LRIG1基因与肿瘤的关系

LRIG1是新近发现的抑癌基因,是LRIGs家族成员(LRIG1、LRIG2和LRIG3)之一,在哺乳动物体内广泛存在.它编码的产物为一类跨膜糖蛋白:在其胞外段含有多个亮氨酸重复序列和免疫球蛋白样结构域(tandem leucine-rich repeats and immunoglobulin-like domains,LRIG).目前对其家族研究较为透彻的是LRIG1,研究表明其与多种恶性肿瘤密切相关,现就近几年LRIG1与肿瘤之间关系的研究予以综述.     

LRIG1对胶质瘤细胞中表皮生长因子受体的抑制作用及其机制

目的 验证LRIG1在胶质瘤细胞中对表皮生长因子受体(EGFR)的抑制作用,探讨其作用机制.方法 采用激光共聚焦显微镜及Western blot法检测LRIG1质粒转染前后神经胶质瘤H4细胞中EGFR和LRIG1的亚细胞定位和表达情况.结果 在H4细胞中LRIG1低表达,EGFR高表达,均主要为膜表达;转染LRIG1质粒后,LRIG1表达增强,EGFR表达下降.结论 LRIG1主要位于胶质瘤细胞膜上,对膜受体EGFR有抑制作用,参与EGFR的负反馈调节.     

LRIG1基因功能域载体的构建及亚细胞定位

目的 构建含LRIG1胞外段＋跨膜段（ET）及跨膜段＋胞内段（TC）基因的真核表达载体, 并研究它们的亚细胞定位.方法 以人LRIG1全长的质粒p3XFLAG-CMV-9-LRIG1为模板, PCR扩增出3XFLAG-LRIG1-ET和LRIG1-TC, 并将之分别亚克隆入真核表达载体pIRES2-EGFP-N1和p3XFLAG-CMV-9中. 酶切和DNA测序鉴定, 脂质体法将构建的质粒转染U251细胞, 观察标记基因荧光蛋白EGFP的表达, 间接免疫荧光检测标记基因3XFLAG的表达. 结果 构建的质粒序列正确, 转染细胞后可检测到EGFP和3XFLAG基因的表达; LRIG1-ET和LRIG1-TC均主要表达在U251的胞膜上, 少量表达在胞浆. 结论 包含LRIG1亚单位ET和TC的真核表达载体均构建成功, 其表达产物均主要位于胞膜, 少量位于胞浆.     

Survivin启动子控制LRIG1基因表达的重组腺病毒对人膀胱癌裸鼠移植瘤的治疗

[目的]探讨Survivin启动子控制LRIG1基因表达的重组腺病毒对人膀胱癌裸鼠移植瘤的治疗作用及机制.[方法]建立膀胱癌裸鼠移植瘤模型,将成瘤裸鼠随机分为3组,Ad-Surp-LRIG1组(尾静脉注射Ad-Surp-LRIG1上清液)、AD-LRlG1组(尾静脉注射Ad-LRIG1上清液)、PBS组(尾静脉注射PBS),观察各组裸鼠移植瘤生长情况并绘制肿瘤生长曲线;RT-PCR和Western blot分别检测各组肿瘤组织中LRIG1和EGFR mRNA和蛋白的表达.[结果]Ad-Surp-LRIG1组肿瘤生长速度明显慢于其他2组,治疗结束后Ad-Surp-LRIG1组肿瘤较其他2组轻,差异有统计学意义(F=97.86,P＜0.001),Ad-LRIG1组与PBS组相比差异无统计学意义(t=1.73,P=0.06).与其他两组相比,Ad-Surp-LRIG1组LRIG1的mRNA和蛋白表达水平明显升高,而EGFR的mRNA和蛋白表达水平则显著降低(P＜0.01).[结论]Ad-Surp-LRIG1在体外均能明显抑制膀胱癌的生长,其机制可能部分与LRIG1能下调EGFR的表达有关.     

LRIG基因家族与肿瘤关系的研究进展

L RIG基因是近年发现的一组新的基因家族，广泛存在于哺乳动物体内，该家族包括3个成员：L RIG1、L RIG2和L RIG3，编码的产物是一组结构类似的跨膜糖蛋白，由胞内段、跨膜段和胞外段3部分组成。研究发现，组成跨膜糖蛋白的胞内段、跨膜段与胞外段的L RIG家族之间相互包含有高度保守的氨基酸序列，提示L RIG家族蛋白之间具有某些相似的分子功能，但他们在信号肽及内在的氨基酸序列存在着显著的差异。L RIG基因家族对维持组织细胞的结构及功能方面具有重要作用，并与多种肿瘤密切相关。3种L RIG蛋白在肿瘤细胞中所起的作用不尽相同，且具有双重的调控作用，与细胞内环境有关［1］。本文就近年 LRIG基因家族与肿瘤关系的研究进展进行综述。     

LRIG2基因短发夹RNA表达载体的构建、鉴定和稳定株的筛选

目的 构建针对富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白2(LRIG2)基因的短发夹RNA(shRNA)表达载体,建立稳定转染的细胞株,观察其对目的 基因表达的影响.方法 根据GenBank中LRIG2基因序列设计2条RNA干扰序列,命名LRIG2-shRNA1、LRIG2-shRNA2,同时设计1条非特异性序列作为阴性对照.据此设计合成各自的寡核苷酸链,退火后连接入pGenesil 2载体,转化扩增后进行序列测定.用不同浓度的G418作用于GL15细胞,得到G418对于GL15细胞的筛选浓度.3种重组表达载体转染胶质瘤细胞系GL15细胞,用G418筛选后挑单克隆后扩增获得稳定株.逆转录RT-PCR和Western印迹法分别在mRNA和蛋白水平上检测LRIG2的表达.结果 3种重组表达载体(pGenesil 2-LRIG2-shRNA1、pGenesil 2-LRIG2-shRNA2和pGenesil 2-negative shRNA)经限制性酶切及DNA测序分析证明序列插入正确.G418对于GLl5细胞的筛选浓度为600μg/ml,筛选出稳定转染三种质粒的GL15细胞,转染pGenesil 2-LRIG2-shRNA2组细胞LRIG2 mRNA和蛋白表达明显低于转染pGenesil 2-LRIG2-shRNA1、pGenesil 2-negative shRNA组.结论 成功构建了针对LRIG2基因的shRNA表达载体(pGenesil 2-LRIG2-shRNA2),转染细胞后可抑制LRIG2基因表达,为研究LRIG2基因的功能提供了基础.     

LRIG1过表达对顺铂诱导的胶质瘤细胞凋亡的影响及其机制

目的 研究过表达富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白1(leucine-rich repeats and immunoglobulin-like domains-1,LRIG1)对顺铂(cisplatin,CDDP)诱导的胶质瘤细胞U251凋亡的影响及其机制.方法 应用脂质体介导的基因转染技术将对照质粒(EGFP-N1)及LRIG1质粒(EGFP-N1-LRIG1)分别转染胶质瘤细胞系U251,设为对照组和LRIG1过表达组,用Real-time PCR检测转染后LRIG1表达水平;用Annexin Ⅴ/7AAD双标流式细胞术检测细胞凋亡;用Western blot检测各目的 蛋白表达水平.结果 LRIG1过表达组LRIG1 mRNA及蛋白均较对照组明显增高;0、10、20 μg/mL CDDP作用下,LRIG1过表达组细胞凋亡率均明显高于对照组(P<0.01);随着CDDP浓度增加,胶质瘤细胞U251磷酸化表皮生长因子受体(P-EGFR)表达增加;不同浓度CDDP作用下,LRIG1过表达组P-EGFR水平均较对照组明显降低,促凋亡蛋白Bax,Caspase-3表达增加,抗凋亡蛋白Bcl-2表达降低.结论 LRIG1通过下调P-EGFR水平而促进顺铂诱导的胶质瘤细胞凋亡,增强胶质瘤细胞对顺铂的敏感性.     

LRIG1诱导人胶质瘤细胞凋亡与表皮生长因子受体基因关系

目的 研究LRIG1诱导神经胶质瘤细胞的凋亡作用,探讨LRIG1对表皮生长因子受体信号转导通路抑制效应的分子机制.方法 采用Lipofectamine介导的基因转染技术,将质粒pcDNA3.1-LRIG1转染原代神经胶质瘤细胞,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot方法检测转染后胶质瘤细胞LRIG1和EGFR mRNA与蛋白水平的变化,Western blot方法检测神经胶质瘤细胞PKCα、Bax、bcl-2蛋白水平的变化.MTT法和流式细胞技术分析细胞的增殖和凋亡的变化.结果 细胞中转染pcDNA3.1-LRIG1组中以LRIG1 mRNA和蛋白质的表达水平较未处理组和转染空载体组明显升高,而EGFR mRNA和蛋白质的表达水平较对照组和转染空载体组明显降低,PKCα、Bax表达上调,bc1-2表达下降,胶质瘤细胞生长受到抑制,凋亡显著增强.结论 LRIG1可能通过参与形成EGFR的负反馈环,从多种途径抑制了肿瘤的生长.     

LRIG3基因特异性siRNA腺病毒表达载体的构建与鉴定

目的 构建并鉴定针对LRIG3 基因的小干扰RNA(LRIG3-siRNA)腺病毒表达载体,为膀胱癌基因治疗的研究提供有效的实验工具.方法 设计可形成小发夹结构的LRIG3-siRNA模板cDNA 序列,克隆至缺陷型腺病毒质粒pSilencer-U6neo,构建LRIG3-siRNA表达质粒pSilencer-LRIG3.鉴定正确后,将pSilencer-LRIG3转染至HEK293细胞,包装成复制缺陷型腺病毒pAd-LRIG3.大量扩增pAd-LRIG3,氯化铯梯度离心纯化,测病毒滴度.pAd-LRIG3 感染人膀胱癌细胞T24,RT-PCR法检测LRIG3 mRNA的表达.结果酶切分析、测序鉴定表明pSilencer-LRIG3构建成功,PCR分析表明pAd-LRIG3含有LRIG3-siRNA 序列.pAd-LRIG3可抑制 LRIG3 mRNA的表达.结论 含有LRIG3-siRNA 的重组腺病毒构建成功,且具有抑制LRIG3基因mRNA 表达的功能.     

富含亮氨酸重复序列的免疫球蛋白样基因-3对GL15细胞增殖和侵袭的影响及分子机制的研究

目的:探讨富含亮氨酸重复序列的免疫球蛋白样基因 -3(LRIG3)对胶质母细胞瘤细胞系GL15细胞增殖和侵袭的影响及其作用机制.方 法:用LRIG3-EGFP质粒转染GL15细胞,激光共聚焦显微镜观察LRIG3在细胞中的定 位,MTT法和Transwell分析检测EGF和AG1478对转染后的细胞增殖和侵袭的影响,逆转录酶聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot分别检测EGF作用于转染后的GL15细胞EGFR和LRIG3 mRNA和蛋白表达的变化.结果:LRIG3主要在胞浆中表达,转染后的细胞增 殖和侵袭性明显下降.EGF可双向调节GL15细胞的增殖.用100 ng/ml的EGF分别作用于各实验组细胞后,不同的时间点细胞EGFR、LRIG3 mRNA和蛋白表达不同,随时间延长,EGFR 的表达下降,LRIG3表达增加.结论:过表达LRIG3可以抑制胶质瘤细胞生长 并使其侵袭性下降,这种抑制作用与EGFR的活性密切相关.LRIG3可能是基因治疗胶质母细胞瘤重要的靶基因.     

非小细胞肺癌患者LRIG1及Fascin-1的表达及其临床意义

目的 探讨多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白1(LRIG1)和成束蛋白1(Fascin-1)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及其临床意义.方法 采用免疫组织化学法检测青海省人民医院2013年2月至2015年12月手术切除的86例癌组织标本和部分配对的42例癌旁正常肺组织中LRIG1及Fascin-1蛋白的表达水平,探讨LRIG1及Fascin-1表达与患者临床病理特征的关系.结果 Fascin-1在癌组织和癌旁组织中阳性表达率分别为73.2%和14.3%,差异有统计学意义(P<0.05);LRIG1在癌组织和癌旁组织中阳性表达率分别为55.8%和86.0%,差异有统计学意义(P<0.05);Fascin-1阳性与阴性患者在肿瘤直径和纵膈淋巴结转移方面比较差异均有统计学意义(P<0.05);LRIG1阳性与阴性患者在病理类型、临床分期和纵膈淋巴结转移方面比较差异也有统计学意义(P<0.05).结论 LRIG1及Fascin-1在肺癌组织和癌旁正常肺组织存在差异表达,并与NSCLC的发生发展及淋巴转移有关.     

LRIG1在卵巢浆液性囊腺癌细胞对依托泊苷敏感性中的作用研究

目的  探讨亮氨酸重复序列免疫球蛋白样结构域基因-1（LRIG1）在卵巢浆液性囊腺癌（SKOV3）细胞株中对依托泊苷敏感性的可能机制。方法  噻唑蓝比色法（MMT）检测不同浓度VP16干预下48 h的SKOV3细胞组、siRNA LRIG1转染SKOV3细胞组、SKOV3/VP16细胞组和siRNA LRIG1转染SKOV3/VP16细胞组的增殖。平板克隆检测细胞增殖,流式检测细胞凋亡情况,实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测LRIG1 mRNA表达。结果  半抑制浓度（IC50）分别为62.90、115.49、156.50和195.42μg/L,siRNA LRIG1转染SKOV3、SKOV3/VP16和siRNA LRIG1转染SKOV3/VP16的耐药指数分别为1.8、2.5和3.1。SKOV3、siRNA LRIG1转染SKOV3、SKOV3/VP16和siRNA LRIG1转染SKOV3/VP16细胞组的克隆率（F =39.338,P =0.000）,细胞的LRIG1 mRNA（F =63.095,P =0.000）和凋亡细胞（F =230.046,P =0.000）明显不同,与SKOV3比较,siRNA LRIG1转染SKOV3、SKOV3/VP16和siRNA LRIG1转染SKOV3/VP16细胞的克隆率增加（t =0.026、0.0710和0.125,P =0.042、0.000和0.000）,细胞的LRIG1 mRNA降低（t =0.130、0.525和0.825,均P =0.000）,凋亡细胞减少（t = 12.350、35.506和44.412,均P =0.000）,与siRNA LRIG1转染SKOV3比较,SKOV3/VP16和siRNA LRIG1转染SKOV3/VP16细胞的克隆率增加（t =0.044和0.099,P =0.001和0.000）,LRIG1 mRNA降低（t =0.395和0.695,均P =0.000）,凋亡细胞减少（t =23.156和32063,均P <0.05）,与SKOV3/VP16比较,siRNA LRIG1转染SKOV3/VP16细胞的克隆率增加（t =0.055,P =0.000）,细胞的LRIG1 mRNA降低（t =0.300,P =0.000）,凋亡细胞减少（t =8.906,P =0.000）。结论  LRIG1 mRNA影响SKOV3细胞对药物的敏感性,沉默LRIG1的耐药细胞可抑制SKOV3细胞凋亡。

     

LRIG1和 EGFR mRNA在非小细胞肺癌患者外周血中的表达及其临床意义

目的：观察非小细胞肺癌（NSCLC）患者外周血中LRIG1和EGFR mRNA表达水平,并分析其与患者临床病理特征的关系,为NSCLC的治疗提供依据。方法：采用实时荧光定量PCR法分析69例NSCLC患者外周血单个核细胞中LRIG1和EGFR mRNA表达水平,并分析其与患者的肿瘤临床分期、性别、年龄及生存期的关系。结果：与正常人比较,NSCLC患者外周血中LRIG1 mRNA的表达水平降低, EGFR mRNA的表达水平增高,差异具有统计学意义（P<0.001）;LRIG1和EGFR mRNA的表达水平与患者性别、年龄及组织来源无关联(P>0.01 ),与患者肿瘤临床分期及生存期有密切关联(P<0.001);Cox回归分析,肿瘤临床分期、LRIG1和EGFR mRNA的表达水平可作为独立的预后因子;肿瘤临床分期越晚,患者预后越差（P=0.028）,相对风险度（RR）= 1.548,95%可信区间(95% CI)为1.074～2.283;LRIG1 mRNA的表达水平越高,患者预后越好（P= 0.026）,RR=0.242,95%可信区间为0.069－0.843;EGFR mRNA表达水平越高,患者预后越差（P=0.027）,RR= 3.732,95%CI为1.165～11.956。高表达LRIG1患者的生存时间长于低表达者（χ2 =56.560,P<0.001）;高表达EGFR mRNA患者生存时间短于低表达者（χ2 =51.962,P<0.001）。同一患者血液标本中LRIG1和EGFR 在mRNA表达水平呈负相关关系( r=－0.307,P=0.016)。结论：LRIG1通过负向调节EGFR的表达影响NSCLC患者的肿瘤临床分期和生存时间。LRIG1可能通过调节EGFR的表达影响NSCLC患者的疗效和预后。     

Netrin-1及其受体在肿瘤发展中的作用研究进展

随着神经系统的深入研究,在胚胎环境中,神经细胞陆续产生大量具有吸引和排斥的协调功能的分子.Netrins是细胞外蛋白家族中的成员,它们与受体家族相互作用,从而具备独特的双信号功能,控制着神经元的迁移和轴突的生长.Netrin-1是家族中倍受关注的分子,它的作用不仅仅是排斥和吸引的生物信号分子.当与特殊受体作用时,即会触发一连串细胞质内的事件.近年来研究发现,这种相互作用能够参与调控肿瘤的发生和发展.本综述就针对近年来对Netrin-1及其受体在肿瘤研究中的作用进行综合概述,进而探讨其影响肿瘤发生发展的机制.     

Survivin启动子驱动的LRIG1基因重组腺病毒载体的构建及鉴定

目的构建含Survivin启动子和LRIG1基因的重组复制缺陷型腺病毒并进行鉴定,为肿瘤基因治疗的研究奠定基础。方法应用分子克隆技术将Survivin启动子连接至pLRIGl-GFP上构建出pEGFP-Surp-LRIGl,将其与含有5型腺病毒右臂的质粒Pbhge3通过Lipofectamine2000共转染至人胚肾293细胞,经同源重组产生重组腺病毒Ad-Surp-LRIGl。Ad-Surp-LRIGl在人胚肾293细胞中大量扩增并通过氯化铯密度梯度离心法纯化,测其滴度。结果 pEGFP-Surp-LRIGl经酶切鉴定正确,扩增得到的Ad-Surp-LRIGl经PCR扩增证实为Survivin启动子驱动的LRIG1重组腺病毒,滴度为2.3×1010pfu/ml。结论成功构建出含有Sur-vivin启动子和LRIG1基因的重组复制缺陷型腺病毒并鉴定正确,可用于下一步膀胱癌基因治疗的研究中。     

Over-expression of LRIG3 suppresses growth and invasion of bladder cancer cells

The purpose of this study was to investigate the impact of leucine-rich repeats and immunoglobulin-like domains 3 (LRIG3) on the biological features of bladder cancer cell lines. The plasmids of over-expressed LRIG3 and the blank plasmid serving as control were transfected into the bladder cancer cell lines, T24, EJ and BIU-87, and the expression levels of LRIG3 mRNA and protein were detected by using real-time PCR and Western blotting. The changes in the cell cycle and apoptosis were examined by using flow cytometry. The invasive ability was measured by Transwell assay, and CCK-8 assays were used to measure the proliferation of cells. As compared with the control group, the LRIG3 mRNA and protein expression levels in LRIG3 cDNA-transfected group were raised significantly (P<0.05). The average number of cells with up-regulated LRIG3 passing through the inserted filter was decreased significantly as compared with the control group (P<0.05). Up-regulation of LRIG3 also could inhibit proliferation and induce apoptosis of T24, EJ and BIU-87 cells. Except BIU-87, the T24 and EJ cells transfected with LIRG3 cDNA were arrested in G 0 /G 1 phase compared to the control group (P<0.05). In conclusion, the over-expression of LRIG3 could influence the cell cycle and invasion, inhibit proliferation and induce apoptosis in the three bladder cancer cell lines.