不同种植基地滇重楼根茎和叶中甾体皂苷类有效成分的差异及相关性分析

目的:探讨不同种植基地滇重楼根茎和叶中主成分及甾体皂苷类有效成分的差异及相关性。方法:采用液质联用技术(LC-MS)定性分析不同种植基地滇重楼根茎和叶中甾体皂苷类有效成分、主成分的差异及相关性,流动相水(A)-乙腈(B)梯度洗脱(0~12 min,45%~60%B;12~25 min,60%~30%B;25~28 min,30%~100%B;28~30 min,100%B;30~35 min,100%~45%B;35~40 min,45%B),检测波长203 nm,采用电喷雾离子源(ESI),正离子模式扫描,毛细管电压4 k V,终板抵消电压500 V,雾化器压力253.8 k Pa,干燥气体为氮气,气体流速8 L·min-1,干燥温度350℃,离子源温度220℃。结果:定性检测到不同种植基地滇重楼根茎和叶中重楼皂苷Ⅰ,重楼皂苷Ⅱ,重楼皂苷Ⅲ(薯蓣皂苷),重楼皂苷Ⅴ,重楼皂苷Ⅵ,重楼皂苷Ⅶ,重楼皂苷H,纤细薯蓣皂苷8种甾体皂苷有效成分;重楼皂苷Ⅰ,重楼皂苷Ⅲ(薯蓣皂苷),重楼皂苷Ⅴ,重楼皂苷Ⅶ是不同种植基地滇重楼根茎中的主要存在形式,重楼皂苷Ⅴ和重楼皂苷Ⅵ是不同种植基地滇重楼叶中的主要存在形式;根据不同种植基地滇重楼根茎、叶正离子模式下液质数据的主成分分析模型可将其分为4类,其中巍山、南涧、弥渡、曲靖4个种植基地滇重楼根茎中主成分和不同种植基地滇重楼叶中主成分聚为一类。结论:不同种植基地滇重楼根茎和叶中8种主要甾体皂苷类有效成分存在较大差异;不同种植基地滇重楼根茎中主成分差异较大,而叶中主成分无显著差异。     

重楼属9种植物根茎中甾体皂苷有效成分的差异

目的:探讨重楼属9种植物根茎中甾体皂苷有效成分和主成分的差异及相关性。方法:采用液质联用(LCMS)技术定性分析重楼属9种植物根茎中甾体皂苷有效成分和主成分的差异及相关性。结果:滇重楼,金线重楼,毛重楼,滇重楼(阔瓣),南重楼,五指莲,黑籽重楼,多叶重楼8种重楼属植物根茎中均能检测到2015年版《中国药典》(一部)药材质量控制指标重楼皂苷Ⅰ,Ⅱ,Ⅵ,Ⅶ,同时还检测到重楼皂苷Ⅴ;重楼皂苷H,薯蓣皂苷,纤细薯蓣皂苷3种主要甾体皂苷有效成分差异较大。根据重楼属9种根植物根茎正离子模式下液质数据的主成分分析(PCA)模型可将S1(滇重楼),S2(金线重楼),S3(毛重楼),S4[滇重楼(阔瓣)],S5(南重楼),S6(五指莲),S9(多叶重楼) 7种重楼属植物聚为一类,S7(黑籽重楼),S8(长柱重楼)各自聚为一类,距离滇重楼最远。结论:滇重楼,金线重楼,毛重楼,滇重楼(阔瓣),南重楼,五指莲,多叶重楼根茎中甾体皂苷有效成分和主成分主要差异较小,但能否替代滇重楼入药还值得进一步深入研究。     

多茎滇重楼不同部位甾体皂苷活性成分积累的研究

目的:探讨不同居群多茎滇重楼不同部位中甾体皂苷活性成分的积累。方法:采用HPLC法测定不同居群多茎滇重楼根茎,茎,叶中主要活性成分重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ含量,建立HPLC图谱,运用单因素方差分析、聚类分析和HPLC图谱分析探讨多茎滇重楼不同部位甾体皂苷活性成分积累的差异。结果:不同居群多茎滇重楼不同部位中重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ含量及其总含量具有极显著(P0.01)或显著(P0.05)性差异,根茎中只有一个居群重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ总含量未达到《中华人民共和国药典》(2015年版)0.60%的限量标准;根茎中重楼皂苷主要以Ⅰ、Ⅶ的形式存在,茎中只检测到重楼皂苷Ⅶ,叶中皂苷活性成分分布不规律;不同居群多茎滇重楼不同部位HPLC色谱图相似度均较高。结论:不同居群多茎滇重楼根茎中重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ总含量除一个居群外均达到国家限量标准,且不同居群多茎滇重楼不同部位中甾体皂苷活性成分差异较小。该研究为多茎滇重楼是否能够替代滇重楼入药提供了一定科学依据。     

15种重楼属植物中8种甾体皂苷的含量测定

建立了同时测定重楼中8种重楼皂苷(重楼皂苷Ⅶ、H、Ⅵ、Ⅱ、Ⅰ、Ⅴ,薯蓣皂苷和纤细薯蓣皂苷)的分析方法,并对15种重楼属植物根茎中重楼皂苷的含量进行了评价。本研究采用Waters Acquity H-Class~(TM)液相色谱系统,PDA检测器,色谱柱为资生堂CAPCELL PAK ADME色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),乙腈-水为流动相(0.8 mL·min~(-1))梯度洗脱,柱温21℃;检测波长为203 nm。可知(1)8种重楼皂苷得到良好分离,稳定性和重复性好,且线性良好(R20.999 9),线性范围较宽(0.041 70~3.812 00μg),平均回收率在95.91%~103.8%。(2)不同种重楼中重楼皂苷的含量差异显著,毛重楼、狭叶重楼和金线重楼中含量较低或基本不含重楼皂苷,不适合作为重楼药用;不同产地的七叶一枝花含量差异显著;滇重楼、长柱重楼、大理重楼和五指莲中重楼皂苷含量较高,最高达5.0%,长柱重楼、大理重楼和五指莲可作为潜在的重楼药用资源。     

滇重楼不同生长发育期有效成分的变化规律

目的 通过对滇重楼不同生长发育期有效成分(重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ)含量的研究,为滇重楼适宜采收期的确定提供实验依据.方法 采用高效液相色谱法.色谱柱为Agilent Zorbax SB-C<,18>(4.6 mm×150 mm,5μm);流动相为乙腈-水,梯度洗脱;流速为1.0 ml·min<'-1>;检测波长为203 nm;柱温为35℃.结果 不同生长期滇重楼中4种重楼皂苷总含量发生明显变化.该类成分在5～6月份含量最高;5～10月呈下降趋势;到次年的4～6月呈升高趋势.结论 明确了滇重楼不同生长发育期重楼皂苷Ⅰ、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷Ⅵ、重楼皂苷Ⅶ的量和总量的动态变化规律.     

云南省不同地区滇重楼4种皂苷含量的比较

目的:研究云南省不同产地滇重楼中重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ4种皂苷的含量。方法:采用Waters C18柱(4.6mm×150mm,5μm),乙腈-水梯度洗脱,流速1mL/min,柱温30℃,检测波长203nm。结果:4种甾体皂苷在0.384-8.16μg范围内线性良好,R=0.9994-0.9998,平均加样回收率97.7%-99.1%;云南省不同产地的滇重楼中4种皂苷含量差异较大,依次为Ⅰ(0.979%)Ⅱ(0.492%)Ⅶ(0.097%)Ⅵ(0.004%);野生滇重楼皂苷的总含量(1.52%)高于人工栽培滇重楼(1.26%)。结论:该方法准确、简捷,可用于重楼中4种皂苷的含量测定。     

云南重楼的甾体皂苷类成分

目的：对重楼属（Paris）植物云南重楼（Pads polyphylla Smith vat. yurmanensis）的甾体皂苷类成分进行研究。方法：采用大孔树脂，硅胶柱色谱，Sephadex LH-20及RP-C18等技术分离纯化单体化合物，根据理化性质、波谱数据鉴定其结构。结果：从云南重楼乙醇提取物中分离并鉴定了9个甾体皂苷类化合物：（23S．25s） -3β3,23,27-trihydroxyspirost-5-en-3- O-β- D-glueopyranosyl- （1→6） -β- D-glueopyranoside （ 1 ）、重楼皂苷Ⅰ（2）、重楼皂苷Ⅱ （ 3 ）, （ 25 R ） diosgenin-3- O-β- D-glueopyranoside （ 4 ）, （ 25 R ） diosgenin-3- O-α- L-αrabinofuranosyl （ 1 → 4 ）-β- D- glueopyranoside （5）, （ 25 R ） diosgenin-3- O-α- L-rhamnopyranosyl （ 1 → 2） -β- D-glueopyranoside （6）, （ 25 R ） diosgenin-3- O-β- D-glueopyranosyl （ 1 → 3 ） [ α- L-rhamnopyranosyl （ 1 → 2 ） ]-β- D-glueopyranoside （ 7 ）, （ 25 R ） permogenin-3- O-α- L - arabinofuranosyl （ 1 → 4） [ a-L-rhamnopyranosyl （ 1 → 2）-β-D-glueopyranoside （8）, （ 25R ） permogenin-3-O-α-L- rhamnopyranosyl （ 1→4）-α-L-rhamnopyranosyl （ 1→4）-[ α- L-rhamnopyranosyl（1→2） ]-β-D-glueopyranoside（9） 。结论：化合物1为新化合物。     

滇重楼高效液相色谱指纹图谱研究

目的建立滇重楼根茎的HPLC指纹图谱,控制其质量。方法采用HPLC法,Eclipse XDB C18(150 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-水为流动相梯度洗脱,检测波长203 nm,柱温25℃,体积流量1.0 mL/min。通过外标法对各批次样品中的重楼皂苷I、H、甾体皂苷Ⅱ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ、薯蓣皂苷、纤细薯蓣皂苷进行测定。结果 18批滇重楼相似度小于0.9,说明不同批次样品差异较大。同时确定了6个共有峰,并通过对照品对其进行了归属。甾体皂苷Ⅱ在S8、S9批次中的量最高,重楼皂苷I在S7批次中的量最高,甾体皂苷Ⅵ只在4个批次中检测出。结论该方法简便、准确,具有良好的精密度、重复性、稳定性,可用于滇重楼的质量控制及综合评价。     

HPLC-ELSD法分析重楼商品药材中甾体皂苷的含量

目的：建立重楼药材中主要生物活性成分甾体皂苷的HPLC-ELSD测定方法。方法：应用蒸发光散射检测器，以乙腈-水为流动相梯度洗脱，流速1 mL·min^-1，在反相C₁₈ (4.6 mm×150 mm, 5 μm)柱上，测定重楼药材中11个甾体皂苷的含量。结果：在30 min以内，成功地分离分析11个甾体皂苷。精密度、稳定性RSD均小于3%，加样回收率在95%～97%。结论：此方法对这11个甾体皂苷的测定具有良好的精密度。结果表明该方法简便、快速、选择性好，适用于常用中药重楼的质量分析。     

反相高效液相色谱法同时测定重楼药材中4种皂苷的含量

目的建立RP-HPLC法测定重楼中4种甾体皂苷的含量。方法采用色谱柱:Zorbax eclipse XDB C8,(150 mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈-水(40∶60),流速1.0 ml.min-1;检测波长:203 nm;柱温:40℃。结果4种甾体皂苷范围在0.401~4.028μg线性良好,R=0.999 6~0.999 9,回收率99.1%~103.1%。不同来源的重楼药材中4种甾体皂苷的含量差异较大。结论该方法准确、简捷,为重楼药材的质量控制提供了一定方法和依据。     

HPLC同时测定不同产地滇重楼中的6种重楼皂苷

目的对不同产地滇重楼的质量进行评价研究,摸清目前云南省境内的滇重楼资源情况,为滇重楼资源合理利用和保护提供科学依据。方法收集产自云南省境内13个州(市、地区)的滇重楼样品进行分析,采用HPLC方法测定其6种重楼皂苷Ⅰ,Ⅱ,Ⅵ,Ⅶ,PA,H。结果不同产地滇重楼皂苷含量差异较大。结论 重楼皂苷质量受产地、环境因素影响较大,滇重楼品质表现出一定的地域及生境依赖性。     

滇重楼种胚休眠和发育过程中内源激素变化的研究

目的:探讨滇重楼种胚休眠和发育过程中种子内源激素的动态变化。方法:用酶联免疫吸附法(ELISA)测定不同时期滇重楼种子内源激素GA3、IAA、ZR和ABA的动态变化。结果:低温层积初期,滇重楼种子ABA的含量呈下降趋势,且较明显;进入生理后熟期以后,GA3、IAA、ZR的含量持续升高。结论:滇重楼种胚休眠和发育过程中,ABA含量显著下降,与休眠解除有较大的相关性;而在滇重楼种胚的发育期,特别是滇重楼种胚的生理后熟期,GA3、IAA、ZR含量逐渐升高,其变化趋势与滇重楼种胚快速分化、发育相一致。抑制物质的减少及促萌物质的增加与积累,最终导致滇重楼种胚休眠的解除。     

变温层积对解除滇重楼种子休眠及其内源激素变化的研究

目的研究滇重楼种子破休眠的方法及其内源激素水平变化规律。方法以变温层积处理的滇重楼种子为材料,利用高效液相色谱法(HPLC)测定种胚发育过程中植物激素赤霉素(GA)、吲哚乙酸(IAA)、脱落酸(ABA)量的变化与种子胚率的关系。结果变温层积处理可在3个月内打破滇重楼种子休眠,其GA量显著升高,ABA量显著下降。结论内源激素ABA和GA在滇重楼种子休眠与萌发过程中起着重要的作用。     

滇重楼的化学成分研究

目的研究滇重楼Paris polyphylla var.yunnanensis根茎中的化学成分。方法利用正相硅胶柱色谱、葡聚糖凝胶Sephadex LH-20、反相制备色谱等手段进行分离纯化,并通过1H-NMR、13C-NMR、ESI-MS等波谱技术进行结构鉴定。结果从醋酸乙酯层中分离得到了7个化合物,分别鉴定为豆甾醇-3-O-β-D-葡萄糖苷(Ⅰ)、1-O-(β-D-葡萄糖基)-(2S,3S,4E,8E)-2-[(2′R)-2′-羟基十六酰氨基]-4(E),8(E)-十八二烯-1,3-二醇(Ⅱ)、β-蜕皮激素(Ⅲ)、薯蓣皂苷元-3-O-α-L-呋喃阿拉伯糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷(Ⅳ)、薯蓣皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷(Ⅴ)、薯蓣皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷(Ⅵ)和偏诺皂苷元-3-O-α-L-呋喃阿拉伯糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷(Ⅶ)。结论化合物Ⅱ为首次从该属植物中分离得到。     

不同生境滇重楼根际解磷菌的筛选与鉴定

二级濒危药用植物滇重楼Paris polyphylla var.yunnanensis野生资源严重匮乏,引种栽培可缓解市场需求,筛选滇重楼根际土壤解磷菌,为开发高效微生物菌肥提供数据支撑.该研究从云南、四川和贵州3个地区10个不同地点的野生和移栽品种的滇重楼根际土壤中分离筛选具有矿化有机磷能力的根际解磷菌,经分离纯化后...     

滇重楼药材及腐烂根茎中氨基酸和元素的测定

目的：测定比较稀缺名贵中药材滇重楼Paris polyphylla Smith var. yunnansensis （Franch.） Hand.-Mazz.药材、健康根茎及腐烂根茎中氨基酸、元素和脂肪酸含量。方法：用氨基酸自动分析仪、等离子体发射光谱仪（ICP法）等测定滇重楼药材、健康根茎及腐烂根茎中氨基酸、矿质元素等成分。结果：滇重楼药材、健康根茎及腐烂根茎中氨基酸和元素含量有明显差异。结论：腐烂根茎与药材和健康根茎相比,氨基酸含量都呈下降趋势,脂肪酸含量介于两者之间;腐烂根茎元素含量与药材和健康根茎相比硫、钾和粗纤维含量都有不同程度的下降;腐烂根茎与健康根茎磷含量相同,都为0.11%;钙、铜、锰、灰粉和粗脂肪含量都呈增长趋势;镁、锌、蛋白质和粗纤维与药材相比含量有所增加,与健康根茎相比含量有所下降。     

影响滇重楼产量和品质诸因素的研究进展

滇重楼具有较强的生物活性,又是一些著名中成药和新药的主要原料之一。从分布、气候等生态因子,以及人工栽培、管理技术、加工炮制、寄生菌等因素对滇重楼产量和品质影响研究进展进行了综述,为实现滇重楼人工大量栽培产业化提供理论依据,并就滇重楼生产中存在的问题及未来研究方向予以展望。     

滇重楼地上部分总皂苷HPLC指纹图谱

目的:建立滇重楼地上部分总皂苷高效液相色谱法(HPLC)指纹图谱,为滇重楼地上部分总皂苷的质量控制提供参考。方法:采用Ecosil HPLC C₁₈色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm)进行分离,流动相为乙腈-水溶液,梯度洗脱,流速为1.0 mL·min^-1,检测波长为203 nm,柱温为31℃。建立6批滇重楼地上部分总皂苷HPLC特征图谱,并进行相似度评价;采用硅胶、反向硅胶RP-C₁₈柱色谱等方法对特征图谱中的3个未知共有峰化合物进行分离,应用质谱法(MS)、核磁共振(NMR)等方法进行结构鉴定;参照各对照品的色谱行为及其二极管阵列检测器(DAD)紫外光谱图,对共有峰进行归属和指认。结果:指纹图谱中的3个未知共有峰化合物为偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖苷(cld01)、偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖苷(cld02)、薯蓣皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖苷(cld03)。cld02为首次从该植物中分离得到,cld03为首次从该植物地上部分分离得到;6批样品特征图谱与对照图谱的相似度均大于0.99,共归属指认了7个共有峰。结论:所建立的HPLC指纹图谱方法稳定、可靠、重复性好,可为滇重楼地上部分总皂苷质量控制提供参考。