦杏仁的加入则会降低麻黄生物碱的煎出量.     

一测多评法结合指纹图谱对杜仲质量控制的研究

目的:建立杜仲多指标HPLC指纹图谱,并应用一测多评法对药材中松脂醇二葡萄糖苷(PDG)、绿原酸(CA)、京尼平苷酸(PA)的含量同时进行测定.方法:采用WelchromTMC18110A(4.6 mm×250 mm,5.μm)色谱柱,以甲醇-0.3％冰醋酸进行梯度洗脱,柱温20℃,流速1 mL· min-1,检测波长238 nm,以松脂醇二葡萄糖苷、绿原酸、京尼平苷酸和京尼平苷(GP)为指标性成分建立杜仲药材的指纹图谱.以绿原酸为参照内标,通过相对校正因子对松脂醇二葡萄糖苷、绿原酸、京尼平苷酸进行含量测定.结果:建立了杜仲多指标HPLC指纹图谱,标定了12个共有指纹峰.对杜仲中3个成分用一测多评法进行了测定,其计算值与外标法实测值之间没有明显差异.结论:建立了杜仲药材多指标HPLC指纹图谱和一测多评法对松脂醇二葡萄糖苷、绿原酸、京尼平甘酸进行同时测定的方法,该方法简便可行,为更全面合理科学地对杜仲药材质量的评价提供了技术支撑.     

配伍对三拗汤煎液中5种成分煎出量及指纹图谱的影响

目的 建立HPLC同时测定三拗汤中5种成分(麻黄碱、伪麻黄碱、苦杏仁苷、甘草苷、甘草酸)含量的分析,研究配伍对汤剂中5种成分煎出量的影响,并对其指纹图谱进行比较.方法 以HPLC法测定不同配伍的三拗汤水煎液中5种成分的含量.结果 该方法准确、灵敏,可用于三拗汤中多成分含量的测定.甘草减少了煎液中麻黄碱的煎出量,麻黄减少了煎液中甘草苷和甘草酸的煎出量,配伍增加了煎液中苦杏仁苷的煎出量,配伍对煎液中伪麻黄碱的的煎出量没有影响.结论 三拗汤在煎煮过程中成分含量存在动态变化.     

HPLC法测定杜仲雄花和杜仲雄花茶中京尼平苷酸、绿原酸和京尼平苷

目的 建立同时测定杜仲雄花及其制剂杜仲雄花茶中京尼平苷酸、绿原酸和京尼平苷的方法.方法 采用反相高效液相色谱法,色谱条件为迪马公司I=)iamonsilTM C18 色谱柱(150 mm×4.6 mE,5 μm),甲醇-水-冰醋酸(15:85:1.5)为流动相,体积流量为1 mL/min,柱温为25～27℃,检测波长为237 am,灵敏度为0.100 0 AIJFS.结果 京尼平苷酸、绿原酸及京尼平苷进样量与色谱峰面积线性关系良好.结论 该方法简便、准确,可用于杜仲雄花及杜仲雄花茶中京尼平苷酸、绿原酸及京尼平苷的测定.     

不同配伍配比对麻黄-桂枝药对有效成分含量的影响

目的:研究麻黄-桂枝不同比例配伍前后水煎液中有效成分含量的变化,探讨两药的配伍规律.方法:采用GCMS测定水煎液中盐酸去甲基伪麻黄碱(NMP)、盐酸去甲基麻黄碱(NME)、盐酸麻黄碱(E)、盐酸伪麻黄碱(PE)、盐酸甲基麻黄碱(ME)的煎出量;采用HPLC测定水煎液中香豆素、桂皮醇和桂皮醛的煎出量.结果:与单煎液相比,麻黄与桂枝配伍后,随着配伍药材比例增大,水煎液中以上各有效成分含量均有不同程度的降低,5种麻黄生物碱含量下降幅度在15％～42％,香豆素、桂皮醇、桂皮醛的含量下降幅度在16％～57％.结论:麻黄-桂枝不同比例配伍后,对彼此有效成分的溶出有一定的抑制作用.     

杜仲板皮和枝皮中4种有效成分差异性比较

目的采用RP-HPLC法测定杜仲板皮和枝皮中桃叶珊瑚苷、绿原酸、京尼平苷和松脂醇二葡萄糖苷的量。方法采用Cosmosil C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-0.1%磷酸水溶液进行梯度洗脱,体积流量0.8 m L/min,检测波长208 nm,柱温25℃。结果杜仲板皮中桃叶珊瑚苷、松脂醇二葡萄糖苷量大于枝皮,枝皮绿原酸、京尼平苷量大于板皮;在不同产地来源上,杜仲板皮和枝皮中桃叶珊瑚苷、绿原酸、京尼平苷和松脂醇二葡萄糖苷平均质量分数有一定差异性。结论该方法简便、快速、准确可靠,为更全面合理科学地对杜仲药材质量的评价提供了技术支撑。     

多波长高效液相色谱法同时测定杜仲中三类有效成分

目的应用高效液相色谱法同时对杜仲中三类有效成分进行测定,为杜仲的鉴别提供了可靠的方法。方法采用Dionex C18柱(5μm,250mm×4.6mm),流动相组成为甲醇—0.1%磷酸水进行梯度洗脱,流速为1.0mL/min,检测波长分别为210nm、240nm、280nm、320nm,柱温为25℃。结果色谱峰分离情况良好,利用高效液相色谱法对杜仲中的京尼平苷酸,绿原酸,松脂醇二葡萄糖苷,桃叶珊瑚苷同时进行测定。结论该方法简便,重现性好,能同时测定杜仲中三类有效成分,为有效地控制杜仲药材的内在质量提供科学依据。     

高效液相色谱法同时测定杜仲药材中绿原酸和松脂醇二葡萄糖苷的含量

目的 建立同时测定杜仲药材中绿原酸和松脂醇二葡萄糖苷含量的高效液相色谱法.方法 采用Diamonsil C18柱(5μm,250mm×4.6 mm),以乙腈-水-0.4%磷酸水溶液(15:85:0.5)为流动相,检测波长227nm.结果 样品中绿原酸和松脂醇二葡萄糖苷的加样回收率分别为95%～98%,96%～103%;绿原酸和松脂醇二葡萄糖苷的线性范围分别为0.298～2.98μg,r=0.9999和0.872～8.72μg,r=0.9998.结论 贵州不同产地杜仲药材皮及叶中绿原酸、松脂醇二葡萄糖苷的含量差异很大.     

金银花-连翘配伍比例对有效成分溶出和大鼠体内药动学的影响

目的:比较金银花-连翘药对配伍前后及不同配伍比例煎出液中绿原酸、连翘苷、连翘酯苷A的溶出量,考察配伍比例对绿原酸在大鼠体内药动学行为的影响.方法:采用HPLC测定金银花-连翘单煎、共煎提取物中绿原酸、连翘苷、连翘酯苷A的含量;分别给予大鼠灌胃金银花-连翘1∶1,1∶2共煎提取物(剂量为绿原酸60 mg· kg-),测定血浆中绿原酸浓度,用DAS软件根据非房室模型法计算药动学参数.结果:绿原酸和连翘苷在共煎提取物中含量高于单煎提取物,而连翘酯苷A在药对中煎出量低于连翘单煎液.金银花-连翘(1∶1,1∶2)共煎提取物的药时曲线下面积(AUC0-t)分别为0.95,1.19 mg·h.L-1,Cmax分别为0.18,0.26 mg·L-1,药动学行为无显著差异.结论:金银花-连翘配伍有助于绿原酸和连翘苷的溶出,但连翘酯苷A的溶出量减少.不同配伍比例的金银花-连翘提取物按相同绿原酸剂量给药,绿原酸在大鼠体内的药动学参数无明显差异.     

苦杏仁与甘草不同配比对苦杏仁苷煎出量影响的研究

目的：研究苦杏仁单煎及与不同比例甘草配伍共煎时汤液中苦杏仁苷含量变化,以指导临床合理用药。方法：采用HPLC测定苦杏仁单煎及其与不同比例甘草配伍共煎时汤液中苦杏仁苷含量。结果：苦杏仁单煎有效成分苦杏仁苷含量先升高后降低,与甘草共煎（3∶4）时苦杏仁苷含量降低最多。结论：苦杏仁长时间煎煮可降低汤液中的苦杏仁苷含量;甘草能降低苦杏仁汤液中苦杏仁苷的含量。     

杜仲降血压成分的组合及血管舒张作用

目的 :对杜仲降血压有效成分进行组合,研究单组分及组合物对大鼠胸主动脉的舒张作用。 方法 :从杜仲皮中提取降血压有效成分松脂醇二葡糖苷,绿原酸,京尼平苷,京尼平苷酸,槲皮素,芦丁,桃叶珊瑚苷,以大鼠胸主动脉环为标本,观察单组分以及各组分两两组合后对NE预收缩的血管舒张作用。 结果 :实验表明,组合后有效成分的舒血管作用较单个组分明显。 结论 :松脂醇二葡糖苷和槲皮素在组合比例为1 ∶1时,其血管舒张作用最好。