人参内生细菌的分离及拮抗菌株的筛选

本研究用平板培养法从人参Panax ginseng根中分离内生细菌,共分离到40种内生细菌,Bacillus spp.和Pseud-omonas spp.为优势内生菌。通过对峙培养,筛选出对人参菌核菌、人参锈腐菌和人参黑斑菌均有明显抑制作用的内生细菌ge15 Stenotrophomonas maltophilia和ge25 Bacillus sp.,其中ge15对人参菌核菌、人参锈腐菌和人参黑斑菌的抑菌带宽度分别达5.5,22.0,14.8 mm;ge25对3种致病菌的抑菌带宽度分别达12.7,16.5,9.0 mm。研究结果表明,内生细菌具有防控人参致病菌的生防潜力,可作为生防因子用于人参土传病害的防治。     

宁夏产甘草内生细菌分离纯化、拮抗植物病原菌菌株的筛选及鉴定

目的对宁夏产甘草根茎叶中内生细菌分离纯化,以明确甘草中内生细菌的多样性及分布规律;初步筛选出对病原菌有拮抗效果的细菌作为优势菌种,进一步对其进行鉴定,为甘草内生细菌资源的进一步开发提供科学依据。方法采用组织块法,在牛肉膏蛋白胨培养基中分离纯化内生细菌;采用滤纸片法,观察有无抑菌圈及抑菌圈的大小来检测内生细菌对病原菌的拮抗效果;采用16Sr DNA测序分析,对比核糖体数据库鉴定典型菌种。结果从甘草中分离出内生细菌100株,其中根占76%、茎占15%、叶占9%;初步筛选出对西瓜枯萎病菌、小麦根腐病菌、黄花枯萎病菌、烟草赤星病菌、棉花枯萎病菌等病原菌综合抑制效果较好的细菌菌种8种(G2、G3、G5、G8、G9、G15、Y1和Y2),进一步鉴定这8种细菌发现G2为地衣芽孢杆菌,G3、G8为蜡样芽胞杆菌,G5、G9、Y1为短小芽胞杆菌。结论宁夏产甘草中含有丰富的内生细菌,且以根中居多;其中能够对多种病原菌有拮抗效果菌种为芽孢杆菌菌属。     

五味子中内生拮抗活性细菌的分离与筛选

目的 从不同地区采集五味子植株,分离内生细菌,并进行菌群密度、拮抗菌筛选和抑菌活性研究。方法 采用平板分离法分离内生细菌并纯化典型菌株;平板对峙法测定体外拮抗活性;生长速率法测定抑菌活性。结果 不同种植地、五味子不同器官中内生细菌的菌群密度差异较大,野生的较栽培的大;五味子各器官中,根中的内生细菌最多,其次为茎,叶片中最少。从分得的大量内生细菌中共纯化出302株内生细菌,拮抗菌比率平均为24.19%。从中选出了12株对五味子茎基腐病菌、人参根腐病菌、棉花枯萎病菌、番茄灰霉病菌、人参黑斑病菌具有较好拮抗作用的菌株。12株菌株的发酵产物对供试病原菌菌丝生长均有一定的抑制作用,其中JYg-2对人参根腐病的抑制率最高,达80.02%。结论 五味子植株体内存在大量内生细菌,并且含有一定比率的拮抗菌,拮抗活性稳定。因此五味子内生细菌可以成为开发拮抗菌资源的重要途径,并具有较大潜能。     

西洋参内生菌株的分离及拮抗活性菌株的筛选和鉴定

目的研究吉林产西洋参内生菌资源状况,筛选出对西洋参病原菌具有拮抗作用的内生菌。方法采用混菌法初筛和发酵液拮抗法复筛来筛选具有拮抗活性的菌株,并用16 S r DNA和ITS方法鉴定筛选得到的内生菌株。结果在西洋参中共分离获得34株内生菌,通过初筛和复筛后,从中选出了6株对西洋参病原菌具有较好拮抗作用的菌株,分别为B3、B11、B17、B23、B24、F10,其中B3对7种病原菌均表现出了抑菌作用,F10对锈腐病菌Cylindrocarpon destructan和黑斑病菌Alternaria panax的抑菌效果最好,其抑菌圈直径均大于35 mm,经鉴定B3和F10分别为芽孢杆菌Bacillus methylotrophicus和暗黄青霉Penicillium citreonigrum。结论西洋参内生菌具有多样性,并有拮抗活性高的菌株存在,可以成为西洋参病害生防菌的新来源。     

人参致病菌拮抗菌株的筛选及鉴定

目的:筛选对人参黑斑菌、人参锈腐菌等人参致病菌有较好抑菌活性的微生物菌株,为人参病害生防防治提供参考依据。方法:采用平板稀释法从人参栽培土壤和菌剂产品中分离菌株;以人参致病菌为靶标,采用对峙培养法筛选拮抗菌;分别采用16S r DNA和28S r DNA序列分析方法鉴定细菌和真菌菌株的分类学地位。结果:共计从人参栽培土壤中分离到66株菌,其中菌株X对人参致病菌表现较好抑菌活性;从商品化菌剂中分离出17株菌,其中菌株QM、BM2、HZ3、GG、HC和DD对人参致病菌表现较好抑菌活性。经鉴定,菌株X为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens),QM、BM2和HZ3为甲基营养型芽孢杆菌(B.methylotrophicus),GG为枯草芽孢杆菌(B.subtilis),HC为棘孢木霉(Trichoderma asperellum),DD为平展木霉(T.effusum)。结论:筛选出的7株拮抗菌对多种人参致病菌有较好抑菌活性,菌株X可用于生防菌剂开发,与菌株QM、BM2、HZ3、GG、HC和DD对应的商品化菌剂可用于人参病害防治。     

川芎内生细菌DGGE分析条件的筛选与优化

目的:针对川芎内生细菌16S rDNA序列进行变性梯度凝胶电泳(DGGE)适宜序列的筛选与电泳条件优化。方法:川芎内生细菌16S rDNA的V3区及V6~V8区分别进行聚合酶链反应(PCR)及巢式PCR以获得各菌种的目标DNA序列。采用DGGE垂直电泳法优化凝胶变性梯度,时间间隔法优化电泳时间,并根据电泳效果对电压和电泳时间组合进行修正。结果:川芎内生细菌16S rDNA V6~V8区序列更能有效排除宿主植物DNA的干扰,获得更加丰富的内生细菌DNA序列。针对该区的DGGE最佳分析条件为变性剂梯度55%~70%(Gel 6%),电泳温度60℃,电压50 V,电泳时间16 h。结论:利用该优化条件能有效分离川芎各内生细菌16S rDNA V6~V8区序列,为川芎内生细菌的群落结构PCR-DGGE分析提供可靠的技术基础,为其他药用植物内生细菌的菌群多样性分析提供参考。     

杜仲内生细菌的分离鉴定及活性检测

目的 从杜仲Eucommia ulmoides的树皮、叶片和果实中分离出具有活性的内生细菌.方法 采用平板培养法分离内生细菌,扩增16S rDNA序列并测序,在GenBank上Blast鉴定其归属;通过菌丝速率生长法和纸片琼脂扩散法检测抑菌活性,通过T-AOC试剂盒检测抗氧化活性.结果 获得内生细菌37株,其中21株鉴...     

川芎内生放线菌的分离及根腐病拮抗菌株的筛选

目的:了解川芎内生放线菌群结构,筛选拮抗川芎根腐病原菌的放线菌资源。方法:采用组织块法、匀浆法、划线平板法等对川芎根茎中的放线菌进行分离和纯化,平板对峙法及抑菌圈法评价各菌株抑菌活性,显微观察法结合DNA测序进行菌种物种鉴别。结果:共获得83株川芎内生放线菌,分属13个类群;其中链霉菌属灰红紫类群中的深海链霉菌Streptomyces scopuliridis(KF600747.1)、灰锈赤链霉菌Streptomyces griseorubiginosus(AB706352.1)、团孢链霉菌Streptomyces agglomeratus(LC055413.1)能同时抑制4种川芎根腐病原菌。结论:内生放线菌群中的链霉菌属灰红紫类群是抑制川芎根腐病原菌的重要生防菌,在川芎药材生产中有着重要的应用前景。     

拮抗细菌B-05的鉴定及发酵条件初探

目的：为了初步鉴定从土壤中分离的一株拮抗性能强且抗性稳定的菌株,并探索其抗菌物质的最佳发酵条件。方法：对拮抗菌一般特征采用苯酚品红染色法,芽孢采用孔雀石绿染色法,鞭毛采用西萨-基尔（Ceseres-Gill）染色法,生理生化测试采用常规的细菌生理生化测试方法进行鉴定。发酵条件分别开展培养基、发酵pH值、温度、时间的筛选。结果：经初步鉴定拮抗细菌B-05属枯草芽孢杆菌。抗菌物质最佳发酵条件为：在pH7．0的PDA培养基中,25℃恒温培养96h后发酵液的抑菌效果最佳。结论：发酵条件及抗菌性研究为抑菌物质的工厂化生产和应用提供了有价值的参考依据。     

拮抗细菌B-05的鉴定及发酵条件初探

目的:为了初步鉴定从土壤中分离的一株拮抗性能强且抗性稳定的菌株,并探索其抗菌物质的最佳发酵条件.方法:对拮抗菌一般特征采用苯酚品红染色法,芽孢采用孔雀石绿染色法,鞭毛采用西萨-基尔(Ceseres-Gill)染色法,生理生化测试采用常规的细菌生理生化测试方法进行鉴定.发酵条件分别开展培养基、发酵pH值、温度、时间的筛选.结果:经初步鉴定拮抗细菌B-05属枯草芽孢杆菌.抗菌物质最佳发酵条件为:在pH 7.0的PDA培养基中,25℃恒温培养96h后发酵液的抑菌效果最佳.结论:发酵条件及抗菌性研究为抑菌物质的工厂化生产和应用提供了有价值的参考依据.     

药用牡丹的栽培技术

本文报道我国道地药材牡丹皮的原植物药用牡丹的生长习性、繁殖方法、种植、病虫害防治、采收及产地加工技术     

杜仲内生真菌的分离鉴定及抗菌活性筛选

目的从药用植物杜仲的根茎叶中分离内生真菌,并进行初步鉴定和抗菌活性筛选。方法经显微形态观察进行内生真菌的分离鉴定,采用菌饼法和纸片法进行抗菌活性筛选。结果从杜仲植物中分离获得62株内生真菌,有47个菌株至少对1种指示菌具有抗菌活性,40株的代谢产物至少对1种指示菌具有抗菌活性,青霉属(Penicinium)的抗菌活性高且抗菌谱广。结论杜仲植物内生真菌中广泛分布着有抗菌活性的菌株。     

基于高通量测序研究甘松根际细菌及药用部位内生细菌群落结构及多样性

目的 探析并比较野生甘松Nardostachys jatamansi与仿野生栽培甘松的根际细菌与内生细菌的种群组成、丰富度、多样性及差异性.方法 以野生甘松和仿野生栽培甘松的根际土壤、根及根茎为研究样本,基于Illumina MiSeq第二代高通量测序技术对根际土壤细菌、根及根茎内生细菌的16S rDNA V4-V5区...     

黄芪根腐病拮抗芽孢杆菌的筛选鉴定及其对根围细菌群落的影响

根腐病是严重危害黄芪产业化生产的一类土传病害。该文以山西省黄芪根腐病的优势致病菌Fusarium solani和F. acuminatum为靶标,筛选具有良好抑菌防病效果的生防芽孢杆菌,并测定其对黄芪根围土壤细菌群落的影响,以期为生防制剂的后续开发提供物质基础和理论依据。试验采用平皿对峙拮抗、发酵液抑菌活性测定、菌丝生长抑制、以及离体防病效果测定的方法,对分离自黄芪根围土壤中的芽孢杆菌进行多重筛选,并对获得的目标拮抗芽孢杆菌SXKF16-1进行形态学、生理生化特性、16S r DNA序列鉴定,同时采用DGGE技术分析其对土壤细菌群落的影响。结果显示,菌株SXKF16-1抑菌效果显著,其无菌发酵滤液对F. solani,F. acuminatum的抑菌圈直径分别为(25. 90±1. 18),(25. 86±1. 85) mm,且持效性良好;离体防病试验中,F. solani,F. acuminatum侵染后保护性处理和治疗性处理的病情指数分别是(37. 50±8. 58),(41. 67±4. 90)和(25. 00±8. 33),(38. 89±9. 62),与对照相比均差异显著(P0. 05)。该菌株鉴定为萎缩芽孢杆菌Bacillus atrophaeus,其发酵液施入土壤后,明显提高了土壤中的细菌多样性。B. atrophaeus SXKF16-1能够有效拮抗根腐病病原菌,并且提高黄芪根围土壤的细菌多样性,具有开发为专用生防制剂的潜力。     

滇牡丹内生真菌PR35的鉴定及次生代谢产物的研究

目的:对滇牡丹内生真菌PR35菌株进行菌种鉴定,并对其次生代谢产物的化学成分进行研究。方法:采用形态学观察结合ITS rDNA序列分析法进行菌种鉴定;应用多种柱色谱方法对其次生代谢产物进行分离纯化,并依据其理化性质及波谱数据鉴定化合物结构。结果:菌株PR35鉴定为长梗木霉Trichoderma longibrachiatum;从菌株PR35的发酵产物中分离获得5个化合物,分别鉴定为1-(2,6-dihydroxyphenyl)-3-hydroxybutan-1-one(1),1-(2,6-dihydroxyphenyl)propan-1-one(2),1-(2,4,6-trihydroxyphenyl)butan-1-one(3),4-methoxy-1-naphthol(4)和啤酒甾醇(5),其中化合物1～3对灰葡萄孢、燕麦镰孢和紧密单孢枝霉显示明显的抗真菌活性。结论:内生真菌长梗木霉首次从滇牡丹植物中分离获得,5个化合物均为首次从滇牡丹内生真菌中分离得到,其中化合物4为首次从微生物发酵产物中获得。     

人参可利用内生菌株的筛选和鉴定

目的研究吉林产人参Panax ginseng内生菌资源状况,筛选出对人参病原菌具有拮抗作用的内生菌。方法采用混菌法初筛和发酵液拮抗法复筛来筛选具有拮抗活性的菌株,并用16 S r DNA和ITS方法鉴定筛选得到的内生菌株。结果在人参中共分离获得133株内生菌,通过初筛和复筛后,从中选出了4株对人参病原菌具有较好拮抗作用的菌株,分别为B16、B25、B69和F32,其中B16、B25和B69对6种以上病原菌均表现出了抑菌作用,F32对菌核病菌、疫病菌和根腐病菌的抑菌效果最好,其抑菌圈直径均大于35 mm,经鉴定它们分别为甲基营养型芽孢杆菌、解淀粉芽胞杆菌、死谷芽孢杆菌和齿孢青霉。结论人参内生菌具有多样性,并有拮抗病原菌活性高的菌株存在,可以成为人参病害生防菌的新来源。     

产黄酮荷叶内生真菌的筛选与鉴定

目的从荷叶中筛选产黄酮的内生真菌,并加以鉴定。方法显色反应法、TLC法和UV法筛选菌株,硝酸铝法测定总黄酮含有量,形态学特征和ITS序列分析进行菌种鉴定。结果筛选到一株产黄酮的荷叶内生真菌HY1,鉴定为棘孢曲霉Aspergillus aculeatus,干菌丝体总黄酮含有量为8.2 mg/g。结论首次从荷叶中分离到产黄酮的棘孢曲霉,可为该类化合物的发酵法生产提供资源。     

三七根内生真菌重金属耐性菌株筛选及分类学鉴定

目的探索三七根内生真菌重金属耐性菌株筛选及分类学鉴定。方法采用MMN液体培养基培养及称量菌丝干重、测定菌丝重金属含有量对其进行重金属(As、Pb)耐性评价,并采用分子手段对功能菌株进行分类学地位鉴定。结果深色有隔内生真菌Pn-12,Pn-13具有较高的砷、铅耐性,在1 600 mg/L As⁵⁺和800 mg/L Pb²⁺中仍可较好地生长,且菌株Pn-12砷、铅耐性强于Pn-13;此外,菌株Pn-12,Pn-13菌丝中砷、铅含有量差异较大,存在砷低铅高的现象,表明菌株Pn-12,Pn-13对砷、铅的耐性机制存有一定的差异。根据系统进化树结果,初步鉴定菌株Pn-12,Pn-13分别为球孢枝孢霉Cladosporium sphaerospermum、支孢样支孢霉Cladosporium cladosporioid。结论本研究可为三七种植砷、铅污染的生态治理提供数据支持和理论依据。     

桃儿七茎部产鬼臼毒素类成分的内生真菌筛选及鉴定

目的:筛选和鉴定濒危藏族药桃儿七茎部产鬼臼毒素类成分的内生真菌,为保护桃儿七植物资源和发现新的天然活性菌株提供参考。方法:采用组织块法对桃儿七茎部的内生真菌进行分离,利用TLC和HPLC检测其代谢产物中的鬼臼毒素类成分,检测波长254 nm,流动相乙腈-水(40∶60)。采用形态学和分子生物学相结合的方法对产鬼臼毒素类成分的内生真菌进行鉴定。结果:共分离得到9株内生真菌,其中菌株J-1,J-2,J-3的发酵液中含有鬼臼毒素类成分,分别鉴定为Chaetomium globosum strain MF564,C.sp.4RF3和Pseudallescheria sp.T55。结论:从桃儿七茎中分离到3株产鬼臼毒素类成分的内生真菌,分别来源于2个新属的不同种菌株,为开发新绿色生物能源和实现内生真菌工业发酵生产鬼臼毒素类成分奠定了理论基础。     

西红花球茎腐烂病拮抗真菌的筛选、鉴定及抑菌机制

目的 筛选西红花Crocus sativus球茎腐烂病拮抗真菌,探讨其抑菌机制。方法 以前期分离得到的24株西红花内生真菌为材料,采用平板对峙法筛选球茎腐烂病拮抗真菌;应用ITS分子技术进行菌种鉴定,用扫描电镜观察拮抗后病原菌尖孢镰刀菌Fusarium oxysporum菌丝形态;检测拮抗菌株CS05菌丝产生β-1,3-葡聚糖酶与几丁质酶的含量及病原菌产碱性磷酸酶(alkalinephosphatase,AKP)的含量。结果 筛选得到对尖孢镰刀菌有显著拮抗作用的内生真菌8株,其中CS05抑制效果最好,相对抑制率为(76.53±3.82)%;将CS05鉴定为担子菌门多孔菌目栓菌属真菌变色栓菌Trametes versicolor;CS05能产生β-1,3-葡聚糖酶与几丁质酶,促使尖孢镰刀菌胞外AKP含量增加,菌丝出现稀疏紊乱、缠绕皱缩等现象。结论西红花内生真菌CS05能较好地拮抗球茎腐烂病菌尖孢镰刀菌,为西红花球茎腐烂病的生物防治提供了参考依据。