自噬在蝙蝠葛碱诱导宫颈癌Hela细胞凋亡中的作用

目的探讨自噬在蝙蝠葛碱诱导宫颈癌Hela细胞凋亡中的作用。方法采用MTT法检测蝙蝠葛碱(3.2,6.4,12.8,25.6μmol·L~(-1))以及蝙蝠葛碱与3-MA联合用药对宫颈癌Hela细胞增殖的影响,应用流式细胞术观察自噬在蝙蝠葛碱诱导宫颈癌Hela细胞凋亡中的作用;Western blot检测蝙蝠葛碱和3-MA对宫颈癌Hela细胞Cleaved caspase-3、Bcl-2、Bax和Beclin-1表达的影响。结果蝙蝠葛碱显著抑制宫颈癌Hela细胞增殖,其抑制作用随着药物浓度的增加和作用时间的延长而增加;而3-MA与蝙蝠葛碱联合应用后,HeLa细胞凋亡率明显减少;蝙蝠葛碱上调Hela细胞Cleaved caspase-3、Bax和Beclin-1的表达(P0.05),下调Bcl-2蛋白表达(P0.05);与蝙蝠葛碱组比较,3-MA与蝙蝠葛碱联合应用组Cleaved caspase-3、Beclin-1、Bax表达均明显降低(P0.05),而Bcl-2蛋白的表达明显升高(P0.05)。结论蝙蝠葛碱能够抑制宫颈癌HeLa细胞的增殖,上调凋亡相关蛋白Cleaved caspase-3、Bax和自噬相关蛋白Beclin-1的表达、下调抗凋亡蛋白Bcl-2表达,从而诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡和自噬性死亡。     

自噬对双去甲氧基姜黄素诱导肝癌HepG2细胞凋亡作用的影响

目的:探讨自噬对双去甲氧基姜黄素诱导肝癌HepG2细胞凋亡作用的影响。方法:以24 mg·L~(-1)双去甲氧基姜黄素或联合5 mol·L~(-1)自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)对HepG2细胞作用24,48 h,以四甲基偶氮唑盐(methye thiazolye telrazlium,MTT)比色法检测细胞活力;以24 mg·L~(-1)双去甲氧基姜黄素单用或联合3-MA对HepG2细胞作用48 h,Hoechst 33342染色倒置荧光显微镜观察细胞凋亡形态,磷脂结合蛋白V/碘化丙啶(Annxin V/propidium iodide,PI)双染检测细胞凋亡率,罗丹明123(Rhodamine 123,Rh123)染色检测线粒体膜电位,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测自噬相关蛋白Beclin-1,LC3,半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),活化型Caspase-3(cleaved Caspase-3),B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)的活性表达。结果:与空白组比较,双去甲氧基姜黄素可抑制HepG2细胞增殖,诱导细胞凋亡,降低线粒体膜电位,使pro-Caspase-3,Bcl-2,LC3-Ⅰ蛋白表达降低(P0.01),升高cleaved Caspase-3,Bax,Beclin-1,LC3-Ⅱ蛋白的表达(P0.01);3-MA可增强双去甲氧基姜黄素所诱导的HepG2细胞凋亡,提高凋亡率(P0.01),增加其降低线粒体膜电位作用(P0.01),明显下调pro-Caspase-3,Bcl-2蛋白的表达(P0.01),并上调Beclin-1,LC3,cleaved Caspase-3蛋白的表达(P0.01)。结论:双去甲氧基姜黄素可经线粒体机制诱导HepG2细胞凋亡,并诱导细胞自噬,自噬对凋亡有抑制作用。     

栝楼薤白半夏汤对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌自噬及凋亡的影响

目的:观察栝楼薤白半夏汤对心肌缺血再灌注损伤(MI/RI)大鼠心肌自噬及凋亡的影响。方法:将40只SD大鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组、3-MA干预组及栝楼薤白半夏汤组,采用可逆性冠脉左前降支结扎缺血30 min、再灌注2 h复制MI/RI模型。利用全自动生化仪检测血清肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)含量,采用Western blot法测定心肌自噬基因Beclin-1、LC3II及促凋亡蛋白Bax表达水平。结果:与假手术组比较,模型组大鼠血清CK、LDH含量与心肌Beclin-1、LC3 II、Bax蛋白表达及LC3 II/LC3I水平均显著升高,与模型组比较,栝楼薤白半夏汤组及3-MA干预组能降低血清CK、LDH含量,下调心肌Beclin-1、LC3 II、Bax蛋白表达及LC3 II/LC3I水平,且栝楼薤白半夏汤抑制Beclin-1表达作用优于3-MA干预组。结论:心肌缺血再灌注可引起自噬反应增强,促进凋亡损伤,栝楼薤白半夏汤通过抑制自噬、改善心肌细胞凋亡而起到心肌保护作用。     

石蒜碱诱导人肝癌HepG_2细胞自噬的体外实验研究

目的:探讨石蒜碱诱导人肝癌HepG_2细胞自噬的作用,为石蒜碱抗肿瘤研究提供实验依据。方法:体外培养人肝癌HepG_2细胞,采用CCK-8法测定细胞增殖抑制率。倒置显微镜观察细胞形态,荧光显微镜观察细胞自噬小体。流式细胞术测定细胞自噬率及加入自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)作用后的细胞自噬率变化。Western blot法检测与自噬相关的蛋白LC3-Ⅱ与Beclin-1的表达。结果:石蒜碱对HepG_2细胞增殖抑制作用随浓度的升高而增强,其作用72 h的IC_(50)为6.27μmol/L。倒置显微镜观察阴性对照组细胞形状完好且紧密排列。石蒜碱各组随给药浓度的升高,细胞变圆、漂浮、排列稀疏生长缓慢的状态越加明显;荧光显微镜可观察到细胞自噬小体的数量随石蒜碱浓度升高而升高。流式细胞仪检测石蒜碱组细胞自噬率与给药浓度呈正相关,加入抑制剂(3-MA)后细胞自噬受到抑制。Western blot法检测结果显示随石蒜碱浓度的升高LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白表达上调,均显著高于对照组(P0.01);3-MA抑制剂能显著拮抗其作用。结论:石蒜碱能诱导肝癌HepG_2细胞自噬,其机制可能是上调肝癌HepG_2细胞中LC3-Ⅱ与Beclin-1蛋白的表达,促使自噬小体形成与成熟,导致细胞过度自噬,最终使细胞凋亡。     

龙蛭汤含药血清联合3-MA、白藜芦醇对氧化应激环境下血管内皮细胞自噬及管腔形成的影响

目的观察龙蛭汤含药血清联合3-甲基腺嘌呤(3-Methyladenine, 3-MA)、白藜芦醇(Resveratrol, Res)对过氧化氢(H_2O_2)诱导的氧化应激环境下血管内皮细胞(HUVECs)自噬及管腔形成的影响。方法 SPF级SD大鼠分别予生理盐水、龙蛭汤水煎液灌胃7 d,取腹主动脉血制备含药血清,分装备用。通过建立H_2O_2诱导的HUVECs氧化应激自噬模型,分别加入正常对照组(Control组)、生理盐水含药血清组(空白血清组)、3-MA(3-MA组)、3-MA+10%龙蛭汤含药血清(3-MA+LZD组)、Res(Res组)、Res+10%龙蛭汤含药血清(Res+LZD组);CCK8、划痕实验、基质胶管型形成实验分别检测HUVECs增殖、迁移及管型形成能力,细胞免疫荧光检测自噬表达强度,Western Blot比较各组细胞Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ、VEGF的蛋白表达水平。结果与空白血清组相比,Res组与Res+LZD组的细胞增殖数、迁移距离及管型形成数均明显增多,LC3荧光表达增强,Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ、VEGF蛋白水平升高,3-MA组的自噬、VEGF蛋白水平均降低;与3-MA组、Res组相比,加入龙蛭汤含药血清后的细胞增殖、迁移、管型形成数增多,3-MA+LZD组自噬荧光表达增强,Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ、VEGF蛋白水平升高;Res+LZD组下调Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白水平,与自噬荧光表达趋势一致,同时VEGF蛋白表达水平上调。结论龙蛭汤含药血清通过调节Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ自噬蛋白水平调控自噬通路,提高血管内皮细胞活力,促进内皮细胞迁移及管型形成,可能是血管内皮细胞氧化应激损伤后的血管新生的重要作用机制。     

熊果酸对肺癌细胞A549自噬相关蛋白的影响

目的研究自噬在熊果酸抑制人肺癌A549细胞增殖中的作用及机制。方法应用CCK8法检测熊果酸对A549细胞增殖的影响;实时荧光定量PCR法检测自噬相关基因LC3、 Beclin-1及p62的表达情况;Western Blot检测自噬相关蛋白LC3、 Beclin-1及p62的表达情况。采用自噬抑制剂3-甲基腺嘌(3-MA)观察熊果酸对A549细胞增殖的抑制作用。结果熊果酸可以显著抑制人肺癌A549细胞的活力(P0.01)且随着熊果酸剂量增加,对细胞的生长抑制率显著上升。熊果酸可诱导A549细胞自噬发生,诱导自噬相关基因、蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ、 Beclin-1表达的增加;p62表达降低(P0.01);3MA使得自噬相关基因、蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ、 Beclin-1表达明显降低;p62表达明显增加(P0.01)。自噬抑制剂3-MA提高了熊果酸对A549细胞的抑制作用(P0.01)。结论熊果酸抑制A549细胞的增殖,可能通过调节LC3Ⅱ/Ⅰ、 Beclin-1及p62蛋白表达诱导细胞发生自噬。自噬抑制剂3-MA能够增强熊果酸抑制A549细胞的增殖抑制作用,有望为肺癌的临床治疗提供新的联合治疗方案。     

黄芪甲苷减轻异丙肾上腺素诱导H9c2细胞肥大损伤的机制研究

目的:探讨黄芪甲苷减轻异丙肾上腺素(ISO)诱导H9c2心肌细胞肥大损伤的保护作用及潜在机制。方法:以100μmol/L ISO作用H9c2细胞建立细胞肥大损伤模型。将细胞分为正常对照组、模型组及黄芪甲苷6.25、12.5、25μmol/L组,黄芪甲苷预给药2 h,ISO作用24 h。CCK-8法检测细胞活力,荧光染色测定细胞表面积,Hoechst 33342和TUNEL染色测定细胞凋亡率。比色法检测乳酸脱氢酶(LDH)活性,荧光探针DCFH-DA检测活性氧(ROS)水平,WST-8法测定超氧化物歧化酶(SOD)水平。q RT-PCR检测Bcl-2、Bax、P62、LC3 m RNA水平。Western Blot检测Sirt1、P62、Caspase-3、Beclin、P53蛋白表达及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ水平。结果:黄芪甲苷能显著减轻ISO诱导的H9c2细胞肥大损伤,减少心肌细胞表面积及LDH的释放,降低细胞凋亡率及细胞内ROS水平,升高SOD水平,上调自噬相关m RNA及蛋白的表达,下调凋亡相关m RNA及蛋白的表达。结论:黄芪甲苷能有效抑制ISO诱导的H9c2细胞肥大及凋亡,其机制可...     

人参皂苷Rh_2通过激活p38诱导K562细胞自噬凋亡的实验研究

为了研究人参皂苷Rh2对人白血病细胞K562的凋亡作用,并从自噬角度来探讨其机制。实验采用CCK-8方法检测人参皂苷单体Rh2对人白血病K562细胞增殖抑制作用;流式细胞术检测细胞凋亡;Hoechest染色观察细胞核染色质的形态;吖啶橙和MDC染色观察Rh2对细胞自噬的影响;Western blot和RT-PCR检测Rh2对白血病细胞自噬重要基因的表达的影响;运用自噬抑制剂(3-MA)研究自噬对细胞增殖和凋亡的影响。CCK-8显示人参皂苷Rh2在低浓度时能有效抑制白血病细胞增殖,且其抑制作用具有浓度和时间依赖性;FCM和Hoechest显示Rh2能增加细胞的凋亡和染色质呈凋亡形态改变;吖啶橙和MDC染色发现Rh2组细胞的绿色荧光增强,并出现大量酸性自噬小泡;Western blot和RT-PCR结果发现Rh2能上调Beclin-1,LC3A,LC3B,激活型Caspase-3和p-p38的表达;运用细胞自噬剂(3-MA)会削弱Rh2对K562的增殖抑制和促凋亡作用。人参皂苷Rh2可能通过激活磷酸化的p38,诱导细胞自噬途径,从而抑制K562细胞增殖和促进凋亡作用。     

痰瘀同治方对心肌缺血再灌注损伤过程中自噬与凋亡相关基因调节作用研究

目的:观察痰瘀同治方对心肌缺血再灌注损伤(IR)不同阶段自噬与凋亡相关基因的调控作用。方法:将80只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、痰瘀同治方组(43 g·kg~(-1)ig)及3-MA干预组(13.5 mg·kg~(-1)iv)。可逆性冠脉左前降支结扎缺血30 min,再灌注2 h复制心肌缺血(MI)及IR模型,利用全自动生化仪检测血清肌酸激酶(CK),乳酸脱氢酶(LDH)含量;采用RT-PCR法检测各组大鼠心肌自噬基因Beclin-1,心肌微管相关蛋白轻链3蛋白(LC3)及抗凋亡蛋白Bcl-2表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠在缺血及再灌注阶段血清CK,LDH含量及心肌Beclin-1,LC3 mRNA表达均显著增强,且Bcl-2 mRNA表达减弱(P0.01);与模型组比较,痰瘀同治组能降低缺血期血清CK及再灌注期CK,LDH含量(P0.05),抑制缺血期Beclin-1 mRNA及再灌注期Beclin-1,LC3 mRNA表达,上调缺血期及再灌注期Bcl-2 mRNA表达(P0.05,P0.01);与假手术组,3-MA组比较,痰瘀同治组在缺血期可上调Beclin-1,LC3 mRNA表达(P0.01)。经相关性检验,缺血期及再灌注期Beclin-1与Bcl-2均呈负相关表达(P0.01)。结论:痰瘀同治方通过促进缺血期自噬发生及抑制再灌注期自噬过表达,同时促进抗凋亡蛋白Bcl-2表达而发挥其对缺血再灌注损伤心肌的保护作用。     

丹参多酚酸盐诱导胶质瘤细胞自噬的实验研究

目的:研究丹参多酚酸盐对胶质瘤U251细胞自噬的影响。方法:丹参多酚酸盐作用胶质瘤U251细胞后,倒置显微镜动态观察细胞形态,CCK-8试剂盒检测细胞增殖情况,MDC荧光染色观察细胞自噬水平,Western-Blot检测自噬蛋白LC3的表达,qRT-PCR检测自噬基因Beclin-1的表达。结果:经丹参多酚酸盐处理后,胶质瘤U251细胞形态出现异常,CCK-8法检测发现细胞增殖能力下降,MDC荧光染色观察可见U251细胞质内有大量自噬体和自噬溶酶体,其自噬水平随丹参多酚酸盐作用时间的延长逐渐增强。Western-Blot法检测发现自噬相关蛋白LC3的表达随着丹参多酚酸盐浓度增加而增加,且随着药物浓度的增加,LC3-Ⅰ向LC3-Ⅱ转化增多。qRT-PCR法检测发现自噬相关基因Beclin-1 mRNA的表达随着丹参多酚酸盐浓度增加而增加。结论:丹参多酚酸盐可诱导胶质瘤U251细胞发生自噬,其诱导U251细胞发生自噬的机制可能与上调Beclin-1的表达有关。     

青钱柳三萜对链脲佐菌素损伤的INS-1细胞自噬和凋亡的影响

目的:观察青钱柳三萜对STZ损伤的INS-1细胞自噬和凋亡的影响。方法:用链脲佐菌素(STZ)诱导INS-1细胞建立损伤模型。MTT法检测不同浓度青钱柳三萜对INS-1细胞增殖的影响,荧光酶标仪检测青钱柳三萜对胞内活性氧(ROS)含量的影响,用放射免疫法测定其胰岛素分泌能力,比色法测定上清液中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性及丙二醛(MDA)含量;比色法测定心肌细胞中Caspase-3、Caspase-9的活性,荧光定量PCR测定Bcl-2和Bax mRNA表达,并计算Bcl-2与Bax的比值,Western blot检测细胞中自噬调控蛋白微管相关蛋白轻链3(LC3)和凋亡调控蛋白聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)蛋白表达。结果:当青钱柳三萜浓度低于25μg/ml时,无论单用青钱柳三萜还是与STZ联用均对INS-1细胞增殖具有促进作用,但是当其浓度大于100μg/ml或与STZ联用大于50μg/ml时,均对其细胞生长具有抑制作用;青钱柳三萜(6.25、12.5、25μg/ml)可抑制INS-1细胞凋亡,促进INS-1细胞分泌胰岛素,降低细胞内ROS含量;升高上清液中SOD、CAT和GSH-Px活性,降低MDA含量,降低自噬调控蛋白LC3-Ⅱ和凋亡调控蛋白Cleaved PARP的蛋白表达,上抗凋亡蛋白Bcl-2 mRNA表达,下调促凋亡蛋白Bax mRNA表达及Bcl-2/Bax,降低Caspase-9及Caspase-3的活性。结论:青钱柳三萜对STZ损伤的INS-1细胞具有较好的保护作用。它通过抑制STZ损伤的INS-1细胞过量产生ROS,增强内源性抗氧化酶GSH-Px、SOD、CAT的活性,降低自噬调控蛋白LC3-Ⅱ和凋亡调控蛋白Cleaved PARP的表达,上抗凋亡蛋白Bcl-2表达,下调促凋亡蛋白Bax表达及降低Caspase-9及Caspase-3的活性,进而提高INS-1细胞存活率,来发挥对受损INS-1细胞的保护作用。     

余甘子叶化学成分没食子酸诱导人肝癌细胞株BEL-7404凋亡机制的研究

目的:探讨余甘子叶化学成分没食子酸诱导人肝癌细胞株BEL-7404产生凋亡的机制。方法:采用PI和Hoechst33342双染色法流式检测对人肝癌细胞株BEL-7404各周期的影响;细胞荧光免疫染色法和Western blot法检测Bax和Bcl-2蛋白表达的变化。结果:PI和Hoechst33342双染色法分析结果表明,余甘子叶化学成分没食子酸作用BEL-7404细胞72 h后,G2/M期细胞数增多,呈现细胞阻滞现象,并伴有大量的细胞凋亡。荧光免疫染色显示,药物作用人肝癌细胞株BEL-7404 72 h后Bax蛋白表达升高,Bcl-2蛋白表达则降低。Western blot法实验亦显示Bax蛋白表达升高。结论:余甘子叶化学成分没食子酸能阻滞G2/M期细胞,并通过上调Bax和下调Bcl-2蛋白表达,导致线粒体膜电位的下降,进而激活Caspase,最终导致细胞死亡,可能是其诱导人肝癌细胞株BEL-7404凋亡的分子机制之一。     

迷迭香酸抑制自噬诱导HepG2细胞凋亡的作用研究

目的:观察迷迭香酸(RA)对HepG2细胞凋亡和自噬的作用,探讨自噬与凋亡之间的相互作用。方法:用不同浓度迷迭香酸作用于HepG2细胞24h、48h、72h。MTT法检测细胞存活率,观察迷迭香酸对HepG2细胞核形态的影响,流式细胞术检测细胞凋亡变化,台盼蓝染色法观察细胞自噬泡情况,透射电镜观察HepG2细胞的自噬变化,蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白Cleaved Caspase-3、Bcl-2和自噬相关蛋白(LC3)、p62的表达水平。采用迷迭香酸+3-甲基腺嘌呤(3-MA,自噬抑制剂)或迷迭香酸+雷帕霉素(RAP,自噬诱导剂)分别培养处理HepG2细胞,观察细胞增殖、细胞凋亡情况及相关蛋白表达变化。结果:与对照组相比,迷迭香酸(6.25、12.5、25、50、100、200μmol/L)均能降低HepG2细胞的存活率,诱导HepG2细胞发生凋亡,具有量效和时效关系,减少细胞内自噬泡和自噬小体,降低LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比值,减少Bcl-2的表达,增加Cleaved Caspase-3、p62蛋白的表达。与迷迭香酸25μmol/L处理组相比,迷迭香酸25μmol/L+3-MA 1.0μM/mL应用可诱导HepG2细胞凋亡增加,可进一步减少细胞内自噬泡和自噬小体数目,降低LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值,进一步抑制HepG2细胞的自噬水平,减少Bcl-2的表达,增加Cleaved Caspase-3和p62表达;迷迭香酸25μmol/L+RAP 1.0μM/mL处理HepG2细胞,增加细胞内自噬泡和自噬小体数目,升高LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值,可以抑制和逆转迷迭香酸诱导的细胞自噬水平下降,增加Bcl-2的表达,减少Cleaved Caspase-3和p62表达,细胞凋亡水平下降,这说明抑制或增强自噬时,迷迭香酸能改变对HepG2细胞的凋亡影响作用。结论:迷迭香酸可通过抑制自噬促进HepG2细胞的凋亡。     

莪术醇诱导人骨肉瘤MG63细胞自噬的实验研究

目的观察莪术醇对人骨肉瘤MG-63细胞自噬性凋亡的作用。方法体外人骨肉瘤MG-63细胞单独或和莪术醇共同培养,MTT法检测莪术醇对骨肉瘤细胞系MG-63的增殖抑制作用;FITC-annexinⅤ/PI染色流式细胞术分析细胞凋亡;PI和hochest33258活细胞染色观察凋亡细胞核形态学变化;EGFP-LC3b细胞转染,荧光显微镜观察细胞自噬;微管相关蛋白1轻链3-β(LC3)蛋白和自噬相关蛋白Beclin-1表达水平用Western blotting方法分析。结果 MTT检测显示莪术醇可抑制人骨肉瘤MG-63细胞增殖,并具有浓度-时间依赖性;流式细胞术检测显示莪术醇可显著诱导MG-63细胞凋亡;活细胞荧光染色显示MG-63细胞核凝聚并碎裂成小体;细胞质内凝集荧光增强;LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白比值,Beclin-1蛋白表达明显增强;自噬抑制剂3-MA可明显逆转上述现象。结论莪术醇能明显抑制人骨肉瘤MG-63细胞的增殖,其机制主要是通过诱导自噬性凋亡。     

盐酸小檗碱对 H2O2 诱导的 H9C2 心肌细胞损伤的保护机制研究

目的:探讨盐酸小檗碱对H_2O_2诱导的H9C2心肌细胞损伤的保护作用和机制。方法:将H9C2心肌细胞随机分成对照组、模型组(200μmol/L H_2O_2处理)、盐酸小檗碱+H_2O_2组(10μmol/L盐酸小檗碱预处理+200μmol/L H2O)2和盐酸小檗碱+Tatbeclin1+H_2O_2组(10μmol/L盐酸小檗碱预处理+1μmol/L Tat-beclin1和200μmol/L H2O)2。采用MTT法测定细胞活力、乳酸脱氢酶(Lactate dehydrogenase,LDH)法测定细胞损伤、免疫荧光实验分析细胞自噬情况、Western Blot检测细胞beclin1表达。结果:与对照组比较,模型组H9C2细胞存活率显著降低、LDH释放显著增加、LC3绿色荧光增多、beclin1蛋白表达显著增加(P 0.05);与模型组比较,盐酸小檗碱+H_2O_2组H9C2细胞存活率提高,LDH释放减少、LC3绿色荧光减少、beclin1蛋白表达降低(P 0.05);与盐酸小檗碱+H_2O_2组比较,盐酸小檗碱+Tat-beclin1+H_2O_2组H9C2细胞存活率降低、LDH释放增加、LC3绿色荧光增多(P 0.05)。结论:盐酸小檗碱能有效减轻H_2O_2诱导的H9C2心肌细胞损伤和细胞自噬,其机制可能与抑制beclin1表达有关,为临床上应用盐酸小檗碱防治心肌细胞损伤提供实验基础和理论依据。     

氧化槐定碱对新生大鼠海马神经元氧糖剥夺再灌注损伤后细胞凋亡的影响

目的:研究氧化槐定碱对原代培养新生大鼠海马神经元氧糖剥夺再灌注损伤后细胞调亡的影响。方法:以原代培养的新生大鼠海马神经元为研究对象建立氧糖剥夺再灌注损伤模型。Hoechst 33342和TUNEL染色法检测海马神经细胞凋亡,透射电子显微镜术观察凋亡细胞形态学变化,化学比色法测定海马神经细胞Caspase-3、Caspase-9和Caspase-8的活性,免疫蛋白印迹技术和实时荧光定量PCR技术检测凋亡相关因子Cytochrome C、Caspase-3、Bcl-2、Bax和PARP-1的蛋白和mRNA的表达。结果:与正常组比较,损伤组Hoechst 33342和TUNEL染色法显示神经细胞凋亡率明显升高;Caspase-3、Caspase-9和Caspase-8活性显著提高;Cytochrome C、Caspase-3、Bax和PARP-1蛋白和mRNA水平明显上调,Bcl-2蛋白和mRNA水平明显下调,Bcl-2/Bax比率也明显下调。与损伤组比较,氧化槐定碱治疗组(20、5、1.25mg/L)可显著改善氧糖剥夺再灌注损伤所致的神经细胞凋亡的形态学变化,并降低神经细胞凋亡率;明显抑制Caspase-3、Caspase-9和Caspase-8的活性。氧化槐定碱治疗组(20mg/L)可明显抑制Cytochrome C、Caspase-3、Bax和PARP-1蛋白和mRNA表达,增强Bcl-2蛋白和mRNA的表达,使Bcl-2/Bax比率上升。结论:氧化槐定碱通过抗凋亡作用对氧糖剥夺再灌注损伤的大鼠海马神经细胞发挥保护作用。     

苦参碱对人乳腺癌MCF-7细胞自噬及细胞凋亡的影响

目的:研究苦参碱对人乳腺癌MCF-7细胞自噬及凋亡的影响,并分析其机制,探索二者之间潜在的关系。方法:采用MTT法和Annexin V/PI双染法检测细胞增殖活力和凋亡率;自噬双标腺病毒法(mRFP-GFP-LC3)和透射电镜法检测细胞自噬水平;Western Blot检测自噬相关蛋白Beclin-1、LC3及凋亡相关蛋白Caspase-3、cleavedCaspase-3、cleaved-Caspase-9的表达;运用自噬抑制剂(3-MA)和凋亡抑制剂(Z-VAD-FMK)对上述相关指标进行干预。结果:苦参碱在未加入抑制剂干预的情况下可显著抑制MCF-7细胞的增殖,提高凋亡率和自噬水平,可上调自噬相关蛋白Beclin-1、LC3和凋亡相关蛋白cleaved-Caspase-3、cleaved-Caspase9的表达(P<0.05或P<0.01)。加入自噬抑制剂(3-MA)后,细胞存活率显著降低,凋亡率显著升高(P<0.05);加入凋亡抑制剂(Z-VAD-FMK)后,自噬水平显著升高(P<0.05)。结论:苦参碱可诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡和细胞自噬,二者之...     

苦豆碱通过抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路调控前列腺癌细胞自噬与凋亡

目的：探讨苦豆碱对前列腺癌PC3、LNCaP细胞的抑制作用及其可能机制。方法：采用不同浓度(0、25、50、100、200、400、800、1 600μmol)苦豆碱处理前列腺癌PC3、LNCaP细胞。CCK-8法及克隆形成实验检测PC3、LNCaP细胞增殖活性;光学显微镜观察细胞形态改变;流式细胞术检测细胞凋亡率;免疫荧光检测自噬指标LC3Ⅱ表达;Western Blot检测凋亡和自噬相关蛋白Caspase-3、Bax、Bcl-2、LC3Ⅱ、Beclin 1、P62及PI3K/AKT/mTOR通路关键蛋白表达。结果：CCK-8及克隆形成实验结果提示苦豆碱以浓度依赖性抑制PC3、LNCaP细胞活力,与空白对照组(0.1%DMSO)比较,100、200μmol苦豆碱处理后的PC3、LNCaP细胞形态发生明显变化,流式细胞术结果显示细胞凋亡率升高,免疫荧光染色结果显示PC3和LNCaP细胞胞质LC3Ⅱ绿色荧光点状表达数量增多,自噬加强,Western Blot结果显示凋亡相关蛋白Caspase-3、Bax表达显著升高,Bcl-2表达显著降低;自噬相关蛋白Beclin 1表达及LC3Ⅱ/LC...     

基于自噬/凋亡研究淫羊藿女贞子合用糖皮质激素对3-MA诱导的ASMCs自噬抑制状态的作用

目的 研究淫羊藿女贞子合用糖皮质激素对自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine, 3-MA)抑制气道平滑肌细胞(airway smooth muscle cells, ASMCs)自噬的影响。方法 培养大鼠原代ASMCs,随机分为5组，即正常组(正常大鼠血清)、3-MA组(正常大鼠血清+3-MA)、激素组(正常大鼠血清+3-MA+地塞米松)、中药组(3-MA+淫羊藿女贞子含药血清)、合用组(3-MA+淫羊藿女贞子含药血清+地塞米松)。根据分组分别加入正常大鼠血清或含药大鼠血清；除正常组外，其余各组同时加入3-MA刺激ASMCs, 48h后进行检测。电镜观察细胞超微结构；MTT法检测细胞活力：免疫细胞化学法检测增殖蛋白Ki-67蛋白表达；Annexin V-FITC/PI法检测凋亡活性；Western Blot或免疫荧光法检测LC3、Bax、Bcl-2、P53、Caspase-3、Beclin-1、mTOR、p-mTOR蛋白表达。结果 与3-MA组比较，各给药组可不同程度地增加3-MA抑制的自噬活性，上调LC3 II/I比值、Beclin-1表达，下调mTOR及p-mTO...     

人参皂苷Rh_2通过自噬途径对KG1α细胞增殖和凋亡的影响

目的研究人参皂苷Rh_2(Rh_2)对人白血病细胞KG1α增殖的抑制作用,并从自噬凋亡角度来探讨其机制。方法采用CCK-8法检测Rh_2对KG1α细胞增殖的抑制作用;流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡;Hoechest染色观察细胞核染色质的形态;吖啶橙染色观察Rh_2对细胞自噬的影响;Western blotting和RT-PCR检测Rh_2对白血病细胞自噬重要蛋白和基因表达的影响;运用自噬抑制剂(3-MA)研究自噬对细胞增殖和凋亡的影响。结果 CCK-8显示Rh_2在低浓度时能有效抑制KG1α细胞增殖,且其抑制作用具有浓度和时间依赖性;FCM检测和Hoechest染色结果显示Rh_2能增加细胞的凋亡,使染色质呈凋亡形态改变;吖啶橙染色发现Rh_2组细胞绿色荧光增强,细胞出现大量的酸性自噬小泡;Western blotting和RT-PCR结果发现Rh_2上调Beclin-1、LC3A、LC3B、激活型Caspase-3表达和增加Bax/Bcl-2值,并激活MAPK、ATK、ERK信号通路;细胞自噬剂(3-MA)会削弱Rh_2对KG1α细胞的增殖抑制和促凋亡作用。结论 Rh_2可能通过激活MAPK、ATK、ERK信号通路,诱导细胞自噬途径,从而抑制KG1α细胞增殖和促进其凋亡。