胃癌组织和细胞中P115 、MIF的表达及意义

目的 观察胃癌组织和细胞中高尔基体转运蛋白P115和MIF的表达情况,探讨其在胃癌发生、发展中的意义.方法 用S-P、Western blot和RT-PCR法检测P115及MIF在正常胃黏膜和胃癌组织,3种细胞株(正常胃黏膜上皮GES-1,不同分化程度的胃癌细胞株MKN-28,BGC-823)中的蛋白和mRNA表达情况.结果 P115和MIF在胃癌组织中的阳性表达率分别为73.3%、80%,在正常胃黏膜中的阳性表达率分别为40%、46.7%,胃癌组织中P115和MIF的表达明显高于正常胃黏膜(P＜0.01) ,且P115的表达和MIF的表达呈正相关(r=0.433,P=0.017);胃癌组织中P115、MIF的蛋白和mRNA表达水平明显高于正常胃黏膜组织(P＜0.01).免疫细胞化学,Western blot和RT-PCR结果显示: P115、MIF在胃癌细胞株MKN-28、BGC-823中的蛋白及mRNA表达水平明显高于正常胃黏膜上皮GES-1(P＜0.01);且低分化胃癌细胞株BGC-823中P115和MIF 的表达水平明显高于高分化胃癌细胞株MKN-28(P＜0.05).结论 P115和MIF的过表达,可能在胃癌的发生过程中起协同作用;对P115和MIF相互作用机制的深入探讨有可能使其成为研究胃癌发生、发展的分子机制的新靶点.     

shRNA抑制p115表达对胃癌体外血管形成的影响

目的初步探讨胃癌BGC-823细胞高尔基体囊泡转运蛋白(golgi-vesicular transport protein,p115)对胃癌血管形成的影响及其可能机制。方法采用脂质体介导法将p115 shRNA-1318转染入胃癌BGC-823细胞株,经G418筛选出稳定转染的细胞株。利用Western blot、RT-PCR和细胞免疫荧光方法检测转染后的p115抑制效应及其对MIF、p-Akt、VEGF-A的调控情况;采用细胞活性检测实验、Transwell体外侵袭实验和血管形成实验方法分别检测转染p115 shRNA的胃癌BGC-823细胞对人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)增殖,迁移和血管形成的影响。结果 p115 shRNA-1318转染后胃癌BGC-823细胞p115、MIF、p-Akt和VEGF-A的蛋白及mRNA表达明显抑制(P<0.01);细胞免疫荧光:与对照组相比,p115 shRNA组p115、MIF及VEGF-A的色泽暗红且抑制率分别为63%、65%、68%;细胞活性检测:与对照组相比,p115 shRNA组...     

MIF抑制剂HA对胃癌BGC-823细胞Bcl-2与p53蛋白表达的影响

目的 体外观察透明质酸(HA)抑制巨噬细胞移动抑制因子(MIF)后对人胃癌细胞株BGC-823表达Bcl-2、p53蛋白的影响.方法 采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测HA对BGC-823细胞MIF mRNA表达的影响;Western blot法检测HA对BGC-823细胞MIF、Bcl-2及p53蛋白表达的影响.结果 RT-PCR法显示细胞内MIF mRNA表达水平随HA浓度的增高和时间的延长而降低,具有浓度-时间效应性.Western blot法显示细胞内MIF、Bcl-2蛋白表达水平随HA浓度的增高和时间的延长而降低,细胞内p53蛋白表达水平随HA浓度的增高和时间的延长而增高,具有浓度-时间效应性.结论 MIF抑制剂HA可以调节胃癌细胞凋亡相关基因p53、Bcl-2蛋白的表达.     

乳腺癌巨噬细胞移动抑制因子、人表皮生长因子受体-2和p53的表达与临床意义

目的研究巨噬细胞移动抑制因子（MIF）、人表皮生长因子受体-2（CerBb-2）和p53在乳腺浸润性导管癌中的表达,以及与临床病理特征的关系。方法对37例乳腺浸润性导管癌手术标本和20例癌旁组织标本进行MIF、CerBb-2和p53免疫组化检测,观察MIF、CerBb-2和p53在乳腺浸润性导管癌组织和癌旁组织中表达的差异,分析其与乳腺浸润性导管癌临床病理特征之间的关系。结果MIF、CerBb-2和p53在乳腺浸润性导管癌组织和癌旁组织中的表达阳性率分别为70．3％和25．0％、393％和100％、43.2％和150％,3项指标在癌组织和癌旁组织中表达的差异均有统计学意义（均P〈0．05）。MIF、p53均与组织学分级、淋巴结转移有密切关系（均P〈0.05）,与其它病理特征无关（P〉0.05）;CerBb-2与组织学分级、淋巴结转移及TNM分期有密切关系（均P〈0.05）,其低表达与ER、PR高表达有密切关系（P〈0.05）,与其它病理特征无关（P〉0.05）;MIF、CerBb-2与p53共同表达与组织学分级、淋巴结转移及TNM分期密切相关（P〈0.05）;CerBb-2与p53呈正相关（P〈0.05）。结论MIF、CerBb-2和p53的表达与乳腺癌发生、发展及侵袭转移有关,三者同时高表达提示肿瘤具有更高的侵袭转移能力。     

巨噬细胞移动抑制因子和p~(53)及MVD在食道鳞癌组织中的表达与意义

目的:探讨巨噬细胞移动抑制因子(MIF)、p53和CD34在食管鳞癌组织表达的相关性。方法:应用免疫组织化学技术对63例食管鳞癌(ESCC)组织中的MIF、p53的表达,新生血管热区的CD34阳性微血管密度(MVD)进行研究。结果:食道鳞癌MIF、p53总体阳性表达率及MVD分别为93.8%(60/64)、84.3%(54/64)及(31.12+12.20)/高倍视野,明显高于正常胃黏膜组(P<0.05),伴有淋巴结转移的癌组织中p53及MVD水平均高于无淋巴结转移的癌组织(P<0.05),MIF、p53和MVD在低分化食管鳞癌的表达率分别为:100%、95.2%和(40.13±20.04)/高倍视野,与高分化食管鳞癌组织差别具有显著性(P<0.05);MIF和p53及MVD表达呈正相关(P<0.05)。结论:MIF、p53和MVD在低分化胃癌、淋巴结转移组织中表达明显增高,且两者的表达有呈明显的正相关。提示MIF是与食道癌密切相关的因子之一。     

SKP2和p27kip1在放疗后鼻咽癌CNE2细胞应答中的作用

目的探讨SKP2、p27kip1及细胞周期阻滞在放疗后鼻咽癌细胞应答中的作用.方法以人鼻咽低分化鳞癌CNE2细胞株作为研究对象,流式细胞仪检测放疗前后细胞周期变化,West blot检测放疗前后不同时间点SKP2及p27kip1表达的变化.结果放疗后鼻咽癌CNE2细胞株出现G2/M期细胞周期阻滞,低剂量(2Gy)放疗后0.5~1.5h出现SKP2表达短暂下降,同时伴p27kip1表达相应增高;放疗后4h出现SKP2表达升高而p27kip1表达下调.高剂量(6Gy)放疗后1.5h内出现SKP2表达升高,而放疗后2~4h表达下降;而p27kip1表达在放疗后0.5h出现短暂下降,1.5~4h表达上调,两者之间关联性不确定.结论 SKP2、p27kip1和细胞周期阻滞参与放疗后鼻咽癌CNE2细胞的应答反应,且低剂量放疗时,p27kip1表达可能受SKP2调控.     

巨噬细胞移动抑制因子和p~(53)及MVD在食道鳞癌组织中的表达与意义

目的:探讨巨噬细胞移动抑制因子(MIF)、p53和CD34在食管鳞癌组织表达的相关性。方法:应用免疫组织化学技术对63例食管鳞癌(ESCC)组织中的MIF、p53的表达,新生血管热区的CD34阳性微血管密度(MVD)进行研究。结果:食道鳞癌MIF、p53总体阳性表达率及MVD分别为93.8%(60/64)、84.3%(54/64)及(31.12+12.20)/高倍视野,明显高于正常胃黏膜组(P&lt;0.05),伴有淋巴结转移的癌组织中p53及MVD水平均高于无淋巴结转移的癌组织(P&lt;0.05),MIF、p53和MVD在低分化食管鳞癌的表达率分别为:100%、95.2%和(40.13&#177;20.04)/高倍视野,与高分化食管鳞癌组织差别具有显著性(P&lt;0.05);MIF和p53及MVD表达呈正相关(P&lt;0.05)。结论:MIF、p53和MVD在低分化胃癌、淋巴结转移组织中表达明显增高,且两者的表达有呈明显的正相关。提示MIF是与食道癌密切相关的因子之一。     

宫颈永生化细胞和癌细胞的胞质蛋白双向电泳图谱的建立及初步分析

目的:建立HPV-16阳性的宫颈上皮永生化细胞(H8细胞株)和宫颈癌细胞(CaSKi细胞株)胞质蛋白双向电泳图谱,并初步分析找出特征性的差异蛋白点.方法:分别培养H8和CaSki细胞,用亚细胞结构蛋白质提取试剂盒提取胞质蛋白进行双向电泳,用ImageMaster 2D V2002.1图像分析软件分析电泳图谱,筛选差异蛋白点.结果:获得了分辨率和重复性均较好的宫颈永生化细胞和癌细胞胞质蛋白2-DE图谱,并分析找出了显著的差异蛋白点8个,其中3种蛋白质在宫颈癌细胞株表达上调,1种蛋白质表达明显下调,2种蛋白质在宫颈癌细胞株表达缺失,2种蛋白质在永生化细胞株表达缺失.结论:应用亚细胞蛋白双向凝胶电泳技术对HPV-16阳性的宫颈癌前和癌变的胞质蛋白分析,能有效找出蛋白质表达差异点,为进一步确定宫颈癌前病变和癌细胞的关键性差异蛋白质的结构和功能奠定了基础.     

p53和MIF在前列腺癌组织中的表达及临床意义

目的探讨p53、MIF（macrophagemigrafion inhibitory factor）在前列腺癌（prostate cancer，Pea）中的发生、发展的作用，为前列腺癌的诊断及治疗提供新途径。方法采用免疫组化方法检测60例良性前列腺增生症（BPH）和58例前列腺癌（Pca）组织中MIF、p53蛋白的表达。结果Pca组织p53与MIF阳性表达率分别为48．28％（28/58）和79．31％（46/58），均明显高于BPH组（P〈0．05）；p53与MIF表达呈明显正相关（P〈0．05）；两者在Pca组织中的表达水平与其病理分级和临床分期均呈正相关（P〈0．05）；p53和MIF阳性表达的肿瘤复发快、易转移、预后差。结论p53和MIF与Pca组织学分级、恶性程度和预后密切相关，是检测Pca的较好分子标志物；联合检测p53和MIF的表达可作为判断Pca生物学行为及预后的重要参考价值。     

小剂量胰岛素对脓毒症大鼠急性肺损伤巨噬细胞移动抑制因子和氧化应激的影响

目的 观察小剂量胰岛素对脓毒症大鼠急性肺损伤巨噬细胞移动抑制因子(MIF)和氧化应激的影响,探讨胰岛素的肺保护作用及其机制.方法 30只雄性SD大鼠随机分为假手术组、脓毒症组、胰岛素治疗组,以盲肠结扎穿孔法建立脓毒症大鼠模型.各组于建模后12 h处死,分别测定动脉血氧分压(PaO2)、肺湿干质量比(W/D)、肺组织匀浆丙二醛(MDA)、总抗氧化能力(T-AOC)测定、肺组织NF-K B/p65及MIF表达水平及肺损伤病理程度等.结果 脓毒症组肺W/D、MDA、NF-K B/p65、MIF、MIF mRNA及病理损伤程度较假手术组显著上升(P＜0.05),T-AOC和PaO2显著下降(P＜0.05);而胰岛素治疗组与脓毒症组比较肺W/D、MDA、NF-K B/p65、MIF、MIF mRNA及病理损伤程度显著下降(P＜0.05),T-AOC和PaO2显著上升(P＜0.05).结论 小剂量胰岛素能够下调MIF的表达和抑制氧化应激,对脓毒症大鼠急性肺损伤有保护作用,其机制可能与抑制NF-KB活化有关.     

食管鳞癌组织中MIFmRNA的表达及其意义

目的:探讨巨噬细胞移动抑制因子(MIF)Mrna在食管鳞癌及正常食管组织中的表达及其与临床病理特征的关系.方法:采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测MIFmRNA在80例手术切除的食管鳞癌组织及正常食管组织中的表达.结果:MIFmRNA表达率在食管鳞癌中为85%(68/80),而在正常食管组织15%(15/80),有显著性差异(P＜0.01).MIFmRNA的阳性表达率与肿瘤细胞分化程度及TNM分期有关(P＜0.05),而与患者年龄、性别、肿瘤大小以及有无淋巴结转移无关(P＞0.05).结论:MIFmRNA的高水平表达说明其参与了食管鳞癌的发病机制.并将可能为食管鳞癌的早期诊断和治疗提供一种新的手段.     

Skp2和p27蛋白的表达与非小细胞肺癌的关系

目的：探讨Skp2和p27蛋白在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达及临床意义。方法：应用免疫组织化学S-P法检测Skp2和p27在115例NSCLC组织和正常支气管上皮细胞中的表达。结果：Skp2仅在肺癌组织中表达，且在吸烟者（P〈0．01）、鳞癌患者（P=0．03）和低分化患者（P=0．01）中过表达，而与患者的年龄、性别和病理分期无关。p27在正常支气管上皮细胞中均有表达，在肺癌组织中表达降低，但其表达仅与病理分期（P=0．02）有关；Skp2阳性表达的患者中p27表达明显降低（P=0．02）。结论：Skp2和p27的表达与NSCLC的发生和发展有一定的关系，在肺癌中二者之间可能存在某种相互作用机制。     

巨噬细胞移动抑制因子在肾癌中的表达及对肾癌细胞侵袭能力的影响

目的 探讨巨噬细胞移动抑制因子(MIF)在肾癌组织中的表达及对肾癌细胞侵袭能力的影响.方法 以内蒙古自治区人民医院和包头市肿瘤医院2013年3月至2015年3月病理室确诊的49例肾癌患者为研究对象,采用蛋白质印迹法(West-ern blot)及反转录(RT)-PCR法检测肾癌组织及癌旁正常组织、肾癌细胞株及正常肾小管上皮细胞HK 2中MIF蛋白及mRNA表达;利用脂质体将siRNA MIF及siRNA NC转染到肾癌细胞中,Western blot及RT-PCR检测转染效果,噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力,Transwell法检测细胞侵袭能力,Western blot检测细胞中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)及基质金属蛋白酶9(MMP9)的表达.结果 肾癌组织中MIF蛋白及mRNA表达水平明显高于癌旁正常组织(0.89±0.09 vs.0.18±0.02,1.19±0.04 vs.0.19±0.01,P＜0.05),肾癌细胞株ACHN、769-p、786-O、Caki-1中MIF蛋白及mRNA表达水平明显高于肾小管上皮细胞HK-2(P＜0.05).与siRNA NC组比较,siRNA MIF组中MIF蛋白及mRNA表达水平明显下调(P＜0.05),细胞活力及侵袭能力降低(P＜0.05),HIF-1α及MMP9表达水平下调(P＜0.05).结论 MIF在肾癌中高表达,下调MIF表达能明显抑制肾癌细胞的侵袭能力,可能与抑制HIF-1α/MMP9信号通路有关.     

Macrophage migration inhibitory factor enhances neoplastic cell invasion by inducing the expression of matrix metalloproteinase 9 and interleukin-8 in nasopharyngeal carcinoma cell lines

Background Nasopharyngeal carcinoma (NPC) shows highly invasive and metastatic features. This study aims to investigate macrophage migration inhibitory factor (MIF)-induced invasion of NPC cells in vitro and the effects on matrix metalloproteinases (MMPs) and interleukin-8 (IL-8), and to study the mechanism of tumor cell invasion and metastasis in the early stage of NPC. Methods Two nasopharyngeal carcinoma cell lines, CNE-1 and CNE-2, were adopted in this study. The NPC cell invasion and migration were evaluated by microinvasion assay. The variation of expression percentages of MMP2- or MMP9-positive cells was detected by flow cytometry in two cell lines with or without MIF treatment. Western blotting and RT-PCR were used to assay the protein and mRNA expressions of MMP2 and MMP9. The IL-8 concentration secreted by NPC cells was compared with the cells with different treatments using ELISA. Results After treating with MIF for 48 hours, the cell numbers of CNE-1 and CNE-2 which went through the 8-μm filter membrane were increased. Compared with non-MIF treated NPC cells, significant difference could be found both in CNE-1(P=0.005) and CNE-2 cells (P=0.001) . The percentages of MMP9-positive cells were significantly increased in both CNE-1 ［from （28.5±2.5）% to （82.4±3.5）%, P=0.001］ and CNE-2 ［from （32.8±3.5）% to （86.1±1.6）%, P=0.002］. The relative intensity of MMP9 protein expression was also enhanced in both cell lines (CNE-1: from 83.1±6.0 to 242.9±22.9, P=0.002; CNE-2: from 84.4±4.3 to 278.9±29.7, P=0.003). Correspondingly, the increased MMP9 mRNA expression level was significantly detectable in both cell lines.The concentration of IL-8 in the supernatant of CNE-2 was higher ［(1201.8±593.3） pg/ml］ after treatment. It was also remarkably higher than that in the supernatant of CNE-2 without treatment (P=0.026). However, there was no significant difference in the concentration variation of IL-8 in CNE-1 (P=0.581), while the IL-8 mRNA level was only enhanced in CNE-2. Conclusions MIF can induce potent invasion of NPC cell lines in vitro, and the infiltrating lymphocytes in NPC might be responsible for the invasion and metastasis of tumor cells. MIF cytokine which is secreted by these infiltrating lymphocytes might contribute to the invasion as well as metastasis of NPC in the early stages by induction of MMP9 and IL-8 in an indirect pathway.     

顺铂作用于宫颈癌HeLa细胞致细胞周期调节因子变化及对细胞周期的阻滞作用

目的：探讨细胞周期调节因子atm,chk2,p53基因在顺铂（DDP）诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡中的作用．方法：MTY法检测梯度浓度DDP对HeLa细胞的生长抑制率,RT—PCR法和WesternBlot法检测DDP作用前后HeLa细胞atm,chk2及p53mRNA和蛋白的表达．流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期的变化．结果：DDP对宫颈癌HeLa细胞的生长抑制作用具有浓度和时间依赖性．DDP作用HeLa细胞后atm,chk2,p53mRNA和蛋白的表达均增强,细胞凋亡增加,细胞周期阻滞于G2／M期（P〈0．05）．结论：atm,chk2,p53基因与细胞凋亡及G2／M期阻滞有关．干预atm,chk2,筇3基因通路有望成为宫颈癌化疗增敏的新策略．     

巨噬细胞移动抑制因子介导MPP+/MPTP诱导的小胶质细胞NLRP3炎症小体的激活

目的 探讨巨噬细胞移动抑制因子（MIF）/κb（NF-κB）对1-甲基-4-苯基吡啶离子（MPP+）/1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶（MPTP）激活小胶质细胞NLRP3炎症小体的影响和机制,进而对神经元的影响。方法 慢病毒MIF-shRNA感染Bv-2细 胞,敲低MIF表达。Western blot检测MPP+干预的Bv-2 NLRP3和MIF表达水平、转染病毒后细胞NLRP3、p65、caspase-1表达水平及细胞核、浆蛋白p65表达水平。ELISA检测细胞培养上清液IL-1β、IL-18表达水平。将细胞培养上清液作为条件培养基培养MN9D细胞,Western blot检测TH蛋白表达水平。C57BL/6小鼠腹腔注射MPTP构建PD小鼠模型,向中脑黑质致密部立体定位注射腺相关病毒MIF-shRNA（AAV-MIF-shRNA）敲低MIF表达。对小鼠进行旷场实验、爬杆实验、悬挂实验行为学评估,组织免疫组化检测小鼠多巴胺能神经元细胞数目和小胶质细胞活化情况,Western blot 检测小鼠黑质 MIF、NLRP3及TH表达情况。结果 感染病毒的细胞MIF mRNA（P<0.001）和MIF蛋白（P=0.014）明显降低。Western blot显示,0.2 mmol MPP+使Bv-2细胞NLRP3（P=0.012）和MIF（P=0.019）表达增高。与MPP组比较,MIF-shRNA组NLRP3（P=0.042） 和caspase-1（P=0.003）表达减少,细胞总蛋白中p65表达没有差异（P=0.978）。ELISA检测细胞上清液发现MIF-shRNA组较MPP组IL-1β（P<0.001）、IL-18（P=0.002）水平降低。与MPP组比较,MIF-shRNA组核蛋白p65表达降低（P=0.016）,浆蛋白p65表达升高（P<0.001）。相较于MPP+的条件培养基,MN9D细胞在MIF-shRNA条件培养基中TH（P=0.01）表达增加。与MPTP 组比较,注射 MIF-shRNA 的小鼠爬杆实验（P=0.024）和旷场实验（P=0.026）评分显著降低,悬挂实验评分显著升高（P=0.001）。组织免疫组化结果显示,相较于MPTP组,AAV-MIF-shRNA组小鼠TH阳性神经元细胞数量增多（P=0.004）,小胶质细胞数量减少（P=0.049）。MIF（P=0.033）、NLRP3表达减少（P=0.045）,TH蛋白明显增多（P=0.043）。结论 抑制MIF表达可以减少MPP+/MPTP干预所引起的小胶质细胞NLRP3炎症小体表达和炎症因子释放,减轻小胶质细胞激活,减轻炎症反应,改善MPTP引起的黑质多巴胺能神经元损伤,在帕金森病神经炎症方面具有保护作用。     

Expression of cyclooxygenase-2 mRNA in drug-sensitive cell and drugresistant strains of ovarian cancer cell lines

Objective： To investigate the expression of cyclooxygenase-2 （COX-2） mRNA in drug-sensitive cell and drugresistant clones of ovarian cancer cell lines. Methods： RT-PCR and immunocytochemistry were used to investigate the expression of cyclooxygenase-2 in 3 clones drug-sensitive and 5 clones drug-resistant ovarian cancer cell. Results： Strong COX-2 mRNA expressions were detected in 3 clones of drug-sensitive cell and weak expressions were detected in 5 clones of drug-resistant cell. The protein expression of COX-2 in drug-sensitive cell was strongly positive reaction in immunocytochemistry stain and there was a weak positive reaction in 5 clones of drug-resistant cell. Conclusion： The expression of COX-2 mRNA in drug-sensitive cell strains is much higher than that in drugresistant strains of ovarian cancer cell lines, providing a basis of the chemoprevention for ovarian cancer.