TMEFF2基因对SH-SY5Y细胞增殖的影响

目的探讨TMEFF2基因过表达对体外培养SH-SY5Y细胞增殖的影响。方法克隆全长的TMEFF2基因,连接入pEGFP-N2载体。以脂质体包裹重组质粒转染SH-SY5Y细胞。在细胞中可表达生成TMEFF2-EGFP融合蛋白。经G418筛选,建立TMEFF2过表达细胞株,同时筛选作为对照的pEGFP-N2稳定转染细胞株。MTT法测定TMEFF2过表达细胞株和pEGFP-N2稳定转染细胞株以及SH-SY5Y细胞增殖。结果成功构建真核表达质粒pEGFP-TMEFF2,并筛选得到稳定表达细胞株。在细胞接种密度较高时,TMEFF2过表达细胞株的增殖较pEGFP-N2稳定转染细胞株以及SH-SY5Y细胞株均明显降低。结论TMEFF2基因可以抑制SH-SY5Y细胞的增殖,且抑制作用具有明显密度依赖性。     

Gnaq对SH-SY5Y细胞增殖的作用及机制

［摘要］目的　研究G蛋白α亚基Gnaq对人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y增殖的影响及其可能机制．方法　利用慢病毒转染技术在SH-SY5Y细胞中过表达Gnaq,利用荧光显微镜检测转染效率,利用逆转录PCR检测过表达后Gnaq的转录水平,利用MTT技术检测过表达Gnaq后细胞增殖速率的变化,同时利用免疫印迹实验检测转录因子NF-κB的表达水平的变化,分析Gnaq影响SH-SY5Y细胞增殖速率的可能机制．结果 （1）慢病毒载体对SH-SY5Y细胞的转染效率达（97.60±2.14）%;（2）过表达Gnaq基因后,SH-SY5Y细胞中的Gnaq转录水平明显升高,细胞的增殖速率明显加快,NF-κB表达水平明显上调（P＜0.05）．结论　Gnaq基因通过调节NF-κB信号通路而对SH-SY5Y细胞发挥明显的促增殖作用．     

白藜芦醇对SH-SY5Y人神经母细胞瘤细胞增殖的影响研究

目的 观察不同浓度白藜芦醇及不同作用时间对SH-SY5Y人神经母细胞瘤细胞生长的影响,并对其增殖进行初步研究.方法 用MTT方法观察不同浓度(12.5、25、50、100)μmol/L白藜芦醇作用20 h、30 h、40 h 后SY5Y细胞存活的数量.用增殖仪器观察不同浓度(32、63、125)μmol/L白藜芦醇作用40 h内SH-SY5Y细胞数量变化情况.用显微镜观察不同浓度药物作用20 h、30 h、40 h时的细胞状态.结果 MTT结果显示白藜芦醇对SY5Y细胞的抑制率随着药物浓度的增加而增加,并且每个浓度的抑制率在作用40 h最大,P值小于0.05,具有统计学意义. 增殖仪器显示白藜芦醇能够抑制该细胞的增殖,并且随着白藜芦醇浓度的增加,抑制细胞增殖的作用越明显.药物作用细胞后显微镜观察可看出,白藜芦醇作用的细胞密度变小,变圆、变亮.随着白藜芦醇浓度的增加,抑制细胞增殖的作用越明显. 结论 白藜芦醇对SH-SY5Y人神经母细胞瘤细胞的增殖具有抑制作用.     

毛蕊异黄酮通过激活Nrf2/HO-1信号通路减轻H_2O_2导致的SH-SY5Y细胞损伤

目的探讨毛蕊异黄酮对H_2O_2刺激的SY5Y细胞氧化应激损伤的调控作用及其机制。方法 MTT法检测毛蕊异黄酮对SY5Y细胞活性的影响以筛选合适的药物干预浓度;实验分PBS对照组,H_2O_2(250μmol/L)模型组和H_2O_2(250μmol/L)+毛蕊异黄酮(0.035μmol/m L)干预组;试剂盒检测MDA的含量和SOD的活性;免疫荧光染色检测Nrf2的核内转移情况及HO-1的表达,免疫印迹法检测总Nrf2、核内Nrf2、NQO1和HO-1蛋白水平。结果与PBS对照组比较,H_2O_2组SY5Y细胞活性降低,毛蕊异黄酮可以改善H_2O_2诱导的细胞损伤,降低MDA的含量、增加SOD的活性。同时,毛蕊异黄酮能够激活Nrf2并促进其向核内转位,明显上调H_2O_2损伤后细胞总Nrf2、核内Nrf2、NQO1和HO-1的水平。结论毛蕊异黄酮可能通过激活Nrf2/HO-1信号通路抑制H_2O_2诱导的SY5Y细胞氧化应激损伤。     

白藜芦醇通过上调SIRT1/自噬通路改善Aβ25-35对PC12细胞增殖的抑制作用

目的 探讨SIRT1/自噬通路在白藜芦醇改善Aβ25-35诱导的PC12细胞增殖活力下降中的作用.方法 用不同浓度(1、5、10、20 μmol/L)白藜芦醇(resveratrol,RSV)单独或加入5 mmol/L自噬特异抑制剂(3-methyladenine,3-MA)、2μmol/L SIRT1选择性抑制剂(EX527)处理PC12细胞2h后,再加入30μmol/L淀粉样蛋白25-35片段(Amyloid β-protein fragment 25-35,Aβ25-35)处理24 h.采用CCK-8检测细胞增殖活力,电镜检测自噬体,Western blot检测自噬标志蛋白P62、LC3和SIRT1蛋白的表达水平.结果 30 μmol/L Aβ25-35可显著降低PC12细胞的增殖活力,为对照组的45.14％(P＜0.05).RSV预处理可显著改善Aβ25-35诱导的PC12细胞增殖活力下降(P＜0.05),且随浓度增加,保护作用增强.同时,RSV可明显促进自噬体的形成,上调SIRT1、LC3-Ⅱ的表达和降低P62的表达,且随浓度增加,表达变化越显著;而加入3-MA和EX527处理能显著抑制RSV的上述效应.结论 RSV可通过激活SIRT1/自噬通路改善Aβ25-35诱导的神经细胞毒性.     

利福平对鱼藤酮诱导的神经细胞SH-SY5Y凋亡的抑制作用

目的 探讨利福平对鱼藤酮所诱导的人多巴胺能神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y凋亡的抑制作用.方法 采用100 nmol/L鱼藤酮作用SH-SY5Y细胞24 h,建立SH-SY5Y细胞凋亡模型;再用100、200、300 μmol/L不同浓度的利福平进行干预,采用MTT比色法检测细胞活性,采用流式细胞术(FCM)及原位缺口末端标记染色法(TUNEL)检测细胞凋亡, Western blot法检测前凋亡蛋白3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)的表达水平.结果 用100 nmol/L鱼藤酮作用SH-SY5Y细胞24 h,能够诱导该细胞产生凋亡并降低其活性;利福平干预后,鱼藤酮所诱导的SH-SY5Y细胞凋亡被抑制,并且这一抑制作用与利福平浓度有明显的剂量-效应关系;而且利福平干预后能降低GAPDH蛋白的表达水平.结论 利福平对鱼藤酮诱导的SH-SY5Y细胞凋亡具有明显的抑制作用,这一抑制作用可能是通过下调GAPDH蛋白的表达而得以实现.     

五味子水提取液延缓叔丁基过氧化氢导致的SH-SY5Y细胞衰老研究

目的:探讨五味子水提取液(SWE)对叔丁基过氧化氢(t-BHP)诱导的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞衰老的保护作用并探讨其机制。方法:将SH-SY5Y细胞分为正常组、模型组(叔丁基过氧化氢100μmol·L-1孵育12 h)和给药组(衰老处理后加不同浓度SWE);MTT法检测各组神经细胞的活力,检测乳酸脱氢酶释放量,RT-PCR法检测各组SH-SY5Y细胞中p53和p21 m RNA的表达。结果:与正常组比较,用不同浓度的t-BHP处理的SH-SY5Y细胞存活能力显著降低,并得到t-BHP诱导SH-SY5Y细胞衰老的最适条件为100μmol/L孵育12 h。与模型组比较,给予不同浓度的SWE能显著提高t-BHP损伤细胞的存活率,改善受损SH-SY5Y细胞的形态,降低LDH的释放量。给药组SH-SY5Y细胞的活力较模型组显著增强(P0.01);LDH释放量显著降低(P0.01);p53和p21 m RNA的表达明显降低(P0.01),以500μg/m L效果最好。结论:SWE对t-BHP诱导的SH-SY5Y细胞衰老有明显的神经保护作用,这可能与抑制了p53-p21通路有关。     

远志正丁醇提取物对SH-SY5Y细胞增殖及抗氧化损伤作用

目的:研究远志正丁醇提取物对SH-SY5Y细胞的增殖作用及对H2O2诱导的SH-SY5Y细胞氧化损伤的保护作用.方法:增殖实验以0(对照组)、5、10、20、40、80和100μg/mL的远志正丁醇提取物培养SH-SY5Y细胞48 h,观察细胞形态,用MTT法测算存活率.损伤实验重取细胞并随机分为空白组、对照组、实验组...     

食源性原花青素对SH-SY5Y细胞生长的抑制作用及其机制

目的：探讨食源性原花青素对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞生长的抑制作用,并阐明其作用机制。方法：培养SH-SY5Y细胞,将细胞分为对照组及10、20和40mg·L^-1食源性原花青素组,各组细胞中加入含不同浓度（0、10、20和40mg·L^-1）食源性原花青素的培养基,采用噻唑蓝（MTT）法检测药物作用24、48和72h时SH-SY5Y细胞增殖率,流式细胞术检测药物作用72 h时不同细胞周期SH-SY5Y细胞百分率,Annexin Ⅴ凋亡试剂盒检测药物作用72 h时SH-SY5Y细胞的凋亡率。结果：与对照组比较,各时间点10、20和40mg·L^-1食源性原花青素组SH-SY5Y细胞增殖率均降低,作用48和72h时20mg·L^-1食源性原花青素组细胞增殖率差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）,作用24、48和72h时40mg·L^-1食源性原花青素组细胞增殖率差异有统计学意义（P<0.01）。与对照组比较,40mg·L^-1组食源性原花青素组细胞中G₀/G₁期细胞百分率升高（P<0.01）,G₂/M期细胞百分率降低（P<0.01）。与对照组比较,10、20和40mg·L^-1食源性原花青素组细胞凋亡率均明显升高（P<0.01）。结论：食源性原花青素可抑制人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的生长,其机制主要是阻滞细胞周期和诱导细胞凋亡。     

二氢杨梅素上调SIRT1信号通路改善HepG2细胞甘油三酯蓄积

目的 探究二氢杨梅素(dihydromyricetin,DHM)对肝细胞脂质代谢的影响及其与SIRT1信号通路的关系.方法 0.2 mmol/L棕榈酸(palmitic acid,PA)处理HepG2细胞24 h,诱导为脂肪变性肝细胞模型,再用0、5、10、20μmol/L DHM及20 μmol/L DHM+2μmol/L SIRT1抑制剂(EX527)分别干预24 h,CCK-8检测细胞增殖活性,油红0染色检测细胞脂滴形成情况,酶偶联比色法检测甘油三酯(triglyceride,TG)含量,蛋白免疫印迹法检测沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,SIRT1)、腺苷酸活化蛋白激酶(adenosine monophosphate activated protein kinase,AMPK)、固醇调节元件结合蛋白1c(sterol regulatory element binding protein-1,SREBP-1c)、脂肪酸合成酶(fatty acid synthetase,FAS)、乙酰辅酶A羧化酶(acetyl-CoA carboxylase,ACC)的表达.结果 0.2 mmol/L PA和5、10、20 μmol/L DHM对细胞增殖活力没有显著影响(P＞0.05);5、10、20 μmol/L DHM处理后明显减少脂肪变性的HepG2细胞脂滴蓄积和甘油三酯含量(P＜0.01),增加磷酸化的AMPK(p-AMPK)和SIRT1的表达水平,并且降低脂质合成相关基因SREBP-lc、FAS、磷酸化的ACC(p-ACC)的蛋白表达,SIRT1抑制剂能显著增加脂肪变性的HepG2细胞的甘油三酯含量(P＜0.01),削弱DHM对脂肪变性HepG2细胞SREBP-1c、FAS、P-ACC表达的抑制作用.结论 DHM通过上调脂肪变性HepG2细胞SIRT1信号通路改善肝细胞脂肪变性.     

2,3-吲哚醌对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞增殖影响

目的 研究2,3-吲哚醌对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞增殖的影响。方法 应用MTT比色法观察2,3-吲哚醌对SH—SY5Y细胞生长的抑制情况;流式细胞仪检测2,3-吲哚醌对SH—SY5Y细胞周期分布的影响;Western blot方法观察其对细胞信号传导通路蛋白有丝分裂原激活的蛋白激酶（ERK）的作用,同时结合免疫细胞化学方法检测2,3-吲哚醌对SH-SY5Y细胞caspase-3的影响。结果 2,3-吲哚醌能显著抑制SH—SY5Y细胞增殖,并使细胞周期阻滞于G0／G1期;caspase-3蛋白表达随着药物浓度的升高逐渐增加;加2,3-吲哚醌后磷酸化的有丝分裂原激活的蛋白激酶蛋白（ERK1／2）相对表达量降低。结论 2,3-吲哚醌对SH—SY5Y细胞具有抗增殖作用,其作用可能是通过诱导细胞凋亡、改变细胞周期以及作用于细胞通路而实现的。     

甲醛对SH-SY5Y细胞的损伤作用

目的利用SH-SY5Y细胞系作为神经细胞的体外模型,探索甲醛对神经细胞的损伤作用,为甲醛损伤神经细胞的机制提供一定的科学依据。方法将甲醛按不同作用浓度(对照组、0.05 mmol/L、0.1 mmol/L、0.25 mmol/L、0.5 mmol/L、1 mmol/L)处理SH-SY5Y人神经母细胞瘤细胞。采用细胞划痕实验、高倍镜检、CTG细胞活性实验检测甲醛对细胞迁移能力、细胞形态及生存活性的影响;使用流式细胞术检测甲醛对细胞凋亡水平的影响;并通过透射电镜观察超微结构改变;使用免疫印迹法检测细胞内磷酸化tau蛋白、Aβ及线粒体裂解相关蛋白的表达水平。结果 0.05 mmol/L甲醛即可抑制SH-SY5Y细胞的迁移能力,0.1 mmol/L作用4 h即可降低细胞生存活性和增殖能力,上述改变与甲醛剂量和作用时间呈正相关;0.05 mmol/L甲醛即可诱导SH-SY5Y细胞的凋亡,可导致SH-SY5Y超微结构线粒体的损伤;0.25 mmol/L甲醛增加线粒体分裂,上调神经细胞磷酸化tau蛋白的表达水平。结论甲醛可通过抑制SH-SY5Y细胞活性和增殖能力、降低其迁移能力、诱导凋亡等途径损伤神经细胞,可上调神经细胞tau蛋白的磷酸化水平。     

小檗碱对H_2O_2损伤大鼠神经干细胞增殖的影响

目的探讨小檗碱(berberine,BBR)对H_2O_2诱导神经干细胞(neural stem cells,NSCs)增殖作用的影响。方法采用悬浮培养法分离纯化新生SD大鼠大脑NSCs。实验分为正常对照组、H_2O_2组、小檗碱组、DAPT(Notch信号通路阻断剂)组。采用Nestin免疫化学染色鉴定NSCs,通过CCK8检测NSCs细胞活力,测量NSCs平均直径反映NSCs增殖能力,Ki67/Nestin双标法检测NSCs增殖情况,Western blot检测Ki67、Notch1、Hes1蛋白表达。结果 Nestin鉴定为阳性,与正常对照组相比,H_2O_2组细胞存活率降低、细胞平均直径降低,Ki67阳性率降低(P0.05);与H_2O_2组相比,小檗碱组(5μmol/L)明显增强细胞活力,提高NSCs的平均直径,上调Ki67、Notch1、Hes1蛋白表达水平(P0.05),小檗碱促进损伤NSCs增殖作用可以被DAPT拮抗。结论小檗碱处理提高H_2O_2损伤NSCs的存活率,可能通过Notch信号通路发挥促增殖作用。     

褪黑素上调SIRT1改善高糖诱导原代心肌细胞损伤的机制研究

目的 探讨褪黑素在高糖诱导的原代心肌细胞损伤中的作用,并明确SIRT1在其中的作用及其机制.方法 将原代心肌细胞分为对照组(Con组)、褪黑素对照组(Con+Mel组)、高糖组(HG组)、高糖+褪黑素组(HG+Mel组)和SIRT1抑制剂理组(HG+Mel+EX527组).采用Cell Counting Kit-8(C...     

PCBP1对6-OHDA作用的SH-SY5Y 细胞凋亡影响的研究

目的 研究核不均一核糖核蛋白(PCBP1)对6-OHDA作用的神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y细胞凋亡的影响。方法 构建含PCBP1的真核表达载体pEGFP/N1-PCBP1,转染SH-SY5Y细胞,用不同浓度6-OHDA对转染后SH-SY5Y细胞刺激不同时间后,流式细胞仪检测分析细胞凋亡率。结果 不同浓度的6-OHDA对转染PCBP1重组质粒的实验组和转染空质粒的对照组细胞作用24h后,实验组细胞早期凋亡率低于对照组细胞,差异有统计学意义(P<0.05);但实验组和对照组细胞晚期凋亡率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。另外,25μmol/L 6-OHDA分别对实验组和对照组细胞作用不同时间后,同样,实验组细胞早期凋亡率低于对照组细胞,差异有统计学意义(P<0.05);该浓度6-OHDA作用不同时间后,实验组和对照组细胞晚期凋亡率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 过表达PCBP1基因可抵抗6-OHDA对SH-SY5Y细胞的早期凋亡作用,降低细胞凋亡率。     

外源性antizyme1基因转染对SH-SY5Y细胞的生物学影响

目的 研究antizyme 1(AZl)基因对成人神经廇SH-SY5Y细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响.方法 将构建好的AZ1基因重组真核表达载体pAZ1m稳定转染SH-SY5Y细胞.通过MTT法检测细胞增殖变化,流式细胞术分析AZ1转染对细胞周期及凋亡的影响.RT-PCR与Western blotting检测AZ1基因转染对cyclin D1和caspase-3表达的影响,caspase-3试剂盒检测酶活性变化.结果 稳定转染SH-SY5Y细胞后,检测结果显示AZ1基因转染能够减慢SH-SY5Y细胞增殖速度,并使细胞停滞于G0/G1期.在cyclin D1基因表达抑制的同时,caspase-3基因表达上调.酶活性测定显示Caspase-3活性上升.结论 AZ1基因能够抑制SH-SY5Y细胞增殖,通过降低cyclin D1的表达阻滞细胞周期于G0/G1期,并上调caspase-3表达促进SH-SY5Y细胞凋亡.     

五味子甲素SchA缓解MPP＋诱导的SH-SY5Y细胞损伤的机制研究

目的：探讨五味子甲素（SchA ）缓解1-甲基-4-苯基吡啶离子（M PP＋）诱导S H-SY5Y细胞损伤的可能机制。方法实验分为5组,空白对照组,加入无血清培养基进行培养;模型组（M PP＋进行诱导）;SchA组;SchA与M PP＋共同处理的SchA组,其中SchA终浓度分别为1、3、5μmol/L ,M PP＋终浓度为1 mmol/L。NO检测试剂盒检测各组细胞 NO含量,Western blot检测细胞总Akt、p-Akt的蛋白表达情况。结果与对照组相比,1 mmol/L MMP＋诱导后,SH-SY5Y细胞NO含量明显增高（P＜0．05）,经5μmol/L SchA及MPP＋共同处理的SH-SY5Y细胞,NO的含量明显降低。各组总Akt相对表达水平没有明显变化（P＞0．05）;模型组细胞p-Akt相对表达水平较对照组减少,SchA组细胞p-Akt蛋白相对表达水平随SchA浓度的升高而升高,且与模型组比较差异都有统计学意义（P＜0．05）。结论 SchA缓解MPP＋诱导的SH-SY5Y细胞损伤可能与影响NO含量及p-Akt蛋白表达有关。     

没食子酸对H2O2诱导的SH-SY5Y神经细胞损伤保护作用的研究

目的：以H₂O₂诱导SH-SY5Y细胞氧化损伤为模型,探讨没食子酸对H₂O₂诱导SH-SY5Y细胞氧化损伤的影响及其机制。方法：筛选没食子酸(gallic acid,GA)对SH-SY5Y细胞无毒剂量范围,以此剂量范围研究没食子酸对H₂O₂诱导SH-SY5Y细胞氧化损伤的保护作用。将细胞分为5组:正常对照组(Control),H₂O₂模型组(Model),GA 5µmol•L^-1组(GA1)、GA 10µmol•L^-1组(GA2) 和GA25µmol•L^-1组(GA3)。GA组先加入GA预处理1 h后再加入终浓度为200 µmol•L^-1 H₂O₂。Hoechst 33258 染色观察凋亡细胞的形态学特征;碘化丙啶染色流式细胞仪检测细胞周期构成比;diaphorase催化的INT显色反应检测乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)释放量;DCFH-DA检测细胞内活性氧(reactive oxygen species, ROS);利用天冬氨酸蛋白水解酶-3(caspase-3)可以催化底物Ac-DEVD-pNA的反应检测caspase-3活性。结果：过氧化氢组与正常对照组相比,终浓度为200 μmol•L^-1 H₂O₂作用于细胞24 h后,细胞活力下降为65%,差异具有统计学意义(P<0.01),细胞凋亡率上升(P<0.01);明显出现了细胞凋亡的形态学特征;增殖指数(proliferation index, PI)降低(P<0.05); LDH释放量和细胞内ROS增加(P<0.01),caspase-3活性增强(P<0.01)。与H₂O₂损伤组相比,终浓度为5～25 µmol•L^-1 GA能显著改善上述指标的变化(P<0.05)。结论：GA在一定剂量范围内对H₂O₂诱导的 SH-SYSY神经细胞损伤具有明显的保护作用,其保护效应可能与清除ROS,减轻DNA氧化损伤,抑制线粒体通路介导的细胞凋亡有关。