FTY720-P对破骨细胞EphA2-EphrinA2双向信号通路作用的研究北大核心CSCD

目的探讨FTY720-P对破骨细胞Eph A2-Ephrin A2双向信号通路的影响。方法取小鼠巨噬细胞RAW264.7,采用地塞米松及1α,25-二羟维生素D3诱导分化为破骨细胞,并行抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate resistant acid phosphatase,TRAP)染色鉴定。将诱导培养的破骨细胞分为两组,实验组给予400 ng/m L的FTY720-P处理,对照组不给予FTY720-P。培养48 h后,取细胞行实时荧光定量PCR检测、Western blot检测以及免疫荧光染色观察,分析细胞中Eph A2、Ephrin A2、Rho A,以及骨重建相关蛋白BMP-2及TGF-β_1的表达。结果经TRAP染色鉴定,RAW264.7细胞成功诱导成为破骨细胞。培养48 h后,与对照组相比,实验组Eph A2及Ephrin A2 m RNA及蛋白相对表达量均明显降低(P<0.05),Rho A蛋白相对表达量也明显降低(P<0.05);BMP-2及TGF-β1 m RNA相对表达量明显增高(P<0.05),蛋白表达增强。结论 FTY720-P能通过影响破骨细胞Eph A2-Ephrin A2双向信号通路之间的传导下调Rho A,并促进TGF-β_1和BMP-2表达,最终影响破骨细胞的破骨作用。     

CTGF对破骨前体细胞RAW264.7增殖及碳酸酐酶Ⅱ分化的影响

目的研究结缔组织生长因子(CTGF)对体外培养的破骨细胞前体细胞RAW264.7增殖及对核因子Kappa B配体受体(RANKL)诱导体外培养的破骨细胞前体细胞RAW264.7分化为成熟多核破骨细胞的影响。方法使用200 ng/mLCTGF干预培养的破骨细胞前体细胞RAW264.7,采用3H-TdR掺入法检测RAW264.7细胞增殖率;使用200 ng/mL CTGF与RANKL单独或共同处理RAW264.7细胞,抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色观察TRAP阳性多核细胞,Western blot检测碳酐酶Ⅱ蛋白的表达。结果 CTGF可显著促进RAW264.7细胞增殖;200 ng/mLCTGF与RANKL共同处理RAW264.7细胞可促进RAW264.7细胞分化为成熟多核破骨细胞;200 ng/mL CTGF与RANKL共同处理RAW264.7细胞可促进RAW264.7细胞碳酐酶Ⅱ蛋白的表达。结论 CTGF促进体外培养的破骨细胞前体细胞RAW264.7增殖,促进RANKL诱导的破骨细胞前体细胞RAW264.7分化为成熟多核破骨细胞。     

复合振动抑制RAW264.7细胞分化成熟

目的研究复合振动对核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)诱导的RAW264.7细胞分化的影响,探讨复合振动对破骨细胞分化的影响及机制。方法 RAW264.7细胞RANKL诱导培养3或4d并施加复合振动干预,通过抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色观察TRAP阳性多核细胞形成的变化,real-time RT-PCR分析破骨细胞特异性基因组织蛋白酶K(cathepsin K),金属蛋白酶-9(MMP-9)和TRAP表达的变化。结果复合振动能抑制RANKL诱导破骨细胞形成,下调破骨细胞特异基因cathepsin K,MMP-9和TRAP的表达。结论 RANKL促进RAW264.7细胞向破骨细胞分化,并增加特异基因的表达,但RANKL的促进作用受复合振动抑制。这进一步的阐释复合振动抗骨质疏松的作用机制。     

RANKL诱导小鼠单核细胞RAW264.7分化成成熟破骨细胞

目的观察小鼠的单核／巨噬细胞RAW264．7的一般生物学特征及在RANKL诱导下形成成熟破骨细胞的特征。方法RANKI，诱导RAW264．7细胞6d后，用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色法观察TRAP阳性多核细胞，吖啶橙染色激光共聚焦显微镜(LCSM)观察多核细胞形态；诱导RAW264．7细胞9d后，RT、PCR检测RAW264．7细胞的破骨细胞表型和功能基因表达及其RANKL诱导后变化；诱导RAW264．7细胞12d后，钙磷覆盖的破骨细胞活性分析板观察破骨细胞的骨吸收功能。结果RAW264．7细胞TRAP染色阴性，单核或2个核，能表达破骨细胞表型和功能基因，无骨吸收功能。RANKL可诱导RAW264．7细胞形成TRAP阳性成熟的多核破骨细胞，上调CathepsinK、CAⅡ、integrinβ3等基因mRNA的表达。结论RAW264．7具有破骨细胞特征性基因表达谱，是一种较好的破骨前体细胞模型。RANKL可诱导RAW264．7细胞形成成熟破骨细胞。     

诱导小鼠破骨前体细胞成熟分化的实验条件探讨

目的探讨小鼠单核细胞RAW264.7能否在RANKL诱导下向破骨细胞成熟分化。方法 RANKL作用RAW264.7细胞7天～9天,光镜、透射电镜、扫描电镜(scanning electron microscope,SEM)分别观察其细胞形态学变化,用抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)染色法观察TRAP阳性的多核细胞,RT-PCR检测破骨细胞表型和功能基因表达变化情况,扫描电镜观察破骨细胞在骨片上形成骨吸收陷窝。结果光镜、透射电镜下可见细胞胞体增大,为椭圆形或不规则形,胞核5～10个,扫描电镜下可见细胞表面大量的伪足样突起;此外,RANKL能诱导RAW264.7细胞分化为TRAP染色阳性的多核破骨细胞,细胞多为超过5个核的多核巨细胞;RAW264.7细胞成熟分化后具有骨吸收功能,并且能上调Cathepsin-K、TRAP、RANK等典型破骨细胞表型和功能基因mRNA的表达。结论 RAW264.7细胞是一种较好的破骨前体细胞模型,单用50ng/ml的RANKL体外连续诱导7天以上,能明显促进它向成熟的破骨细胞分化。     

不同浓度金属磨损颗粒对破骨细胞体外分化的影响

[目的]观察不同浓度金属磨损颗粒对RAW 264.7在体外分化成破骨细胞的影响,明确浓度与破骨细胞分化数量的关系.[方法]真空球磨法制备人工关节磨损颗粒:RANKL诱导RAW 264.7体外分化成破骨细胞,通过TRAP染色,电镜扫描检测骨片吸收陷窝来鉴定破骨细胞;不同浓度人工关节磨损颗粒混悬液作用RAW 264.7,并用RANKL诱导后第7 d,TRAP染色后,光镜下计数破骨细胞数量.[结果]不同浓度磨损颗粒作用于RAW 264.7 7 d后,显微镜下计数破骨细胞数量,结果显示随着磨损颗粒混悬液浓度增加,RANKL诱导生成的破骨细胞增多,低、中、高浓度3组破骨细胞数均显著高于空白对照组(P<0.05),中、高浓度组破骨细胞数均显著高于低浓组(P<0.05),高浓度组破骨细胞数亦显著高于中浓组(P<0.05).[结论](1)RAW 264.7是一种较好的破骨前体细胞模型,RAW 264.7诱导形成破骨细胞的方法简便易行,所获得破骨细胞均一性好;(2)人工关节金属磨损颗粒为RAW264.7细胞向具有骨质吸收功能的破骨细胞转化发挥正向作用,而且与混悬液的浓度有量效关系.     

高糖及TNF-α对RAW264.7细胞向破骨细胞分化的影响

【摘要】 目的 观察高糖及TNF-α的培养条件对RAW264.7细胞向破骨细胞诱导分化的影响。方法 在正常、高糖(30 mmol/L)及TNF-α(10 μmol/L)条件下培养RAW264.7细胞后,加入浓度为100 ng/mL的细胞核转录因子κB受体激活物的配体(receptor activator of NF-κB ligand, RANKL)为诱导剂,诱导RAW264.7向破骨细胞分化;诱导9天后,抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色,比较各组TRAP+细胞数,RT-PCR及Western Blot检测各组破骨细胞标志基因CTR和MMP-9的表达。结果 不同的培养条件下RANKL均能诱导RAW264.7分化为成熟的破骨细胞,其中TNF-α环境中RAW264.7形成的TRAP+阳性细胞数、CTR和MMP-9的表达最高,而在高糖环境下最低。结论 TNF-α可以促进RAW264.7向破骨细胞分化,而高糖对这个过程可能是抑制作用,这一现象符合Ⅰ型和Ⅱ糖尿病患者骨质破坏的表现;高糖及TNF-α的培养条件下RANKL对RAW264.7的作用可模拟糖尿病足病变微环境中OC的诱导分化的过程。     

薯蓣皂苷通过ERα/miR503/RANK信号通路抑制破骨细胞生成

目的 探究薯蓣皂苷对小鼠破骨细胞前体细胞(RAW264.7)破骨分化的抑制作用以及潜在机制。方法 利用核因子κB受体活化因子配体(RANKL)诱导的RAW264.7破骨分化模型,设置模型对照组、雌激素组、薯蓣皂苷低剂量组、薯蓣皂苷高剂量组,通过CCK8法检测不同浓度薯蓣皂苷对细胞的毒性作用,通过TRAP染色进行破骨细胞计数,qPCR检测细胞中ERα/miR503/RANK信号通路及破骨标志性基因TRAP、MMP9、CTSK基因表达水平,Western blot检测细胞中ERα、RANK蛋白表达水平。结果 薯蓣皂苷对RAW264.7细胞无明显毒性作用。与模型对照组比较,高剂量薯蓣皂苷组及雌激素组的TRAP阳性细胞数目下降(P<0.05),薯蓣皂苷及雌激素上调了ERα、miR-503-5p的表达水平,抑制了RANK的表达水平,下调了破骨标志性基因的表达(P<0.05)。结论 薯蓣皂苷可能通过ERα/miR-503/RANK信号通路下调破骨标志性基因,从而抑制RAW264.7细胞破骨分化。     

低分子量褐藻糖胶对破骨细胞凋亡的影响

目的探讨低分子量褐藻糖胶(LMWF)对小鼠单核细胞RAW264.7诱导成熟破骨细胞凋亡的影响。方法通过100ng/m L RANKL诱导RAW264.7细胞株分化为破骨细胞,经TRAP特异性染色和骨吸收陷窝对诱导后的细胞进行鉴定。鉴定成功后,用100 ng/m L RANKL诱导RAW264.7细胞株5 d后,使用含有LMWF的培养基继续培养3 d,通过对TRAP阳性细胞计数和分析骨吸收面积来观察低分子量褐藻糖胶对破骨细胞的抑制和骨吸收功能情况;采用流式细胞术检测LMWF对破骨细胞凋亡的影响,capsase-3活性测试试剂盒检测LMWF对capsase-3活性进行测定;RT-PCR检测LMWF对成熟破骨细胞BAX与BCL-2基因表达的影响。结果单纯采用100 ng/m L的RANKL可成功诱导成熟的、有功能的破骨细胞。LMWF可以明显抑制RANKL诱导成熟破骨细胞的形成以及成熟破骨细胞的骨吸收功能;流式细胞术显示LMWF可增加成熟破骨细胞的早期凋亡率;并且能升高capsase-3的活性;PCR显示LMWF可明显下调破骨细胞凋亡相关的BCL-2和上调BAX基因mRNA表达,降低BCL-2/BAX的比值。结论低分子量褐藻糖胶可抑制破骨细胞的活性与骨吸收能力,促进破骨细胞凋亡,其主要机制是通过下调BCL-2和上调BAX mRNA基因表达实现的。     

巴斯德毕赤酵母菌株分泌表达的重组骨保护素融合蛋白生物学活性的研究

目的探讨巴斯德毕赤酵母菌株分泌表达的重组骨保护素融合蛋白(recombiant humanosteoprogerin-human serum album,rhOPG-HSA)对破骨细胞的抑制效应。方法利用巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony stimulating factor,M-CSF)以及破骨细胞分化因子(receptor activator ofnuclear factor-kβligand,RANKL)诱导骨髓单核细胞Raw264.7分化为破骨细胞,通过抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)染色和甲苯胺蓝染色法鉴定rhOPG-HSA抑制破骨细胞及其骨吸收能力。结果 rhOPG-HSA组与阴性对照组相比,Raw264.7细胞诱导3d,4d,5d后,TRAP阳性染色的破骨细胞明显减少;Raw264.7细胞与骨薄片共培养诱导10d后,骨吸收陷窝明显减少。结论 rhOPG-HSA能够抑制破骨细胞的分化及骨吸收。     

破骨细胞微管正端蛋白动态成像观察

目的 采用活细胞成像技术观察破骨细胞微管正端蛋白EB1在细胞内的分布及运动,初步研究微管在破骨细胞功能中的作用。方法 ①用脂质体转染方法（阳离子脂质体Lip2000）转染EB1-GFP基因至Raw264.7细胞系,G418筛选转染成功的Raw264.7细胞,荧光显微镜下观察后GFP蛋白免疫荧光染色确定稳定转染EB1-GFP的Raw264.7细胞系建立;②活细胞工作站下观察转染EB1-GFP的Raw264.7细胞中EB1蛋白的运动; ③用含100ng/mLRANKL和30ng/mL M-CSF的培养基分别诱导稳定转染EB1-GFP的Raw264.7细胞与正常Raw264.7细胞为破骨细胞,进行TRAP染色鉴定,比较两组细胞形态有无差别;④Raw264.7细胞系诱导出破骨细胞后,用细胞免疫荧光染色方法观察破骨细胞EB1蛋白的形态及分布;⑤活细胞工作站下观察稳转EB1-GFP的Raw264.7细胞诱导出的破骨细胞内EB1蛋白的运动状态。结果 ①脂质体转染方法建立了稳定转染EB1-GFP基因的Raw264.7细胞系;②观察到破骨前体细胞Raw264.7的微管正端蛋白（EB1）的运动轨迹;③转染EB1-GFP基因的Raw264.7细胞与正常Raw264.7细胞诱导的破骨细胞TRAP染色无明显差别;④活细胞工作站观察破骨细胞微管正端蛋白EB1的运动状态,结果表明破骨细胞微管活动性较破骨前体细胞Raw264.7活动性低。结论 ①EB1-GFP基因对破骨前体细胞系Raw264.7诱导破骨细胞无明显影响;②微管活动性降低可能与破骨细胞骨吸收活性相关。     

α-MEM培养基和高糖DMEM培养基对RAW264.7细胞向破骨细胞分化的影响

目的比较α-MEM和高糖DMEM两种培养基对小鼠破骨细胞前体细胞系RAW264.7细胞分化的影响。方法 (1)根据培养基和是否添加核因子κB受体激活蛋白配体(receptor activator for nuclear factor-κB ligand,RANKL)将细胞分为4组:α-MEM培养基组、添加RANKL的α-MEM培养基组、高糖DMEM培养基组、添加RANKL的高糖DMEM培养基组;(2)于培养第3天收集细胞,分别通过q PCR、免疫印迹实验观察分化相关标记物抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate resistant acid phosphatase,TRAP)、活化的T细胞核因子(nuclear factor of activated T-cells 1,NFATc1)、核因子κB受体活化因子(receptor activator for nuclear factor-κB,RANK)和组织蛋白酶(Cathepsin)K的mRNA及蛋白表达水平,并做TRAP染色观察各组成熟破骨细胞的形成情况,探讨添加RANKL后α-MEM培养基和高糖DMEM培养基对RAW264.7细胞向破骨细胞分化的影响。结果 (1)与添加RANKL的高糖DMEM培养基相比,添加RANKL的α-MEM培养基使RAW264.7细胞的分化相关标记物TRAP、NFATc1、RANK及cathepsin K的mRNA表达水平增加,TRAP、NFATc1及cathepsin K的蛋白表达水平增加;(2)在α-MEM培养基或高糖DMEM培养基中添加RANKL均可使RAW264.7细胞分化为成熟破骨细胞,但添加RANKL的α-MEM培养基处理的细胞组中形成的成熟破骨细胞更多。结论添加RANKL的α-MEM培养基有利于RAW264.7细胞向破骨细胞分化。     

槲皮苷抑制RANKL诱导的破骨细胞形成及骨吸收

[目的]探讨槲皮苷对核因子κB受体激动剂配体(receptor activator of nuclear factor kappa B ligand,RANKL)诱导的破骨细胞形成及骨吸收功能的影响。[方法]通过CCK-8法观察不同浓度槲皮苷(0~800μmol/L)干预不同时间(48 h、96 h)对RAW 264.7细胞的生存影响,确定合适的体外用药浓度;利用体外RANKL诱导RAW 264.7细胞形成破骨细胞体系,通过抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate resistant acid phosphatase,TRAP)染色计数评价槲皮苷(200、400μmol/L)对破骨细胞形成和生存的影响;通过骨片吸收实验对骨凹陷和骨吸收面积统计分析评价槲皮苷(200、400μmol/L)3 d内对成熟破骨细胞骨吸收功能的影响;釆用实时定量(Real-Time)PCR技术,检测槲皮苷(200、400μmol/L)对RANKL诱导的破骨细胞特异性基因NFATc1、TRAP和c-fos表达水平的影响。[结果]细胞生存实验发现槲皮苷干预96 h后,槲皮苷(0~800μmol/L)对RAW 264.7细胞4 d内生存未发现显著影响;通过TRAP染色发现200、400μmol/L槲皮苷能显著抑制体外RANKL诱导的破骨细胞形成;通过骨片吸收实验发现200、400μmol/L槲皮苷3d内能显著降低骨吸收面积,提示其抑制成熟破骨细胞骨吸收功能;同时,槲皮苷能呈剂量依赖性抑制RANKL诱导活化T细胞核因子(nuclear factor of activated T cells,NFAT)c1、TRAP和c-fos基因表达。[结论]槲皮苷通过抑制NFATc1,TRAP和c-fos的表达,来抑制体外RANKL诱导的破骨细胞形成和骨吸收功能,是一种潜在治疗骨质疏松药物。     

雌激素通过调节 EphB4／EphrinB2信号参与破骨细胞分化

目的研究雌激素通过调节EphB4/EphrinB2信号通路对破骨细胞分化的影响。方法 (1)采用RANKL诱导法培养卵巢摘除骨质疏松模型(OVX)组和假手术(Sham)组小鼠的破骨细胞,于第10天提取两组细胞的RNA和蛋白质样品,通过RT-PCR和Western blot检测细胞EphrinB2表达的变化;(2)采用雌激素及雌激素拮抗剂分别诱导培养RAW264.7破骨细胞,培养第8天提取RNA和蛋白质样品,利用RT-PCR和Western blot检测细胞EphrinB2表达的变化;(3)在OVX模型组小鼠的破骨细胞培养中添加EphrinB2配体EphB4-Fc片段,通过RT-PCR检测破骨细胞标志物的表达和抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色并计数,观察破骨细胞分化能力的变化。结果卵巢摘除骨质疏松模型组小鼠EphrinB2的表达量低于假手术组(P0.01);雌激素拮抗剂组EphrinB2的表达量低于对照组(P0.01),而雌激素组EphrinB2的表达量高于对照组(P0.05);给予EphrinB2的配体EphB4-Fc片段后,OVX组小鼠的破骨细胞标志物表达量降低(P0.01,P0.001),TRAP染色阳性细胞数减少。结论雌激素可以通过调节破骨细胞EphrinB2的表达影响破骨细胞分化,采用EphB4-Fc片段处理后,OVX组小鼠增强的破骨细胞分化受到抑制。     

模拟微重力条件下重组骨保护素融合蛋白(rhOPG-HSA)对破骨前体细胞Raw264.7抑制效应的研究

目的探讨在模拟微重力(Simulated microgravity,SMG)条件下重组骨保护素融合蛋白(rhOPG-HSA)对破骨前体细胞Raw264.7的抑制效应。方法在SMG条件下,分别培养破骨前体细胞Raw264.7与成骨细胞MC3T3-E1,利用ELISA法检测MC3T3-E1细胞培养液中骨保护素活性,用巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)以及可溶性破骨细胞分化因子(sRANKL)诱导Raw264.7分化为破骨细胞,通过抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色法鉴定rhOPG-HSA抑制破骨细胞能力,利用半定量RT-PCR测定破骨细胞中TRAP的表达。结果 SMG条件下,骨保护素活性在72 h后显著降低(P<0.01);Raw264.7细胞经M-CSF及sRANKL诱导3、4、5 d后,与阴性对照组相比,TRAP阳性染色的破骨细胞用rhOPG-HSA处理后明显减少(P<0.05),RT-PCR测定结果表明破骨细胞TRAP的表达降低(P<0.05)。结论 SMG条件下,rhOPG-HSA能够抑制破骨前体细胞Raw264.7的分化。     

JNK抑制剂SP600125对骨质疏松症保护作用的实验研究

目的 探讨JNK抑制剂SP600125对骨质疏松症模型成骨细胞和破骨细胞分化及功能的影响。方法 使用CCK8试验检测RAW264.7细胞、BMMs细胞和成骨细胞的增殖活性;使用相关染色试验探究JNK抑制剂SP600125的成骨化作用和对破骨细胞分化及功能的影响;使用RT-PCR分别检测BMMs细胞中破骨细胞及成骨细胞特异性基因mRNA表达水平;使用蛋白印迹试验检测RAW264.7细胞中JNK通路和NF-κB通路的活化水平;使用DCFH-DA法检测RAW264.7细胞中ROS水平。结果 CCK8试验结果显示,当SP600125浓度≤20 μmmol/L,对RAW264.7细胞、BMMs细胞和成骨细胞的增殖活性无显著影响;SP600125不影响成骨细胞钙结节的形成并抑制破骨细胞分化和功能;SP600125抑制的破骨细胞特异性基因的表达但不改变成骨细胞特异性基因的表达;SP600125抑制RANKL诱导的RAW264.7细胞中JNK通路和NF-κB通路的激活及ROS水平的升高。结论 JNK抑制剂SP600125能够抑制破骨细胞的分化及骨吸收功能,但对成骨细胞的分化无显著影响。     

不同浓度地西他滨对破骨细胞分化的影响

目的：探讨不同浓度梯度地西他滨对破骨细胞形成、活性及吸收功能的影响。方法不同浓度地西他滨（0、0.1、0.25和0.5μmol/L）处理单核巨噬（RAW264.7）细胞。通过4’,6?联眯?2?苯基吲哚（4,6?Diamidino?2?phenylindole dihydrochloride, DAPI）染色和微丝绿色荧光探针（F?actin?Trakcer Green）染色后观察F?actin环的形成即破骨细胞轮廓;抗酒石酸酸性磷酸酶检测试剂盒检测细胞上清中的抗酒石酸酸性磷酸酶活性,骨板吸收实验检测破骨细胞的骨吸收能力;Q?PCR实验检测破骨细胞标志基因抗酒石酸酸性磷酸酶（tartrate?resistant acid phosphatase, TRAP）、组织蛋白酶K（cathepsin K, CK）和脊髓基质金属蛋白酶?9（matrix metalloproteinase?9, MMP?9）的mRNA表达。结果不同浓度地西他滨抑制核因子NF?κB配体激活因子（receptor activator of NF?κB ligand, RANKL）诱导RAW264.7细胞形成F?actin环,降低了破骨细胞的TRAP酶活性,抑制了破骨细胞的骨吸收能力,同时也下调了破骨细胞标志基因TRAP、CK和MMP?9的mRNA表达。且随着药物浓度的增高,上述的抑制作用越明显。结论地西他滨抑制破骨细胞形成、活性和骨吸收能力,且这种抑制作用随着药物浓度的增加而逐渐增强。     

小鼠单核巨噬细胞白血病细胞（RAW264.7）的培养及其在诱导破骨细胞中的应用

小鼠单核巨噬细胞白血病细胞(RAW264.7)是通过Abelson鼠白血病病毒诱导BALB/c小鼠产生肿瘤后得到的细胞株。RAW264.7细胞在医学研究中应用十分普遍:它是许多白血病相关研究模型的常用细胞株;在微生物学、免疫学等研究中也十分常用;同时也是小鼠源性破骨前体细胞,可通过特定细胞因子的诱导在体外获得成熟破骨细胞,因此也成为许多骨骼疾病研究的体外模型。但RAW264.7细胞形态和分化状态多变,在实际培养中较难把握,给科研工作带来了一定困难。科研工作者在RAW264.7细胞的培养方法、细胞的形态及分化状态等方面始终观点不一,对于用RAW264.7细胞在体外诱导获得破骨细胞的方法也有许多差别。本文结合文献资料及实践,探索了RAW264.7细胞的培养条件,冻存、复苏、传代方法,以及用核因子κB受体活化因子配基(receptor activator for nuclear factor-κB ligand,RANKL)诱导其成为成熟破骨细胞的技术关键;旨在总结RAW264.7细胞的培养及诱导其分化为破骨细胞的经验教训,探讨RAW264.7细胞的培养和在体外用RANKL诱导RAW264.7细胞分化为破骨细胞的方法、技巧,供广大科研工作者借鉴。