血管紧张素-(1-7)对血管紧张素Ⅱ诱导的肾小管上皮细胞E-cadherin、α-SMA表达的影响

目的探讨血管紧张素-(1-7)[Ang-(1-7)]对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的大鼠肾小管上皮细胞(NRK52E)E-cadherin,α-SMA表达的影响。方法体外培养NRK52E细胞,经Ang-(1-7)和AngⅡ(终浓度均为10~(-6)mol/L)干预24、48、72、96 h后,应用细胞免疫化学法检测E-cadherin、α-SMA蛋白的表达;采用实时荧光定量PCR(RTPCR)检测细胞中E-cadherin和α-SMA mRNA表达水平的变化。结果 AngⅡ作用96 h后,E-cadherin蛋白及E-cadherinmRNA表达显著减弱(P<0.05),α-SMA蛋白及α-SMA mRNA表达显著增强(P<0.05);同时加入Ang-(1-7)后,与AngⅡ组比较,E-cadherin蛋白及E-cadherin mRNA的表达增强(P<0.05),α-SMA蛋白及α-SMA mRNA表达减弱(P<0.05)。结论 Ang-(1-7)能够抑制AngⅡ诱导的α-SMA的表达,上调E-cadherin的表达。     

抗纤维化短肽Ac-SDKP对Ang Ⅱ诱导肺泡Ⅱ型上皮细胞向肌成纤维细胞分化的调控作用与机制

目的 探讨抗纤维化短肽N-乙酰基-丝氨酰-天门冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸(Ac-SDKP)对血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)诱导肺泡Ⅱ型上皮细胞向肌成纤维细胞分化的调控作用与机制.方法 采用AngⅡ诱导肺泡Ⅱ型上皮细胞向肌成纤维细胞分化,并予以缬沙坦、Ac-SDKP和PD98059预处理.免疫组织化学染色法检测E-钙黏蛋白(E-cad)的表达,激光共聚焦扫描显微镜检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和磷酸化细胞外信号调节激酶(P-ERK)1/2的共定位表达.Western-blot法检测E-cad、α-SMA、Ⅰ型胶原、血管紧张素受体1(AT1)、P-ERK1/2及ERK1/2的定量表达.结果 与对照组比较,Ang Ⅱ刺激组细胞E-cad表达下降,α-SMA、Ⅰ型胶原、AT1和P-ERK1/2的表达增高;而缬沙坦、Ac-SDKP、PD98059预处理后,均降低Ang Ⅱ诱导的A549细胞α-SMA、Ⅰ型胶原、AT1的表达升高及E-cad表达下降(P<0.05).结论 AngⅡ-AT1-ERK1/2通路介导肺泡Ⅱ型上皮细胞向肌成纤维细胞分化,而Ac-SDKP可通过AngⅡ-AT1-ERK1/2通路介导抑制肺泡Ⅱ型上皮细胞向肌成纤维细胞分化.     

血管紧张素Ⅱ参与肾小管上皮细胞转分化的实验研究

目的:本文通过观察血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,Ang Ⅱ)影响肾小管上皮细胞转分化(epithelial-mesenchymaltransition,EMT)的作用,以及和转化生长因子-β1(transforming growth factor,TGF-β1)作用的关系,探讨Ang Ⅱ参与肾小管间质纤维化的作用机制.方法:以人肾小管上皮细胞株(human kidney cell)HKC细胞为研究对象,采用蛋白印迹等方法,观察Ang Ⅱ(10-9、10-8、10-7、10-6 mol/L),及其与TGF-β1共同作用对该细胞表达α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)和纤维连接蛋白(fibronectin,FN)的影响.明胶酶谱法检测细胞培养上清液中基质金属蛋白酶-2和基质金属蛋白酶-9(MMP-2和MMP-9)的变化,Boyden小室检测HKC细胞的迁移能力.结果:①单独应用Ang Ⅱ不能够造成HKC细胞E-cadherin表达的变化,也不能诱导α-SMA表达,但是却能上调FN的表达;②与TGF-β1共同作用时能够加强TGF-β1影响E-cadherin,α-SMA和FN表达的作用;③Ang Ⅱ能够增加HKC生成MMP-2和MMP-9;④Ang Ⅱ能够(10-7和10-6 mol/L)增加HKC细胞迁移至Boyden小室膜下侧面的数目.结论:①Ang Ⅱ可以参与EMT过程,但不是导致EMT的关键因素;②Ang Ⅱ能够以协同的方式参与TGF-β1导致的EMT,可能以此方式加重肾小管间质的纤维化.     

SHP-1在Ang-(1-7)拮抗AngⅡ致心房肌缝隙连接蛋白43重构中的作用

目的 探讨血管紧张素1-7[angiotensin 1-7,Ang-(1-7)]是否通过SHP-1来抑制血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导的c-Src激活,从而改善缝隙连接蛋白43(connexin 43,Cx43)的表达以及功能.方法 以小鼠心房肌细胞系(HL-1细胞系)作为研究对象,分为Control组、AngⅡ组、AngⅡ+SU6656(c-Src抑制剂)组、AngⅡ+Ang-(1-7)组、AngⅡ+Ang-(1-7)+SSG(SHP-1抑制剂)组,Western blot分别检测p-c-Src、Cx43、SHP-1的表达,细胞免疫荧光、划痕标记染料示踪技术观察Cx43空间分布以及缝隙连接功能.结果 与Control组比较,高浓度AngⅡ(10-mol/L)干预后p-c-Src表达增加(P＜0.01),Cx43表达降低(P＜0.05),Cx43传导距离缩短;SU6656和Ang-(1-7)预处理可抑制AngⅡ诱导的c-Src激活,Cx43表达增加(P＜0.05),Cx43传导距离增加;同时Ang-(1-7)预处理明显地促进SHP-1的表达增加(P＜0.05).与AngⅡ+Ang-(1-7)组比较,AngⅡ+Ang-(1-7)+SSG组SHP-1表达降低(P＜0.05),p-c-Src表达增加(P＜0.01),细胞Cx43表达降低(P＜0.05),Cx43传导距离缩短.结论 Ang-(1-7)通过增加SHP-1表达从而抑制c-Src活性,进而发挥对AngⅡ的拮抗作用,使Cx43表达上升并改善缝隙连接功能.     

p-ERK1/2在Ang-(1-7)抑制大鼠肾系膜细胞增殖中的作用

目的探讨p-ERK1/2在血管紧张素-(1-7)(Ang-(1-7))抑制血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的大鼠肾系膜细胞(GMC)增殖中的作用。方法在培养的GMC中,加入不同浓度的Ang-(1-7)与Ang-Ⅱ共同培养,采用结晶紫计数法检测GMC数目变化;western blot检测GMC中p-ERK1/2蛋白表达变化。结果Ang-(1-7)呈剂量依赖性地抑制Ang-II诱导的GMC数目的增加和GMC内p-ERK1/2蛋白的表达。结论ERK通路参与了Ang-(1-7)抑制Ang-II诱导的GMC的增殖。     

血管紧张素转化酶2过表达对大鼠心肌梗死后心室重构的影响

目的 观察血管紧张素转化酶2(ACE2)过表达对大鼠急性心肌梗死(AMI)后心室重构的影响,并探讨其可能的分子机制。方法 75只SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、AMI组、生理盐水组(AMI+NS组)、报告基因组(AMI+AdEGFP组)和重组腺病毒AdACE2组(AMI+AdACE2组),每组15只。结扎大鼠冠状动脉左前降支建立AMI模型,AMI+NS、AMI+AdEGFP、AMI+AdACE2组于心肌梗死周边区各选取5个点分别注射生理盐水、AdEGFP和AdACE2,Sham组与AMI组不予注射。建模4周后测量血流动力学指标和心室质量;用组织学方法评价心肌组织结构变化与胶原沉积;用免疫组化染色检测心肌组织血管紧张素(Ang)Ⅱ(AngⅡ)、Ang-(1-7)及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达,蛋白质印迹法检测心肌组织ACE2、Src同源结构域2蛋白酪氨酸磷酸酶１(SHP-1)、ERK1/2、p-ERK1/2、p38、p-p38、α-SMA及转化生长因子β₁(TGF-β₁)蛋白的表达。 结果 (1)与其他4组相比,AMI+AdACE2组ACE2表达水平升高(P<0.05),同时Ang-(1-7)表达也升高(P<0.05)。(2)与Sham组相比,AMI、AMI+NS及AMI+AdEGFP组左室舒张末压,心室质量/体质量比值,胶原沉积,梗死周边区AngⅡ、Ang-(1-7)、SHP-1、p-ERK1/2/ERK1/2、p-p38/p38、α-SMA、TGF-β₁表达均升高(P<0.05)。(3)与AMI、AMI+NS及AMI+AdEGFP组相比,AMI+AdACE2组Ang-(1-7)、SHP-1表达升高(P0.05),p-ERK1/2/ERK1/2、p-p38/p38、α-SMA及TGF-β₁表达降低(P<0.05)。 结论 过表达ACE2可明显改善大鼠心肌纤维化进程,缓解心室重构,其机制可能与ACE2激活酪氨酸磷酸酶SHP-1,负性调节肾素-血管紧张素系统(RAS)下游丝裂原活化蛋白激酶(MAKPs)活性有关。     

血管紧张素Ⅱ对高糖诱导NRK-52E细胞转分化作用研究

目的探讨血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）对高糖诱导大鼠肾小管导管上皮细胞株NRK-52E转分化的干预作用。方法细胞培养72 h后,Western blot检测对照组（0 mmol/L葡萄糖）、高糖组（25 mmol/L葡萄糖）、血管紧张素Ⅱ干预组（10 nmol/L AngⅡ）、高糖血管紧张素Ⅱ干预组（10 nmol/L AngⅡ＋25 mmol/L葡萄糖）中转化生长因子β1（TGF-β1）、Ⅰ型胶原、金属蛋白酶2（MMP2）、α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）以及甲状旁腺素相关肽（PTHrP）在NRK-52E细胞中的表达。活性氧（ROS）含量应用CM2H2DCFDA试剂盒检测。结果高浓度葡萄糖上调TGF-β1、Ⅰ型胶原、MMP2、α-SMA以及PTHrP表达。AngⅡ明显上调高浓度葡萄糖状态下TGF-β1、Ⅰ型胶原、MMP2、α-SMA和PTHrP的表达,并提高ROS含量。结论AngⅡ可以促进高浓度葡萄糖诱导肾小管导管上皮细胞转分化。     

microRNA-29b在血管紧张素Ⅱ诱导肾小管上皮细胞转分化中的作用

目的:研究microRNA-29b(miR-29b)在血管紧张素Ⅱ诱导肾小管上皮细胞间充质转分化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)中的角色。方法:实时定量PCR检测自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rats,SHR)和Wistar-Kyoto(WKY)大鼠肾脏皮质组织miR-29b表达的差异。体外培养NRK-52E大鼠肾小管上皮细胞,给予血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)10-7mol/L(为Ang Ⅱ组),以正常培养的细胞作空白对照,实时定量PCR检测Ang Ⅱ组和正常对照组细胞miR-29b表达差异,运用WesternBolt技术和实时定量PCR技术分别检测Ang Ⅱ组和空白对照组TGF-β、α肌动蛋白(α-SMA)和I型胶原蛋白(Col Ⅰ)的表达量。进一步分别再转染miR-29b inhibitor和miR-29b mimics,建立miR-29b低表达和高表达细胞模型。低表达模型实验分三组:①空白对照组:正常培养的肾小管上皮细胞未经任何处理;②低表达组:转染miR-29b inhibitor;③阴性对照组:转染随机合成NC microRNA片段。高表达模型实验分三组:①空白对照组:肾小管上皮细胞给予Ang Ⅱ(10-7mol/L)诱导;②高表达组:肾小管上皮细胞给予Ang Ⅱ(10-7mol/L)诱导,同时转染miR-29b mimcs;③阴性对照组:肾小管上皮细胞给予Ang Ⅱ(10-7mol/L)诱导,同时转染随机合成NC microRNA片段。用流式细胞仪技术检测转染率,用实时定量PCR检测转染效果,运用Western Bolt技术和实时定量PCR技术分别检测各组中TGF-β、α-SMA和Col Ⅰ的表达量。结果:实时定量PCR检测SHR大鼠肾脏皮质组织miR-29b的表达(0.76±0.01)相比WKY大鼠(1.00±0.00)下降(P<0.05),相比空白对照组(1.00±0.00),Ang Ⅱ组miR-29b的表达(0.56±0.06)明显下降(P<0.05),TGF-β、α-SMA、Col Ⅰ的mRNA表达和蛋白表达明显升高(P<0.05)。流式细胞仪技术检测NRK-52E细胞转染率为95.14%,相比空白对照组(1.00±0.00),低表达组miR-29b表达(0.07±0.02)明显下降,高表达组miR-29b表达(38.3±8.1)明显升高(P<0.05)。在低表达模型实验中,低表达组α-SMA、TGF-β、Col Ⅰ mRNA表达和蛋白表达比空白对照组和阴性对照组均上调(P<0.05),而空白对照组和阴性对照组间差异无统计学意义(P>0.05)。在高表达模型实验中,高表达组的NRK-52E细胞α-SMA、TGF-β、Col Ⅰ的mRNA表达和蛋白表达比空白对照组和阴性对照组均下调(P<0.05),而空白对照组和阴性对照组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论:SHR大鼠肾脏皮质组织miR-29b的表达水平比WKY大鼠下降,这可能和SHR大鼠体内的高Ang Ⅱ水平有关,miR-29b表达降低能促进肾小管上皮细胞发生EMT,Ang Ⅱ调节肾小管上皮细胞发生EMT的一个潜在的机制可能是通过miR-29b来实现的。     

血管紧张素-(1-7)对血管紧张素Ⅱ致内皮损伤的保护作用

目的 探讨血管紧张素-(1-7)[Ang-(1-7)]对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)致内皮细胞损伤的保护作用.方法 体外培养的ECV-304内皮细胞株,随机分为4组:(1)对照组:单纯DMEM培养基培养;(2)AngⅡ组:单纯DMEM培养基, 加入AngⅡ,终浓度为10-7mol/L;(3)Ang-(1-7)组:单纯DMEM培养基, 加入Ang-(1-7),终浓度为10-7mol/L;(4)混合组:单纯DMEM培养基, 加入Ang-(1-7)预处理30 min, 再加入AngⅡ, 两者终浓度均为10-7mol/L.各组作用6,12,24 h,倒置相差显微镜下观察各时间点细胞的形态变化,收集细胞,流式细胞仪测定细胞内的活性氧,硝酸还原酶法测定上清液中的一氧化氮.结果 AngⅡ组内皮细胞发生损伤性的形态学变化,活性氧生成增加,NO生成下降,与其他3组比较差异有显著性;Ang-(1-7)组与对照组比较, 细胞形态没有变化, 活性氧和NO含量差异无显著性;混合组与AngⅡ组相比, 细胞损伤明显减弱, 活性氧和NO含量与AngⅡ组比较差异有显著性,与对照组比较差异无显著性.结论 Ang-(1-7)对AngⅡ导致的内皮损伤有保护性作用.     

血管紧张素-(1-7)对血管紧张素Ⅱ诱导培养乳鼠非心肌细胞增殖的影响

[目的]探讨血管紧张素-(1-7)[Ang-(1-7)]对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导培养乳鼠非心肌细胞增殖的影响.[方法]在AngⅡ诱导培养的SD乳鼠非心肌细胞中,应用Ang-(1-7),通过测定非心肌细胞DNA、蛋白质合成、细胞数目等指标,观察非心肌细胞增殖情况.[结果]Ang-(1-7)呈剂量依赖性抑制AngⅡ诱导培养的乳鼠非心肌细胞的DNA及蛋白质合成,与单纯AngⅡ组相比,Ang-(1-7)10、10-8、10-7、10-6mol/L分别减少[3H]thymidine掺入21%、31%、35%、36%,减少[3H]Leucine掺入15%、25%、31%、32%.Ang-(1-7)还能减少AngⅡ诱导培养的乳鼠非心肌细胞数目(AngⅡ组吸光度0.86±0.10;AngⅡ+Ang-(1-7)组0.78±0.09,P＜0.05),其作用能被非选择性血管紧张素Ⅱ拮抗剂[Sar1Thr8]AngⅡ抑制.[结论]Ang-(1-7)能抑制AngⅡ诱导的乳鼠非心肌细胞增殖.     

CTGF反义寡核苷酸对AngⅡ诱导的人近曲肾小管上皮细胞转分化的影响

目的：探讨结缔组织生长因子（CTGF）反义寡核苷酸对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的肾小管细胞转分化的可能影响.方法：采用体外培养的人近曲肾小管上皮细胞株（HK2）,分别观察CTGF反义寡核苷酸和AngⅡ干预细胞对细胞CTGF mRNA和蛋白质的表达、细胞内超微结构及细胞α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达的影响.结果：AngⅡ干预HK2细胞48 h后,细胞CTGF mRNA和蛋白的表达显著增高（P＜0.01）;AngⅡ干预96 h后,细胞超微结构显示出间质细胞样结构;这些作用都可被CTGF反义寡核苷酸显著抑制.AngⅡ可以呈时间依赖性地刺激HK2细胞表达α-SMA,这些作用可以被CTGF反义寡核苷酸显著抑制（P＜0.01）.对照组错义寡核苷酸无上述作用.结论：CTGF反义寡核苷酸对AngⅡ诱导HK2细胞转分化具有显著的抑制作用,提示CTGF可能介导了AngⅡ诱导的肾小管上皮细胞转分化.     

血管紧张素1-7对大鼠肝星状细胞α-平滑肌肌动蛋白表达的影响

目的 探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和血管紧张素1-7(Ang1-7)对大鼠肝星状细胞α-平滑肌肌动蛋白表达的影响.方法 采用HSC-T6细胞株,分别给予Angα,Ang1-7,Angα+Ang1-7,Ang1-7+A779 10μmol/L处理,逆转录聚合酶链反应检测Rock通路中Rock2(Rhokinase 2)mRNA的表达.免疫印迹法检测α-平滑肌肌动蛋白的表达水平.结果 AngⅡ处理组Rock2 mRNA的表达显著增强,Ang1-7可抑制AngⅡ诱导的Rock2 mRNA的表达.AngⅡ可诱导α-平滑肌肌动蛋白水平的变化,Ang1-7可抑制AngⅡ诱导的α-平滑肌肌动蛋白表达量.结论 Ang1-7可抑制AngⅡ诱导的α-平滑肌肌动蛋白表达.     

大黄素对IL-1β诱导大鼠肾小管上皮细胞转分化的影响

目的 探讨大黄素对白细胞介素-1β(IL-1β)诱导大鼠肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化(TEMT)的影响.方法 以IL-1β诱导体外培养的正常大鼠肾小管上皮细胞株(NRK52E),同对以大黄素(12.5、25、50、100mg/L)进行干预,在12、24、48及72h观察细胞形态,细胞免疫化学染色法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及角蛋白(CK)的表达.结果 不同浓度大黄素对正常细胞形态学及其α-SMA及CK的表达无明显影响.大黄素作用48h后可减轻IL-1β诱导的细胞梭形改变,并呈时间依赖性地下调IL-1β诱导的α-SMA表达,上调CK的表达(P<0.05).结论 大黄素对IL-1β诱导的NRK52E细胞转分化有明显抑制作用.     

血管紧张素-(1-7)对自发性高血压大鼠去外膜颈动脉血管功能的影响

目的研究血管紧张素-(1-7)[Ang-(1-7)]对自发性高血压大鼠(SHR)一侧颈动脉外膜去除后血管功能的影响。方法13周龄雄性SHR24只用机械和化学方法去除右侧颈动脉外膜,左侧作假手术对照后,随机分为3组(每组8只),即SHR对照组、Ang-(1-7)组(25μg·kg-1·h-1)和Ang-(1-7)拮抗剂Ang779组(25μg·kg-1·h-1);8只同周龄雄性WKY大鼠作为正常血压对照组(WKY组)。采用微渗泵植入技术经颈静脉给药2周,鼠尾袖法测量给药前后鼠尾动脉收缩压(SBP)。电磁流量计测量双侧颈动脉血流量。放免法测定血浆及双侧颈动脉血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)浓度。免疫组织化学方法测定双侧颈动脉血管紧张素II1型受体(AT1R)蛋白表达。TUNEL法检测大鼠血管组织细胞凋亡情况。结果Ang-(1-7)组SBP较SHR对照组和Ang779组显著下降(P<0.01)。Ang-(1-7)组去外膜侧颈动脉血流量显著高于SHR对照组和Ang779组(P<0.01)。去外膜侧颈动脉AngⅡ浓度显著高于未去外膜侧(P<0.01)。去外膜侧颈动脉AT1R蛋白表达较未去外膜侧明显增多(P<0.01),而Ang-(1-7)组双侧颈动脉AT1R蛋白表达明显低于SHR对照组和Ang779组(P<0.01)。Ang-(1-7)组去外膜侧和未去外膜侧凋亡指数较SHR对照组和Ang779组显著升高(P<0.01)。结论去除血管外膜后,血管内皮细胞和平滑肌细胞增生,凋亡减少,管腔狭窄,血流量降低,血管功能出现障碍。Ang-(1-7)能通过下调颈动脉AT1R蛋白表达,促进血管组织细胞凋亡,改善血管功能。     

姜黄素和氯沙坦对血管紧张素Ⅱ诱导的内皮间质细胞转化的作用及机制研究

目的 研究姜黄素和氯沙坦对血管紧张素(Ang)Ⅱ诱导的内皮间质细胞转化(EndMT)的作用及机制.方法 培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs)然后分为4组:对照组(不加刺激药物的正常培养组);AngⅡ组(加入刺激浓度为0.1 μmol/L或1μmol/L的AngⅡ);姜黄素+AngⅡ组(先加入12.5 μmol/L的姜黄素预孵1h,再加入1 μmol/L的AngⅡ);氯沙坦+AngⅡ组(先加入10 μmol/L的氯沙坦孵育2h,再加入1μmol/L的AngⅡ);刺激24 h后行划痕试验检测各组细胞迁移能力改变和CCK-8检测细胞活力;刺激5d后,显微镜观察各组细胞形态变化和Western blot检测各组血管内皮钙黏蛋白(VE-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子β1(TGF-β1)蛋白表达量.结果 HUVECs经AngⅡ刺激后形态改变,长梭形样细胞明显增多;姜黄素和氯沙坦可维持内皮细胞铺路石样形态.AngⅡ呈浓度依赖性地降低HUVECs存活率(P＜0.01);各组存活率均＞50％(均P＜0.05).相比对照组,AngⅡ促进HUVECs的迁移(P＜0.05);相比AngⅡ组,加入姜黄素和氯沙坦可抑制HUVECs的迁移(均P＜0.05).AngⅡ可诱导EndMT,AngⅡ刺激5d后VE-cadherin表达减弱(P=0.003),而α-SMA和TGF-B1的表达都明显增强(均P＜0.01),姜黄素和氯沙坦使VE-cadherin表达明显增加,而α-SMA和TGF-β1的表达均明显下调.结论 姜黄素和氯沙坦通过下调TGF-β1表达抑制AngⅡ诱导的EndMT.     

Ang-(1-7)对HUVECs p38MAPK磷酸化表达的影响

目的 探讨血管紧张素-(1-7)[Ang-(1-7)]阻断血管紧张素-Ⅱ(AngⅡ)致炎作用的可能机制. 方法 用含20%胎牛血清的DMEM培养基在CO2培养箱中培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),待细胞生长至80％融合时无血清培养16 h后分组:对照组,AngⅡ组,Ang-(1-7)组,Ang-(1-7) AngⅡ组,A-779 Ang-(1-7) AngⅡ组,Ang-(1-7)拮抗剂(A-779)组.上述各组作用一定时间后收集细胞,用Western blot方法测定细胞p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)磷酸化表达. 结果 与对照组比较,100 nmol/LAngⅡ作用于培养的内皮细胞,HUVECs p38MAPK磷酸化表达显著增加(2.17±0.18,P<0.005);ang-(1-7)组、A-779组可以检测到少量的磷酸化p38MAPK表达(分别为1.22±0.12和1.05±0.11),但与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05).与AngⅡ组比较,Ang-(1-7) AngⅡ组p38MAPK磷酸化表达显著减少(0.67±0.09,P<0.001);A-779 Ang-(1-7) AngⅡ组HUVECs p38MAPK磷酸化表达则无明显变化(2.21±0.27,P>0.05). 结论 Ang-(1-7)可拮抗AngⅡ激活HUVECs p38MAPK通路的作用,从而可能阻断AngⅡ的致炎作用.     

肝细胞生长因子和血管紧张素Ⅱ对肾小管上皮细胞转分化的影响及其作用机制

目的: 探讨肝细胞生长因子(HGF)和血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对肾小管上皮-肌成纤维细胞转分化(TEMT)的影响,并阐明其作用机制。方法: 体外培养人近曲小管上皮HK-2细胞,取Ⅳ期细胞分为对照组、AngⅡ(1×10^-6mol·L^-1)组、HGF(8 μg·L^-1)组和AngⅡ(1×10^-6mol·L^-1)+HGF(8 μg·L^-1)组。采用CCK8法检测HK-2细胞增殖情况,RT-PCR法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA表达水平,Western blotting法检测α-SMA的蛋白表达水平。结果: 与对照组比较,AngⅡ组HK-2细胞增殖活性降低(P<0.01),HGF组HK-2细胞增殖活性升高(P<0.05),AngⅡ+HGF组HK-2细胞增殖活性降低(P<0.05)。与对照组比较,AngⅡ组 HK-2细胞中α-SMA mRNA及蛋白表达水平升高(P<0.05或P<0.01),HGF组HK-2细胞中α-SMA mRNA及蛋白表达水平降低(P<0.05或P<0.01), AngⅡ+HGF组HK-2细胞α-SMA mRNA及蛋白表达水平降低(P<0.05); 与AngⅡ 组比较,AngⅡ+HGF组细胞增殖活性升高(P<0.05),α-SMA mRNA及蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论: AngⅡ抑制肾小管上皮细胞增生而促进TEMT, HGF促进肾小管上皮细胞增生而抑制TEMT,HGF可能介导AngⅡ抑制HK-2细胞增生及促进TEMT的作用。     

血管紧张素(1-7)对压力负荷引起高血压大鼠心肌重构的影响

目的观察血管紧张素(1-7)[Ang-(1-7)]对压力负荷增高所致大鼠心肌重构的影响。方法 30只雄性SD大鼠随机分为3组:假手术组、腹主动脉缩窄(AAC)组和Ang-(1-7)组。后2组采用腹主动脉缩窄术建立心脏压力负荷增高动物模型。术后1 d开始,Ang-(1-7)组大鼠经渗透性微量泵持续颈静脉输注Ang(1-7)25μg·kg~(-1)·h~(-1),假手术组及AAC组经渗透性微量泵给予等量生理盐水。4周后鼠尾容积法测量收缩压;称取左心室质量(LVM),计算左心室质量指数(LVMI);HE染色检测心肌细胞平均直径;放免法测定血浆和心肌血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)浓度。结果与假手术组相比,AAC组、Ang-(1-7)组收缩压、LVM、LVMI、心肌AngⅡ浓度、心肌细胞平均直径均显著升高(P<0.05,P<0.01)。与AAC组相比,Ang-(1-7)组血压和心肌AngⅡ浓度差异无统计学意义(P>0.05),但LVM、LVMI、心肌细胞平均直径明显降低(均P<0.05)。结论 Ang-(1-7)可改善腹主动脉缩窄高血压大鼠左室肥厚,逆转心肌重构。     

血管紧张素-(1-7)对野百合碱所致肺动脉高压的影响

【目的】 探讨血管紧张素-(1-7)[Ang-(1-7)]对野百合碱 (MCT)诱导的肺动脉高压的作用及相关机制&#65377;【方法】 雄性Sprague-Dawley大鼠80只随机分为: 正常对照组(control)&#65380;MCT组&#65380;MCT + Ang-(1-7)组&#65380;control + Ang-(1-7)组&#65377;MCT组和MCT + Ang-(1-7)组颈静脉注射MCT 60 mg/kg,24 h后经微泵持续泵入生理盐水或Ang-(1-7) (24 μg&#8226;kg-1&#8226;h-1)&#65377;control和control + Ang-(1-7)组颈部注射生理盐水,24 h后经微泵泵入生理盐水或Ang-(1-7) (24 μg&#8226;kg-1&#8226;h-1)&#65377;治疗4周后测定大鼠的右室收缩压(RVSP)和右心室肥厚指数(RVHI),测定肺小动脉管壁厚度(WT)占动脉外径(ED)的百分比(WT%)及管壁面积(WA)占血管总面积的百分比(WA%)&#65377;通过放射免疫方法检测血浆及肺组织中血管紧张素Ⅱ (AngⅡ)浓度&#65377;Western blot分析肺组织中细胞外调节蛋白激酶1/2 ( ERK1/2)磷酸化水平&#65377; 【结果】 与control组相比,MCT组RVSP&#65380;RVHI&#65380;WT%&#65380;WA%&#65380;肺组织AngⅡ浓度&#65380;ERK1/2磷酸化水平显著升高(P < 0.01); MCT + Ang-(1-7)组与MCT组相比, RVSP&#65380;RVHI&#65380;WT%&#65380;WA%&#65380;ERK1/2磷酸化水平均明显降低(P < 0.01);control组&#65380;control + Ang-(1-7)组&#65380;MCT + Ang-(1-7)组三组间RVSP&#65380;RVHI&#65380;WT%&#65380;WA%&#65380;ERK1/2磷酸化水平差异无显著性意义(P > 0.05)&#65377; 【结论】 在MCT诱导的肺动脉高压模型中,Ang-(1-7)可能通过降低 ERK1/2磷酸化水平,抑制肺血管的重构,预防肺动脉高压的发生&#65377;     

曲尼司特对转化生长因子-β1诱导大鼠肾小管上皮细胞转分化作用的影响及机制

目的:探讨曲尼司特对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)转分化作用的影响及机制。方法:应用TGF-β1刺激NRK-52E,分为阴性对照组,TGF-β1诱导组和不同剂量曲尼司特干预组,用流式细胞仪观察曲尼司特干预后NRK-52E的转分化标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和E-钙粘蛋白(E-cadherin)的表达情况。结果:在TGF-β1诱导NRK-52E细胞转分化过程中,曲尼司特能剂量依赖性下调α-SMA表达,上调E-cadherin表达,两者表达呈负相关(r=-0.653)。结论:提示曲尼司特在TGF-β1诱导肾小管上皮细胞转分化中发挥保护作用。